利用慢病毒载体观察microRNA-194对人骨肉瘤细胞系U2-OS生物学特性的影响
摘要：目的：通过构建携带针对microRNA-194的shRNA载体及过表达载体,包装慢病毒,感染人骨肉瘤细胞系U2-OS,改变细胞内microRNA-194基因的表达水平,研究microRNA-194对细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,为探索microRNA-194作为骨肉瘤生物治疗的新靶点提供理论和实验依据。方法：PCR扩增pri-miR-194及miR-194-5成熟体,克隆于慢病毒载体plent-i GFP中,转染大肠杆菌感受态细胞,收获并浓缩慢病毒颗粒,感染人骨肉瘤细胞系U2-OS。进行MTT,流式,平板克隆等试验。结果：1.重组慢病毒表达质粒构建正确,过表达及抑制过表达重组慢病毒的滴度分别为1.5×108TU/ml及4×108TU/ml；2.microRNA-194过表达的人骨肉瘤细胞系U2-OS细胞增殖速度,凋亡率及细胞周期相较于其它实验组都有明显变化（P〈0.01）。结论：成功构建了microRNA-194过表达及抑制过表达慢病毒表达载体；miR-194的表达水平对U2-OS细胞的增殖和凋亡造成显著影响。microRNA-194可能成为骨肉瘤治疗的潜在新靶点,但该基因对骨肉瘤发生发展的作用及其机制尚待进一步研究。经穴注射BMSCs联合中药对大鼠血清VEGF、G-CSF、SDF-1浓度的影响
摘要：目的：前期基础实验发现经穴注射骨髓间充质干细胞联合益气活血中药对大鼠缺血后肢骨骼肌血管密度以及后肢血流恢复具有明显促进作用,为进一步明确其机制,本研究着重经穴注射骨髓间充质干细胞（BMSCs）联合益气活血方对大鼠血清中血管内皮细胞生长因子（VGEF）,粒细胞集落刺激因子（G-CSF）,基质细胞衍生因子-1（SDF-1）浓度的影响,从而为临床中医血管外科防治后肢动脉缺血性疾病提供新的思路和方法。方法：25只大鼠随机分为空白对照组（CG）、下肢缺血模型组（IG）、益气活血方缺血组（HG）、经穴注射BMSCs缺血组（BG）,经穴注射BMSCs＋益气活血方缺血组（BHG）,每组5只,在给予相应干预措施后,于7天后取血清,用酶联免疫吸附法（ELISA）测定大鼠血清中VEGF、G-CSF、SDF-1质量浓度。结果：1与CG比较,IG、HG、BG、BHG大鼠血清中VEGF、SDF-1、G-CSF浓度显著升高（P〈0.01）；2与IG比较,HG、BG、BHG组大鼠血清中VEGF,G-CSF浓度显著升高（P〈0.01）,BG、BHG大鼠血清中SDF-1浓度显著升高（P〈0.01）；3与HG比较,BG、BHG大鼠血清中VEGF,SDF-1,G-CSF浓度显著升高（P〈0.01）；4与BG比较,BHG大鼠血清中VEGF,SDF-1,G-CSF浓度显著升高（P〈0.01）,以上差异均有统计学意义。结论：经穴注射BMSCs联合益气活血中药可大幅提升下肢缺血模型大鼠血清中VEGF、G-CSF、SDF-1质量浓度,为临床中医血管外科防治后肢动脉缺血性疾病提供了新的思路和方法。双报告基因真核表达载体的构建及其功能鉴定
摘要：目的：构建绿色荧光蛋白和海肾荧光素酶共同高效表达的双报告基因真核表达载体。方法：将增强型绿色荧光蛋白基因和海肾荧光素酶基因以昆虫病毒T2A序列相连接而后克隆进入pcDNA3.1（-）质粒,构建双报告基因真核表达载体。将该载体转染至COS-7细胞,通过荧光显微镜观察、照度计定量分析检测绿色荧光蛋白和海肾荧光素酶生物活性,Western Bolt检测T2A序列自剪切效率。结果：双报告基因真核表达载体能够同时表达非融合的绿色荧光蛋白和海肾荧光素酶,与单独表达载体产物具有相似的生物活性和表达效率。结论：双报告基因真核表达载体建立成功,为基因表达调控等相关领域研究提供辅助工具。脾切除对肝硬化门静脉高压症大鼠免疫功能的影响及意义
摘要：目的：对肝硬化门静脉高压症大鼠行脾切除手术,观察术后大鼠免疫系统功能的变化情况,探讨脾切除术对免疫系统的影响,为临床治疗提供理论基础。方法：选取SD大鼠45只建立PHT模型,随机分为PHT组、脾全切组及部分脾切除组,每组各15只。另选取10只健康大鼠为对照组。分别对四组大鼠行不同的脾切除方案,术后检测四组大鼠的血常规、免疫球蛋白含量、T淋巴细胞亚群的变化及组织病理学染色结果等,分析各指标的意义。结果：四组大鼠血常规检测结果显示,PHT组大鼠WBC高于对照组,PHTTS组高于PHT组,PHTSS组高于PHTTS组,差异显著且具有统计学意义（P〈0.05）。四组大鼠血浆中IgG含量差异显著（P〈0.05）；IgA、IgM含量无显著性差异（P〉0.05）。四组大鼠CD4＋、CD8＋含量差异显著（P〈0.05）；CD29＋含量无显著性差异（P〉0.05）。结论：脾脏直接参于细胞介导免疫调节,脾切除可降低门脉压力,消除脾亢,有利于肝硬化门脉高压症的缓解。抑制c-FLIP基因促进TRAIL诱导的乳腺癌细胞凋亡
摘要：目的：探讨抑制c-FLIP的表达对TRAIL诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响。方法：重组腺病毒Ad-c-FLIP-siRNA和Ad-sTRAIL单独及联合感染对TRAIL耐药的乳腺癌细胞MCF-7,应用实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测病毒感染后各组细胞内c-FLIP和TRAIL的mRNA表达变化；MTT法和结晶紫染色法检测MCF-7细胞活性,Hoechst 33258荧光染色检测各组细胞的凋亡情况。结果：与阴性对照组比较,c-FLIP-siRNA组和c-FLIP-siRNA＋TRAIL组c-FLIP的mRNA相对表达量分别是（0.32±0.16）和（0.39±0.48）倍；TRAIL组和c-FLIP-siRNA＋TRAIL组TRAIL的mRNA相对表达量分别是（96.21±1.54）和（87.33±1.66）倍；TRAIL组、c-FLIP-siRNA组及c-FLIP-siRNA＋TRAIL组的抑制率（%）分别为（60.27±1.25）、（11.34±1.74）及（74.91±2.12）。对比阴性对照组的凋亡率（3.12±1.54）,TRAIL组（12.79±2.46）和c-FLIP-siRNA＋TRAIL组（25.50±3.17）组的凋亡率明显增高（P〈0.05）,c-FLIP-siRNA组（6.85±2.82）的凋亡率变化不明显,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：siRNA抑制c-FLIP基因的表达能显著促进TRAIL对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的诱导作用。三种猪源性细胞外基质体内降解规律的实验研究
摘要：目的：研究本实验以小鼠腹壁缺损为模型,通过对三种猪源性细胞外基质（ECM）—猪脱细胞小肠粘膜下层（P-SIS）、猪脱细胞心包（P-PC）以及猪脱细胞真皮（P-ADM）,进行体内弹性纤维和葡糖氨基聚糖类（GAGs）的含量测定,然后通过三组材料中弹性纤维和GAGs在术后第4周、第8周时再生或降解的数量,来对比研究三种生物材料植入体内后的降解规律,从而为寻找性能优良的生物补片提供理论依据,为生物补片的临床应用以及避免术后并发症方面提供指导方向。方法：BALB/c小鼠60只,体重18～20 g,手术造成1 cm×1 cm的腹壁全层缺损,随机分为3组（n=20）,分别以等面积的P-ADM、P-PC以及P-SIS进行修复,于术后4周、8周进行取材评估。结果：术后P-SIS组的腹腔内粘连评分均低于同时期内的其余两组。术后4、8周比较：P-ADM组,GAGs含量减少（P〈0.01）；P-PC组,弹性纤维（P〈0.01）、GAGs（P〈0.05）含量均有所增加；P-SIS组,弹性纤维（P〈0.001）、GAGs（P〈0.05）含量均增加。结论：P-SIS材料中,弹性纤维和GAGs的再生状况优于其他两组,且P-SIS材料不易引起腹腔内粘连,故P-SIS能够更好的应用于组织缺损的治疗,P-SIS在组织工程学领域相对而言是更加理想的修复材料。siRNA下调EZH2基因对肾癌细胞系769-P增殖的影响
摘要：目的：运用小干扰RNA下调果蝇zeste基因增强子人类同源物（enhancer ofzeste homolog 2,EZH2）在肾癌细胞系769-P中的表达,明确其对肾癌细胞增殖的影响。方法：将处于对数生长期769-P细胞分为实验组（experiment group）、阴性对照组（negative group）、空白对照组（blank group）,合成靶向EZH2基因的小干扰RN段（EZH2-siRNA）和无效序列片段后,通过脂质体介导分别转染至实理组和阴性对照组,空白对照组未做任何处理。以qRealtime-PCR检测EZH2基因mRNA水平的变化情况,以MTT法检测各组细胞增殖变化；流式细胞术（FCM）检测转染后细胞周期变化情况。结果：实理组中EZH2在mRNA表达水平明显受抑制；MTT实验中第4天始,实验组中769-P细胞的增殖能力开始受抑制,第5天时实验组细胞抑制更明显,与阴性对照组和空白组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。siRNA转染后实验组中G0/G1期细胞比例明显增多（81.32±3.14）%,与阴性对照组（44.13±1.52）%和空白对照组（45.71±2.32）%差异有统计学意义。结论：EZH2-siRNA可有效下调并抑制肾癌细胞769-P的增殖,EZH2在肾癌的发生、发展中发挥了重要作用,为下一步研究肾癌基因治疗提供了理论支持。冬凌草甲素对人结肠癌细胞株HCT116生长的影响及其机制研究
摘要：目的：研究冬凌草甲素（ORI）对人结肠癌细胞株HCT116生长的影响及其可能机制。方法：以体外培养的HCT116细胞为研究对象,给予不同浓度（0、2.5、5、10、20μM）ORI处理HCT116细胞不同时间（0、24、48、72 h）,通过MTT法检测其对HCT116细胞增殖的影响,DAPI染色观察其对细胞核的形态的影响,western blot检测细胞内β-catenin、c-myc蛋白表达的变化。结果：1ORI可显著抑制HCT116细胞的增殖,且此作用随着浓度和作用时间的增加或延长而增强（P〈0.05）。2ORI处理HCT116细胞24小时后,细胞核固缩的百分率随药物作用浓度的增加而增加。35、10、20μM ORI处理HCT116细胞24小时后,细胞内的β-catenin、c-myc蛋白水平均显著下调,且随着ORI浓度的增加逐渐减少。结论：ORI能以浓度和时间依赖性的方式抑制HCT116细胞的增殖,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。丹酚酸A对大鼠脑缺血/再灌注损伤及抗氧化酶活性的影响
摘要：目的：探讨丹酚酸A对大鼠脑缺血/再灌注（cerebral ischemia/reperfusion,CI/R）损伤及抗氧化酶活性的影响。方法：采用大鼠脑中动脉闭塞（middle cerebral arteryocclusion,MCAO）2 h再灌注24 h模型。实验终末,检测脑梗死面积,脑水肿以及评价神经功能损伤,并进一步分析脑组织中三种抗氧化酶的活性水平。结果：与模型组相比,丹酚酸A组大鼠脑梗死面积显著减少（P〈0.05）,水肿程度显著减轻（P〈0.05）,神经功能学评分显著下降（P〈0.05）。模型组再灌注24 h后,SOD,GSH-PX及CAT活性显著下降（P〈0.05）；丹酚酸A组SOD,GSH-PX及CAT活性则显著升高（P〈0.05）。结论：丹酚酸A对大鼠CI/R损伤具有保护作用,可能与CI/R损伤时的脑组织SOD,GSH-PX及CAT活性显著升高相关。白藜芦醇通过降低galectin-3的表达抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖并促进其凋亡
摘要：目的：探讨白藜芦醇对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响及galectin-3在其中的作用。方法：以体外培养的人宫颈癌SiHa细胞为研究对象,实验分为对照组、白藜芦醇处理组及[白藜芦醇＋galectin-3（5、10、20μg/mL）]共5组,分别给予生理盐水、300μmol/L白藜芦醇及[300μmol/L白藜芦醇＋Galectin-3（5、10、20μg/mL）]处理。48小时后,分别收集各组细胞,采用MTT法检测细胞的增殖情况,Caspase-3活性试剂盒测定细胞的凋亡情况,Western Blot技术测定细胞内galectin-3的蛋白表达水平。结果：300μmol/L的白藜芦醇明显抑制SiHa细胞的增殖,并显著增加其凋亡水平,同时减少了细胞内galectin-3的蛋白表达。在白藜芦醇处理的同时,给予5、10及20μg/mL的Galectin-3,随着Galectin-3蛋白浓度的增加,SiHa细胞的增殖抑制率逐渐降低,凋亡水平也逐渐下降,但是VEGF-R3受体的磷酸化水平却逐渐升高。结论：白藜芦醇通过降低galectin-3的表达抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖并促进其凋亡。高血压患者脉搏波参数与脉搏波传导速度的相关性研究
摘要：目的：探讨高血压患者脉搏波参数与脉搏波传导速度的相关性,为从脉图上辨识高血压病及脉搏波参数的拓展应用提供参考。方法：选择2012年6月至2013年6月在北京安贞医院和北京人民医院门诊和住院确诊的原发性高血压患者32例作为实验组,并招募健康成人志愿者29例作为对照组。利用中医四诊合参辅助诊疗仪与皮尺分别采集两组受试者的左侧寸口脉图信息和主动脉至桡动脉的血管长度,计算脉搏波参数及脉搏波传导速度,采用方差分析和皮尔逊简单相关的统计方法分析高血压患者不同的脉搏波参数与其脉搏波传导速度的相关性。结果：与对照组比较,实验组的PWV显著升高,有显著性差异（P〈0.05）。实验组H2/H1明显高于对照组（P〈0.05）,但H4/H1、T1/T、T2/T比值均显著低于对照组（P〈0.05）,差异均有显著性意义（P〈0.05）。高血压患者的H2/H1、T1/T、T2/T、H4/H1均与其PWV相关,其中H2/H1与PWV呈显著正相关（P〈0.05）,T1/T、T2/T与PWV呈显著负相关（P〈0.05）,H4/H1与PWV呈一般正相关（P〈0.05）。结论：高血压患者的脉搏波参数与脉搏波传导速度具有显著相关性,且潮波出现的幅值与脉搏波传导速度有显著正相关;脉搏波上升支和潮波的时值与脉搏波传导速度具有显著负相关,重搏波相对高度与脉搏波传导速度具有一般相关关系,因而可通过脉搏波参数的变化了解高血压患者血管弹性的状态。液体复苏对于严重脓毒症患者生存率的预后分析
摘要：目的：严重脓毒症中液体复苏的生理病理学理论支持及动物实验证据不足,有必要进行相关临床试验来确定液体复苏对于严重脓毒症患者预后的影响。方法：将26名严重脓毒症和脓毒症休克患者分为液体复苏组和非液体复苏组。比较两组的28天生存率,ICU住院天数的差别,对两组在院生存天数进行生存函数分析。结果：液体复苏组的28天生存率为41.7%,未液体复苏组的28天生存率为50.0%,之间没有统计学差异（P=0.713）。液体复苏组的平均住院天数为24.7±6.0天,未液体复苏组的平均住院天数为17.7±3.4天,两组之间没有统计学差异（P=0.308）。液体复苏组的中位在院生存天数为38.0[28.0,48.0],液体复苏组的中位在院生存天数为25.0[22.8,27.2]。两组之间有显著统计学差异,（Log Rank P=0.044,Breslow P=0.025）。结论：在严重脓毒症及脓毒症休克患者中,采取液体复苏能够延长患者的中位在院生存天数,可见液体复苏在严重脓毒症的治疗中有重要意义。尚未发现液体复苏能提高严重脓毒症患者28天生存率的相关证据。采取液体复苏究竟能否改善严重脓毒症患者预后,还需要大样本随机临床对照试验来证明。细胞因子IFN-γ,IL-2,TNF-α和ADA对结核性和恶性胸腔积液鉴别诊断的价值
摘要：目的：探讨细胞因子γ-干扰素（IFN-γ）、白介素-2（IL-2）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和腺苷脱氨酶（ADA）对结核性和恶性胸腔积液的鉴别诊断的价值。方法：以2012年9月至2013年3月期间在青岛大学医学院附属医院呼吸科及青岛胸科医院未经治疗的胸腔积液患者为研究对象,其中恶性胸腔积液患者46例,结核性胸腔积液患者42例。采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法（ELISA）分别检测结核性和恶性胸腔积液患者中IFN-γ、IL-2、TNF-α及ADA的表达情况。并应用ROC曲线分析两组患者胸腔积液中IFN-γ、IL-2、TNF-α及ADA的表达差异及意义。结果：结核性胸腔积液组IFN-γ、IL-2、TNF-α及ADA的表达明显高于恶性胸腔积液组,差异有统计学意义（t=8.118、8.126、8.066、7.221；P=0.000、0.000、0.000、0.000,P〈0.001）；ROC曲线分析结果显示胸腔积液中IFN-γ、IL-2、TNF-α及ADA的诊断临界值为201.45 pg/mL、41.91 pg/mL、21.55 pg/mL、33.78 U/L；诊断敏感度分别为91.3%、93.5%、91.2%、89.1%；特异度分别为91.0%、92.1%、89.9%、90.1%。结论：胸腔积液中IFN-γ、IL-2、TNF-α及ADA的表达对结核性和恶性胸腔积液诊断与鉴别诊断具有重要参考价值。Rapidarc联合呼吸门控在非小细胞肺癌放疗中的应用
摘要：目的：探讨RapidArc联合呼吸门控技术在非小细胞肺癌放射治疗中的应用。方法：选取未能手术的ⅢA-ⅢB期非小细胞肺癌患者19例,分别在自由呼吸（FB）和呼吸门控系统RC状态下为每例患者设计FB下的IMRT（IMRT-FB）、双弧RapidArc（Arc-FB）和RC下的IMRT（IMRT-RC）、双弧RapidArc（Arc-RC）4种放疗计划。评价四种计划和Arc-RC治疗的疗效及副反应。结果：除1例患者由于经济原因中途退出,其他患者均顺利完成治疗。PTV的平均体积由FB下的296 cm3减少到了RC下的210.2cm3；RC下的双肺平均体积为3817.4 cm3,较FB增加了34%；Arc-RC计划靶区的CI、HI及D2%、D98%、V95,与IMRT-FB、Arc-FB、IMRT-RC计划差异无统计学意义,但双肺的V20、V30、V40、V50、及平均剂量（Dmean）明显低于后三者（P〈0.05）。总有效率为72.23%（13例）。急性放射性食管炎1、2级发生率分别为61.1%、16.7%,急性放射性肺炎1、2级发生率分别为77.8%、11.1%,骨髓抑制1、2、3级分别为61.1%、22.2%、11.1%,急性心脏损伤1、2级发生率分别为83.3%、16.7%。结论：RapidArc联合呼吸门控在非小细胞肺癌精确放疗中具有减少正常组织受照剂量体积和提高放疗精度的作用。丘脑底核高频和低频电刺激治疗帕金森病的临床效果评价
摘要：目的：观察和比较丘脑底核高频电刺激与低频电刺激治疗帕金森病（PD）的临床效果。方法：对入选的31名PD患者行双侧丘脑底核电刺激手术,术后1个月,在高频刺激条件下,进行UPDRS运动评分,同时对震颤、强直、运动迟缓、中轴症状进行评分；术后6个月,在关闭刺激、高频刺激和低频刺激三种刺激条件,同样进行相关评分。结果：术后1个月和术后6个月,除中轴症状外,UPDRS运动评分和震颤、强直、运动迟缓评分均较术前明显降低（P〈0.05）。术后6个月,HFS、LFS刺激条件下,UPDRS运动评分和震颤、强直、运动迟缓评分均较OFF降低（P〈0.05）,但中轴症状评分无明显降低（P〉0.05）。术后6个月,LFS较HFS,各项评分均无明显差异。结论：丘脑底核高频和低频电刺激均能改善PD的运动功能,对震颤、强直和运动迟缓疗效明显,但对中轴症状均无明显治疗效果。丁苯酞氯化钠注射液联合神经节苷脂治疗急性脑梗死的临床效果观察
摘要：目的：探讨丁苯酞和神经节苷酯治疗急性脑梗死的临床效果,为临床治疗提供可借鉴的方法。方法：选取2011年8月-2013年5月在我院接受治疗的94例急性脑梗死患者,随机分为治疗组和对照组,每组47例。对照组患者采取抗血小板制剂及活血药物进行常规治疗,治疗组患者在此基础上给予丁苯酞氯化钠注射液联合单唾液酸神经节甘酯进行治疗。采用NlHSS评定各组患者神经功能缺损程度,应用改良Rankin量表评定残障水平,并对两组患者的治疗效果进行对比分析。结果：两组患者治疗前的NIHSS与mRs评分无明显差异（P〉0.05）。两组患者治疗后的NIHSS及mRs评分较治疗前均获得改善,治疗组患者改善更为明显,治疗效果明显优于对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。对照组患者治疗的总有效率为93.61%；治疗组患者治疗的总有效率为97.87%。治疗组的治疗总有效率明显高于对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：丁苯酞联合神经节苷酯治疗急性脑梗死具有明显的治疗效果,患者治疗后的NIHSS及mRs评分得到改善,值得临床推广采用。小儿幽门螺旋杆菌感染与缺铁性贫血的相关性分析
摘要：目的：分析并探讨小儿幽门螺杆菌感染与缺铁性贫血的相关性。方法：选择2012年2月至2013年2月本院门诊患儿412例,行血常规、血清铁、血清铁蛋白、HP-IgG抗体检测。结果：HP感染患儿IDA26例,IDA患病率为20.4%（26/127）,HP未感染患儿IDA19例,IDA患病率为6.7%（19/285）。两者比较差异有统计学意义（x2=17.21,P=0.00）。对比两组患儿MCV、MCH、MCHC指标,差异具有显著性（P均〈0.05）。45例IDA患儿中26例有HP感染,感染率为57.8%（26/45）,367例非IDA患儿中有101例HP感染,感染率为27.5%（101/367）。两者比较差异有统计学意义（x2=17.21,P=0.00）。结论：HP感染同IDA发病有显著相关性,HP感染可以是导致IDA的原因。快速康复配合腹腔穿刺减压治疗胃粘膜下肿瘤术后气腹的效果观察
摘要：目的：探讨快速康复护理模式对行腹腔穿刺放气结合胃肠减压处理胃黏膜下肿瘤患者的术后气腹症状,为临床护理工作提供参考。方法：对我院2010年7月至2013年1月收治的43例的胃黏膜下肿瘤患者行EFR手术,对术中及术后各临床资料进行分析。结果：两组患者手术的基本情况无显著性差异（P〉0.05）。快速康复组患者术后恢复情况优于常规护理组,且术后并发症的发生率低,差异具有统计学意义（P〈0.05）。快速康复组护理工作的落实率和患者治疗的依从性均明显优于常规护理组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：通过胃肠减压和腹腔穿刺放气能有效改善患者因术中胃壁全层切除产生胃壁穿孔而导致的术后气腹症状,全套操作及护理能够减少患者术后并发症、平均住院时间和平均住院花费,是一种安全有效的处理胃粘膜下肿瘤EFR术后气腹方法。
