原子力显微镜研究粘附分子与细胞膜上整合素分子的相互作用
摘要：目的：研究肝癌细胞弹性变化对其表达的整合素分子与配体分子相互作用的影响。方法：以壳聚糖/聚丙烯酰胺水凝胶作为可变基底材料,并将人肝肿瘤细胞（Hep G2）接种到不同软硬度壳聚糖/聚丙烯酰胺水凝胶基底上,利用原子力显微镜力与距离模式定量测定不同软硬基底上生长的Hep G2肝瘤细胞膜表面整合素分子与层粘连蛋白分子之间相互作用力。结果：功能化的原子力显微镜探针与不同软硬基底上生长的细胞所产生的粘附情况不相同,细胞生长在培养皿的为对照组;细胞生长在硬度为1000Pa壳聚糖/聚丙烯酰胺水凝胶基底上的为实验组,表达在Hep G2肝瘤细胞膜上的α6β1整合素与其配体层粘连蛋白相互作用力的大小分别为19±7 p N和38.85±19.7 p N。结论：基底软硬度会影响细胞整合素与配体分子间的相互作用。核酸载体lipopolyplex的制备及细胞毒性研究
摘要：目的：为降低聚阳离子基因载体polyplex的正电荷和毒性,在其表面构建中性磷脂膜制备lipopolyplex,并测定lipopolyplex对小鼠结肠癌细胞CT26和人乳腺癌细胞MCF-7的细胞毒性。方法：采用PEI25KDa与DNA复合制备polyplex,在polyplex体系中加入中性脂质体和SADGE制备lipopolyplex。采用琼脂糖凝胶电泳考察lipopolyplex对质粒DNA的包裹能力;采用激光粒度仪和zeta电位分析仪测定lipopolyplex的粒径与zeta电位;采用透射电镜观察lipopolyplex的形态;采用CCK-8试剂盒考察lipopolyplex对CT26和MCF-7的细胞毒性。结果：琼脂糖凝胶电泳显示lipopolyplex可以完全包裹质粒DNA;lipopolyplex的粒径在200 nm左右,电位在-20 m V左右;透射电镜下为较为规则的球状颗粒;lipopolyplex在CT26和MCF-7细胞中的毒性明显低于聚阳离子基因载体polyplex。结论：在polyplex表面成功构建中性磷脂膜制备的lipopolyplex,可以完全的包裹DNA并且细胞毒性明显低于polyplex,在基因输送载体领域具有潜在应用价值。t-PA对EAE病理性淋巴细胞与血脑屏障粘附的影响
摘要：目的：研究组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠病理性淋巴细胞与血脑屏障粘附的影响。方法：用MOG35-55肽段免疫C57BL/6小鼠建立EAE动物模型,于发病高峰期取淋巴细胞用MOG35-55肽段进行刺激得到抗原特异性T淋巴细胞。通过尾静脉给予t-PA的方法对EAE小鼠进行干预,临床评分评价小鼠的发病情况。体外培养小鼠血脑屏障内皮细胞系b End.3,应用不同浓度的t-PA进行处理。用荧光标记MOG35-55特异性T细胞进行细胞粘附实验,用Transwell小室建立体外血脑屏障模型进行细胞迁移实验。用免疫荧光化学方法检测ICAM-1的表达情况。结果：t-PA处理可以使血脑屏障内皮细胞与T淋巴细胞粘附和迁移作用增强。在体外细胞培养模型中检测到t-PA诱导ICAM-1表达升高。经过t-PA处理的小鼠,其血管内皮表面ICAM-1的表达也有所上升。经t-PA处理的EAE小鼠发病高峰提前,症状加重。结论：t-PA处理可以使EAE病理性淋巴细胞与血脑屏障内皮的粘附性增加,浸润能力增强;t-PA所引起的粘附性增加可能与b End.3表面ICAM-1表达升高有关。MMP-1、MMP-3和MMP-13在慢性睡眠剥夺所致颞下颌关节损伤中的变化
摘要：目的：观察MMP-1、MMP-3和MMP-13在慢性睡眠剥夺所致颞下颌关节损伤中表达的变化,探讨慢性睡眠剥夺所致颞下颌关节损伤的可能机制。方法：采用改良多平台（MMPM）建立大鼠慢性睡眠剥夺模型,将90只成年雄性Wastar大鼠随机分为小平台组、网格组和对照组。小平台组和网格组大鼠接受每天18 h的睡眠剥夺和6 h间歇期（10：00-16：00）,间歇期大鼠正常笼养。实验第7、14和21 d时分别观察动物的行为学观察、检测动物血浆皮质醇（CORT）和促肾上腺皮质激素（ACTH）水平检测,通过免疫印迹法和实时定量聚合酶链反应（PRC）检测颞下颌关节软骨中MMP-1、MMP-3和MMP-13的蛋白和m RNA表达,并通过HE染色法观察颞下颌关节结构的变化。结果：与对照组和网格组大鼠相比,小平台组大鼠第14 d和21 d时髁突软骨中间部位表面纤维在出现明显的炎症、松解及脱落现象;第21天时的血浆ACTH和CORT水平均显著高于网格组和对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;第7、14、21 d时关节软骨MMP-1和MMP-13蛋白和m RNA的表达水平均显著上调（P〈0.05）。结论：慢性睡眠剥夺所致的颞下颌关节损伤可能与关节软骨中MMP-1、MMP-3和MMP-13的表达上调有关。高效液相色谱法测定藿苏养胃口服液中黄芪甲苷的含量
摘要：目的：建立藿苏养胃口服液中黄芪甲苷前处理及含量的HPLC测定方法。方法：前处理方法如下：100 m L样品中加入67 m L浓氨水,振荡后静置5 min,转移至D101大孔树脂柱上,上样完毕后,依次以100 m L氨试液、100 m L水和100 m L 40%乙醇洗脱,弃去洗脱液,然后以100 m L 70%乙醇洗脱,收集洗脱液,蒸干,用甲醇溶解并转移至5 m L容量瓶中,以甲醇溶解;测定方法如下：采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18（4.6×150 mm,5.0μm）色谱柱,以乙腈-水（33：67）为流动相,流速1.0 m L·min-1,柱温35℃;ELSD检测器的参数为：氮气流速1.60 SLM、雾化器温度30℃、蒸发器温度80℃。结果：黄芪甲苷线性范围为0.262~15.696μg（r=0.9992）,平均加样回收率为99.46%（n=6）,RSD为2.3%。结论：所建立的前处理方法简便易行,准确度高,重复性好;检测方法可作为藿苏养胃口服液的质量控制方法。肾动脉射频消融对兔压力负荷性高血压的作用研究
摘要：目的：建立新西兰兔的高血压模型和观察肾动脉射频消融（Renal Sympathetic Denervation,RSD）对高血压的影响。方法：通过腹主动脉内径缩窄50%~60%建立兔高血压模型,建模后分为假手术对照组、对照组＋射频组、高血压组、高血压＋射频组4组,建模2个月后使用临床常用的射频消融导管经腹进行双侧肾动脉外膜消融去除肾交感神经,术后继续饲养2个月,通过颈动脉插管测定血压数值变化。结果：通过腹主动脉缩窄术成功建立新西兰兔压力负荷高血压模型。RSD术后2月,新西兰兔的心率无明显区别（P〉0.05）,高血压组的血压仍然明显高于对照组（P〈0.05）,然而,高血压＋射频组的血压低于高血压组（P〈0.05）;同时对照＋射频组与对照组的血压无明显差异（P〉0.05）。结论：通过腹主动脉缩窄术可以稳定地建立新西兰兔压力负荷高血压模型,经RSD后血压明显下降,且这种降压作用只对高血压有作用。我们首次从动物水平验证RSD可以降低压力负荷导致的血压升高。非酒精性脂肪性肝病与MTP关系的实验研究
摘要：目的：探讨非酒精性脂肪性肝病（Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）与微粒体甘油三酯转运蛋白（microsomal triglyceridetransfer protein,MTP）的关系。方法：将雄性Wistar大鼠60只随机分为正常对照组（A组）、高脂组（B组）和MTP抑制剂组（C组）,每组各20只。B组、C组给予高脂饲料喂养,8周后确认非酒精性脂肪肝建模成功,C组大鼠给予混有特异性小肠MTP抑制剂JTT-130的高脂饲料喂养,B组大鼠建模过程始终喂养高脂饲料,A组大鼠喂养普通饲料。于第12周,分别测定大鼠血清甘油三酯（triglyceride,TG）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein-cholesterol,HDL-c）含量,以及肝脏TC、TG、磷脂含量。同时测定肝脏中微粒体甘油三酯转运蛋白（MTP）的活性与m RNA表达量。结果：与正常对照组（A组）相比,高脂组（B组）大鼠血清TC、TG、HDL-c浓度和肝脏TC、TG含量明显提高（P〈0.05）,MTP活性及m RNA水平明显下调（P〈0.05）。与高脂组（B组）比较,MTP抑制剂组（C组）大鼠血清TC、TG、HDL-c浓度和肝脏TC、TG含量明显下降（P〈0.05）,而MTP活性及m RNA表达量比较无明显差别（P〉0.05）。结论：非酒精性脂肪性肝病存在MTP表达下调,特异性小肠MTP抑制剂JTT-130可以有效抑制肠道对TG的转运,不影响肝脏TG分泌,并在降低高脂大鼠血浆TG和胆固醇水平的同时也降低肝脏TG含量。Apobec-1加重神经源性细胞缺氧损伤并上调COX-2的表达
摘要：目的：研究三种神经源性细胞中,缺氧条件下Apobec-1的表达与COX-2表达水平及细胞缺血损伤程度之间的关系。方法：对SH-SY5Y细胞,NG108-15细胞和PC12细胞分别施以无氧-无糖刺激,进而检测刺激前后细胞活力,乳酸脱氢酶（LDH）释放量,以及Apobec-1的表达量,以研究缺氧对Apobec-1表达的影响。在这三种细胞中分别过表达Apobec-1,检测细胞中COX-2蛋白及m RNA的水平。结果：1在三种神经源性细胞中,随着无氧-无糖刺激时间的延长,细胞损伤程度加重,同时Apobec-1和ACF的表达量升高。2过表达Apobec-1可加重无氧-无糖刺激导致的神经细胞损伤,具体表现为细胞活力降低及LDH释放量增加。3Apobec-1可在此三种神经源性细胞中提高COX-2蛋白及m RNA的水平。结论：Apobec-1在神经源性细胞中与细胞缺氧损伤程度及COX-2表达密切相关。不明原因复发性自然流产夫妇MTHFR C677T位点多态性分析
摘要：目的：分析不明原因复发性自然流产（URSA）夫妇与亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T（MTHFR C677T）位点多态性的关联性研究。方法：采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）对URSA组和对照组各50对夫妇的外周血进行MTHFR C677T的位点多态性进行检测分析。结果：URSA组MTHFR基因677位点的T/T、C/T＋T/T基因型的发生频率显著高于对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）,而对照组MTHFR基因677位点的C/C基因型发生频率显著高于URSA组（P〈0.05）,两组MTHFR基因677位点的C/T基因型比较无明显差异（P〉0.05）。另外URSA组等位基因T明显高于C的频率,且URSA组等位基因T发生频率显著高于对照组,对照组等位基因C发生频率显著高于USRA组,差异均具有统计学意义（P〈0.05）。结论：MTHFR C677T位点的多态性与URSA的发生密切相关,是该病的重要遗传风险因素。Wnt/β-catenin信号通路关键因子在放射性肺纤维化中的作用
摘要：目的：观察直线加速器X射线照射对人肺成纤维细胞（HLFs）Wnt/β-catenin信号通路关键信号因子的影响并探讨其意义。方法：HLFs分别经直线加速器0Gy、5Gy、8Gy X线照射后,MTT比色法检测其增殖活性,筛选合适照射剂量。人肺成纤维细胞分为照射组（R组）和正常对照组（C组）,R组经直线加速器X射线,5 Gy照射24 h后,免疫荧光检测成纤维细胞α-SMA表达,Western blot检测成纤维细胞中GSK-3β、p-GSK-3β表达。结果：X线5 Gy照射剂量可使人肺成纤维细胞增殖活力增强,较0 Gy、8 Gy增殖曲线明显。照射组人肺成纤维细胞形态较正常组有明显差异。照射组人肺成纤维细胞α-SMA,p-GSK-3β表达水平升高,p-GSK-3β/GSK-3β比值升高,与正常对照组比较均有统计学意义（P〈0.05）。结论：Wnt/β-catenin信号通路在放射性肺损伤的发生发展中起调控作用,可能为放射性肺纤维化的治疗提供了新视角。透明质酸孵育树突状细胞对荷瘤小鼠免疫功能的影响
摘要：目的：研究透明质酸对小鼠骨髓来源树突状细胞功能的影响以及回输后荷黑色素瘤小鼠脾淋巴细胞增殖、活化和细胞因子的变化,进而探讨透明质酸诱导的树突状细胞增强荷瘤小鼠免疫功能的机制。方法：体外细胞因子联合诱导培养小鼠骨髓细胞获得树突状细胞（DCs）,免疫磁珠分选纯化获得CD11c＋树突状细胞,经不同浓度透明质酸（HA）刺激后,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养上清液中细胞因子IL-12p70含量。建立小鼠皮下B16黑色素瘤模型,肿瘤局部皮下回输HA孵育DC后检测肿瘤大小,应用Con A检测脾淋巴细胞增殖情况,应用MTT法检测脾淋巴细胞杀伤活性,ELISA法检测脾淋巴细胞分泌的TNF-α和IFN-γ的表达,以单纯DC回输、生理盐水注射以及正常小鼠（无瘤）组作为对照。结果：在10~100μg/m L范围内,HA以剂量依赖的方式上调DCs分泌IL-12p70。HA孵育DC处理组肿瘤生长明显受到抑制;淋巴细胞增殖反应、杀伤活性和细胞因子TNF-α和IFN-γ的表达明显高于单纯DC组和生理盐水组（P〈0.05）。结论：透明质酸可促进小鼠骨髓DC的成熟;透明质酸孵育的DC通过增强荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫功能而抑制肿瘤的生长。保护性机械通气对开腹手术后肺功能的影响
摘要：目的：探讨开腹手术期间使用保护性通气策略对于术后肺功能的恢复和肺感染的影响。方法：选择ASAⅠ~Ⅱ级择期行腹部手术的患者50例,预计手术时间大于2 h,体重指数〈25%。将患者随机分为2组：A组接受标准通气,潮气量8 m L/kg;B组接受保护性通气,潮气量为6 m L/kg,10 cm H2O PEEP以及肺复张。术后第1、3天进行肺功能实验,检测Pa O2和SPO2。术前和术后第3天进行胸部X线和肺部感染评分。结果：与A组患者比较,B组患者术后第1、3天的动脉氧合升高,且肺功能提高（P〈0.05）;术后第3天肺不张的发生率降低（P〈0.05）;术后第1、3天肺感染评分显著降低（P〈0.05）。结论：大于2 h的腹部手术中,使用保护性通气可促进术后肺功能的恢复和减少肺感染的发生。三阴乳腺癌保乳术联合前哨淋巴结活检的临床疗效分析
摘要：目的：探讨三阴乳腺癌保乳术联合前哨淋巴结活检对三阴乳腺癌的临床疗效的影响。方法：选取我院外科收治的三阴乳腺癌患者92例,随机数字表达法分为两组,其中对照组46例,予全乳切除及腋窝淋巴结清扫术;实验组46例,予保乳术联合前哨淋巴结活检术。统计术中手术时间、术中出血量、术后生活质量、术后乳房美容效果及术后复发和转移率。结果：1实验组术中手术时间和术中出血量明显低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;2术后复发率和转移率实验组和对照相比,差异无统计学意义（P〉0.05）;3实验组术后生活质量中的社会功能、角色功能及身体健康状况明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;而躯体功能和情绪功能两组相比,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：三阴乳腺癌保乳术联合前哨淋巴结活检能够明显缩短手术时间,减少术中出血量,明显改善生活质量,提高乳房美容效果,且对局部复发和远处转移无影响,值得临床推广应用。纳洛酮治疗慢性阻塞性肺病合并Ⅱ型呼吸衰竭患者临床疗效研究
摘要：目的：探讨纳洛酮治疗慢性阻塞性肺病合并Ⅱ型呼吸衰竭患者血清降钙素原、炎症因子的改变及临床疗效。方法：收集2013年5月至2014年9月来我院治疗的COPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者60例,根据治疗方法不同随机分为对照组和观察组,对照组给与常规治疗,观察组在常规治疗的基础上给与纳洛酮治疗。记录两组患者在治疗前后静脉血Pa CO2、Pa O2的变化以及临床疗效。采用Elisa法检测两组患者在治疗前后血清PCT、TNF-α、IL-6含量的变化,并用RT-PCR法检测两组患者在治疗前后血清PCT、TNF-α、IL-6 DNA的改变。结果：观察组患者在治疗前静脉血Pa CO2的值为81.3±9.4 mm Hg,治疗后下降为45.4±5.3mm Hg,Pa O2由49.6±3.9 mm Hg上升至81.3±5.9 mm Hg,均优于对照组,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;临床总有效率为85.7%,高于对照组的68%,且差异有统计学意义（P〈0.05）。ELISA检测结果显示,两组患者在治疗后,血清PCT,CRP、IL-6含量均显著下降,且观察组下降程度高于对照组,RT-PCR检测结果与ELISA检测结果相一致。结论：纳洛酮治疗COPD合并Ⅱ型呼吸衰竭的临床疗效显著,能有效的提高Pa O2,降低Pa CO2,且能有效的减缓炎症反应的加重。丹参酮ⅡA磺酸钠注射液辅助治疗对突发性耳聋患者血液流变学及临床疗效的影响
摘要：目的：探讨丹参酮ⅡA磺酸钠注射液辅助治疗对突发性耳聋患者血液流变学及临床疗效的影响。方法：选取我院收治的突发性耳聋患者78例,并将其随机分为实验组和对照组,每组39例。对照组给予三磷酸腺苷二钠、辅酶A、复合维生素、双密达莫片及高压氧治疗,而实验组在对照组的基础上给予丹参酮ⅡA磺酸钠注射液治复合组治疗。观察和比较两组患者治疗后的听力恢复等级分布以及治疗前后的电测听情况和各项血液流变学指标的变化情况。结果：治疗后,与对照组比较,实验组听力恢复Ⅰ级患者的比例更高,电听力平均值均显著降低,各项血液流变学指标均明显改善,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：丹参酮ⅡA磺酸钠注射液辅助治疗能够显著提高突发性耳聋的临床疗效,这可能其改善患者的血液流变学有关。血培养阳性脓毒症病原体监测及相关指标分析
摘要：目的：观察血培养阳性脓毒症检出菌的变迁规律,探讨与其预后相关的因素。方法：总结2010年至2013年我院呼吸内科血培养阳性脓毒症136株检出菌及相关指标,并将其分为两组：一组为治愈及好转组,二组为未愈及死亡组,使用统计软件进行单因素分析,筛选出可能与脓毒症预后相关的因素。结果：主要以凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）为首,其次为大肠埃希氏菌,发现耐亚胺培南大肠埃希菌株一例,其耐药率为2.9%;两组间进行比较,对年龄、性别、基础疾病包括心血管病、脑血管病后遗症、糖尿病、恶性肿瘤在内、住院前是否应用抗生素、发热程度、是否存在肺部感染及低白蛋白血症进行单因素分析,肺部感染情况P〈0.05,有统计学意义,可认为其与脓毒症的预后相关,其余指标P均〉0.05,尚不能认为其与脓毒症预后相关。结论：革兰阳性球菌是血培养阳性脓毒症的主要致病菌;肺部感染情况与脓毒症的预后相关。天麻素对全麻宫颈癌根治术患者术后认知功能及S-100β影响
摘要：目的：探讨天麻素对全身麻醉下宫颈癌根治术患者术后认知功能及S-100β的影响。方法：选取我院妇科收治的宫颈癌患者86例,随机数字表法分为两组,两组患者均在全身麻醉下行全子宫双附件切除联合盆腔淋巴结清扫术。对照组术后予以抗感染、肠外营养支持等常规术后治疗,实验组术后常规治疗的基础上加用天麻素注射液。两组患者分别于麻醉前、手术后6 h、1 d、3 d及7 d测定MMSE评分及血中S-100β水平。结果：两组患者全麻宫颈癌根治术后均出现中度认知障碍,MMSE评分较麻醉前下降,与对照组同期比较,实验组术后3天、7天MMES评分较高,差异具有统计学意义（P〈0.05）;两组患者宫颈癌根治术后血中S-100β蛋白水平升高,与对照组同期比较,实验组术后1 d、3 d与7d S-100β水平较低,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：天麻素能够明显改善全麻宫颈癌根治术患者术后认知功能障碍,降低S-100β蛋白水,提高术后恢复效果,对临床具有指导意义。入伍新训中膝关节损伤的特点与防治研究
摘要：目的：通过对某部新入伍官兵训练中膝关节损伤发生原因、特点进行流行性病学调查和分析,为合理训练,预防损伤发生和治疗相关伤病提供指导依据。方法：对某部2013年度450名新入伍官兵的训练伤发病情况进行统计分析,重点分析膝关节损伤发生率、伤病类型和致伤原因,并对其严重者进行关节镜治疗,观察和分析术后随访效果。结果：某部新兵的训练伤发生率为20.0%。以关节急性扭伤最为多见,占81.1%。其中膝关节损伤共发生32例,占训练伤发病率为7.1%,占训练伤发病率43.8%,其中膝关节周围肌肉损伤20例、交叉韧带损伤1例、半月板损伤9例、侧副韧带损伤2例。致伤率最高的前3位科目是5000米负重跑、跨越障碍训练、格斗训练,共27例,占膝关节训练伤总数的84.4%。所有受伤患者中,12例行手术治疗,20例给予石膏、支具固定、休息等保守治疗。经随访所有患者均得到较好的功能恢复。结论：对于新兵膝关节训练伤预防工作非常重要,避免致残;关节镜手术技术的进步对于膝关节军事训练伤治疗有良好的效果。
