miR-126报告基因载体的构建及其功能鉴定
摘要：目的：根据miR-126的预测靶点构建荧光素酶报告基因重组质粒，并进行功能鉴定。方法：利用sanger数据库提供的miR-126靶序列设计引物，PCR扩增目的微小RNA（microRNAs，miRNAs）靶基因3’非编码区（three-primeuntranslatedregions，3＇UTRs）序列，PCR产物双酶切，后连入经过同样双酶切的pGL3．control载体中，连接产物转化大肠杆菌DH5a，进行阳性克隆鉴定。同样，将候选靶基因3’UTRs突变，突变型3’UTR克隆入pGL3-control报告载体，构建野生型和突变型的报告基因重组质粒。将野生型和突变型的报告基因载体分别和化学合成的microRNA以及内参质粒共转染293TN细胞，进行双荧光素酶检测。结果：成功构建miR—126报告基因野生型和突变型重组质粒pGL3．VEGF—A-3＇UTR和pGL3-VEGF-A-3＇UTR，质粒测序及酶切结果完全正确。瞬时转染实验显示，过表达miR-126能直接抑制VEGF-A-3’UTRs报告基因活性。结论：miR-126对VEGF—A具有靶向调节功能。Perilipin5基因功能结构域载体的构建及亚细胞定位分析
摘要：目的：依据perilipin5的功能结构域，构建含perilipin5截断体的真核表达载体，并研究它们的亚细胞定位。方法：以小鼠肝脏cDNA文库为模板，PCR扩增出perilipin5的全长及功能结构域，将之分别装载入真核表达载体PCMV5中，并引入HA标签。酶切和测序鉴定，脂质体法将构建的质粒转染293T细胞，Westernblot验证表达，免疫荧光检测标记HA，于荧光显微镜下观察per-ilipin5各结构域的亚细胞定位。结果：构建的质粒序列3Y_确，转染细胞后可检测到HA—perilipin5融合蛋白的表达，免疫荧光显示含有1-188aa结构域的perilipin5截断体可定位于脂滴表面，1—188aa一旦缺失perilipin5的截断体则弥散于胞内。结论：包含per-ilipin5功能结构域的真核表达载体构建成功，perilipin5的1-188aa与其脂滴定位密切相关。脂肪来源干细胞体外成骨和成脂及成神经的诱导分化研究
摘要：目的：4g讨脂肪来源干细胞体外成骨和成脂及成神经的诱导分化情况。方法：选取10只SPF级雄性sD大鼠，将其不同部住的脂肪组织取出，分别采用不同方法对其向成骨、成脂及成神经等方向进行诱导分化并对其结果进行鉴定。结果：ADSC表达中，CD29占（99．11±0．13）％，CD44占（95．94±0．71）％，CD45占（0．12±O．09）％。经4周的成骨诱导后，茜素红s染色在细胞团中央发现红色钙化结节存在，碱性磷酸酶染色在细胞的胞质内观察到紫红色颗粒，经7d成脂诱导后，油红“O”染色在细胞质内观察到橙红色脂滴；经过6d的神经干培养基诱导后，通过免疫荧光染色证明诱导的Nestin细胞、神经丝蛋白-200以及GFAP等均出现阳性表达。结论：ADSC具备向脂肪、成骨及神经元等细胞进行多向分化的潜能，具有来源广、易于操作、体外增殖快速等优越性，并且不存在免疫排斥及医学伦理学问题，发展前景广阔。转录因子FOXP1在胃癌组织中的表达及意义
摘要：目的：检测FOXP1蛋白在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达情况，并探讨其与胃癌患者病理参数及预后的关系。方法：采用免疫组织化学染色方法检测90例胃癌组织和相应癌旁正常组织中FOXPI的表达情况并进行评分，进一步统计分析FOXPl表达与胃癌患者临床病理参数以及预后的关系。结果：FOXPl在胃癌组织中的表达显著低于癌旁正常组织（P〈0．01）；对临床资料进行统计分析表明，在临床IⅡ期和Ⅳ期患者的胃癌组织中FOXPl的表达显著低于临床I期和II期的患者（P〈0．05）；FOXPl在低分化胃癌中的表达显著低于高、中分化胃癌（P〈O．01）；FOXPl表达阳性者术后总体生存率较表达阴性者高（P=0．145），中位生存期长。结论：FOXPl表达的减少可能参与了胃癌的发生发展，FOXPl在胃癌中可能扮演抑癌基因的角色，FOXPl可作为胃癌治疗的潜在靶点。《分子影像学》第二版已正式出版发行
摘要：由哈尔滨医科大学附属第四医院申宝忠教授主编的《分子影像学》第二版（ISBN：978-7—117-13344—9／R·13345）一书已于2010年9月14日由人民卫生出版社出版发行。《分子影像学》是国内第一部分子影像学大型专著。对于分子影像学的基本概念、基本原理、基本方法和应用概况都有精彩而详细的论述，充分体现了国际分子影像学的最新进展。APRIL,XIAP及caspase-9在肝癌中的表达及意义
摘要：目的：探讨增殖诱导配体APRIL，X染色体连锁凋亡抑制蛋白XIAP及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶caspase-9在人肝癌组织中的表达及意义。方法：采用实时荧光定量逆转录．聚合酶链反应（reversetranscription-polymerasechainreaction，RT-PCR）方法，分别检测62例肝癌患者的肝癌组织、癌旁组织及30例正常人的肝脏组织中APRIL，XIAP和caspase-9的表达。对比分析APRIL，XIAP和caspase-9的表达与肝癌临床病理参数的关系。结果：在肝癌组织中，APRIL和XIAP的表达明显高于其在癌旁组织及正常肝脏组织中的表达（P〈0．05）；caspase-9的表达则明显低于癌旁组织以及正常肝脏组织（P〈0．05）；在癌旁组织和正常肝脏组织中，APRIL，XIAP和caspase-9的表达无显著差异（P〉O．05）。APRIL和XIAP在肝癌组织中的表达与甲胎蛋白、肿瘤组织学分级、临床病理TNM分级有关（P〈0．05）。结论：APRIL，XIAP和caspase-9在肝癌组织中的表达与肝癌临床病理特征密切相关，不仅是检测肝癌的重要生物学标志，也是潜在的肝癌治疗靶点。大鼠主动脉内皮细胞的分离培养和鉴定
摘要：目的：探索大鼠主动脉原代内皮细胞体外培养方法，为体外研究提供细胞模型。方法：分离大鼠主动脉，直接贴壁于培养皿中，荧光倒置显微镜观察细胞形态，免疫组化Ⅷ因子相关抗原染色鉴定细胞。结果：约24小时组织块边缘有游离的新生细胞长出，7天即融合成片。消化传代后细胞呈短梭形或三角形，单层生长，铺路石状，Ⅷ因子表达阳性，呈指数增殖。冻存后复苏细胞活性均超过90％。结论：用贴壁法成功建立了大鼠血管内皮细胞体外培养方法，冻存细胞存活率高，为体外研究提供了稳定的模型。人源蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2基因克隆与原核表达
摘要：目的：构建蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2的原核表达载体并在大肠杆菌中表达。方法：以人脑组织mRNA为模板，通过RT-PCR扩增出目标cDNA，构建蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2-pEASY-E1重组质粒。将重组质粒转化进E．coliTOPl0感受态细胞中，通过菌落PCR和测序进行阳性克隆的筛选和验证，将正确的质粒转化E．coliTransetta感受态细胞中，通过SDS-PAGE和western．blot进行蛋白检测和验证，酶促动力学分析SHP-2可溶性蛋白的活性。结果：成功克隆SHP-2功能域，构建SHP-2-pEASY-E1原核表达载体，完成可溶性蛋白的表达；酶促动力学分析结果为：米氏常数Km=0．97mmol／L，Vmax为13．57mmol／L／s。结论：本研究成功构建SHP-2的原核表达载体，重组表达的SHP-2蛋白具有较高的磷酸酶活性。不同来源肝细胞在体外降脂药物评价中药效反应的对比
摘要：目的：通过对比不同来源的人肝癌细胞系HepG2和原代大鼠肝细胞在体外降脂药物评价中药效反应，指导两种肝细胞在体外降脂药物评价中的实际应用。方法：用游离脂肪酸（油酸／棕榈酸，2：1）诱导HepG2细胞、原代大鼠肝细胞脂肪变性，并用100ixmol·L-1苯扎贝特干预，检测细胞内甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、活性氧（ROS）含量，细胞内脂滴数目、并检测细胞上清液中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果：FFA刺激使HepG2细胞和原代大鼠肝细胞脂质沉积（TG、脂滴）和氧化应激（ROS、MDA、SOD）水平上升。苯扎贝特对HepG2细胞1mmol·L-1 FFA造模组和原代大鼠肝细胞0．5mmol·L-1 FFA造模组脂质沉积和氧化应激水平改善显著；而HepG2细胞0．5mmol·L-1 FFA造模组和原代大鼠肝细胞1mmol·L-1 FFA造模组脂质沉积和氧化应激水平在苯扎贝特干预后变化不明显。结论：在相同FFA造模浓度，原代大鼠肝细胞病理特征变化更为明显；苯扎贝特对两种肝细胞在脂质沉积和氧化应激水平的作用也不完全相同。因而HepG2细胞和原代大鼠肝细胞在体外降脂药物评价中药效反应是不完全相同的。长期酒精摄入对雄性大鼠生殖系统的损伤
摘要：目的：研究长期酒精摄入对雄性大鼠生殖系统的损伤机制。方法：选用8周龄的SD大鼠，进行随机分组：对照组（5％蔗糖，口服）；酒精组（4g／kg，口服）。连续12周后，分别取附睾考察精子数目、活力；取血清检测睾酮和促黄体生产素（LH）含量；计算睾丸一体重比，并检测睾丸中丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）含量以及谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性；同时检测凋亡相关蛋白bax，bcl-2以及caspase．3前体和剪切体的蛋白表达。结果：酒精组12周后，大鼠的睾丸．体重比明显降低（P〈0．05），精子数目减少（P〈0．01），精子活力下降（P〈0．01）；血清中睾酮含量下降（P〈0．05），LH含量增加（P〈0．05）；睾丸中MDA含量增加（P〈0．01），GSH含量降低（P〈0．05），GPX和SOD活性下降（P〈0，01）；凋亡相关蛋白bax表达增加（P〈0．05），caspase-3剪切体与前体的比值增加（P〈O．01）。结论：长期摄入酒精引起的大鼠睾丸内氧化应激水平的增加是其导致其生殖系统损伤的重要因素之一。钛颗粒对小鼠颅骨OPG/RANKLmRNA及蛋白表达的影响
摘要：目的：观察钛颗粒对小鼠颅骨中OPG／RANKLmRNA及其蛋白表达的影响，探讨关节置换术后骨溶解的发生机制。方法：取成年BALB／C小鼠40只，随机分为假手术组、钛颗粒低剂量组、钛颗粒中剂量组及高剂量组，每组10只。除假手术组外，其余各组分别将钛颗粒15、30、60mg涂抹于小鼠颅骨表面后缝合切口。8周后取颅骨组织及外周血，运用real-timePCR及ELISA技术测定OPG／RANKL基因及蛋白表达情况。结果：与假手术组相比，钛颗粒低剂量组外周血中OPG蛋白表达及颅骨组织中OPGmRNA的表达均显著上升（P〈0．01），外周血中RANKL蛋白表达降低，但无统计学差异，颅骨组织中RANKLmRNA表达无显著差异；中剂量组及高剂量组外周血中OPG蛋白表达显著降低（p〈0．01），RANKL蛋白表达显著升高（P〈0．01），OPGmRNA表达显著降低（P〈0．01），RANKLmRNA表达显著升高（P〈0．01）。低中高三种不同剂量钛颗粒组组间相比，外周血中OPG、RAKNL蛋白及颅骨组织中其rnRNA表达均存在明显差异（P〈O．01），高剂量组对OPG、RANKL蛋白及mRNA表达的影响更显著。结论：钛颗粒可以改变OPG／RANKL的mRNA及蛋白表达量，这可能是其导致关节置换术后体骨溶解进而产生松动的原因之一。腹腔镜袖状胃切除术治疗病态性肥胖合并2型糖尿病近期疗效分析
摘要：目的：探讨行腹腔镜袖状胃切除术治疗合并2型糖尿病（type2diabetesmellitus，T2DM）肥胖症病人的效果。方法：回顾性分析上海长征医院普外三科2008年7月至2011年12月行腹腔镜袖状胃切除术治疗合并T2DM的肥胖症8例病人的术前资料和术后12个月的随访资料。结果：所有病人均在腹腔镜下完成手术，无中转开腹。术中术后均无严重并发症发生。在术后12个月的随访过程中，病人体重、体重指数均呈下降趋势，与术前相比，术后1月开始差异即有统计学意义（P〈0．01）。术后12个月T2DM临床完全缓解4例（50％），临床部分缓解4例（50％）。所有病人术后糖化血红蛋白、空腹血糖均呈下降趋势，从术后1个月开始，糖化血红蛋白与术前相比差异有统计学意义（P〈O．01），术后3个月复查5例（62．5％）已恢复正常水平；空腹血糖自术后1月开始与术前相比差异即有统计学意义（P〈0．01）。结论：腹腔镜袖状胃切除术是一种安全、有效的治疗肥胖症合并T2DM的手术方式。PDCD4和DNMT1在卵巢上皮性癌中的表达及其临床意义
摘要：目的：检测PDCD4和DNMTl在正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤组织、卵巢上皮性癌组织中的表达，并探讨其临床意义。方法：采用免疫组化法检测20例正常卵巢、25例卵巢良性肿瘤、40例卵巢上皮性癌组织中PDCD4和DNMTl的表达情况，分析其与卵巢上皮性癌临床病理参数之间的关系。结果：正常及良性卵巢组织中PDCD4的阳性表达率明显高于卵巢癌组（P〈0．05），卵巢癌的FIG0分期越高，PDCD4的表达越低，卵巢癌的病理分化程度越低，PDCD4的表达也越低，PDCD4的表达与卵巢癌的组织类型、腹水、年龄、是否绝经无关。正常及良性卵巢组织中DNMTl的阳性表达率明显低于卵巢癌组（P〈0．05），卵巢癌的病理分化程度越低，DNMTl的表达越高，但其与卵巢癌的FIGO分期、组织类型、腹水、年龄、是否绝经均无关。卵巢癌中DNMTl的与PDCD4的表达呈显著负相关（P〈0．05）。结论：PDCD4和DNMTl在卵巢癌中的表达呈负相关，PDCD4的表达下调和DNMTl的表达上调可能在卵巢癌的发生及发展中起重要作用。多发脑膜瘤的影像学特点分析
摘要：目的：探讨多发脑膜瘤的影像学特点。方法：对27例经术后病理确诊的多发性脑膜瘤患者术前影像学等临床相关资料进行回顾性分析。结果：本组27例中，共58个病灶，颅内病灶最多的共有14个，最少的共有2个，显示大脑凸面肿瘤数27个，大脑镰13个。肿瘤实体直径最小为0．5cm，最大为8．5cm，平均4．5cm。其中78％（21例）发病模式为一个较大肿瘤和许多较小肿瘤，仅有6例为大小相似的2个或多个肿瘤，并且肿瘤总数均小于5个，数目较多的肿瘤为“子母瘤”的形式。结论：多发脑膜瘤的数目、大小差别较大，既可集中分布，亦可分散存在，无论是多排增强CT还是高场强MRJ诊断均应全面观察，避免遗漏。三阴性乳腺癌中MMP9和P53的表达与其预后的关系研究
摘要：目的：研究三阴性乳腺癌（triplenegativebreastcancer，TNBC）中基质金属蛋白酶9（matrixmetalproteinase9，MMP9）和P53的表达及其与三阴性乳腺癌预后的关系。方法：收集2002年3月至2011年7月上海交通大学医学院附属新华医院普外科诊治且临床资料完整的TNBC标本147例，通过免疫组化检测其MMP9、P53的表达。结合临床随访数据，分析MMP9、P53的表达与TNBC预后的关系。结果：TNBC占同期本院收治的乳腺癌13．3％（147／1103）。MMP9、P53在TNBC中的阳性表达率分别为47．6％和66．0％。MMP9与TNBC患者的淋巴结转移数显著相关（P=0．003）。MMP9表达阳性的TNBC与MMP9表达阴性TNBC患者60个月的无病生存（diseasefreesurvival，DFS）率分别为62％和83％，差异具有统计学意义（P=0．001）；总体生存率（overallsurvival，os）率分别为66％和73％，差异具有统计学意义（P=0．022）。P53表达阳性的TNBC和P53表达阴性的TNBC患者60个月的DFS分别为65％和87％（P=0．010）；OS分别为60％和85％（P=0．005）。MMP9和P53的HR分别为3．353（95％CI：1．614-6．966，P=0．001）和2．979（95％CI：1．239-7．165，P=0．015）。结论：MMP9和P53在TNBC中的阳性表达与患者的预后不良有关，且MMP9为影响TNBC患者预后的独立危险因素。PET/CT和超声弹性成像在乳腺癌诊断中的价值对比分析
摘要：目的：探讨PET／CT和超声弹性成像（UE）在乳腺癌诊断中的价值。方法：回顾性分析2011年1月至2012年5月在我院确诊的173例乳腺患者的临床资料，所有患者均行PET／CT和LIE检查。依据病理组织活检和临床随访分别评价PET／CT和LIE对乳腺癌诊断的灵敏性、特异性、准确性，并比较两者的结果。结果：PET／CT和UE诊断乳腺癌的灵敏性分别为98．8％和81-3％；特异性分别为84-3％和97．2％；准确性分别为90．7％和90．2％；两种方法联合检测诊断乳腺癌的灵敏性、特异性、准确性分别为98．8％、98．1％、98．4％，UE检测乳腺癌的敏感性明显低于PET／CT及PET／CT＋UE，PET／CT检测乳腺癌的特异性明显低于LIE及PET／CT＋UE，PET／CT＋UE诊断乳腺癌的准确性显著提高（P〈0．05）。结论：PET／CT和超声弹性成像在乳腺癌诊断中均有较高的应用价值，各有优缺点，二者联合检测可提高乳腺癌诊断的准确率。调强适形放疗联合化疗治疗局部晚期食管癌的疗效观察
摘要：目的：观察调强适形放疗（intensitymodulatedradiationtherapy，IMRT）联合多西他赛、奈达铂方案化疗同步治疗局部晚期食管癌的疗效及安全性。方法：选择66例局部晚期食管癌患者为研究对象，将其随机分为2组，其中常规放疗组（A组）共30例，采用常规照射方法，6／8MV高能x线，2．0Gy／次，5次／周；40Cy／20次后再次定位剂量达60-66Gy，强调放疗组（B组）共36例，采用强调适应性放疗，6／8MV—X射线照射，以95％等剂量线包绕PTV（计划靶区），处方剂量GTV（肿瘤区）66Gy／30次，cTV（临床靶区）60Gy／30次，PTV60Gy／30次，每天1次，每周5次。强调放疗组同期接受IMRT和多西他赛、柰达伯化疗，21天1个周期，连续2个周期。治疗结束后根据实体瘤疗效评价标准（RECAST）评定临床疗效；参照WHO毒性反应分度标准评价毒副反应。结果：常规放疗组和强调放疗组的总有效率分别为46．66％和91．67％（xZ=17．26，P〈0．05）；常规放疗组的毒副反应发生率显著高于强调放疗组，包括骨髓抑制、放射性食管炎和消化道反应的发生率存在显著差异（P〈O．05）。结论：调强适形放疗联合多西他赛、奈达铂化疗同步治疗局部晚期食管癌疗效较好，毒副反应可耐受，具有潜在的推广应用价值，值得临床进一步研究。斜视矫正手术对双眼视觉功能影响的临床研究
摘要：目的：探讨斜视矫正手术对双眼视觉功能的影响。方法：将收集的85例斜视患者根据斜视类型分组，共同性外斜视组5l例，占60．00％；共同性内斜视组16例，占18．82％。麻痹l生斜视组13例，占15．30％，特殊类型斜视组5例，占5．88％。同视机检查并记录患者术前及术后双眼视功能情况。结果：外斜视手术方式多选用单眼外直肌后徙＋内直肌缩短术，内斜视手术主要选用双眼内直肌后徙术，上斜肌麻痹多行患眼下斜肌适量后徙或转位术，麻痹性内斜和外斜手术方式为患眼水平肌后徙联合缩短术，外斜V征手术方式为双眼外直肌后徙联合上移半个肌腱，伴有斜肌亢进者需同时行斜肌减弱术，固定性内斜1例手术方式为患眼内直肌断键＋直肌联结术。85例患者术后正位73例（85．89％），双眼视觉功能手术前后比较有显著性差异（P〈0．05），术后较术前可见明显改善。结论：斜视矫正手术可促进双眼视觉功能的恢复。尤其是对于学龄前儿童效果更明显。
