Apelin通过调节ROS水平抑制TNF-α诱导的HepG2细胞凋亡
摘要：目的：探讨apelin在肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α,TNF-α）诱导的肝细胞凋亡中的作用及可能机制。方法：PCR检测HepG2细胞和原代小鼠肝细胞中APJ受体的表达;采用Hoechst 33342染色检测TNF-α诱导的HepG2细胞凋亡;用活性氧（ROS）检测试剂盒结合流式细胞术测定细胞内ROS水平;通过Western blot检测信号分子JNK的磷酸化水平;比较给予apelin处理对上述指标的影响。结果：HepG2细胞和原代小鼠肝细胞均表达APJ受体;apelin可抑制TNF-α导致的细胞内ROS生成增多和JNK磷酸化水平升高并减少TNF-α诱导的HepG2细胞凋亡。结论：Apelin可能通过拮抗TNF-α诱导的细胞内ROS水平升高,使JNK信号失活,从而抑制HepG2细胞凋亡。高压氧预处理对减压病大鼠肺组织的影响
摘要：目的：研究高压氧预处理对减压病大鼠肺组织的影响及其意义。方法：SD大鼠30只,随机分为正常对照（CN）组,高压氧预处理（HBO）组,减压（DCS）组,减压组采用20min匀速升压至7.0ATA,停留20min使大鼠充分换气,2min内快速减压常压方案。减压24h后观察肺组织中谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的变化;并通过HE染色观察肺组织病理学变化。结果：减压组肺泡腔不够完整,肺泡破裂融合,肺泡壁增厚,有中度炎性细胞浸润,高压氧组与减压组相比,病理改变明显减轻;与对照组相比,单纯减压使大鼠肺组织GPx、MDA升高,SOD降低,高压氧预处理组GPx、MDA降低,SOD降低升高;高压氧组与减压组相比GPx、MDA下降,SOD升高（P〈0.05）。结论：高压氧预处理对减压病大鼠肺组织具有一定的保护作用。MIR-122慢病毒表达载体构建及稳定转染HepG2细胞系
摘要：目的：构建人mir-122慢病毒表达载体,感染肝癌细胞HepG2,建立稳定表达mir-122的HepG2细胞系。方法：以人has-mir-122成熟序列,设计并合成引物,采用PCR的方法扩增目的基因,并连接到慢病毒表达质粒pGCSIL-GFP（含绿色荧光蛋白GFP基因）中。对重组质粒进行双酶切鉴定后,进行mir-122基因慢病毒（pGCSIL-GFP-miR-122）的包装及病毒滴度测定,用构建好的慢病毒表达载体感染HepG2细胞,qPCR检测感染后细胞中MIR-122的变化。通过流式细胞仪检测荧光蛋白GFP,westernblot检测mir-122靶分子CAT-1,验证pGCSIL-GFP-miR-122在HepG2细胞中的表达效果。结果：pGCSIL-GFP-miR-122经双酶切分析及测序,插入序列正确。qPCR检测显示转入病毒后mir-122在细胞中的表达显著提高。表明mir-122慢病毒表达载体构建成功。流式细胞仪根据GFP荧光筛选纯化感染后细胞,感染率达90%以上。Western blot显示mir-122明显抑制其靶分子表达。进一步验证pGCSIL-GFP-miR-122在细胞中的稳定表达。结论：成功构建mir-122慢病毒表达载体,并建立稳定表达的细胞系,为研究mir-122在人体所起的作用及功能机制打下基础。慢病毒介导的大鼠肝BRL-3A细胞Tmub1基因沉默及稳定感染细胞系的建立
摘要：目的：构建Tmub1基因慢病毒干扰载体,建立稳定转染细胞系,检测大鼠肝BRL-3A细胞中Tmub1基因表达的干扰效果。方法：设计并构建4对针对大鼠Tmub1基因的特异性shRNA干扰质粒,酶切鉴定、DNA测序所得质粒。将由pRSV-Rev、pMDLg-pRRE、pMD2G和pll3.7干扰质粒组成的包装系统共转染293T细胞,产生慢病毒。所得慢病毒感染大鼠正常肝细胞BRL-3A,Western Blot检测不同靶点RNAi后Tmub1蛋白表达情况,确定有效靶点。针对有效靶点大量包装慢病毒。测定病毒滴度并以最适感染复数（multiplicity of infection,MOI）感染BRL-3A细胞后,G418抗生素筛选稳定感染细胞系BRL-3A/256。RT-PCR和Western Blot检测各组细胞Tmub1 mRNA和蛋白质的表达差异。结果：结果显示Tmub1 RNAi慢病毒载体构建成功,C0020Sh2-Hops-256干扰靶点RNAi效果最强。成功包装Tmub1基因RNAi慢病毒,测定病毒滴度为2.3×108TU/ml,对293T细胞的最适感染复数为60。成功建立Tmub1 RNAi慢病毒载体稳定感染细胞系BRL-3A/256,且在该细胞系中Tmub1 mRNA和蛋白质表达明显降低。结论：成功构建Tmub1 RNAi慢病毒载体,有效干扰BRL-3A细胞中Tmub1 mRNA和蛋白表达;成功筛选出Tmub1RNAi慢病毒稳定感染细胞系BRL-3A/256。单人建立大鼠原位肝移植模型的手术体会
摘要：目的：探讨单人建立稳定大鼠原位肝移植模型手术中的难点及对策。方法：单人及双人裸视下采用改良二袖套法制备大鼠原位肝移植模型各50例。结果：单人及双人组供体手术时间、无肝期、受体手术手术时间分别为：（39.16±2.89）min和（38.36±3.04）min、（19.92±1.36）min和（19.70±1.40）min、（61.98±3.46）min和（58.65±3.94）min;单人及双人组手术成功率、1周存活率、一月存活率分别为：94.0%（47/50）和92.0%（46/50）、86.0%（43/50）和88.0%（44/50）、86%（43/50）和84%（42/50）。结论：通过改进手术方法,简化操作,单人即可建立稳定的大鼠原位肝移植模型。人关节软骨细胞的体外分离、培养与鉴定
摘要：目的：研究人关节软骨细胞的体外分离、培养及鉴定方法,观察各代人关节软骨细胞的形态学特性。方法：取人创伤性截肢的无菌膝关节软骨,采用两步酶消化法分离培养人关节软骨细胞,并进行传代培养。通过倒置相差显微镜下观察细胞形态,绘制生长曲线,甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色对细胞进行鉴定。结果：两步酶消化法消化出的软骨细胞呈圆形,培养2-3天,细胞贴壁、变形,呈三角形或多角形,2周左右细胞融合成层,传代5次后出现去分化。软骨细胞增殖和生长缓慢。形态学、免疫组织化学染色显示细胞培养5代以内可以保持表型的稳定。结论：本研究采用胰蛋白酶及Ⅱ型胶原酶联合消化法获得大量高纯度、高活性的人关节软骨细胞。5代以内细胞生长良好,生物学特性明显,适合于实验研究,5代以后出现去分化现象。人类风湿性关节炎滑膜组织cDNA文库的构建
摘要：目的：构建人类风湿关节炎（RA）滑膜组织cDNA文库。筛查与RA相关的特异基因,为探讨RA的发病机制及基因治疗奠定基础。方法：提取人类风湿关节炎滑膜组织RNA并使用Trizol法纯化mRNA;运用mRNA5＇末端的模板转换方法以powerscriptTM逆转录酶进行转录,使用COS III/3＇PCR引物合成第1链cDNAs;长距离聚合酶链反应（LD-PCR）合成双链cDNA;PCR产物经蛋白酶K水解并纯化后,经Sfi I酶切、柱层析洗脱,重组于TripIEx2载体并包装后,测定滴度、重组率、扩增文库,随机挑取40个噬菌斑,用载体克隆位点两端的通用引物进行PCR扩增,以检测所构建cDNA文库的质量。结果：未扩增文库的滴度为6.89×106pfu/mL;扩增后文库滴度为2.63×109pfu/mL,重组效率为93%;插入片段主要集中在300～1800bp。结论：成功构建了一个人类风湿关节炎（RA）滑膜组织cDNA文库,可以用探针抗体等做免疫学筛选,为进一步探寻与RA疾病相关的基因奠定坚实基础。弥漫大B淋巴瘤12号染色体基因表达的研究
摘要：目的：研究弥漫大B淋巴瘤（Diffuse Large B-Cell Lymphoma,DLBCL）12号染色体基因表达情况。方法：收取临床DLBCL病人淋巴结标本液氮速冻,快速冷冻切片,采用激光显微切割技术分离单纯淋巴瘤细胞,提取淋巴瘤细胞中的mRNA与表达谱芯片杂交,通过信号扫描、处理后获得表达基因杂交信号强度。每基因设11-20对探针。杂交信号与错配探针对比,扣除背景值后,使用Wilcoxon符号秩和检验选取与错配杂交信号有显著差异的基因作为分析结果（P=0.05）。随机选取两个检测到的基因,使用PCR方法检验基因芯片结果的可靠性。结果：成功地从快速冷冻保存的DLBCL标本中提取了RNA。使用表达谱芯片进行研究,发现了共164条12号染色体编码的基因在淋巴瘤细胞中表达。并根据胞内定位,基因功能和基因所属的代谢通路三种分类方法对所得基因进行分类分析。基因表达密度分析显示12号染色体上的基因表达情况与编码基因分布情况比较一致。结论：使用表达谱芯片研究了12号染色体上的基因表达情况,为研究DLBCL提供了依据。大豆异黄酮对MMTV-erbB-2转基因小鼠乳腺肿瘤中MMP-2和TIMP-2表达影响的研究
摘要：目的：利用MMTV-erbB-2转基因小鼠,探讨食物中大豆异黄酮对MMTV-erbB-2转基因小鼠乳腺肿瘤发生发展的影响。方法：选择健康雌性MMTV-erbB-2转基因小鼠60只,随机分为实验组（自鼠龄四周起喂养含有大豆异黄酮的豆饲料和对照组（喂养不含大豆异黄酮的普通饲料）。观察两组小鼠生长情况,观察各组小鼠乳腺肿瘤的发病率和潜伏期、记录肿瘤生长情况,并通过HE染色观察其病理类型,免疫组织化学染色SP法检测各组小鼠乳腺癌组织及正常乳腺组织中MMP-2和TIMP-2的表达并分析其关系。结果：豆饲料干预组,普通饲料干预组小鼠乳腺肿瘤的发瘤率分别为36.7%,66.7%,豆饲料干预组小鼠乳腺肿瘤发瘤率与对照饲料干预组相比明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。小鼠肿瘤多生长在第2-3对乳腺上,两组小鼠乳腺肿瘤最大平均直径及潜伏期相比较差异无统计学意义。两实验组小鼠乳腺肿瘤组织经HE染色后全部确定为乳腺癌组织。两实验组小鼠乳腺肿瘤组织中MMP-2和TIMP-2表达均高于正常乳腺组织,差异有统计学意义（P〈0.05）,MMP-2和TIMP-2在乳腺肿瘤组织中表达呈负相关,在正常乳腺组织中表达无相关性。MMP-2在豆饲料干预组,普通饲料干预组小鼠乳腺肿瘤组织中的阳性率分别为83.3%,73.9%,各实验组阳性率相比较差异无统计学意义（P=0.888）;TIMP-2在豆饲料干预组,普通饲料干预组小鼠乳腺肿瘤组织中的阳性率分别为33.3%,43.5%,各实验组阳性率相比较差异无统计学意义。结论：大豆异黄酮能抑制MMTV-erbB-2转基因小鼠乳腺肿瘤的发生,但其对小鼠乳腺肿瘤的作用与MMP-2及TIMP-2的表达无明显相关,具体机制尚待进一步研究。白藜芦醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注的治疗作用
摘要：目的：观察白藜芦醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的治疗作用及可能的机制。方法：将SD大鼠随机分为2组：对照组（n=16）,白藜芦醇组（n=16）。对照组再灌注即刻腹腔给予0.5 ml生理盐水,白藜芦醇组再灌注即刻腹腔给予20 mg/kg白藜芦醇。再灌注22小时后,进行神经功能学评分、脑梗死容积测定,用分光光度仪测定脑组织溶浆中SOD、MDA和MPO的含量。结果：再灌注22小时后,白藜芦醇治疗组可以改善大鼠神经功能学评分和降低脑梗死面积（P〈0.05）,同时可以增加脑组织溶浆中SOD的活性,降低MDA和MPO的含量。结论：白藜芦醇通过减轻白细胞的浸润、提高自由基的清除率对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤发挥治疗作用。Twist在胸腺上皮性肿瘤中的表达及预后意义
摘要：目的：检测Twist在胸腺上皮性肿瘤的表达及其与预后的关系。方法：应用免疫组织化学pv6000法检测Twist在87例胸腺上皮性肿瘤（胸腺瘤71例,胸腺癌16例）中的表达情况,分析其与患者各项临床病理指标及预后的关系。结果：Twist蛋白在胸腺癌的阳性表达（81.3%）显著高于胸腺瘤组织（11.3%）,其阳性表达的差异存在统计学意义（P〈0.001）,其在胸腺瘤各亚型之间表达的差异无统计学意义（P〉0.05）。Twist阳性表达与胸腺上皮性肿瘤术后发生远处转移呈正相关关系（r=0.40,P=0.001）。Kaplan-Meier生存分析显示Twist阳性表达患者术后生存期低于Twist阴性表达患者（P〈0.001）。结论：检测Twist蛋白表达情况对于鉴别胸腺瘤与胸腺癌可能有重要的参考价值,Twist阳性表达可能与术后发生远处转移有关并影响患者术后生存期。重叠PCR法构建XLRS1三种不同类型突变体
摘要：目的：构建X连锁视网膜劈裂（XLRS）三种不同类型突变体（点突变、缺失突变、插入突变）,以便进一步构建不同类型的突变细胞模型。方法：根据NCBI gene数据库中XLRS1基因的CDS设计三对不同类型的引物,使用重叠PCR法获得突变片段,然后克隆入载体pLJM1-EGFP。结果：经测序验证,成功构建了三种不同类型突变体。结论：使用重叠PCR法构建三种不同类型突变体,为进一步研究XLRS1不同类型突变的致病机制奠定了基础。糖尿病大鼠内嗅皮层神经元放电与场电位相干性研究
摘要：目的：通过分析神经元放电与场电位的相干性,探讨内嗅皮层神经元放电与场电位的关系。方法：10只成年大鼠随机分2组,一组糖尿病建模,另一组作为对照,记录对照组和糖尿病组大鼠的内嗅皮层神经元放电锋电位和场电位,利用点过程谱分析方法对神经元放电与场电位相干性进行分析对比。结果：糖尿病大鼠麻醉神经元放电与场电位的相干性明显低于对照组（P〈0.01）。结论：糖尿病大鼠内嗅皮层神经元功能受到损害。超临界流体强化溶液分散法制备Eudragit S100纳米颗粒
摘要：目的：制备Eudragit S100纳米颗粒。方法：采用超临界流体强化溶液分散（SEDS）法制备,考察了Eudragit S100浓度、超临界CO2流速、溶液流速、压力、温度对Eudragit S100纳米粒形貌和粒径的影响,并用场发射扫描式电子显微镜、激光粒度分析仪、差示扫描量热仪、傅里叶变换红外光谱仪对样品进行表征。结果：SEDS法可以制备球形的、粒径分布窄的Eudragit S100纳米粒,所得纳米粒的平均粒径在90~220 nm之间。降低Eudragit S100浓度和温度、升高压力有利于制备形貌好、粒径小的纳米粒;提高超临界CO2流速和降低溶液流速也有利于制备粒径小的纳米粒,但当超临界CO2流速升高至4 kg/h或溶液流速降低至0.5 ml/min时,纳米粒的产率较低。SEDS处理后Eudratit S100仍以无定形态存在,且SEDS过程没有对Eudratit S100的化学键造成破坏。结论：采用SEDS法可用于Eudragit S100纳米粒的制备,工艺简单可行。超声造影技术评价兔腹主动脉斑块内新生血管形成及斑块稳定性的研究
摘要：目的：通过超声造影技术评价不同时间点兔主动脉粥样硬化斑块内新生血管的变化,并进一步判断斑块稳定性。方法：60只纯种新西兰大白兔随机分为4组,每组15只。正常对照组、高脂饲养组、球囊损伤组、球囊损伤联合高脂饲养组。分别于第8、14、20周进行超声造影检查,比较斑块及斑块内新生血管形成率。20周后抽血测定血脂及炎性因子水平。处死动物,取腹主动脉,HE染色观察斑块形态及组成成分,并统计各组存活率。结果：高脂饲养组与高脂饲养联合球囊损伤组血脂无显著差异,但明显高于对照组（P〈0.05）;高脂饲养联合球囊损伤斑块内新生血管明显多于单纯高脂饲养以及球囊损伤组（P〈0.05）。HE染色提示高脂饲养联合球囊损伤组不稳定斑块明显多于单纯高脂饲养以及球囊损伤组。结论：超声造影可以明确动脉粥样硬化斑块内新生血管,并进一步判断斑块稳定性。《分子影像学》第二版已正式出版发行
摘要：由哈尔滨医科大学附属第四医院申宝忠教授主编的《分子影像学》第二版（ISBN：978—7—117—13344—9／R·13345）一书已于2010年9月14日由人民卫生出版社出版发行。《分子影像学》是国内第一部分子影像学大型专著。对于分子影像学的基本概念、基本原理、基本方法和应用概况都有精彩而详细的论述，充分体现了国际分子影像学的最新进展。关于滨州医学院开展研究生学术论坛活动的效果评价研究
摘要：随着科学技术的发展,研究生教育在教学工作中的地位日渐突出。为了提高研究生培养质量,充分发挥研究生主观能动性,达到促进交流、活跃学术、培养研究生创新能力的目的,开展丰富多彩的研究生学术论坛活动势在必行。本研究通过问卷调查的方式对我校研究生学术论坛开展现状进行了分析,从结果可以看出大部分研究生对待研究生论坛的态度是积极的,同时,大多数研究生对研究生论坛的期望值是很高的,但是,仍有少部分研究生对待研究生论坛存在消极态度,我们应该清醒的认识到目前研究生论坛存在的不足,及时调整研究生学术论坛活动内容和形式,充分调动每一位研究生的积极性和创造性。SPECT对症状性颅内动脉狭窄支架成形术的疗效评价
摘要：目的：通过SPECT脑血流灌注显像,对症状性颅内动脉粥样硬化性狭窄行颅内支架成形术,进行血流动力学的疗效评价。方法：对42例症状性颅内动脉粥样硬化性狭窄（狭窄程度〉50%）患者,术前通过SPECT,分为低灌注组和正常灌注组。术后3月复查SPECT,做出血流动力学的疗效评价。通过术前及术后1年mRS评分,比较两组的远期疗效。结果：低灌注组发病症状一般为缺血性卒中,正常灌注组一般为TIA（P〈0.01）。低灌注组术后血流灌注较术前改善明显（P〈0.01）。正常灌注组复发性TIA的发生率较低灌注组高（P〈0.05）。低灌注组术前术后mRS评分有统计学差异（P〈0.05）。结论：颅内支架成形术可以明确改善颅内低灌注区的血流灌注,对低灌注组术后缺血事件的预防效果好,并有改善神经功能作用。因此,存在颅内低灌注区的患者更具有颅内支架成形术的手术适应症。
