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摘要:目的:构建FKBP38(FK506 Binding Protein 38)基因肝脏特异敲除小鼠。方法:利用胚胎注射法构建在FKBP38上携带lox P位点的转基因小鼠。在FKBP38基因位置携带lox P位点的小鼠的基础上,以肝脏实质细胞特异性表达的Alb-Cre介导FKBP38条件性敲除,以获得FKBP38基因肝脏特异敲除小鼠模型Alb-Cre:FKBP38^fl/fl。同时对FKBP38特异性敲除鼠进行鉴定。结果:①FKBP38肝脏特异敲除小鼠FKBP38^-/-肝脏中FKBP38基因的m RNA水平相对于同年龄同窝野生型小鼠具有统计学差异(P〈0.001)。②FKBP38肝脏特异敲除小鼠FKBP38^-/-肝脏中FKBP38基因的蛋白表达水平相对于同年龄同窝野生型小鼠具有统计学差异(P〈0.001)。③FKBP38肝脏特异敲除小鼠FKBP38^-/-肝脏中,转录和翻译相关蛋白水平未见显著差异,p70 S6K的磷酸化水平轻微上调,4EBP-1的磷酸化水平有轻微下调。(4)FKBP38肝脏特异敲除小鼠FKBP38^-/-肝脏中,凋亡相关蛋白Bcl-2未见差异化表达。结论:FKBP38肝脏特异敲除小鼠FKBP38^-/-肝脏中,FKBP38基因的m RNA和蛋白基本不表达,提示成功构建FKBP38基因肝脏特异敲除小鼠。
摘要:目的:观察一氧化碳中毒后大鼠海马组织中Nogo-A蛋白动态表达情况,探讨Nogo-A蛋白在一氧化碳中毒后神经系统损伤中的作用与影响。方法:随机数字法将雄性SD大鼠30只分为正常对照组(NC组)、CO中毒组(CO组)、CO中毒后24小时组(CO-24h)、CO中毒后48小时组(CO-48h)、CO中毒后7天组(CO-7d),每组各6只。CO气体腹腔注射染毒法建立一氧化碳中毒模型。建模后不同时间点利用免疫组织化学染色(IHC)、蛋白质免疫印迹技术检测(WB)Nogo-A蛋白在海马组织中的表达情况并分析其变化规律。结果:IHC结果表明NC、CO组、CO-24h组、CO-48h组、CO-7d组中Nogo-A蛋白平均光密度值分别为0.0928±0.0038、0.01172±0.0042、0.1452±0.0056、0.1271±0.0057、0.1088±0.0055;WB结果提示一氧化碳中毒后海马组织中Nogo-A蛋白的表达较NC组增高,在24h时表达达到高峰(P〈0.05);24h后表达开始逐步下降,至染毒第7天时,海马组织中Nogo-A蛋白的表达明显下降,但仍高于NC组(P〈0.05)。结论:在本研究中,大鼠海马组织中Nogo-A蛋白表达的增高与一氧化碳中毒相关;Nogo-A蛋白表达在24h时表达达到高峰;24h后表达开始逐步下降。
摘要:目的:采用多种方法探究天然植物抗菌液(PAMs)对人肝癌细胞HEPG-2的杀伤及初步分子作用机理。方法:运用形态学观察、MTT法测定PAMs对HEPG-2的抑制作用,AO/EB细胞双染、Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测PAMs作用于HEPG-2细胞后细胞的凋亡情况,再通过q RT-PCR与western blot检测HEPG-2中相关基因在m RNA水平和蛋白水平的表达量变化。最后利用划痕实验和transwell小室检测PAMs对HEPG-2细胞迁移能力的抑制。结果:PAMs可以抑制和杀伤HEPG-2细胞,作用效果呈浓度和时间依赖性,且与细胞的凋亡途径密切相关。PAMs可下调HEPG-2细胞中foxm1、survivin、bcl-2的m RNA表达水平,同时在蛋白水平下调foxm1的表达量,上调p53的表达量。除此之外,PAMs还能够有效地抑制HEPG-2细胞的体外迁移。结论:PAMs杀伤HEPG-2细胞的途径之一是通过下调foxm1、上调p53基因的表达量,从而抑制或减少其下游靶基因survivin和bcl-2的转录表达,促进细胞凋亡。本研究为基于PAMs抗癌创新民族医药的研发提供了重要的前期工作基础。
摘要:目的:探讨微弧氧化(micro-arc oxidation,MAO)后的Zr46(Cu4.5/5.5Ag1/5.5)46Al8(at%)(本文简称Zr-Cu-Al-Ag非晶合金)的细胞相容性。方法:按照国家标准制备300 V、350 V和400 V电压MAO处理的Zr-Cu-Al-Ag非晶合金、铸态Zr-Cu-Al-Ag非晶合金以及TI6Al4V合金试件的浸提液用于培养L929细胞,阴性组的L929细胞用含10%小牛血清的DMEM溶液培养,阳性组的L929细胞用含64 g/L苯酚和10%小牛血清的DMEM溶液培养,通过四唑盐(MTT)比色法分析试件的细胞相容性。结果:MAO处理的Zr-Cu-Al-Ag非晶合金细胞毒性评级为0,其浸提液中的L929细胞状态良好,细胞增殖曲线呈上升趋势,三个MAO组的吸光度值高于铸态Zr-Cu-Al-Ag非晶合金组、TI6Al4V合金组和阳性对照组(P〈0.05),但与阴性对照组无明显差别(P〉0.05)。结论:MAO提高了Zr-Cu-Al-Ag非晶合金表面的细胞相容性。
摘要:目的:探讨上皮性卵巢癌组织中细胞肉瘤蛋白(Cell sarcoma,c-Src)的表达及其其临床意义。方法:通过Western blotting方法检测4例正常卵巢组织及21例上皮性卵巢组织中c-Src蛋白的表达。同时,通过免疫组化的方法检测26例正常卵巢组织和134例上皮性卵巢癌组织中c-Src的表达。统计分析c-Src的表达与上皮性卵巢肿瘤的临床病理因素之间的关系。结果:与正常卵巢组织相比,上皮性卵巢癌组织中c-Src蛋白的表达明显增高。c-Src蛋白的过表达与上皮性卵巢癌患者的临床病理分期、组织学分化程度、淋巴结转移情况及肿瘤复发之间差异存在统计学意义(P〈0.05),但与患者的年龄等因素均无显著相关性(P〉0.05)。此外,c-Src蛋白的高表达,与上皮性卵巢癌患者的预后密切相关(P〈0.05)。结论:c-Src在上皮性卵巢癌组织中过表达,且与肿瘤的恶性生物学行为密切相关,可能作为评估上皮性卵巢癌恶性程度、病情进展的重要指标及分子靶向疗法的新靶点。
摘要:目的:对透明质酸(HA)靶向绿原酸(CA)脂质体(HA-CA脂质体)进行处方筛选,以及对U14宫颈癌小鼠的抑制作用实验。方法:筛选制备HA-CA脂质体的方法,并以磷脂比、药脂比、PBS的p H为单因素考察指标通过正交实验筛选最优处方;采用透析袋法考察HA-CA的体外释放;Bal b/c小鼠右腋皮下接种U14宫颈癌瘤株,连续尾静脉注射给药14 d后,摘取瘤体称重,并计算肿瘤生长抑制。结果:采用薄膜分散法制备脂质体,最优处方为磷脂比为4:1,药脂比为1:30,PBS的p H为7.4。HA-CA脂质体与CA脂质体释放曲线基本一致,都具有一定的缓释效果。48 h时,HA-CA脂质体和CA脂质体的累计释放度分别为78.39%、83.01%。HA-CA脂质体对U14宫颈癌小鼠的抑瘤率为60.39%,与阳性对照组环磷酰胺相当,高于CA和CA脂质体。结论:HA-CA脂质体由于其具有主动靶向配体HA的修饰,使其抑制U14宫颈癌裸鼠的效果明显高于CA和CA脂质体。
摘要:目的:探讨出生早期母婴分离对新生儿神经系统的影响及其相关机制。方法:随机选择2015年1月-2015年9月出生的新生小鼠120例作为本次研究的对象,其中新生小鼠出生后实施母婴分离的作为观察组(60只),出生后不实施母婴分离的作为对照组(60只)。比较两组新生小鼠的神经系统、神经细胞的变化。结果:观察组新生小鼠在母婴分离第7天、14天、21天的神经元细胞的凋亡率显著高于对照组新生(P值均〈0.05),神经元胱天蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达均明显高于对照组(P值均〈0.05)。观察组新生小鼠的母婴分离14天、21天的神经胶质细胞小窝蛋白-1(Caveo-1)蛋白的表达,与对照组新生小鼠的神经胶质细胞Caveo-1蛋白的表达进行比较,(P值均〈0.05),具有统计学意义。结论:出生早期实施母婴分离,对新生儿的神经系统会产生较大的影响,影响新生儿发育中神经系统的表达,进而会影响新生儿成年后的行为发育异常。
摘要:目的:探讨Orexins对小鼠摄食和能量代谢的影响。方法:将小鼠分为摄食组和代谢组,摄食组通过中枢置管,注射不同剂量(1、3、10 nmol)的orexin-A和orexin-B,观察它们对小鼠摄食以及肝柠檬酸合酶活性的影响。代谢组将小鼠置于代谢笼内,通过中枢注射orexin-A,观察小鼠在光照条件、黑暗条件、禁食条件下呼吸商和代谢率的变化。结果:与对照组相比,1 nmol和10 nmol orexin-A在注射后4小时内可显著刺激小鼠进食(P〈0.05),而3 nmol orexin-A对摄食量的影响并不明显,但能显著促进柠檬酸合酶活性。任何剂量的orexin-B对小鼠摄食都没有显示出刺激作用(P〉0.05)。在光照条件下,orexin-A可显著降低呼吸商(RQ),代谢率显著升高(P〈0.05);而在黑暗条件下,orexin-A对RQ没有任何影响,但代谢率显著升高(P〈0.05);但是给禁食小鼠中注射orexin-A可诱导RQ的短暂升高,代谢率显著升高(P〈0.05)。结论:Orexins对小鼠摄食与能量代谢可能有一定的调控作用。
摘要:目的:探讨益气健脾方对大肠癌模型异常腺窝病灶(ACF)的抑制效应及其相关机制。方法:50只Wistar大鼠随机分为5组:中药低剂量组(将中药溶液稀释3倍后,5 m L/kg日灌胃量)、中药中剂量组(5 m L/kg日灌胃量)、中药高剂量组(15 m L/kg日灌胃量)、模型组、正常组,每组10只大鼠,采用免疫组化法、美兰染色后镜下观察大肠组织。结果:各中药组ACF及大型ACF的数量较模型组减少(P〈0.05),并且中药中剂量组ACF数量减少最为明显,差异具有统计学意义(P〈0.05)。造模后24h、48h中药组肠腺细胞PCNA增殖指数低于模型组,差异具有统计学意义(P〈0.05)。造模后24 h、48 h中药组肠腺细胞凋亡指数高于模型组,差异具有统计学意义(P〈0.05)。中药组β-catenin异位表达均低于模型组,并且中药组β-catenin异位表达中高剂量组最高,低剂量组次之,中剂量组最低(P〈0.05)。中药组MMP-7的表达均低于模型组,而且各中药组中低剂量MMP-7表达最高,高剂量组次之,中剂量组最低(P〈0.05)。结论:益气健脾方可以明显降低Wistar大鼠ACF的发生数量,抑制大肠癌发生中Wnt信号的激活,在一定程度上减少了大肠癌的发生,起到了预防作用。
摘要:目的:探讨下丘脑腹内侧核Orexin-1及其受体对大鼠胃酸分泌的影响及其机制。方法:大鼠麻醉后侧脑室及VMH置管,大鼠分组后分别VMH注射orexin-A、[Pro^34]-酪酪肽、[cPP^1-7、NPY^19-23、Ala^31、Aib^32、Gln^34]胰多肽;腹腔注射SB-334867;皮下注射阿托品;侧脑室微量注射GR-231118、CGP-71683。给药结束后使用幽门结扎模型检测大鼠的胃酸分泌。结果:OXA能够促进胃酸分泌,且呈量效依赖关系。腹腔注射SB-334867能够抑制胃酸分泌,且呈量效依赖关系;SB-334867能够抑制orexin-A对胃酸分泌的促进作用;阿托品不但能够抑制胃酸分泌并且还能够完全阻断OXA的促胃酸分泌作用。侧脑室微量注射GR-231118或CGP-71683胃酸及胃液量减少,呈量效依赖关系,并且能够完全阻断OXA的促胃酸分泌作用。VMH内微量注射[cPP^1-7,NPY^19-23,Ala^31,Aib^32,Gln^34]胰多肽胃酸分泌增多,且呈量效依赖关系。结论:Orexin-A能够作用于下丘脑VMH促进胃酸分泌,orexin受体、Y1和Y5受体以及迷走神经系统均参与该过程。
摘要:目的:探讨一种简单、有效、低成本、低耗时的化学发光蛋白芯片方法用于检测血清中的糖链抗原19-9(Carbohydrate Antigen19-9,CA19-9),以有助于对原发性肝癌的早期辅助诊断。方法:预先在醛基芯片上包被鼠源CA19-9单克隆抗体,建立CA19-9抗体蛋白芯片,共筛选出46份肝癌血清和32份正常健康人血清,然后用蛋白芯片方法进行检测,并以化学发光成像对检测结果进行判定。结果:24份肝癌血清的CA19-9水平高于37 U/m L,22份肝癌血清的CA19-9水平低于37 U/m L;30份正常人血清CA19-9含量低于37 U/m L,2份正常人血清的CA19-9含量为37 U/m L;灵敏度为52.17%,特异性为93.75%,ROC曲线下面积0.688[95%CI:0.566,0.811]。结论:本研究成功的建立了血清CA19-9的化学发光蛋白芯片检测方法。
摘要:目的:分析脾氨肽联合普米克治疗小儿支气管哮喘的临床疗效及对患儿CD4^+、CD8^+、血清Ig E水平的影响。方法:选取我院2015年6月-2016年10月收治的支气管哮喘急性发作患儿88例,采用随机数字法将其分为对照组和观察组,每组各44例。所有患儿进行止咳化痰治疗,对照组患儿在此基础上采用雾化吸入普米克令舒混悬液,观察组患儿在对照组用药基础上加用脾氨肽口服冻干粉。比较两组患儿的临床疗效、症状消失时间、肺功能变化情况、住院时间及治疗前后CD4^+、CD8^+、CD 4^+/CD8^+及血清Ig E水平的变化。结果:观察组的治疗总有效率显著高于对照组(P〈0.01)。治疗后,观察组的咳嗽、胸部哮鸣音、喘憋消失时间及住院时间均明显短于对照组(P〈0.01),FVC、FEV1及FEV/FVC、CD4^+、CD4^+/CD8^+水平均显著高于对照组(P〈0.01),而血清Ig E浓度明显低于对照组(P〈0.01)。两组不良反应发生率及CD8^+水平比较差异无统计学意义(P〉0.05)。结论:脾氨肽联合普米克令舒可显著提高小儿支气管哮喘的临床疗效,迅速改善患儿的临床症状及免疫功能,且安全性高。
摘要:目的:探讨神经生长因子联合奥拉西坦治疗高血压脑出血的临床疗效及对血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平的影响。方法:选择2013年10月至2016年10月在我院治疗的高血压脑出血患者90例,按照治疗方法分为观察组和对照组。观察组采用神经生长因子联合奥拉西坦治疗,对照组使用奥拉西坦治疗。观察和比较两组治疗后临床疗效,治疗前后血清IL-1β、IL-6、CRP、NSE水平、NIHSS评分、Barthel指数、MMSE评分及血肿体积的变化。结果:经治疗后,观察组的总有效率为95.6%,明显高于对照组(82.2%,P〈0.05);观察组血清IL-1β、IL-6、CRP、NSE水平均明显的低于对照组[(4.11±0.47)pg/mL vs(5.37±0.62)pg/mL;(6.98±0.72)pg/mL vs(12.61±1.32)pg/mL;(5.75±0.61)mg/mL vs(9.34±1.02)mg/mL;(9.45±1.04)ng/mL vs(11.34±1.21)ng/mL](P〈0.05);NIHSS评分、血肿体积明显低于对照组,Barthel指数、MMSE评分均高于对照组(P〈0.05)。结论:奥拉西坦联合神经生长因子治疗高血压脑出血患者,能够显著改善神经功能损伤,降低血清IL-1β、IL-6、CRP、NSE水平,提高临床疗效。
摘要:目的:探讨彩色多普勒超声(CDU)赋分诊断(HER-2、ER和PR)三阴性乳腺癌(TNBC)并腋淋巴结转移(ALNM)的临床应用价值。方法:回顾性分析2014年1月至2015年12月期间在青岛大学附属医院经CDU检查、手术和病理证实的863例女性乳腺癌患者的临床资料。根据临床病理学及免疫组化(的)检测结果(将其)分为TNBC组和非三阴性乳腺癌(NTNBC)组。对比分析两组乳腺癌的CDU征象,采用多因素非条件Logistic回归分析CDU赋分诊断与TNBC的相关性。将CDU描述性指标纳入赋分(0-15分),赋分〉10分者为NTNBC,8-10分为疑似TNBC,〈8分为倾向TNBC。结果:本组乳腺癌CDU诊断与病理符合率为90.96%(785/863),删除不能确定乳腺肿块性质78例(9.04%)。NBC组(105例)与NTNBC组(680例),肿块呈圆形或椭圆形(48.57%vs10.70%)、最大径〉5.0 cm(21.90%vs15.30%)、无微钙化灶(87.62%vs74.12%)、境界清楚(56.19%vs41.47%)、边缘无毛刺征(74.29%vs41.62%)、周边无高回声晕环(74.29%vs46.76%)、后方回声无衰减(72.38%vs46.76%)、ALNM(61.90%vs 37.35%)等比较有明显差异(P〈0.05),而在肿块数目、纵横径比、回声程度、回声分布和血流分级等则无明显差异(P〉0.05)。CDU赋分〉10分为NTNBC与病理符合率93.93%(680/724);8-10分疑似诊断TNBC符合率11.51%(16/139);〈8分倾向诊断TNBC符合率64.03%(89/139),TNBC总诊断符合率为75.54%(105/139)。在CDU诊断785例乳腺癌中,ALN肿大319例(40.64%),其中TNBC组61.90%(65/105),NTNBC组37.35%(254/680)。经多因素非条件Logistic回归分析结果显示:肿块呈圆形或椭圆形、边缘无毛刺征、周边无高回声晕环、后方回声无衰减和ALNM等与TNBC存在相关性(P〈0.05)。结论:乳腺貌似良性肿块并腋淋巴结肿大,CDU赋分〈8分,同时年龄≤50岁或未绝经,或有乳腺癌家族易感史者,可作为CDU诊断TNBC并ALNM重要�
摘要:目的:探讨原发性肝癌不同分化程度、细胞类型的MRI图像特征、参数。方法:回顾性分析肝硬化再生结节27例、肝细胞癌75例81处病灶(高度分化15例,中度分化40例,低度分化26例)、肝内胆管癌20例的病理结果及MRI影像学数据,比较再生结节、肝细胞癌和肝内胆管癌之间,以及肝细胞癌各种组织分化程度之间的ADC值、强化程度差异。结果:常规MRI平扫结合LAVA可准确诊断大部分原发性肝癌病例。再生结节、肝细胞癌及肝内胆管癌ADC值均值的具有显著统计学差异(P〈0.01);肝细胞癌高分化组、中分化组及低分化组ADC值均值均具有显著统计学差异(P〈0.01),但中、低分化肝细胞癌ADC值均值的差异无实际临床意义;高分化肝细胞癌与肝内胆管癌ADC值均值的差异无统计学意义(P=0.27)。结论:常规MRI结合DWI、多期动态增强扫描有助于区分原发性肝癌各种组织分化程度及细胞类型。
摘要:目的:分析阿奇霉素联合糖皮质激素治疗重症支原体肺炎患儿的临床效果及安全性。方法:选择112例重症支原体肺炎患儿并通过抽签法分为对照组与观察组,每组各56例。对照组予以阿奇霉素治疗,观察组在对照组基础上加用糖皮质激素治疗。观察并比较两组患儿治疗前后血沉(ESR)、血清乳酸脱氢酶(LDH)、同工酶MB(CK-MB)、肌酸激酶(CK)、谷草转氨酶(AST)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、CD4^+及CD8^+,临床疗效及不良反应的发生情况。结果:观察组有效率为96.4%,显著高于对照组(82.1%),差异有统计学意义(P〈0.05)。治疗后,两组ESR、血清LDH、CK-MB、CK、AST、CRP、IL-6、TNF-α水平及CD8^+均较治疗前显著降低,且观察组以上指标均明显低于对照组;两组CD4^+均较治疗前明显上升,且观察组显著高于对照组,差异均有统计学意义(P〈0.05)。观察组退热、咳嗽缓解、肺部湿啰音消失时间均明显短于对照组(P〈0.05)。两组不良反应的发生情况比较差异无统计学意义(P〉0.05)。结论:阿奇霉素联合糖皮质激素治疗小儿重症支原体肺炎的临床效果明显优于单用阿奇霉素治疗,可有效减轻心肌损伤和炎症反应,并提高患儿免疫功能,且安全性高。
摘要:目的:分析鞍旁海绵状血管瘤MR影像特点及误诊原因,提高对该疾病的诊断及鉴别诊断水平。方法:收集我院经手术病理证实的13例鞍旁海绵状血管瘤,术前均行MRI平扫及增强扫描,5例行3D-ASL检查,分析其影像学资料。结果:9例表现为横向哑铃状,鞍旁大,鞍内小,病灶主体位于颈内动脉外侧,颈内动脉海绵窦段被病灶包绕;1例鞍旁与鞍内病灶大小相似,1例病灶主体位于颈内动脉内侧,2例病灶完全位于颈内动脉外侧;7例垂体显示不清,6例垂体受推移;6例T2W I表现为类似脑脊液的极高信号;仅5例行3D-ASL检查,病灶均呈低灌注。误诊9例,其中4例误诊垂体腺瘤,5例误诊脑膜瘤。结论:横向哑铃状、病灶主体位于颈内动脉外侧及T2W I类似脑脊液的极高信号是鞍旁海绵状血管瘤的典型影像特征。对于不典型病变,借助3D-ASL可以减少误诊,充分掌握MRI影像特征及鉴别诊断的要点,对提高临床术前诊断水平具有重要价值。
摘要:目的:探讨自拟益气活血方治疗小儿脾肾气虚型肾病综合征的临床疗效。方法:选择2014年6月到2016年10月我院收治的80例脾肾气虚型肾病综合征患儿,按随机数字表法分为对照组和治疗组各40例。对照组给予强的松治疗,治疗组在对照组治疗的基础上给予自拟益气活血方治疗,两组均治疗4个月。评估两组临床疗效,检测治疗前后两组24h尿蛋白、总胆固醇(TC)、血浆白蛋白(Alb)以及肾功能指标包括尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、血肌酐清除率(Ccr)。结果:治疗组的总有效率为95.00%,明显高于对照组的67.50%,差异具有统计学意义(P〈0.05)。治疗后,两组24 h尿蛋白、TC、BUN及Scr水平低于治疗前,Alb、Ccr水平高于治疗前,且治疗组上述各指标水平变化均显著优于对照组,差异均具有统计学意义(P〈0.05)。结论:自拟益气活血方治疗小儿脾肾气虚型肾病综合征的临床疗效显著,能够明显改善患儿肾功能,值得在临床上推广应用。