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摘要:目的:建立能够高效、快速地从小鼠大脑提取抑制性神经元特异性多聚核糖体结合的m RNA的方法,为进行小鼠大脑抑制性神经元特异性翻译表达谱分析提供材料。方法:依据Cre-loxp系统,将Ribo HA标签小鼠与抑制性神经元特异性VGAT-Cre/PV-Cre小鼠杂交,启动抑制性神经元中核糖体上HA标签的表达。后代小鼠进行基因型鉴定,获得同时表达Cre和HA的小鼠。利用免疫荧光染色检测HA的表达。通过免疫共沉淀从目标细胞群体中获得HA标记的多聚核糖体。提取多聚核糖体结合的m RNA。荧光定量PCR法检测所得m RNA的细胞类型特异性。利用琼脂糖凝胶电泳及bioanalyzer 2100检测所得m RNA及c DNA的质量。结果:HA标记的多聚核糖体在目标细胞群体中能够被高效启动表达。抑制性神经元特异性多聚核糖体结合的m RNA能够被特异性地富集提取。所获细胞类型特异性的多聚核糖体结合的m RNA及c DNA的质量足以用来进行高通量测序及翻译表达谱的分析。结论:利用Cre-loxp遗传系统标记,结合蛋白免疫共沉淀实验,建立了从小鼠大脑抑制性神经元中高效特异地获得多聚核糖体结合的m RNA的方法,为进一步进行小鼠大脑抑制性神经元特异性翻译表达谱的分析奠定了基础。
摘要:目的:观察ADPKD小型猪肾脏组织中细胞增殖和凋亡的改变。方法:使用PKD1基因敲除的小型猪模型,用Western blot和免疫组化方法检测肾脏组织中细胞增殖指标PCNA;增殖相关的m TOR信号通路分子(phospho-m TOR、phospho-p70S6、phospho-4EBP1)和ERK信号通路分子(phospho-PKA、phospho-MEK、phospho-ERK)的表达水平以及内皮细胞粘附分子CD31以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase 3的表达变化。结果:在ADPKD小型猪肾脏组织中,增殖指标PCNA表达显著升高。m TOR信号通路分子phospho-m TOR、phospho-p70S6、phospho-4EBP1水平明显升高,ERK信号通路分子中phospho-PKA、phospho-MEK、phospho-ERK水平明显升高。CD31表达明显升高,Bax/Bcl-2的比值以及caspase 3的表达水平显著升高。结论:本研究显示在ADPKD小型猪肾脏组织中,细胞增殖和凋亡信号通路明显激活。
摘要:目的:观察蛇床子素(osthole)对人骨肉瘤细胞SAOS-2增殖和凋亡的影响及潜在的调控机制。方法:采用MTT法、TUNEL染色技术和流式细胞术检测不同浓度蛇床子素对骨肉瘤细胞凋亡的影响;Western blot检测蛇床子素对骨肉瘤细胞中与细胞凋亡密切相关的蛋白(Bax、Bcl-2)的变化。结果:蛇床子素作用于SAOS-2细胞后,MTT结果显示SAOS-2细胞的活力受到明显抑制,且与蛇床子素浓度和时间相关;Western blot结果显示细胞中的促凋亡蛋白Bax表达上调,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显减弱,且呈剂量依赖性。结论:蛇床子素可显著抑制人骨肉瘤细胞的增殖且促进其凋亡的作用,可能与上调凋亡蛋白Bax和下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达有关。
摘要:目的:观察柴胡解毒汤对实验性酒精性肝纤维化复合模型大鼠Col-IV、HA血清含量的影响。方法:通过采用酒、猪油混合灌胃诱导大鼠实验性酒精性肝纤维化复合模型,并分为柴胡解毒汤干预I组(简称干预I组)、柴胡解毒汤兼酒精高脂饮食组(简称干预II组)、酒精兼高脂饮食组(简称模型组)及空白对照组予以灌胃,最终取大鼠血清进行检测。称量大鼠体重,并用ELISA Kit法检测透明质酸(HA)和IV型胶原(Col-IV)的含量。结果:12周后,造模各组大鼠毛发灰暗,杂乱,消瘦,活动度减弱,大便溏稀。血清Col-IV、HA较空白对照组均有显著升高(P〈0.01),与模型组比较,干预I组和干预II组均下降明显(P〈0.01)。干预I组、干预II组、模型组、空白对照组HA含量依次为219.17±41.64、184.89±22.83、249.32±34.60、123.48±25.85。Col-IV含量依次为9.59±1.81、12.57±1.41、19.71±6.04、7.62±5.36。结论:柴胡解毒汤可能通过抑制Col-IV、HA的表达水平,对大鼠实验性酒精性肝纤维化复合模型具有一定的干预作用。
摘要:目的:探讨白藜芦醇对6-羟基多巴引起的细胞损伤的内在保护机制。方法:以SN4741细胞系为实验对象,分为对照组、6-羟基多巴处理组和白藜芦醇预处理、6-羟基多巴处理组组。MTT法测定细胞活性。Western blot检测细胞内DJ-1表达水平。ROS检测反映细胞的氧化应激水平和线粒体损伤情况。线粒体膜电位检测反映细胞线粒体功能。结果:白藜芦醇可以剂量依赖性方式提高6-OHDA诱导的SN4741细胞的存活率。白藜芦醇预处理显著逆转6-OHDA诱导的SN4741细胞DJ-1水平的下降,降低6-OHDA引起的氧化应激水平和线粒体损伤。结论:白藜芦醇预处理能够保护6-羟基多巴所致的SN4741细胞损伤,可能与提高DJ-1的表达,减轻细胞内的氧化应激水平,改善线粒体功能有关。
摘要:目的:探讨透明质酸联合盐酸米诺环素对大鼠金黄色葡萄球菌感染创口的治疗效果。方法:选择32只Wistar大鼠,在背部脊柱两侧各制备1个全层皮肤缺损模型。创面接种细菌形成感染创口并将大鼠随机地分为4个组,每个组共有16个创口。实验组(1.5%透明质酸联合0.1%盐酸米诺环素凝胶治疗组)、对照组1(0.9%生理盐水治疗组)、对照组2(1.5%透明质酸凝胶治疗组)、对照组3(0.1%盐酸米诺环素凝胶治疗组)。观察分析创口愈合情况及创口愈合率,HE染色组织形态学分析,免疫组织化学染色法分析创口中肿瘤坏死因子α的表达。结果:透明质酸联合盐酸米诺环素组创口愈合率为(78.13±3.04)%,显著高于生理盐水对照组、透明质酸对照组和盐酸米诺环素对照组(均P〈0.05);透明质酸联合盐酸米诺环素组创口可见大量成熟的纤维组织,生理盐水组创口可以观察到组织发生坏死,结构不清;透明质酸组可见富含血管的新生肉芽组织;盐酸米诺环素组可见大量纤维组织;透明质酸联合盐酸米诺环素组创口TNF-α表达为10.84±1.49,显著低于生理盐水对照组、透明质酸对照组和盐酸米诺环素对照组(均P〈0.05)。结论:1.5%透明质酸联合0.1%盐酸米诺环素凝胶对大鼠金黄色葡萄球菌感染创口有较好的治疗效果。
摘要:目的:构建乳腺癌体外骨转移瘤3D模型。方法:新生CD-1小鼠的颅骨单独孵育为正常组,新生CD-1小鼠的颅骨与MDA-MB-231细胞低氧共孵育四天为模型组。通过扫描电镜(SEM)鉴定骨转移瘤模型,中性红染色法鉴定骨组织中的破骨细胞,硝酸银复染法观察骨的溶解,结晶紫染色法观察骨转移瘤模型中肿瘤细胞的生长。结果:正常组骨表面光滑完整;模型组骨组织表面黏附大量肿瘤细胞,破骨细胞活性增强,产生严重的溶骨,表面出现骨陷窝,骨纤维发生断裂。结论:成功建立了乳腺癌骨转移瘤体外3D模型,该模型能够模拟体内骨转移瘤微环境。
摘要:目的:观察藁本内酯对H2O2诱导的B16黑素瘤细胞氧化损伤的保护作用并探讨其可能机制。方法:以H2O2诱导B16黑素瘤细胞氧化损伤为模型,并以藁本内酯进行干预,采用MTT法测细胞活力,酶标仪检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,流式细胞术测细胞凋亡率、线粒体膜电位(△Ψm)和细胞内游离钙离子浓度。结果:与H2O2诱导的B16黑素瘤细胞比较,应用藁本内酯(5、10、20μmol·L^-1)处理的B16黑素瘤细胞活力和△Ψm明显提高,LDH漏出量明显减少,细胞凋亡率和细胞内游离钙离子浓度明显降低,差异均具有统计学意义(P〈0.05)。结论:藁本内酯对H2O2诱导的B16黑素瘤细胞氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能通过恢复线粒体功能、抑制细胞凋亡有关。
摘要:目的:基于细胞计数板建立一种简单、快速使用免疫荧光显微镜观察B淋巴细胞吞噬卡介苗(BCG)现象的新方法,对即将进行流式细胞检测的样品进行质控,提高流式细胞术检测吞噬率的稳定性,同时为流式细胞仪检测吞噬率提供镜下依据。方法:B细胞与FITC标记的BCG共培养24 h后,PE anti-human CD19抗体直接标记细胞膜,应用细胞计数板在荧光显微镜下观察B细胞吞噬现象,流式细胞仪检测吞噬率。结果:应用细胞计数板在荧光镜下可观察到B细胞与BCG的荧光标记及B细胞与BCG共标记现象,证实B细胞可吞噬BCG,流式细胞仪检测结果显示吞噬率为13.9%。结论:应用细胞计数板在荧光镜下可观察B细胞吞噬现象,且操作简便快速,能对流式细胞检测的样品进行质控,并提供镜下依据。
摘要:目的:探讨层析法新工艺和原有的低温乙醇工艺制备纤维蛋白原在大鼠跟腱断裂模型中促恢复的效果差异。方法:构建大鼠跟腱部位断裂模型,将其分为空白组(未剪跟腱)、模型组(跟腱断裂未给药)、实验组(自制纤维蛋白原2 mg/m L)与对照组(市售纤维蛋白原2 mg/m L),观察各组大鼠在手术后三周跟腱部位的最大滑动距离、弹性模量和最大抗拉力差异。结果:采用冷沉淀溶解、酸沉除杂、S/D灭活病毒、Macro Cap Q柱层析、过滤等流程可从人血浆冷沉淀组分I中成功分离纯度为90.9%纤维蛋白原。试验中构建的大鼠跟腱部位断裂模型无感染、且均存活至试验终止。生物力学结果显示,四组大鼠跟腱在最大滑行距离上无明显统计学差异(P〉0.05);在跟腱部位弹性模量及最大抗压力比较上,实验组及对照组均优于模型组,但与空白组仍有一定差距,且差异均具有统计学意义(P〈0.05)。结论:采用柱层析法分离人纤维蛋白原,不仅能有效提高分离效率,减少蛋白损失,还可增强纤维蛋白原在断裂跟腱中的促恢复效果。
摘要:目的:分析髋关节周围滑膜组织CD11b表达水平与人工髋关节置换术后无菌性松动的相关性。方法:以2006年5月至2016年5月于西京医院接受人工髋关节置换的患者为研究对象,对其髋关节周围滑膜组织进行CD11b免疫组化染色,并随访术后5年和10年无菌性松动的发生情况,通过单因素分析及logistic回归分析讨论CD11b表达与无菌性松动之间的相关性。结果:共300例患者纳入研究,全部获得随访,CD11b表达阳性患者163例,阳性率为54.33%;术后5年松动患者29例,术后5年无菌性松动发生率为9.67%;术后10年无菌性松动患者49例,术后10年无菌性松动发生率为16.33%;单因素分析结果表明CD11b表达阳性患者5年及10年松动率均高于CD11b表达阴性患者(P〈0.05);logistic回归分析结果表明CD11b过表达是髋关节置换术后无菌性松动发生的危险因素。结论:髋关节周围滑膜组织CD11b过表达是人工髋关节置换术后无菌性松动发生的危险因素,该分子或可作为无菌性松动的辅助诊断指标及潜在治疗靶点。
摘要:目的:分析美沙拉嗪对溃疡性结肠炎患者血清炎症因子与凝血指标的影响。方法:按抽签法将102例溃疡性结肠炎患者分作对照组和研究组,各51例,对照组治疗采用柳氮磺胺吡啶,研究组治疗采用美沙拉嗪,观察两组治疗前后血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α),血小板(PLT)、纤维蛋白原(Fg)、凝血酶原时间(PT)、D-二聚体(D-D)水平,氧化应激指标,免疫功能,临床疗效及安全性。结果:治疗后,研究组患者血清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、Fg、D-D水平及PLT均显著低于对照组,PT高于对照组,差异有统计学意义(P〈0.05)。研究组氧化应激过氧化脂质(LPO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、免疫功能(CD3^+、CD4^+、CD8^+、CD4^+/CD8^+)改善均优于对照组(P〈0.05)。研究组总有效率高于对照组,不良反应率低于对照组,均有统计学差异(P〈0.05)。结论:美沙拉嗪治疗溃疡性结肠炎患者可显著抑制炎症,改善氧化应激状态,纠正凝血功能障碍并改善免疫功能,且临床疗效和安全性均较好。
摘要:目的:探讨核医学肾动态显像和血清胱抑素C(Cys C)在评价肾积水患者肾功能中的临床应用。方法:选择2014年1月至2015年1月我院收治的肾积水患者70例,依据肾积水程度将患者分为轻度积水组(21例)、中度积水组(26例)、重度积水组(23例)三组,选择同期我院体检中心的健康成人20例作为对照组,所有研究对象分别通过肾动态显像和双血浆法测量肾小球率过滤(GFR),分别记为I-GFR和r GFR,采用酶联免疫吸附法和血生化分析仪分别检测血清Cys C和尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)。结果:各组各指标比较差异均有统计学意义(均P〈0.05),肾积水患者r-GFR、I-GFR显著低于对照组患者,Cys C、BUN、SCr均显著高于对照组患者,差异有统计学意义(均P〈0.05);不同程度患者r-GFR、Cys C和SCr差异有统计学意义(均P〈0.05),其中,重度积水组〉中度积水组〉轻度积水组,差异有统计学意义(均P〈0.05);重度积水组I-GFR和BUN均高于轻度积水组和中度积水组,差异有统计学意义(均P〈0.05);r GFR和I-GFR与肾积水程度呈负相关(r=-0.967、-0.754,P=0.000、0.000),Cys C、BUN和SCr与肾积水程度呈正相关(r=0.883、0.627、0.671,P=0.000、0.002、0.001)。结论:核医学肾动态显像在评价轻度肾积水患者肾功能时更敏感,而血清Cys C在区分中、重度肾积水患者时更加准确,上述两指标作为替代双血浆法的检测方法在临床上应该互为补充,方能使诊断更加准确。
摘要:目的:探讨不同年龄段冠心病(CAD)患者的临床特征,并对其危险因素进行分析。方法:采用回顾性研究,选择2010-2014年于我院冠状动脉造影并行介入治疗的冠心病患者480例,其中老年患者(A组)320例,中青年患者(B组)160例。分析两组患者的临床资料、冠状动脉病变情况、疾病类型及术后不良反应发生率,比较两组实验室检查指标,将上述差异有统计学意义的因素带入多元线性回归,分析冠心病的危险因素。结果:(1)A组与B组之间,在性别构成及是否患有高血压病方面比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。(2)A组的单支病变以及三支病变者发生率较B组高,差异有统计学意义(P〈0.05)。A组患者术后总的不良发生率较中B组多,其中出血、心律失常、心源性休克的发生率也均较中青年组高,差异有统计学意义(P〈0.05)。(3)A组患者的肌酐(Cr)、血浆凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(FIB)水平高于B组,谷氨酰转肽酶(GGT)、三酰甘油(TG)、同型半胱氨酸(Hcy)、血小板计数(PLT)水平低于B组,且差异有统计学意义(P〈0.05)。(4)多因素Logistic回归分析显示,Hcy、FIB是冠心病的危险因素(P〈0.05)。结论:老年与中青年冠心病患者的临床表现有较大不同,且Hcy、FIB是影响不同年龄段冠心病发病的危险因素,提示在临床治疗冠心病过程中治疗方案应存在一定差异。
摘要:目的:探讨血清血管内皮生长因子(VEGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和CA125水平和子宫动脉栓塞术(UAE)治疗子宫腺肌症的之间的相关性。方法:选择接受子宫动脉栓塞术治疗的39例子宫腺肌症患者作为患者组,取同时期参加健康体检的30名健康者作为健康对照组。用ELISA法检测子宫腺肌症患者子宫动脉栓塞术前和术后不同时点血清VEGF、IGF-1、CA125的水平,评估子宫动脉栓塞术后的患者的疗效。结果:34例痛经患者术后1个月开始改善,最终29例完全缓解,有效率85.2%。患者组治疗前血清VEGF、IGF-1、CA125水平均显著高于健康对照组(P〈0.05)。子宫动脉栓塞术治疗后,患者组血清IGF-1、VEGF和CA125的水平与治疗前相比均显著降低,术后6月,恢复正常水平。结论:血清IGF-1、VEGF、CA125的变化可能在子宫动脉栓塞术治疗子宫腺肌症中作为疗效和预后评估指标。
摘要:目的:探讨骨保护素对激素性股骨头坏死患者功能恢复及血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)和Ⅱ型胶原羧基端端肽(CTX-Ⅱ)水平的影响。方法:选取2014年1月~2016年6月我院骨科收治的130例激素性股骨头坏死患者作为研究对象,采取随机数字表将其分成两组,每组65例。两组患者均给平卧床、患肢持续皮牵引治疗,观察组在此基础上联合使用骨保护素治疗,比较两组临床疗效、功能恢复情况以及治疗前后骨密度、血清TRAP与CTX-Ⅱ水平。结果:观察组治疗优良率为90.77%,相对于对照组的72.31%明显上升(P〈0.01)。两组治疗后股骨头局部骨密度均有上升(P〈0.01),其中观察组上升更为明显(P〈0.01);观察组治疗后腰椎平均骨密度与治疗前相比有明显上升(P〈0.01),对照组无明显变化(P〉0.05)。两组治疗后血清TRAP与CTX-Ⅱ水平均较治疗前显著下降(P〈0.01),但观察组下降更为明显(P〈0.01)。结论:骨保护素治疗激素性股骨头坏死可有效抑制骨吸收、增强骨密度、改善患髋关节功能。
摘要:目的:探讨清肝降压胶囊联合厄贝沙坦治疗原发性高血压的临床疗效。方法:收集2014年3月-2016年3月我院收治的86例高血压患者,随机分为对照组和研究组,每组43例。对照组患者采用硝苯地平缓释片治疗,研究组患者采用清肝降压胶囊联合厄贝沙坦治疗。观察并比较两组患者治疗前后收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、血清脂联素(Adiponectin)、同型半胱氨酸(Hcy)及血管内皮生成因子(VEGF)水平的变化情况,以及临床疗效。结果:与治疗前相比,两组患者治疗后SBP及DBP水平均降低,差异具有统计学意义(P〈0.05);与对照组比较,研究组患者治疗后SBP及DBP更接近于正常水平,差异具有统计学意义(P〈0.05)。与治疗前相比,两组患者治疗后血清脂联素水平均升高,而VEGF及Hcy水平均降低,差异具有统计学意义(P〈0.05);与对照组比较,研究组患者治疗后血清脂联素水平较高,而VEGF及Hcy水平较低,差异具有统计学意义(P〈0.05)。研究组患者治疗总有效率显著高于对照组,差异具有统计学意义(P〈0.05)。结论:清肝降压胶囊联合厄贝沙坦治疗原发性高血压的临床疗效显著,能够升高患者血清脂联素水平,同时降低血管内皮生长因子和同型半胱氨酸水平,值得临床推广应用。
摘要:目的:比较远端胃癌应用腹腔镜辅助技术行D2根治术与传统开腹远端胃癌D2根治术安全性、近期生存差异。方法:回顾性分析2010年1月-2012年12月在我院行远端胃癌根治术的158例患者,其中行腹腔镜辅助远端胃癌根治手术75例(腹腔镜组),与开腹远端胃癌根治手术83例(开腹组)。对比分析腹腔镜组与开腹组病人术中情况和术后并发症及近期生存差异。结果:腹腔镜组与传统开腹组病人一般资料、病理学类型、肿瘤位置、肿瘤浸润深度、转移淋巴结数目、总清扫淋巴结数目、肿瘤TNM分期比较差异无统计学意义(P〉0.05),腹腔镜组手术时间较传统开腹组长(P〈0.05),切口长度、离床活动时间、排气时间、进流食时间、总住院时间短于开腹组,差异有统计学意义(P〈0.05),腹腔镜组与开腹组术中出血量、术后并发症发生率、近期生存率比较差异无统计学意义(P〉0.05)。结论:腹腔镜辅助胃癌D2根治性手术安全可行,可达到开腹手术相同的根治效果,但较开腹组具有术中创伤小、术后恢复快优势。