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摘要:目的:比较具有氧化还原活性的过渡金属离子Cu2+(Cu)诱导形成的Aβ聚集物(Aβ-Cu复合物)与Aβ自聚集形成的纤丝(Fibrillar Aβ,f Aβ)对小胶质细胞激活作用的差异。方法:制备Aβ-Cu复合物和fAβ,利用小鼠BV-2小胶质细胞株,分别以不同浓度的Aβ-Cu复合物和fAβ于37℃刺激24 h,检测细胞上清液中的TNF-α(Tumor necrosis factor-α)、NO(Nitric oxide)以及H2O2(Hydrogen Peroxide)的含量。分别收集Aβ-Cu复合物和f Aβ作用24 h后的大鼠原代小胶质细胞条件培养液,通过观察该条件培养液对大鼠原代海马神经元细胞活力的影响,评价小胶质细胞介导的间接神经元毒性。结果:(1)在不引起直接神经毒性剂量(2.5μM)下,Aβ-Cu复合物激活小胶质细胞释放TNF-α(P〈0.01)、NO(P〈0.05)以及H2O2(P〈0.05)的作用强于f Aβ。(2)在此剂量下,Aβ-Cu复合物通过激活小胶质细胞引起的间接神经元毒性强于fAβ(P〈0.05)。结论:与fAβ相比,非神经毒性剂量的Aβ-Cu复合物对于小胶质细胞具有更强的激活作用,并由此引发更为明显的神经元毒性。
摘要:目的:从足月剖腹产分娩新生儿脐带中分离出人脐带间充质干细胞(UC-MSCs),探讨其在体外促进SKOV3卵巢癌细胞凋亡,抑制其增殖的作用。方法:新鲜人脐带洗净后剥离动静脉及脐带外膜,得到脐带Wharton’s胶。采用组织块贴壁法分离、纯化得到UC-MSCs细胞,光镜下观察UC-MSCs细胞的形态及贴壁生长情况。收集UC-MSCs细胞培养上清,加入SKOV3细胞共培养后,观察不同作用时间(12 h,24 h,36 h,48 h,60 h,72 h)其体外促进SKOV3卵巢癌细胞凋亡,抑制其增殖的作用。结果:光镜下UC-MSCs细胞成长梭状,单核,并成放射或漩涡状排列。PI染色提示,随着UC-MSCs细胞培养上清对SKOV3卵巢癌细胞作用时间的增加,其发生凋亡的细胞数量增多,且具有统计学意义(P〈0.05)。MTT实验提示SKOV3细胞增殖活力随UC-MSCs细胞培养上清作用时间的增加而显著下降(P〈0.05),共培养24 h,48 h,72 h的抑制率分别为17.08%,35.36%,46.83%。结论:UC-MSCs在体外具有明显促进SKOV3卵巢癌细胞凋亡,抑制其增殖的作用。
摘要:目的:探讨缺血再灌注损伤早期肾脏皮质内大电导钙依赖性钾通道(BK)通道的表达及意义。方法:建立成年SD大鼠肾脏急性缺血再灌注损伤模型,快速收集24小时缺血大鼠与对照大鼠血和损伤侧肾脏皮质标本,使用ELISA方法检测血肌酐和尿素氮含量,实时荧光定量RT-PCR和蛋白免疫印迹方法检测肾脏组织中BK通道α亚基的m RNA表达水平和蛋白表达水平。结果:(1)急性缺血再灌注大鼠损伤侧肾脏皮质BK通道α亚基m RNA水平较对照大鼠同侧肾脏皮质的表达明显降低(P〈0.01)。(2)急性缺血再灌注大鼠损伤侧肾脏皮质BK通道α亚基蛋白水平较对照大鼠同侧肾脏皮质的表达也明显降低(P〈0.05)。(3)NS1619预处理缺血再灌注大鼠血尿素氮和血肌酐含量显著降低(P〈0.05)。结论:BK通道表达和功能的改变是参与大鼠肾脏缺血再灌注损伤的重要机制。
摘要:目的:研究盐酸小檗碱缓释片的配方与制备方法,考察其释放度。方法:以盐酸小檗碱释放度为考察指标,采用单因素试验法,考察了羟丙基甲基纤维素(HPMC)和乳糖的用量对药物体外释放行为的影响,并采用正交设计实验对处方进行优化,确定最佳处方。结果:最佳配方为HPMC-K4M的用量为10%,乳糖用量为20%,PVP的用量为3%,微晶纤维素的用量为20%。2 h累积释药量为30%,6 h累积释药量为60%,12 h累积释药量为90%。结论:按最佳配方制备的盐酸小檗碱缓释片有较好的缓释行为,基本上能满足缓释片的释放要求。
摘要:目的:构建鹿茸富脯氨酸多肽(APRP)基因融合表达载体,并诱导表达融合蛋白GST-APRP。方法:以鹿茸顶端组织总c DNA为模板,PCR方法扩增目的片段,连接p MDTM18-T载体,转化E.coli DH5α进行TA克隆。酶切与测序鉴定合格后,将目的片段与p GEX-6P-1质粒连接,完成p GEX-6P-1-APRP融合表达载体的构建。利用原核表达系统进行初步诱导表达。SDS-PAGE蛋白电泳检测蛋白表达情况。结果:PCR成功扩增出目的基因片段,目的基因片段大小为216 bp。提取表达载体质粒经酶切及测序分析证实p GEX-6P-1-APRR融合表达载体构建成功。利用终浓度为0.5 m MIPTG诱导,融合蛋白成功表达,分子量为35 k Da。结论:目前利用基因工程技术获得特定的鹿茸多肽的报道很少。本研究结果表明,利用原核表达系统可在体外对鹿茸富脯氨酸多肽基因(APRP)进行融合表达,并且融合蛋白GST-APRP以可溶形式表达,有利于进一步研究APRP。这也为研究其他鹿茸多肽单体成分提供重要参考。
摘要:目的:通过建立表达不同高低水平miRNA-194的骨肉瘤细胞系,研究和探测miRNA-194对于骨肉瘤细胞转移特性的影响和作用。为进一步研究miRNA-194作为生物治疗的新靶点提供理论依据。方法:使用慢病毒技术,对骨肉瘤细胞进行转染和筛选,获得表达不同高低水平miRNA-194的骨肉瘤细胞系并进行分组。通过Transwell实验,划痕实验对miRNA-194在骨肉瘤中的作用进行探索。结果:1)慢病毒转染及筛选成功,获得表达不同高低水平miRNA-194的骨肉瘤细胞系;2)transwell迁移及侵袭实验中,miRNA-194过表达组的迁移(28.60±4.36)及侵袭(21.25±6.42)能力都显著的小于其余各组,相应的,miRNA-194沉默表达组(132.60±15.64;115.76±11.38)则高于其余各组。划痕实验结果显示,miRNA能够显著的抑制骨肉瘤细胞SOSP-9607的划痕愈合能力(P〈0.01)。结论:miR-194能够对骨肉瘤细胞SOSP-9607的转移起到明确的抑制作用。MiRNA-194有望成为骨肉瘤转移与治疗的新靶点。
摘要:目的:研究藏红花(Saffron)对肝纤维化大鼠肝组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)表达的影响。方法:45只雄性SD大鼠随机均分为3组:正常组、模型组、藏红花组,除正常组外,另外两组给予40%四氯化碳橄榄油溶液腹腔注射制备肝纤维化大鼠模型,在造模的同时,藏红花组给予藏红花溶液5 m L·kg-1·d-1灌胃。8周后处死大鼠,留取肝脏组织,通过Masson染色观察大鼠肝纤维化的形成,免疫组化方法检测肝组织中Caspase-3及Bcl-2蛋白表达。结果:模型组大鼠肝纤维化程度最重,藏红花组较模型组纤维化程度轻,正常组大鼠肝脏无纤维化。与模型组比,藏红花组Caspase-3在肝实质内呈弱阳性表达,而纤维间隔内表达增加;Bcl-2的表达明显减少(P〈0.05),正常组Caspase-3及Bcl-2几乎无表达。结论:藏红花具有抗肝纤维化作用,其机制可能与调节Caspase-3,Bcl-2的表达有关。
摘要:目的:探索氢氧化镁对BSA微球体外释放的影响,优化BSA微球的制备工艺。方法:通过水包油包固复乳法制备BSA-PLGA微球。先将BSA与葡聚糖制备成玻璃体颗粒,再将玻璃体颗粒与氢氧化镁包裹进PLGA中,制备成缓释微球。在扫描电镜下观察其形态。然后用Micro BCA法测定其包封率和载药量,并考察其体外释放行为。结果:所制得的微球粒径约60μm,呈较好的球形。添加氢氧化镁后,BSA微球的包封率和载药量都有显著提高。不同含量的氢氧化镁对BSA微球的包封率和载药量影响也不同。在体外释放过程中,载有氢氧化镁的微球14天累积释放量为(85.10±2.67)%,而对照组不到80%。结论:通过调整氢氧化镁的量,可以制得形态完整,大小均匀,突释较小的BSA微球。
摘要:目的:探究树舌多糖GF(GAPS.GF)对rAAV-shRNA-CDK2抑制肝癌细胞Cyclin E基因表达的辅助作用。方法:将细胞培养后的人肝癌HepG2以皮下注射的方式接种于裸鼠前肢腋下,接种后的裸鼠随机分为5组:NC(非相关序列)对照组、肿瘤组、rAAV-shRNA-CDK2组、树舌多糖GF组以及树舌多糖GF+rAAV-shRNA-CDK2组,各实验组均采取尾静脉注射定量给药。采用实时定量PCR和Western blot技术研究肝癌细胞Cyclin E基因m RNA和蛋白水平的表达情况,同时观察GASP.GF对其作用的影响。结果:树舌多糖GF+rAAV-shRNA-CDK2联合应用组对肝癌HepG2细胞增殖的抑瘤率为75.6%,对Cyclin E基因mRNA表达抑制率为69%,对Cyclin E基因蛋白表达抑制率为67.5%,比rAAV-shRNA-CDK2组分别提高了3.42%、1%和2.7%。结论:树舌多糖GF与rAAV-shRNA-CDK2联合应用可以显著提高肝癌的治疗效果,说明树舌多糖GF可以辅助r AAV-shRNACDK2对肝癌细胞Cyclin E基因的表达的抑制作用。
摘要:目的:改进现有的检测表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的荧光PCR法并开发出新的试剂盒,将其与直接测序法和ARMS法进行对比,验证该试剂盒用于临床诊断的敏感性、特异性和准确性。方法:收集2013年6月至2015年8月手术确诊的141例非小细胞肺癌(NSCLC)的石蜡包埋组织标本。采用盲法分别使用直接测序法、ARMS法和新试剂盒检测EGFR突变,比较新试剂盒与其他两种检测方法的差异,结果不一致时采用三种方法分别重复检验一次。结果:三种方法检测成功率均为100%,新试剂盒与直接测序法测得结果完全一致的比率达75.9%(107/141),在直接测序法测得的96例突变阳性中,92例在新试剂盒检测中得到验证(95.8%)。而直接测序法显示突变阴性的45例中,新试剂盒检测发现了23例突变阳性,两种检测方法的结果存在统计学差异(x2=40.745,P〈0.05)。与直接测序法进行比较,新试剂盒检测EGFR突变的敏感性、特异性分别为95.8%、48.9%,阳性预测值、阴性预测值分别为80.0%、84.6%,检测准确度为80.9%。以ARMS检测法为金标准,新试剂盒测得结果完全一致的比率达84.4%(119/141),两者的一致性比较好(K=0.749,P〈0.05),敏感性、特异性分别为94.1%、86.4%。结论:改进后EGFR基因突变检测的试剂盒在技术上较好地控制了检测结果的假阳性和假阴性,该检测方法较直接测序法具有更好的敏感性和准确性,与现有的ARMS法一致性较高。
摘要:目的:探讨慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者血清降钙素原(PCT)、尿酸(UA)、白细胞计数(WBC)、空腹血糖(Glu)的变化及其在AECOPD中的临床意义。方法:收集2014年9月至2015年9月期间就诊于我院的AECOPD患者45例、COPD稳定期患者30例及健康受试者45例。分别采用荧光法、血液分析仪和生化分析仪测定受试者血清PCT、WBC、UA和Glu水平,并进行统计学分析。结果:与COPD稳定期及健康对照组相比,AECOPD患者PCT(0.23±0.23 vs.0.13±0.16,0.01±0.03)、UA(410.54±81.35 vs.324.44±57.71,264.32±52.23)、WBC(8.88±4.28 vs.7.65±1.66,6.59±1.14)、Glu(6.22±1.14 vs.5.62±0.98,4.35±0.62)水平均明显升高(P〈0.05)。PCT、UA、WBC、Glu诊断AECOPD的ROC曲线下面积分别为0.834、0.939、0.643、0.933,AUCGlu〉AUCPCT〉AUCWBC有统计学意义(P〈0.05),AUCUA〉AUCGlu无统计学意义(P〉0.05)。结论:PCT、UA、WBC、Glu水平对AECOPD患者具有一定的诊断意义,以UA和Glu的诊断价值更高。
摘要:目的:探讨双歧杆菌三联活菌胶囊联合营养支持治疗重症急性胰腺炎的临床疗效。方法:选择2014年1月至2015年6月我院收治的90例重症急性胰腺炎患者作为研究对象,按照随机数字表法分为治疗组和对照组,每组45例患者。对照组在常规治疗基础上采用营养支持治疗,治疗组在对照组的基础上采用双歧杆菌三联活菌胶囊治疗。分别于治疗前后取患者静脉血进行C反应蛋白、白细胞介素-8、肿瘤坏死因子、白细胞计数、淀粉酶、脂肪酶、乳酸脱氢酶的检测,并对治疗效果和胃肠功能进行评分。结果:治疗组的总有效率95.56%显著高于对照组的80.00%,差异有统计学意义(P〈0.05)。治疗14 d后,两组患者的C反应蛋白、白细胞介素-8、肿瘤坏死因子、白细胞计数、淀粉酶、脂肪酶、乳酸脱氢酶水平均降低,且治疗组的下降幅度显著大于对照组,差异均有统计学意义(P〈0.05)。治疗后两组患者的胃肠功能评分均低于治疗前,且治疗组胃肠功能评分明显优于对照组,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:双歧杆菌三联活菌胶囊联合营养支持治疗重症急性胰腺炎可降低患者的血液指标,增强肠道功能,具有较好的临床疗效,临床可推广应用。
摘要:目的:研究冠心病不稳定型心绞痛患者支架植入术后CF6浓度变化与支架内膜增生程度的关系。方法:筛选符合入组条件的患者20例,入组患者于造影前、造影后即刻、支架植入术(Percutaneous coronary intervention,PCI)后即刻、术后1天、术后3天、术后7天、术后12个月后检测体内CF6的浓度,并于术后12个月行冠状动脉造影复查,用光学相干断层成像(Optical coherence tomography,OCT)检测内膜增生程度。结果:造影前和造影术后即刻患者血浆CF6水平没有明显差别(造影前CF6:215.65+14.39pg/m L,造影术后即刻CF6:216.75+14.40 pg/m L,P〉0.05)。PCI术后即刻血浆CF6浓度较造影前增高(231.75+13.2 pg/m L,P〈0.05),术后1天可达到高峰(262.4+14.06 pg/m L,P〈0.05),3天后有所下降(239.86+13.15 pg/m L,P〈0.05),但仍高于造影前水平,7天后可以恢复至造影前水平(222.4+15.06pg/m L,P〉0.05)。术后1年随访时,血浆CF6水平是221.05+14.82 pg/m L,平均内膜增生厚度为0.158+0.014mm,平均内膜面积为0.134+0.057 mm2,患者内膜增生厚度与支架植入1天后血浆CF6峰值呈正相关(r=0.819,P〈0.05)。内膜增生面积与PCI术后血浆CF6峰值水平正相关(r=0.729,P〈0.05)。结论:冠心病患者术后CF6浓度峰值越高,其支架内膜增生越厚。
摘要:目的:比较椎间盘镜髓核摘除术(microendoscopic discectomy,MED)与椎间孔镜髓核摘除术(percutaneous endoscopic lumbar discectomy,PELD)治疗腰椎间盘突出症的优缺点、安全性及临床疗效。方法:分析和回顾2012.06-2015.06第四军医大学唐都医院骨科收治的共计118例腰椎间盘突出症患者。经严格的进行纳入和排除标准筛选,其中椎间盘镜组共纳入患者46例,椎间孔镜组患者共纳入患者72例。对所有患者均进行了6个月以上的术后随访,记录和分析两组患者在手术时间、卧床时间、出血量、切口长度、疼痛、并发症等指标。并通过Macnab腰椎功能评分等对两组患者的功能恢复进行比较。结果:在术后,两组患者在疼痛评分及功能恢复方面均有明显的提高,且两组之间并无显著统计学差异(P〉0.05)。而椎间孔镜组在手术时间、卧床时间,总花费等指标中要优于椎间盘组(P〈0.05)。但在住院时间,出血量,切口长度及并发症等方面两组无明显的显著性差异(P〉0.05)。结论:两种手术方式作为脊柱微创手术,能够有效地治疗腰椎间盘突出症,安全程度较高,各有其优劣性,在临床中应根据不同的患者的实际情况进行个性化的选择。
摘要:目的:探讨腹腔镜手术治疗急性阑尾炎的临床疗效以及对患者血清降钙素原(PCT)和C反应蛋白(CRP)水平的影响。方法:选择2014年9月至2015年9月期间我院收治的急性阑尾炎患者80例为研究对象,采用随机数字表法将患者分为对照组(n=40)和观察组(n=40),观察组行腹腔镜手术治疗,对照组行开腹手术治疗,对比两组患者的疗效、并发症、围手术期外周血PCT、CRP的变化情况。结果:观察组患者术中出血量、术后首次肛门排气时间以及住院时间均明显少于对照组(P〈0.05);观察组患者术后总并发症发生率明显低于对照组(P〈0.05);术后第1 d,两组患者的血清PCT、CRP水平相比术前均有明显升高(P〈0.05);术后第3 d,观察组血清PCT、CRP水平则与术前无明显差异(P〉0.05),而对照组则仍明显高于术前水平(P〈0.05);术后第5 d,观察组血清PCT、CRP水平明显低于术前(P〈0.05),而对照组与术前相比无统计学意义(P〉0.05)。观察组术后第1、3、5 d的血清PCT、CRP水平均明显低于对照组(P〈0.05)。结论:相比开腹手术,腹腔镜手术治疗急性阑尾炎患者疗效显著,能有效控制血清PCT、CRP水平,有利患者及早康复。
摘要:目的:探讨中性大孔径树脂血液灌流联合连续性静脉-静脉滤过治疗脓毒症并发急性肾功能损伤的临床疗效。方法:120名脓毒症并发急性肾功能损伤的患者随机分成两组,每组60例。观察组采用中性大孔径树脂血液灌流联合连续性静脉-静脉滤过(NMRC-DHP+CVVH)治疗;对照组采用连续性静脉-静脉滤过(CVVH)治疗。使用ELISA方法对两组患者CRP、TNF-α、IL-6及IL-10水平进行检测,并对两组APACHEⅡ评分进行比较。结果:(1)治疗后3 d、7 d、14 d,两组CRP、TNF-α和IL-6较治疗前显著下降,P〈0.05,而IL-10水平差异无统计学意义(P〉0.05);同期比较,观察组CRP、TNF-α和IL-6水平均低于对照组,P〈0.05,而IL-10水平无显著变化(P〉0.05);(2)治疗后3 d、7 d、14 d,两组APACHE II评分较治疗前显著下降,P〈0.05;同期比较,观察组APACHE II评分均低于对照组,P〈0.05。结论:相对于单独采用CVVH,采用NMRC-DHP联合CVVH治疗脓毒症并发AKI能够更加有效清除炎症介质,促进肾功能的恢复,疗效确切,值得临床推广。
摘要:目的:探讨微创经皮钢板固定技术(MIPPO)与锁定加压钢板(LCP)治疗胫骨干骺端骨折的临床疗效。方法:选择2013年6月-2015年6月在我院接受手术治疗的胫骨干骺端骨折患者103例作为研究对象,根据手术方法不同将所选患者分为三组。其中,联合手术组(35例)患者采用MIPPO联合LCP内固定术治疗,外固定组(33例)患者采用超关节外固定支架术治疗,内固定术组(35例)患者采用切开复位钢板内固定术治疗。观察并比较三种手术方法的临床效果及对患者骨关节功能的影响。结果:与外固定术组及内固定术组比较,联合手术组患者的手术时间短,术中出血量少,骨折愈合时间早,差异具有统计学意义(P〈0.05);联合手术组患者的手术优良率高于外固定组和内固定组,差异有统计学意义(P〈0.05);内固定组手术优良率高于外固定组,差异具有统计学意义(P〈0.05);联合手术组患者术后并发症的发生率低于外固定组及内固定组,差异具有统计学意义(P〈0.05);外固定组与内固定组术后并发症的发生率比较,差异无统计学意义(P〉0.05)。结论:MIPPO联合LCP内固定治疗胫骨干骺端骨折具有手术切口小、术中出血量少、术后并发症发生率低、骨折愈合快、关节功能恢复较好等优点,是治疗胫骨干骺端骨折的理想方法,值得临床推广应用。
摘要:目的:探讨注射液胸腺法新(日达仙)辅助希罗达联合奥沙利铂治疗晚期胃癌的临床疗效和对患者免疫功能及生活质量的影响。方法:选择2010-2013入院治疗的晚期胃癌患者116例,随机平均分为实验组(58例)和对照组(58例)。对照组给予卡培他滨片(希罗达)联合奥沙利铂,试验组在对照组的基础上辅用注射液胸腺法新(日达仙)治疗。每治疗两到三个周期后进行一次系统疗效评估,评估项目包括影像学腹部CT、胸片、腹部彩超、血常规、尿常规、肝功、肾功,肿瘤标记物癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA19-9,CA72-4)、免疫指标CD3+、CD8+、CD4/CD8、NK细胞,总治疗周期为6-8个周期。结果:实验组疾病治疗有效率为48%,对照组有效率为29%,两组比较差异具有统计学意义(p=0.041),实验组患者中位无疾病进展期(PFS)为12.5月,显著高于对照组10.1月,两组比较具有统计学意义(P〈0.05)。实验组患者生活质量评分、外周血CD3+、CD8+、CD4/CD8、NK细胞数量均显著优于对照组(P〈0.05)。结论:注射液胸腺法新(日达仙)辅助希罗达联合奥沙利铂(XELOX方案)能够提高晚期胃癌的临床疗效,改善患者的生活质量和免疫力,减少患者化疗用药的毒副反应。