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摘要:目的:ASICs通道及P/Q钙通道均参与偏头痛发生,分析ASICs通道及P/Q钙通道的电生理相互作用,评价二者的在偏头痛发生中的交互影响.方法:健康SPF级野生型C57BL/6鼠婴,分离培养双侧三叉神经节神经元,采用全细胞膜片钳技术记录三叉神经节神经元的钙电流变化及动作电位变化.结果:酸性外液及阿米洛利对钙通道无直接影响,酸性外液及P/Q通道阻断剂Aga-IVA均增加三叉神经元兴奋性(P<0.05),而阿米洛利可阻断这种增加效应(P<0.05).结论:阿米洛利能够抑制Aga-IVA对三叉神经节神经元兴奋性的增加,可能与其阻断ASICs通道有关,提示ASICs通道可能为P/Q通道突变引发偏头痛的下游机制之一.
摘要:目的:探索NIH3T3和DU145细胞中PUM1蛋白的伴侣蛋白.方法:收集NIH3T3和DU145细胞进行免疫沉淀实验,实验组和对照组分别使用抗PUM1抗体和抗Goat-IgG抗体.通过银染实验观察实验组与对照组是否有差异性条带,通过质谱鉴定和Mascot软件对差异性条带所包含的蛋白进行分析,鉴定PUM1蛋白在细胞中发挥作用时的可能互动蛋白.结果:在NIH3T3和DU145细胞银染实验中,实验组凝胶泳道均在约37 KD处出现差异性条带.对NIH3T3细胞中差异性条带进行质谱分析,通过Mascot软件肽质量指纹谱搜索,将有真实差异的蛋白评分最低阈值设为65,P<0.05,结果显示肽段评分最高的蛋白为NDFIP2蛋白.与NCBInr数据库比对,检测到针对NDFIP2的肽段的覆盖率为40%.结论:NDFIP2与哺乳动物PUM1蛋白在细胞内关联,可能是PUF家族蛋白的伴侣蛋白.
摘要:目的:优化表达并纯化水蛭素融合蛋白SA-H-RGD,检测其生物学活性,获得能够与生物素标记的纤维蛋白适配子G81-2结合的偶联物.方法:将序列正确的质粒pET-44b-SA-H-RGD进行原核表达,采用不同浓度的IPTG及时间优化融合蛋白表达条件,镍亲和凝胶层析柱纯化融合蛋白,Western-blot鉴定蛋白.通过凝血酶原时间(PT)和抗血小板聚集实验检测融合蛋白活性;之后按照生物素-G81-2:SA-H-RGD摩尔比为4:1的比例制备纤维蛋白特异性的偶联物,用凝胶迁移阻滞实验(EMSA)验证二者的偶联.结果:融合蛋白SA-H-RGD在IPTG 0.9 mmol/L、5h时在大肠杆菌中获得可溶性高效表达,纯化的融合蛋白具有延长PT的作用和抑制血小板聚集的活性,EMSA表明SA-H-RGD具有结合生物素标记的G81-2适配子的功能.结论:本研究成功地优化表达了具有抗凝血和抗血小板聚集功能的融合蛋白SA-H-RGD,获得了水蛭素融合蛋白与生物素-G81-2适配子组成的靶向偶联物.
摘要:目的:观察活性维生素D3腹腔注射对2型糖尿病大鼠海马神经元的影响.方法:SD大鼠30只,随机分为空白对照组(Control),高脂组(HF),高脂+VD组(HF+VD),糖尿病组(DM),糖尿病+VD组(DM+VD).测定大鼠空腹血糖、胰岛素、维生素D等生化指标,应用透射电镜观察海马神经元结构变化.结果:与对照组相比,HF组、HF+VD组大鼠体重增加,(分别为343.28±10.41 g;356.81± 36.20 g和360.18±25.56g),DM组体重降低(265.6±16.11 g)(P<0.05);DM组SDF-1为398.33±15.01 ng/L,低于Control组(457.53±26.56 ng/L),骨化三醇干预后SDF-1显著升高(448.54±36.83 ng/L)(P<0.05);DM组(25-OH-D)水平为165.25±30.75 μg/L,低于Control组213.65±30.79 μg/L,补充骨化三醇后显著提高至210.31±50.69 μg/L(P<0.05);DM组海马神经元CXCR4表达降低,线粒体可见明显肿胀,DM+VD组线粒体形态明显改善,海马神经元CXCR4表达水平明显升高.结论:常规量补充维生素D可提高糖尿病大鼠体内维生素D水平,对海马神经元有明显保护作用.
摘要:目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对蛛网膜下腔出血(SAH)脑损伤的影响及其可能机制.方法:选取健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠80只,按照随机数字表法分为假手术组(Sham组)、SAH组、SAH+EGCG组、蛛网膜下出血+生理盐水组(SAH+NS组),每组各20只.SAH造模成功后1d、3d,检测大鼠神经功能评分及脑组织含水量;造模成功3d后,脑组织石蜡切片HE染色观察脑细胞形态,并采用超敏C-反应蛋白(hsCRP)试剂盒检测血清hsCRP水平,通过Western blotting检测脑组织脑源性神经生长因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)及与其高度亲和的酪氨酸激酶受体B(tropomyosin-related kinaseB,TrkB)的表达.结果:①SAH+EGCG组神经功能评分较Sham组明显降低,但较同期SAH组增高明显(P<0.05);②与Sham组比较,SAH+EGCG组脑组织含水量明显增加,但与同期SAH组比较,SAH+EGCG组脑组织含水量明显降低(P<0.05);③与SAH组比较,SAH+EGCG组血清hsCRP水平明显降低(P<0.05);④与SAH组比较,SAH+EGCG组脑组织石蜡切片HE染色神经细胞水肿明显减轻,且坏死神经元减少,细胞核固缩明显减轻;⑤与SAH组比较,SAH+EGCG组脑组织BDNF、TrkB的表达量明显升高(P<0.05).结论:EGCG能够有效的保护大鼠SAH后的脑损伤,促进神经功能修复,减轻预后神经功能障碍,可能与其促进脑组织BDNF、TrkB的表达有关.
摘要:目的:探讨胆管上皮细胞中Toll样受体3(TLR3)内源性活化对原发性胆汁性肝硬化损伤的影响.方法:体外培养人肝内胆管上皮细胞(HiBEC),并通过冻融处理制备坏死HiBEC样本.将死亡样本与活样本混合培养6h,以制备TLR3内源性活化样本,将其标记为观察组;以核酸酶处理坏死细胞及活细胞,并混合培养6h,以制备对照样本,将其标记为对照组.检测2组细胞凋亡率、TLR3及β干扰素Toll样受体结构域衔接蛋白(TRIF)表达水平、Caspase-3活性.结果:观察组凋亡率明显高于对照组,TLR3及TRIF相对表达量明显高于对照组,细胞Caspase-3平均表达量明显高于对照组,上述差异均有统计学意义(P<0.05).结论:TLR3的内源性活化可导致HiBEC凋亡,在原发性胆汁性肝硬化的发生及发展中可能有一定促进作用.
摘要:目的:探究双侧海马CA1区立体定向注射anti-GDNF抗体对匹鲁卡品诱导的大鼠癫痫模型的影响.方法:选择成年雄性SD大鼠60只,并随机分为3组,即假手术组(sham组,n=20)、癫痫模型组(model组,n=20)和GDNF抑制剂组(anti-GDNF组,n=20).使用氯化锂-匹鲁卡品腹腔注射诱导癫痫模型,sham组只给予氯化锂,anti-GDNF组在造模前2h给予大鼠双侧海马CA1区立体定向注射anti-GDNF抗体.在造模后1、3、7d观察大鼠癫痫的发作频率,7d后采用脑电图监测(EEG)测定脑电波的变化情况,通过免疫组化方法测定海马CA1区域神经元数量变化(NeuN表达水平),造模后1d时使用western blot方法测定海马CA1区GDNF、RET和P53蛋白的表达.结果:Model组大鼠棘-慢波数量明显高于Sham组,anti-GDNF组以上指标较model组显著减少口<0.05);Model组海马CA1区神经元大量凋亡,但anti-GDNF组凋亡较model组显著减少(P<0.05).与Sham组比较,在癫痫发作后1d,model组的GDNF、RET表达水平上调,P53表达水平下降(P<0.05),而anti-GDNF组大鼠海马CA1区GDNF、RET表达较model组明显下调,P53表达水平显著上降(P<0.05).结论:双侧海马CA1区立体定向注射anti-GDNF抗体能够减少癫痫发作,并对海马神经元起到保护作用,可能与其抑制GDNF/RET/P53信号通路有关.
摘要:目的:探讨绞股蓝总皂苷(Gyp)对光老化人皮肤成纤维细胞(HSF细胞)凋亡以及Caspase-3信号通路的影响.方法:分别以80、160、320 mg/d剂量的Gyp生理盐水溶液灌胃大鼠7d后取血并分离血清,长波紫外线(UVA)照射方法(照射剂量36 J/cm3)构建光老化HSF细胞模型以得到低剂量组、中剂量组、高剂量组,同时以空白对照组(未照射细胞)、UVA模型组、正常组为对照.UVA诱导的细胞活性氧表达采用二氯荧光素(DCF)法测定,细胞凋亡情况采用TUNEL法测定,HSF细胞活性采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)测定,Bax、Bcl-2、Caspase-3基因和蛋白表达分别采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和West-ern-blotting方法进行测定.结果:与空白对照组比较,其余5组的OD值、HSF细胞凋亡数、活性氧(平均荧光强度)、活性氧水平、Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平差异具有统计学意义(P<0.05);与UVA模型组和正常组比较,低、中、高剂量组OD值、HSF细胞凋亡数、活性氧(平均荧光强度)、活性氧水平、Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平差异具有统计学意义(P<0.05);低、中、高剂量组随着剂量增加OD值、Bcl-2mRNA和蛋白表达水平逐渐升高,细胞凋亡数、活性氧(平均荧光强度)、活性氧水平、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平逐渐降低(P<0.05).结论:Gyp通过抑制细胞内活性氧的产生以及Bax的表达,以及激活Bcl-2、Caspase-3信号通路而逆转UVA诱导的HSF细胞凋亡,进而延缓HSF细胞的光老化现象.
摘要:目的:探讨核蛋白1 (Nupr1)调控非小细胞肺癌细胞迁移、凋亡机制的研究.方法:肿瘤抑制剂盐酸素(salinomycin)不同时间处理非小细胞肺癌细胞A549后采用Western Blot法检测非小细胞肺癌细胞A549中Cleaved Caspase-3、Nupr1的蛋白表达;Transwell小室检测Nuprl基因沉默后非小细胞肺癌细胞A549细胞体外迁移、侵袭能力的变化;Western Blot法检测Nupr1沉默后非小细胞肺癌细胞A549 MMP-2、TIMP-1的蛋白表达;流式细胞仪检测Nupr1沉默后非小细胞肺癌细胞A549的凋亡情况.结果:与未经肿瘤抑制剂salinomycin处理对照组相比较,salinomycin处理后的非小细胞肺癌细胞A549中Nupr1蛋白表达量下降,Cleaved Caspase-3蛋白表达量升高,并且随着作用时间呈依赖关系.Nupr1-siRNA转染组的迁移能力相比对照组未转染组下降(64.4±7.2)%,Nupr1-siRNA转染组的侵袭能力相比对照组下降(58.7±7.3)%.与未转染Nupr1-siRNA对照组相比较,转染后TIMP-1的表达明显上调,而MMP-2的表达则明显下调.流式细胞仪检测结果显示Nupr1沉默后非小细胞肺癌细胞A549出现大量凋亡.结论:Nupr1基因沉默后通过上调TIMP-1的表达,下调MMP-2的表达降低肺癌A549细胞的侵袭和迁移能力,进而促进非小细胞肺癌细胞凋亡.
摘要:目的:探讨一种声弹性成像定量分析方法用于评价深静脉血栓(DVT)患者血栓进展的情况.方法:经处理得12条大隐静脉标本,采用声弹性成像技术分别在1d、3d、6d、9d采集静脉标本中血凝块声弹性图像;应用等硬度区域面积测量技术(AMEHR)进行处理,计算血凝块区域在静脉标本中所占的比例,并进行数据分析.结果:经由AMEHR技术分析,在1d、3d、6d、9d静脉标本中,血凝块区所占比例分别为46.72%± 12.16%,71.93%± 7.24%,82.17%± 5.17%,91.92%± 3.69%.随着血栓时间的增加,血凝块区域所占比例逐渐增加,且差异有统计学意义(P<0.05);随着时间的进展,血凝块增长的速率逐渐降低(1-3 d:25.21%,3-6 d:10.24%,6-9 d:9.75%).结论:AMEHR技术对血栓形成时间的评估上有一定的应用价值,有望为评估血栓形成时间提供参考.
摘要:目的:观察跑台运动和饮食控制对去卵巢肥胖大鼠心肌Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin、磷酸化-GSK-3β和GSK-3β蛋白表达的影响.方法:将48只3月龄雌性未孕SD大鼠按体重分层后随机分为假手术组、去卵巢组、去卵巢运动组和去卵巢控食组.去卵巢运动组大鼠在去卵巢手术后的第3周开始进行为期8周的跑台运动训练,去卵巢控食组在去卵巢后的第三周开始进行为期8周的控食干预.干预结束后,腹主动脉取血处死各组大鼠,用电子天平秤量大鼠心肌重量,用Westem blot方法检测心肌β-catenin、磷酸化-GSK-3β和GSK-3β蛋白表达.结果:与假手术组大鼠比较,去卵巢组大鼠体重、心肌重量显著增加,而心肌重量指数、β-catenin、磷酸化GSK-3β和p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达均显著降低(P<0.05);与去卵巢组大鼠比较,去卵巢运动组大鼠在最后两周时体重显著降低(P<0.05),心肌组织β-catenin、p-GSK-3β和p-GSK-3 β/GSK-3β蛋白表达均显著升高,而去卵巢控食组大鼠体重、心肌重量、心肌重量指数和GSK-3β表达差异均无统计学意义(P>0.05),但心肌组织β-catenin、p-GSK-3β和p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达均显著升高(P<0.05).结论:跑台运动和控食干均预均能激活去卵巢大鼠心肌Wnt/β-catenin信号通路.
摘要:目的:探讨文拉法辛联合认知行为疗法治疗帕金森病(PD)抑郁、认知功能障碍的临床疗效和安全性.方法:选择我院收治的60例PD合并抑郁、认知功能障碍患者并将其随机分为三组,分别为对照组(单用文拉法辛治疗),联合奥氮平组(文拉法辛联合奥氮平),联合认知行为疗法组(文拉法辛联合认知行为疗法),每组20例,于治疗前及治疗后4、8周末采用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)进行抑郁程度评定,简易精神状态评价量表(MMSE)和事件相关电位(event-related potentials,ERPs)P300进行认知功能评定.结果:治疗4、8周时,三组的HAMD评分均较治疗前有不同程度下降,P300潜伏期较治疗前有不同程度缩短,P300波幅、MMSE评分有不同程度升高(P<0.05),联合奥氮平组和联合认知行为疗法组HAMD评分较对照组明显下降,P300潜伏期较对照组明显缩短,P300波幅、MMSE评分明显升高(P<0.05),联合认知行为疗法组HAMD评分较联合奥氮平组明显下降,P300潜伏期明显缩短,P300波幅、MMSE评分明显升高(P<0.05).三组均无特殊不良反应.结论:文拉法辛联合认知行为疗法治疗PD抑郁、认知功能障碍疗效确切,能显著改善患者抑郁症状,提高患者的认知功能,疗效较单用文拉法辛或文拉法辛联合奥氮平治疗更好,且安全性高.
摘要:目的:探讨改良快速顺序诱导用于快速康复外科全麻患者的临床效果.方法:随机选择我院2015年1月1日至2015年12月31日胃肠外科行腹腔镜下胃癌根治手术患者共计100例,随机分为观察组和对照组各50例,分别行改良快速顺序诱导和经典快速顺序诱导.并比较术前基本情况、术中情况、术后情况及免疫相关指标.结果:两组患者手术时间、手术方式、肿瘤分期方面分析比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组术中出血量及补液量均少于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).观察组术后排气时间、排便时间、住院时间、进食时间均明显早于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).术前、术后1日、术后3日、出院前,IgG差异均具有统计学意义(P<0.05).结论:改良快速顺序诱导用于快速康复外科全麻患者可加速患者术后的恢复,提升术后免疫力.
摘要:目的:研究滑膜炎颗粒联合中药熏蒸对膝关节创伤性滑膜炎患者临床疗效及其可能机制.方法:选取2014年7月至2015年7月我院接诊的膝关节创伤性滑膜炎患者80例作为本次研究对象并将其随机分为两组.对照组采用滑膜炎颗粒治疗,观察组采用滑膜炎颗粒联合中药熏蒸治疗,观察两组患者治疗前后视觉模拟疼痛(VAS)、膝关节功能(HSS)评分,症状体征积分,血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)水平的变化及治疗疗效.结果:治疗后,观察组VAS评分显著低于对照组[(2.30± 0.40)分vs(4.69± 0.42)分](P<0.05),HSS评分显著高于对照组[(90.28± 6.97)分vs(69.47± 5.83)分](P<0.05),疼痛、肿胀、活动度、临床症状积分均显著低于对照组(P<0.05),血清TNF-β、IL-1β、IL-6水平均显著低于对照组(P<0.05),总有效率明显高于对照组[90.00%(36/40)vs70.00%(28/40)](P<0.05).结论:滑膜炎颗粒联合中药熏蒸治疗膝关节创伤性滑膜炎临床效果显著优于单用滑膜炎颗粒治疗,可能与其有效抑制TNF-α、IL-1β、IL-6的表达有关.
摘要:目的:观察和比较舒洛地特(SDX)联合缬沙坦(VAL)治疗Ⅲ期、Ⅳ期糖尿病肾病(DN)的临床效果及对患者肝肾功能、凝血功能的影响.方法:选取我院2014年6月-2016年6月收治的146例DN患者,按照随机数字表法均分为两组.对照组予VAL治疗,观察组在此基础上联合SDX治疗,记录比较两组临床疗效,治疗前后肝肾功能指标和凝血功能指标以及治疗期间不良反应的发生情况.结果:经3个月治疗后,观察组总有效率为95.9%,明显高于对照组的84.9%(P<0.05).两组治疗前后血清Y-GT、ALT、BUN、Scr水平及APTT、PT值组内及组间比较差异均无统计学意义(P>0.05).与治疗前相比,两组治疗后24h UAlb、尿α1-MG和血浆FIB水平均显著下降(P<0.01),且观察组治疗后24 h UAlb、尿c1-MG和血浆FIB水平降低程度均显著高于对照组同期(P<0.01).观察组不良反应率为9.6%,较对照组(8.2%)相比差异无统计学意义(P>0.05).结论:应用SDX联合VAL治疗Ⅲ、Ⅳ期糖尿病肾病患者更能显著提高其临床疗效,提高肾功能,且对患者肝功能及凝血功能均无显著影响.
摘要:目的:探讨百令胶囊对多囊卵巢综合征患者卵泡液骨形态蛋白(βMP)、生长分化因子(GDF)-9及胰岛素样生长因子(IGF)的影响.方法:选择2013年7月至2016年7月我院接诊的90例多囊卵巢综合征患者,通过随机数表法分为观察组(n=45)和对照组(n=45),对照组使用达英-35治疗,观察组在此基础上使用百令胶囊.比较两组糖代谢指标、内分泌指标、卵泡液BMP-15、GDF-9、IGF-1水平的变化以及临床疗效.结果:治疗后,观察组空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗(HOMA-IR)、血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)水平水平均显著低于对照组(P<0.05),卵泡液BMP-15、GDF-9水平显著高于对照组,IGF-1水平明显低于对照组(P<0.05),总有效率显著高于对照组(P<0.05).结论:百令胶囊质量多囊卵巢综合征效果显著,可有效调节内分泌,并改善卵泡液BMP-15、GDF-9、IGF-1的水平.
摘要:目的:通过分析女性绝经期不同骨密度人群的血浆同型半胱氨酸(HCY)指标,探讨同型半胱氨酸在女性绝经期骨质疏松发生过程中的作用及其潜在的临床价值.方法:收集2014年3月至2016年3月我院体检中心进行体检的女性绝经期妇女(>60岁)血样标本共计625例,根据体检的骨密度报告对其进行分组,骨质疏松组215例,骨量减少组309例,骨量正常组101例,测量每组的同型半胱氨酸水平.结果:骨密度程度与同型半胱氨酸水平存在负相关关系(rs=-0.763,P=0.046),三组之间的同型半胱氨酸水平也存在显著差异(F=4.807,P<0.016),其中骨质疏松组指标最高,骨量正常组指标最低.结论:同型半胱氨酸是重要的骨代谢指标,在衡量绝经期妇女骨质疏松进展中具有重要的意义.
摘要:目的:研究与分析糖尿病肾病患者红细胞免疫及抗氧化状态相关指标的变化情况.方法:将2015年1月-2016年6月期间于本院进行治疗的66例糖尿病肾病患者设为观察组,同时将66名同龄健康人设为对照组.检测与比较两组同龄者的红细胞免疫及抗氧化状态相关指标,同时比较不同糖尿病肾病分期患者的红细胞免疫及抗氧化状态相关指标水平.结果:观察组的红细胞免疫及抗氧化状态相关指标明显差于对照组,且不同糖尿病肾病分期患者的检测水平也呈现明显差异,P均<0.05,检测水平之间均存在显著性差异.结论:糖尿病肾病患者红细胞免疫及抗氧化状态相关指标明显较差,糖尿病分期较高者的检测结果也相对较差,因此应注意对糖尿病肾病患者进行上述方面的改善.