TurboFect介导骨形态发生蛋白2转染CHO细胞的研究
摘要：目的：构建真核表达载体p IRES-EGFP-BMP-2,通过Turbo Fect转染得到表达BMP-2蛋白的CHO细胞系。方法：利用逆转录PCR方法扩增获得人的BMP-2基因c DNA,克隆入p MD18-T载体,经PCR、酶切和基因测序分析等方法鉴定重组质粒;将BMP-2连入p IRES-EGFP真核表达载体中,经限制性酶切和PCR扩增鉴定重组质粒。以壳聚糖和Turbo Fect分别作为基因载体转染CHO细胞,荧光显微镜检测分析转染结果;G418筛选富集转染阳性细胞。结果：成功的克隆得到了BMP-2基因,酶切鉴定成功构建了p IRES-EGFP-BMP-2质粒。与壳聚糖组相比,Turbo Fect用量为1：1时,细胞阳性率为（31.92±1.31）%,高于壳聚糖的细胞阳性率（6.33±1.53）%。目的基因与Turbo Fect比例为1：2时转染效率为（42.90±1.10）%高于1：1的（28.59±2.38）%和1：3的（37.52±2.14）%。细胞密度调节到5×10^3 cells/cm^2阳性细胞率可达到（44.43±3.23）%。荧光检测可见荧光阳性细胞得到稳定传代。Western Blot检测可见BMP-2蛋白表达。结论：Turbo Fect成功的介导了p IRES-EGFP-BMP-2载体转染CHO细胞,建立了稳定表达BMP-2和EGFP的CHO细胞株。雌激素膜受体GPER1通过调节Nrf2减轻心肌氧化损伤
摘要：目的：观察雌激素膜受体GPER1对心肌细胞氧化损伤的保护作用,并探讨其通过PI3K/Akt信号通路上调Nrf2,减轻心肌氧化损伤的机制。方法：H_2O_2处理原代培养的新生大鼠心肌细胞建立氧化损伤模型,分为对照组、H_2O_2处理组,GPER1受体激动剂G1预处理＋H_2O_2处理组和GPER1拮抗剂G15＋G1预处理＋H_2O_2处理组,MTT检测细胞活性,Hoechst33342染色和cleaved caspase-3免疫荧光染色观察细胞凋亡,并检测细胞内氧自由基,总抗氧化能力,超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的水平。Western blot测定细胞中p-Akt和细胞核内Nrf2的水平。结果：G1显著抑制H_2O_2导致细胞活性下降和细胞凋亡,并降低细胞内氧自由基水平,提高总抗氧化能力,增加SOD活性,减少MDA含量,但G15能拮抗G1的上述效应。同时G1能增加细胞内Akt磷酸化水平和细胞核内Nrf2的表达,这些效应可被G15和LY-294002阻断。结论：GPER1通过PI3K/Akt信号通路,调节Nrf2的表达,抑制氧化应激导致的心肌细胞损伤。GPER1可以作为开发心肌缺血损伤保护剂的一个潜在靶点。Tbx18能使兔脂肪干细胞向心肌样细胞分化
摘要：目的：研究Tbx18是否能成功转染脂肪干细胞并使脂肪干细胞向心肌细胞分化。方法：分离培养来源于日本大耳兔腹股沟部脂肪的兔脂肪干细胞,用搭载有Tbx18的腺病毒载体转染脂肪干细胞,诱导分化后检测向心肌细胞的分化情况,同时将转染了含GFP的腺病毒组与未转染组作为对照。采用用流式细胞仪检测转染效率,采用免疫荧光法检测平滑肌肌动蛋白α-SMA,采用实时定量PCR法检测兔肌钙蛋白TNNT2的表达。结果：转染后荧光显微镜下可观察到荧光表达,且持续时间较长。流式细胞仪检测转染效率为70%左右;诱导分化后,脂肪干细胞内出现了α-SMA和TNNT2的表达。结论：Tbx18可成功转染入脂肪干细胞,且能在细胞内稳定表达;Tbx18可诱导脂肪干细胞向心肌样细胞分化。氧化应激诱导内皮细胞凋亡microRNA表达改变的研究
摘要：目的：研究氧化应激诱导的内皮细胞micro RNA的表达变化。方法：ECM（Endothelial Cell Medium）培养人脐静脉内皮细胞,利用不同浓度双氧水（0μmol/L,200μmol/L,500μmol/L,800μmol/L）刺激24小时后应用流式细胞术检测其凋亡水平。提取细胞总RNA,利用实时定量PCR（Quantitive real-time PCR;q RT-PCR）检测micro RNA表达量变化,并利用生物信息学软件预测可能的靶基因。结果：加入不同浓度双氧水处理24 h后的内皮细胞总凋亡率均显著高于对照组,200μmol/L、500μmol/L和800μmol/L组的凋亡率分别为（13.31%vs 4.75%,35.9%vs 4.75%,89.75%vs 4.75%,P〈0.01）。200μmol/L的双氧水处理内皮细胞后,micro RNA的表达出现了明显的改变。其中mi R-92a、mi R-126的表达明显下调（P〈0.05）,mi R-181a、mi R-217、mi R-34a和mi R-320的表达明显上调（P〈0.05）。靶基因预测显示mi R-320、mi R-92a可能调控多个和内皮细胞凋亡相关的基因表达。结论：在氧化应激诱导的内皮细胞凋亡中,mi RNA表达发生改变并可能参与调控内皮细胞功能。慢性阻塞性肺疾病与代谢综合征及颈动脉内膜厚度的相关性研究
摘要：目的：研究慢性阻塞性肺疾病与代谢综合征及颈动脉内膜厚度的关系。方法：选择2014年8月至2015年4月在我院就诊的慢性阻塞性肺疾病患者60例作为研究组,另选择同期在我院接受健康体检的60名志愿者作为对照组。比较两组空腹血糖、甘油三酯及高密度脂蛋白胆固醇水平、代谢综合征的发生率、颈动脉内膜厚度以及合并与不合并代谢综合征的慢性阻塞性肺疾病患者的肺功能和颈动脉内膜厚度,并采用多元回归分析颈动脉内膜厚度与慢性阻塞性肺疾病及代谢综合征的相关性。结果：与对照组相比,研究组患者空腹血糖（FPG）明显升高,而甘油三酯（TG）水平明显降低,差异具有统计学意义（P〈0.05）;两组高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）比较差异无统计学意义（P〉0.05）。研究组代谢综合征的发病率、颈动脉内膜厚度均明显高于对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）;慢性阻塞性肺疾病合并代谢综合征患者的肺功能明显优于无代谢综合征的慢性阻塞性肺疾病患者,差异具有统计学意义（P〈0.05）;合并代谢综合征的慢性阻塞性肺疾病患者FEV1占预计值百分比及FEV1/FVC均明显高于无代谢综合征慢性阻塞性肺疾病患者的对应值,差异具有统计学意义（P〈0.05）。Logistic回归分析结果显示慢性阻塞性肺疾病与颈动脉内膜厚度呈独立相关性,而代谢综合征与颈动脉内膜厚度无直接相关性。结论：慢性阻塞性肺疾病与颈动脉内膜厚度呈独立相关,且慢性阻塞性肺疾病合并代谢综合征患者发生颈动脉粥样硬化的风险更高。Ⅰ-ⅢA期非小细胞肺癌KRAS基因突变与ERCC1、TYMS mRNA表达水平的相关研究
摘要：目的：探讨Ⅰ-ⅢA期非小细胞肺癌（NSCLC）KRAS基因突变与核苷酸切除修复交叉互补基因1（ERCC1）、胸苷酸合成酶（TYMS）mRNA表达水平的相关性及其与患者临床病理特征的关系。方法：收集空军总医院胸外科2010年06月至2014年10月符合入组条件的Ⅰ-ⅢA期NSCLC患者69例,肺癌组织标本均为手术中切取,KRAS基因突变应用x TAG-液相芯片法检测,ERCC1、TYMS mRNA表达水平应用分支DNA-液相芯片法检测。结果：在69例检测样本中,共有13例存在KRAS基因突变,突变率为18.8%（13/69）;男性患者中KRAS基因突变率（29.3%,12/41）较女性患者（3.6%,1/28）高（P=0.007）。ERCC1 mRNA的表达水平与病理类型、吸烟史、有无淋巴结转移、临床TNM分期相关（P〈0.05）,TYMS mRNA表达水平与患者各临床病理特征无关（P〉0.05）。KRAS突变型患者ERCC1 mRNA表达水平比KRAS野生型患者高（P〈0.05）,KRAS基因突变与TYMS mRNA表达水平无关（P〉0.05）。结论：在Ⅰ-ⅢA期NSCLC患者中,男性患者更容易发生KRAS突变。KRAS突变型患者可能不能从铂类化疗药物中受益,有利于指导早中期NSCLC患者术后的个体化治疗。尼可地尔预处理对大鼠缺血再灌注心肌mtDNA4834bp片段缺失的影响
摘要：目的：探讨尼可地尔预处理对大鼠缺血再灌注心肌mt DNA4834 bp缺失突变的影响。方法：体重200 g-300 g,7-9周龄健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠50只,随机平均分为5组,假手术（Sham）组、心肌缺血再灌注损伤（MIRI）组、缺血预处理（IPC）组、尼可地尔（Nic）组、尼可地尔＋5羟基葵酸钠（Nic＋5-HD）组。建立心肌缺血再灌注模型后取心肌组织,提取mt DNA,应用巢式PCR法定性检测mt DNA4834 bp片段缺失突变。结果：MIRI组、IPC组、Nic组和Nic＋5-HD组突变频率分别为100%、20%、30%和89%。Sham组未检测到mt DNA4834 bp缺失突变。Nic组mt DNA4834 bp片段缺失明显低于MIRI组和Nic＋5-HD组（P〈0.05）,与IPC组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：尼可地尔预处理可降低大鼠MIRI后mt DNA4834 bp片段缺失突变,改善线粒体能量衰竭。黄芪多糖预防2型糖尿病大鼠肝损伤的实验研究
摘要：目的：研究分析黄芪多糖（Astragalus polysaecharides,APS）在预防2型糖尿病大鼠肝损伤的作用。方法：Wistar大鼠72只,其中48只以小剂量链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）建立2型糖尿病大鼠模型,并随机分为模型对照组（B组）和APS组（C组）,余24只大鼠为正常对照组（A组）。C组大鼠给予APS 400 mg/kg/d灌胃,A、B组分别给予等量生理盐水。分别于第0、2、4、6周检测3组大鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、超氧化物歧化酶（SOD）以及丙二醛（MDA）水平,透射电镜下观察3组大鼠肝细胞超微结构变化。结果：第0、2周时B、C组大鼠ALT、AST、SOD以及MDA水平比较无显著差异（P〉0.05）。第4、6周时,C组大鼠ALT、AST以及MDA水平均高于A组,但低于B组;而SOD水平低于A组,但高于B组;差异均有统计学意义（P〈0.05）。电镜下观察,A组肝细胞内大量线粒体、内质网,结构完好,未见损伤;B组细胞器数量减少,线粒体及内质网形态异常,膜结构破损,细胞空化;C组细胞器也存在损伤,但较B组明显减轻。结论：APS可增加肝细胞抗氧化酶的活性,促进氧自由基的清除,减少肝细胞损伤,对预防2型糖尿病引起的肝功能损害有一定的价值。灵芝孢子粉对戊四氮活化海马神经细胞caspase-9表达的研究
摘要：目的：本实验研究灵芝孢子粉对戊四氮活化大鼠海马神经细胞caspase-9表达变化的影响,进一步探索灵芝孢子粉对癫痫大鼠脑保护的作用机制和癫痫与海马神经细胞凋亡调控基因之间的关系。方法：通过制备癫痫模型,RT-PCR和Western blotting检测正常对照组、癫痫模型组和灵芝孢子粉用药组caspase-9的表达。结果：癫痫模型组和灵芝孢子粉用药组caspase-9的表达较正常对照组均升高;其中癫痫模型组caspase-9的表达水平与对照组比较明显升高,灵芝孢子粉用药组caspase-9的表达水平与癫痫模型组比较明显降低,差异有统计学意义。结论：本研究结果证实,Caspase-9介导了癫痫大鼠神经细胞凋亡机制,说明灵芝孢子粉有效成份能充分作用于脑组织,可以调控caspase-9的表达,发挥抗凋亡的神经保护作用。PCT及CRP在急性肠梗阻大鼠血清中的表达水平及其临床意义
摘要：目的：探讨降钙素原（Procalcitonin,PCT）及C反应蛋白（C-reactive protein,CRP）在急性肠梗阻大鼠血清中的水平及其临床意义。方法：将83只Wistar大鼠分为对照组（n=13）、假手术组（n=35）和急性肠梗阻组（n=35）。对照组大鼠采集标本后处死,肠梗阻组行开腹手术结扎回肠末端,假手术组仅行开腹手术。检测8 h、24 h、48 h、72 h及96 h血清PCT及CRP水平,观察急性肠梗阻大鼠回肠组织的病理学改变情况。结果：假手术组PCT与CRP水平在术后24 h内显著升高,48 h至96 h逐渐下降;各时间点PCT水平明显高于对照组,而CRP水平在实验结束时已恢复至正常水平。肠梗阻组PCT和CRP水平在各时间点均明显高于对照组,并逐渐增加,到实验结束时达到高峰;肠梗阻组PCT和CRP水平在48 h-96 h均显著高于假手术组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。组织病理学检查显示,对照组大鼠肠壁粘膜结构正常,假手术组可见轻度病理改变,肠梗阻组大鼠回肠组织可见粘膜结构明显破坏,绒毛坏死,严重水肿和炎症细胞浸润。结论：血浆PCT和CRP水平能够反映肠梗阻的状态和肠粘膜受损程度。InterTan髓内钉治疗老年骨质疏松患者股骨转子间骨折
摘要：目的：随访Inter Tan髓内钉治疗老年（年龄≥60）骨质疏松性股骨转子间骨折的中远期疗效,并比较各AO分组的差异等。方法：收集西京医院2010年1月至2015年1月收治的病例,共59例。随访其术后骨折恢复情况并做髋关节功能Harris评分,然后将这些病例按照AO分型,分为A1、A2组,比较两组在手术时间、出血量和术后功能恢复方面有无差异。结果：患者出现实质性影响功能的损害病例为髋关节疼痛8例,肢体短缩3例,大腿疼痛伴肌肉萎缩1例,股骨干因跌坐骨折1例。Harris评分标准评定优：40例,良：12例,可：3例,差：2例。A1、A2分型组在手术时间及术后功能恢复方面没有显著性差异;术中失血量A2组较A1组多,有统计学意义（P=0.022）。结论：Inter Tan治疗老年骨质疏松患者股骨转子间骨折,效果较好,术后Harris评分优良率为91.2%;A2组较A1组术中出血较多,手术时间及术后恢复无显著差异。糖适平对2型糖尿病合并糖尿病肾病4期患者血糖、肌酐清除率及尿蛋白水平的影响
摘要：目的：探讨糖适平对2型糖尿病合并糖尿病肾病4期患者血糖、肌酐清除率及尿蛋白水平的影响。方法：选择我院收治的2型糖尿病合并糖尿病肾病4期患者100例,按照用药情况分为糖适平实验组和胰岛素对照组,每组50例。对照组患者给予预混人胰岛素及阿卡波糖片,实验组患者给予糖适平及阿卡波糖片。比较治疗前后两组患者空腹血糖（FBG）、肌酐清除率（CCr）、血清肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）及24小时尿蛋白定量（24 h Upro）水平的变化情况。结果：与治疗前相比,两组患者治疗后空腹血糖、血清肌酐、血尿素氮及24小时尿蛋白定量、肌酐清除率均明显改善,差异具有统计学意义（P〈0.05）,但实验组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：糖适平对2型糖尿病合并糖尿病肾病4期患者无药物积蓄问题,用于治疗2型糖尿病合并糖尿病肾病4期安全有效。飞秒激光辅助全板层角膜移植术治疗圆锥角膜临床观察
摘要：目的：评价飞秒激光辅助全板层角膜移植治疗圆锥角膜患者早期临床效果。方法：回顾性分析。15例17眼圆锥角膜患者均采用飞秒激光辅助联合Anwar大气泡技术暴露后弹力层的角膜移植手术。术前17只眼均测量裸眼视力（Uncorrected visual acuity,UCVA）、最佳矫正视力（Best corrected visual acuity,BCVA）、角膜内皮细胞计数（endothelial cell density,ECD）、角膜中央平均厚度、角膜曲率1（K1）、角膜曲率2（K2）、角膜地形图角膜散光度数和眼压（intraocular pressure,IOP）。所有患者随访时间为术后第1周、第1月、第2月和第3月。结果：到第3月时,UCVA和BCVA均有明显提高。测量中央角膜中央厚度为（493.0±46.80）μm;角膜曲率已接近正常水平,K1和K2平均值分别为（44.56±4.86）D和（40.22±3.60）D,以上数据与术前相比,差异均具有统计学意义（P〈0.001）。散光值下降至（4.57±3.60）D（P=0.185,P〉0.05）。角膜内皮细胞丢失率为14.3%。术后眼压均正常。结论：飞秒激光辅助全板层角膜移植治疗圆锥角膜患者早期临床效果明显,具有精确性、安全性和可预测性。室间隔缺损介入封堵和外科手术对瓣膜功能影响的对比研究
摘要：目的：通过对介入封堵治疗的室间隔缺损患者进行中长期临床随访,并和同期行外科修补手术的室间隔缺损患者进行对比,分析两种术式对心脏瓣膜功能的影响。方法：选择行介入封堵治疗患者279例（介入组）,行外科手术修补治疗患者243例（手术组）。利用超声心动图检查瓣膜反流发生情况及随访转归情况,并对两组瓣膜反流的发生率进行对比研究。结果：术后短期介入组二尖瓣反流发生率较手术组高（P〈0.05）,三尖瓣和主动脉瓣反流发生率两组相比无统计学差异。中长期随访中,三尖瓣反流、主动脉瓣反流以及二尖瓣反流两组相比均无统计学差异。结论：室间隔缺损介入封堵治疗疗效确切,安全性高,创伤较小。术前利用超声心动图对患者的严格筛选,术中熟练轻柔稳定的操作和适合封堵器的选择是减少介入封堵术后发生瓣膜反流最重要的因素。胃复安与雷莫司琼对全麻腹腔镜胆囊摘除术患者呕吐及躁动的影响
摘要：目的：探讨胃复安与雷莫司琼对全麻下腹腔镜胆囊摘除术患者术后呕吐及躁动的影响。方法：选取我院收治的全麻下腹腔镜胆囊摘除术者86例,根据术后治疗方法不同,分为两组,其中对照组予以雷莫司琼治疗,实验组在对照组基础上予以胃复安治疗。观察并比较两组患者的临床疗效、呕吐、躁动及不良反应发生情况。结果：与对照组比较,实验组临床疗效明显,差异具有统计学意义（P〈0.05）;实验组患者呕吐次数明显低于对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）;实验组患者躁动明显改善,差异具有统计学意义（P〈0.05）;实验组不良反应发生率低于对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：胃复安与雷莫司琼能够有效治疗全麻下腹腔镜胆囊摘除术患者术后呕吐及躁动情况,提高临床疗效。BIS监测下两种快通道麻醉方式应用于鼻内镜手术的比较
摘要：目的：观察BIS指导两种快通道麻醉在鼻内镜手术中的应用及麻醉效果。方法：选择60例ASAⅠ-Ⅱ级择期行功能性鼻内镜手术（FESS）患者,随机分为七氟醚诱导维持麻醉组（VIMA组）与异丙酚全凭静脉麻醉组（TIVA组）。VIMA组：8%七氟醚,氧流量8L/min,潮气量法吸入诱导,七氟醚维持麻醉;TIVA组：异丙酚2 mg/kg诱导,异丙酚维持麻醉。两组诱导时都静脉注射瑞芬太尼1μg/kg,罗库溴铵0.6 mg/kg,监测TOF值为0、BIS〈60并维持5 s后行气管插管。术中静脉泵注瑞芬太尼0.2μg·kg^-1·min^-1,分别调整七氟醚和异丙酚维持剂量使BIS值在气管插管后至手术结束前15 min左右保持在40-60之间,手术最后15 min保持于60-70之间。两组术后进行Steward评分,并比较两组各时点SBP、DBP、HR,拔管时间,快通道麻醉成功率和苏醒期不良反应发生率。结果：VIMA组拔管时间（11.60±2.55 min）比TIVA组的（7.13±3.26 min）明显延长（P〈0.05）;TIVA组快通道成功率显著高于VIMA组（P〈0.05）。两组苏醒期不良反应的发生情况比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：异丙酚全凭静脉麻醉用于鼻内镜手术拔管时间比七氟醚诱导维持麻醉短,快通道麻醉效果更好。腰硬联合麻醉对围手术期剖宫产患者皮质醇及血浆D-D水平的影响
摘要：目的：探讨腰硬联合麻醉（CSEA）对剖宫产围术期患者围术期皮质醇及血浆D-二聚体（D-D）水平变化的影响。方法：选取2014年3月-2015年5月在我院接受剖宫产手术的患者68例为研究对象。.根据术中采用的麻醉方法不同,将患者分为腰硬联合麻醉组（CSEA组）和连续硬膜外麻醉组（CEA组）。观察并比较两组患者围手术期皮质醇及D-二聚体水平的变化情况。结果：两组患者术中纤维蛋白原、凝血活酶时间及凝血酶原时间间比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）;两组患者麻醉后皮质醇及D-D水平均显著高于麻醉前,但CSEA组低于CEA组,差异具有统计学意义（P〈0.05）;两组患者D-D水平在手术结束时、术后24 h较麻醉前均显著升高,差异有统计学意义（P〈0.05）;但CSEA组D-D水平在术后24 h及、术后72 h,CSEA组D-D水平均低于CEA组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：腰硬联合麻醉可以更好的抑制剖宫产患者术中血清皮质醇及术后血浆D-D水平的升高,有利于改善患者术后高凝状态,值得临床推广应用。Hyper-CVAD/MA治疗复发或难治性弥漫大B细胞淋巴瘤的临床研究
摘要：目的：探讨Hyper-CVAD/MA方案治疗复发或难治弥漫大B细胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL）的疗效及安全性。方法：观察26例经系统化疗后复发或难治的DLBCL患者接受Hyper-CVAD/MA方案化疗,21-28天为1周期,连续2个周期评价疗效及安全性,分析生存情况。结果：全组26例患者中,总有效率为46.15%,其中完全缓解（complete remission,CR）3例（11.54%）,部分缓解（partial remission,PR）9例（34.61%）,全组患者中位生存时间为10（2-25）个月,1年和2年总生存率分别为28.57%、14.29%。不良反应主要表现为III-IV度骨髓抑制及继发的肺部感染,其他包括胃肠道反应、口腔炎、肝功能异常等。结论：Hyper-CVAD/MA治疗复发难治DLBCL有一定的疗效,且患者可耐受,可作为二线方案的一个选择。
