DNA甲基转移酶基因干扰对K562细胞癌-睾丸抗原表达的影响
摘要：目的：探讨抑制甲基转移酶（DNMT）对K562细胞中癌-睾丸抗原表达的影响及其机制。方法：分别采用针对DNMT家族不同成员的siRNA转染K562细胞，采用RT—PCR检测细胞中DNMT及癌-睾丸抗原的水平表达，并采用甲基化特异PCR（MSP）检测部分癌．睾丸抗原基因启动子的甲基化状态。结果：经siRNA干扰后，K562细胞中DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的表达量均明显降低，癌-睾丸抗原CTl0的启动子区序列发生了去甲基化，但处于非甲基化状态的MAGE．A1启动子区没有发生任何改变。干扰DNMT组的K562细胞，再表达癌-睾丸抗原CT10、PRAME和CT9，而MAGE-A1、ssx-1的表达上调，但是NY-ESO—1、HCA587和HCA661的表达状况均没有任何影响。结论：在K562细胞中，干扰DNMT可使部分癌-睾丸抗原基因的启动子区发生去甲基化，从而导致相应的癌-睾丸抗原分子的再表达或表达增加。人脂联素重组克隆载体构建
摘要：目的：构建含有人脂联素（adiponectin，ad）基因的重组克隆载体pEGFP-N1-AD，为进一步研究AD与脂质代谢及代谢综合征关系奠定基础。方法：根据Gene-Bank中已经公布的AD设计引物，从含有目的基因的质粒克隆模板中，利用PCR方法钓取目的基因。将AD基因克隆到真核表达载体pEGFP-N1中。酶切、PCR、及测序鉴定。结果：PCR、酶切及测序鉴定证实目的基因正确克隆至真核表达载体pEGFP-N1中，测序结果与Gene—Bank报道一致。结论：成功构建了AD重组克隆真核表达载体。内源性κ-阿片肽介导的缺血后处理心肌保护作用
摘要：目的：研究内源性K-阿片受体（K-OR）的激动剂强啡肽在触发缺血后处理（postconditioning，Postcon）中的抗凋亡作用及潜在机制。方法：除了假手术组，SD大鼠（每组6只）制作缺血再灌注模型，进行了左冠状动脉前降支闭合30分钟后，再灌注2小时伴有或不伴有缺血后处理。在再灌注前5分钟静脉注射选择性K-受体拮抗剂nor-binaltorphimine（nor-BNI）。氯化三苯四染色测定心肌梗死面积。用分光光度计测定血浆中肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）水平和心肌细胞凋亡蛋白酶-3（caspase-3）活性。TUNEL法检测心肌细胞凋亡。ELISA法检测血清和心肌中强啡肽含量。结果：缺血／再灌注（I依组）组的梗死面积，caspase-3活性，细胞凋亡指数，CK和LDH活性等明显高于假手术组（P〈0．01）。与I／R组相比，Postcon明显减少梗死面积，caspase-3活性，细胞凋亡指数，CK及LDH活性（P〈0．01）。Postcon可使强啡肽含量显著增加（P〈0．01）。除强啡肽含量外，上述所有的作用均被nor-BNI所阻断。结论：心脏保护和后处理的抗凋亡作用是通过激活K-OR，至少部分通过增加强啡肽的水平来介导的。电针不同穴位对慢性炎症痛模型大鼠心理行为改变的实验观察
摘要：目的：观察电针不同穴位对慢性炎症痛模型大鼠行为学改变的影响，进一步探讨电针对慢性痛所致心理行为改变的调节规律：方法：将40只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、电针百会组、电针关元组、电针足三里组，每组各8只。除正常组外，其余各组均采用弗氏完全佐剂（CFA）制备佐剂性关节炎（AA，即慢性炎症痛）大鼠模型，于造模第2天各治疗组捆绑固定后给予电针20min，正常组及模型组捆绑束缚20min，隔日一次，共10次。于造模前、造模后、治疗5次、10次分别采用高架十字迷宫检测各组大鼠开放臂进入次数比例（OE％）及开放臂停留时间比例（OT％）的变化。结果：与造模前比较，电针百会穴组大鼠造模后0E％和0T％明显减少（P〈0．05，P〈0．05），且治疗5次后OT％、治疗10次后0E％与0T％均降低明显（P〈0．01，P〈0．01，P〈0．05），而电针关元组大鼠治疗10次后OE％和OT％则明显升高（P〈0．05，P〈0．05），电针足三里组大鼠造模后0T％、治疗5次后大鼠OE％与OT％、治疗10次后OT％均明显降低（P〈O．01，P〈0．05，P〈0．01，P〈0．05）；与造模刚结束比较，电针百会组大鼠在治疗5次、10次后0E％由升高逐步降低，而OT％由低逐渐升高（P〉0．05），电针关元组模型大鼠治疗10次后模型大鼠0E％和0T％均明显升高（P〈0．05，P〈0．05），电针足三里组模型大鼠治疗10次后OT％升高明显（P〈0．05）；与治疗5次后比较，电针百会组大鼠在治疗10次后OE％降低、OT％升高（P〉O．05），电针关元组与电针足三里组大鼠治疗10次后OE％和OT％均明显升高（P〈0．05，P〈0．05；P〈0．01，P〈0．01）。与电针百会组比较，电针关元组与电针足三里组大鼠在治疗10次时OE％均明显升高（P〈0．01，P〈0．01）结论：电针不同穴位具有一定抗抑郁和抗焦虑作用，�流式细胞术BrdU／DNA双染法测定云芝糖肽诱导的Molt-4细胞周期阻滞
摘要：目的：探究云芝糖）Ik（PSP）对人急性淋巴母细胞白血病Molt-4细胞周期的影响。方法：采用流式细胞术BrdU／DNA双染法获得各时相细胞分布状况和细胞周期的动力学参数。结果：0．1mg／mlPSP处理12h后，G2／M期细胞百分比由对照组的11．09％减少至3．69％。DNA合成时间由12．10h延长至108．40h。24h处理组中，S期细胞百分比由对照组的43.29％增加至67．26％，而G0／G1期和G2／M期细胞百分比均减少，G0／G1期细胞百分比由对照组的37．47％减少至27．43％，G2／M期细胞百分比由对照组的19．24％降低至5.31％。DNA合成时间更是由11．95h延长至114．52h。结论：PSP对人急性淋巴母细胞白血病Molt-4细胞周期的阻滞作用在于S期．该作用与DNA合成抑制有关。RNA干涉介导的Plk1沉默对乳腺癌细胞恶性生物表型的影响
摘要：目的：研究乳腺癌细胞中丝／苏氨酸蛋白激酶Plk1基因表达下调后对其恶性生物表型的影响。方法：利用pSitencer4．1-CMVneo质粒，分别构建针对Plk1基因的RNA干涉载体（pSilencer4．1-shPlk1），利用脂质体Lipofectamine2000转染MCF-7细胞，G418筛选稳定的转染细胞系。半定量RT—PCR和Western blot分别检测Plk1基因mRNA和蛋白表达，MTT和克隆形成试验检测细胞增殖活性的变化，流式细胞仪分析细胞周期和凋亡的变化，最后分析MCF-7细胞对紫杉类药物（紫杉醇和多西他赛）化疗敏感性的变化。结果：成功筛选了稳定转染细胞系（MCF-7／shPlk1和MCF-7／shcontro1）。同MCF-7／shPlk1细胞相比，MCF-7／shPtkl细胞中Plk1基因mRNA和蛋白表达水平分别下调65．8％和74．4％（P〈0．05）。同MCF-7／shcontrol，MCF-7tshPlk1细胞增殖速度显著抑制，到第5天时抑制率达到44．9±3．2％（P〈0．05）。同时，MCF-7／shPlk1细胞的克隆形成能力显著降低（P〈0．01）流式细胞仪技术分析细胞周期结果表明：MCF-7／shPlk1细胞的G2／M期细胞比例显著增加了21．1±4．1％，而S期细胞比例则显著降低了（18．5±3．1％；P〈0．05）。流式细胞仪技术分析细胞凋亡结果表明：MCF-7／shPlk1细胞的凋亡率约显著增加了13．1±213％（P〈0．05），同时还发现：MCF-7／shPlk1细胞中激活的caspase-3蛋白显著增加，Bcl-2蛋白显著降低，而Bax蛋白则显著增加。结论：RNA干涉载体能特异性下调乳腺癌细胞中Plk1基因的表达，从而抑制乳腺癌细胞的增殖和体外克隆形成能力，同时诱导乳腺癌细胞的G2／M期阻滞和细胞凋亡率显著增加。因此，靶向Plk1基因的生物治疗有望成为未来临床乳腺癌的一个重要的辅助治疗策略.细胞周期蛋白依赖激酶Roscovitine诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡及其机制的研究
摘要：目的：探讨细胞周期蛋白依赖激酶（CDK）抑制剂Roseovitine（Ros）诱导非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞凋亡及其作用机制。方法：以不同浓度Ros（101．1M、20yM、40μM）处理细胞24h，采用AnnexinV-PI染色以流式细胞仪检测细胞凋亡，Westernblot法检测胞浆中和线粒体促凋亡蛋白Bax和Bad的表达，流式细胞仪检测线粒体膜电位（脚）变化。结果：Ros以剂量依赖的方式诱导A549细胞凋亡，同时Bad和Bax在胞浆的含量随着Ros剂量的增加而减少，而在线粒体中却出现相反的结果，线粒体膜电位随Ros剂量的增大而降低。结论：Ros可通过促进Bax和Bad由胞浆向线粒体易位，诱导NSCLCA549细胞由线粒体途径发生凋亡。乳腺癌细胞株中MKK4的表达及其对细胞转移的影响和机理研究
摘要：目的：观察乳腺癌细胞株中MKK4蛋白的表达水平，研究MKK4蛋白表达对乳腺癌细胞运动能力及EMT标志物的影响，确定MKK4在肿瘤细胞EMT转化及肿瘤转移中的作用，为肿瘤转移机制研究提供一定的基础资料，为肿瘤防治奠定一定的理论基础。方法：通过体外细胞培养技术收集系列乳腺癌细胞株的培养裂解液，利用Westernblot技术检测细胞培养裂解液中MKK4及EMT标志物的表达水平，构建M鼬（4表达水平与细胞转移能力的对应图；采用siRNA技术，干扰MKK4高表达乳腺癌细胞株MKK4的表达，Westernblot技术观察MKK4低表达后，EMT标志物的变化，同时，构建MKK4质粒，转染MKK4低表达乳腺癌细胞株，Westernblot技术观察MKK4高表达后，EMT标志物的变化。并采用MTT法、Transwell、划痕法观察MKK4高表达后细胞增殖、运动、迁移等能力的变化。结果：乳腺癌细胞株中MKK4蛋白的表达水平与乳腺癌细胞运动能力有一定的相关性，并与EMT标志物的表达具有相关性，MKK4蛋白表达越高，细胞运动能力越差。干扰或转染技术影响乳腺癌细胞株中MKK4的表达后，细胞EMT标志物的表达也相应变化，乳腺癌细胞株中MKK4高表达后，其细胞增殖明显抑制，运动迁移能力也相应下降。结论：乳腺癌细胞中MKK4蛋白的表达水平与乳腺癌细胞EMT转化及运动能力有一定的相关性，MKK4蛋白表达越高，细胞运动能力越差。不同气候条件下慢性阻塞性肺疾病的病原学和免疫学研究
摘要：目的：探讨COPD患者不同气候条件下（雷暴、阴雨、台风）的病原学和免疫功能。方法：细菌鉴定采用VITEK全自动微生物鉴定系统。K．B纸片扩散法测定药敏。T淋巴细胞亚群测定采用单克隆抗体免疫组化荧光染色法。血清免疫球蛋白（IgG，IgA，IgM）用琼脂单向扩散法。结果：台风、雷暴、阴雨、天气气候条件60例患者痰培养阳性率分别为45％、40％、30％，占革兰阴性菌前2位分别为肺炎克雷伯杆菌、流感嗜血杆菌和肺炎克雷伯杆菌、大肠埃希杆菌及流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌。革兰阳性菌中分别以肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌为主及肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌为主和金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌为主。铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯杆菌、流感嗜血杆菌对常用抗生素具有较高的耐药性。台风、雷暴、阴雨气候条件下3组AECOPD患者CD3＋ CD4＋、CD4＋／CD8＋、IgG、IgA、IgM均明显低于健康对照组（P〈0．05），CD8＋高于健康对照组（P〈0．05），而发作期和缓解期无显著差异（P〉0．05）。三种气候条件下相互之间比较的细胞和体液免疫指标比较无显著差剐（P〉0．05）。结论：雷暴、阴雨、台风条件下AECOPD的患者存在病原学分布差异，对常用抗生素具有较高的耐药性，细胞和体液免疫功能进一步下降。但三者相互之间的免疫功能比较无明显差异。重组人类生长激素对胃癌细胞的体外增殖研究
摘要：目的：通过体外实验，研究重组人类生长激素对胃癌细胞的增殖的影响。方法：实验分为空白组，重组人类生长激素组，奥沙利铂组和重组人类生长激素＋奥沙利铂组。用不同浓度的重组人类生长激素处理SGC．7901细胞，采用MTT法和流式细胞仪检测人胃癌细胞株的细胞抑制率，细胞周期和DNA抑制率。结果：体外实验结果表明，重组人类生长激素对SGC．7901细胞株增殖没有明显的促进作用，重组人类生长激素组和空白组以及重组人类生长激素＋奥沙利铂组和奥沙利铂组之间没有统计显著性（P〉0．05），细胞抑制率和停止生长的细胞在G0-G1期明显增加（P〈0．01），同时重组人类生长激素＋奥沙利铂组和空白组以及奥沙利铂组在S期，细胞数依次下降，DNA抑制率依次增加。重组人类生长激素＋奥沙利铂组与奥沙利铂组相比，细胞抑制率有明显上升趋势。结论：体外实验表明，重组人类生长激素并不加快人类胃癌细胞的增殖，与抗癌药物一同使用时，有增加治疗功效的作用。β-萘黄酮能抑制荧光素酶活性
摘要：目的：研究β-萘黄酮对荧光索酶活性的影响。方法：利用人GCLC基因调控序列驱动的GCLC．PGL3．enhancer-Luciferase报道载体（PL45）转染人肺腺癌细胞A549，人肝癌细胞HepG2，人子宫颈癌细胞HeLa，人乳腺癌细胞MCF-7，人肝癌细胞Bel-7402，人支气管上皮细胞16HBE，β-萘黄酮刺激后，双荧光素酶报告基因检测系统分析其对GCLC基因表达的影响。westerblot检测β-NF刺激16HBE细胞后GCLC蛋白水平的变化。β-萘黄酮刺激转染了表达Luciferase的真核表达载体pRC／CMV2．1uc＋的A549和HepG2细胞后，双荧光素酶报告基因检测系统分析其对Luciferase基因表达的影响。PIA5转染A549和HepG2细胞，裂解细胞后用p-NF刺激，双荧光素酶报告基因检测系统分析其对Luciferase基因的影响。结果：在各种细胞中，转染PL45报道载体后，β-NF处理组荧光素酶相对活性值与DMSO对照组相比均明显下降（p〈0．01）。westerblot结果显示β-NF处理组GCLC蛋白的表达较DMsO对照蛆明显升高。在A549和HepG2细胞中，转染pRC／CMV2．1uc＋载体后，β-NF处理组荧光素酶相对活性值与DMSO对照组相比均明显下降（P〈0．01）。PIA5转染A549和HepG2细胞，裂解细胞后用β-NF刺激，β-NF处理组荧光素酶相对活性值与DMSO对照组相比均明显下降（P〈0．01）。结论：β-萘黄酮直接抑制了荧光素酶的活性模拟微重力促进骨髓间充质干细胞神经营养因子的表达
摘要：目的：探究微重力对干细胞向神经元分化的影响，为临床治疗神经退行性疾病提供新的思维和方法。方法：运用流式细胞术鉴定骨髓间充质干细胞及其微重力对凋亡的影响。运用反转录PCR检测微重力干预干细胞48h及72h后神经营养因子BDNF，CNTF，NGF的表达。运用ELISA检测其分泌营养因子的浓度。结果：流式细胞仪检测细胞凋亡，两组之间并无差异。CNTF分泌在微重力干预后有明显增加（p〈O．05）。BDNF浓度有轻度增加。结论：模拟微重力可以促进骨髓间充质干细胞神经营养因子的表达。家兔自发性蛛网膜下腔出血早期脑损伤模型的初步研究
摘要：目的：建立一种可重复的、有典型神经损伤症状的自发性蛛网膜下腔出血（sAH）动物模型，为研究蛛网膜下腔出血后早期脑损伤（EBI）的机制提供可靠的动物模型。方法：选用新西兰大耳白兔60只，随机分为实验组、对照组、空白组。采用枕大池穿刺一次注入自体动脉血法建立SAH模型。在4h、8h、12h、24h、48h、72h时间点，观察比较行为学与脑组织形态学的变化。结果：（1）实验组枕大池和蛛网膜下腔内发现大量的血凝块和血液。（2）实验组光镜下可观察到蛛网膜下腔大量红细胞，神经元细胞水肿，电镜下可见胶质细胞空泡样改变，神经元细胞线粒体肿胀，髓鞘内存在空泡和板层分离现象。（3）实验组造模后均出现明显的神经系统损伤，对照组4h出现典型神经系统损伤表现，12h后恢复正常，空白组未见神经系统损伤表现。结论：枕大池一次注血法是一种简便、可重复的症状性自发性蛛网膜下腔出血早期脑损伤模型，适宜于研究早期脑损伤的致病机制。脱臭工艺对玉米油中反式脂肪酸含量的影响
摘要：目的：研究脱臭工艺对玉米油中反式脂肪酸含量的影响。方法：在实验室内对玉米油进行不同温度和时间的脱臭处理，利用气相色谱法分析处理后玉米油中的反式脂肪酸含量。结果：脱臭温度和脱臭时间均对玉米油中反式油酸的产生影响不显著。脱臭温度对玉米油中反式亚油酸含量影响显著，脱臭时间对玉米油中反式亚油酸含量影响不显著。在一定的脱臭时间，不同脱臭温度下，玉米油中总反式脂肪酸最多含量为最少含量的80倍以上；在一定的脱臭温度，而不同脱臭时间下，玉米油中总反式脂肪酸最多含量约为最少含量的1．5倍，且在255℃以下时，随脱臭时间延长，玉米油中总反式脂肪酸的形成速度缓慢、相对含量低。结论：玉米油精炼脱臭时，对脱臭工艺装备和工艺条件中的脱臭温度进行优化选择可有效减少玉米油反式脂肪酸的产生。肺淋巴管平滑肌瘤病临床病理分析及文献复习
摘要：目的：探讨肺淋巴管平滑肌瘤病（PLAM）的临床和病理特征，提高对该病的认识。方法：对1例PLAM患者的临床特点、HE及免疫组化染色结果进行分析，并结合文献进行复习。结果：PLAM是一种持续发展的弥漫性肺疾病，几乎发生于育龄期妇女，主要临床症状为进行性呼吸困难、反复气胸及乳糜胸。病理特征显示未成熟平滑肌样细胞在细支气管壁、肺泡壁、淋巴管壁和血管壁周围增生。免疫组化染色显示增生PLAM细胞Desmin、SMA、Vimentin、HMB45均呈阳性表达，部分细胞ER及PR阳性。结论：PLAM在影像学与病理组织学上有特征性表现，免疫组化HMB-45阳性具特异性。由于肺部广泛病变，预后较差．对PLAM的发病机制和治疗的研究已有了一定的进展，但今后尚需更深入地研究。胃癌组织中EN01、M2-PK蛋白表达及其临床意义
摘要：目的：探讨胃癌组织中烯醇化酶-α（enolase-α，ENOD、肿瘤型丙酮酸激酶（tumor M2pyruvatekinase，M2-PK）的表达、相互关系及临床病理学意义。方法：应用免疫组织化学SP染色方法分别对55例胃癌组织和23例胃良性病变组织切片染色，观察胃癌组织和良性病变组织EN01、M2．PK的表达情况及分析两者临床病理关系。结果：胃癌组织中EN01阳性表达率为67．3％（37／55），明显高于胃良性病变组30．4％（7／23）（P〈0．01），其表达与胃癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期均显著相关（均P〈0．05）。M2-PK在胃癌组织中的阳性表达率为78．2％（43／55），明显高于胃良性病变组织39．1％（9／23）（P〈0．01），其表达与胃癌分化程度、浸润深度均显著相关（均P〈0．05）。胃癌组织中EN01与M2-PK的表达呈正相关（r：=0．5729，P〈0．05）。结论：EN01和M2-PK的表达上调与胃癌的发生、发展可能有关，联合检测两种蛋白在肿瘤组织中的表达，对临床判断胃癌的预后有一定的指导意义。覆膜支架封堵治疗食管胃吻合口-胸腔瘘的临床疗效
摘要：目的：探讨采用自膨式覆膜支架封堵治疗食管胃吻合口-胸腔瘘的，临床价值及其安全性。方法：6例经碘水造影检查证实的食管胃吻合口-胸腔瘘患者，植入覆膜支架后，持续性胸腔引流，抗感染治疗。结果：6例患者共植入7枚支架，支架展开良好，1枚移位。有效率6／7（86％）。置入覆膜支架后，既封堵了瘘口又解决了进食问题，控制了感染。结论：采用自膨式覆膜支架封堵治疗食管胃吻合口-胸腔瘘具有较高的临床价值及安全性。ProExC在宫颈癌及其癌前病变中的表达及意义
摘要：目的：探讨ProExC在宫颈癌及其癌前病变中的表达及意义。方法：应用免疫组织化学SP法检测ProExC在不同宫颈病变组织芯片中的表达。结果：ProExC在宫颈炎、C1NⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌中的阳性表达率分别是25％，51．7％，77．9％，90％，93．8％，且其表达在宫颈癌及CINⅡI级病变与宫颈炎及CINI级病变相比较差异具有统计学意义（P〈0．05），ProExC在CINⅠ级组织中表达低于CINⅡ级，差异具有统计学意义（P〈0．05），ProExC在浸润性宫颈癌中的表达与临床病理因素无关（P〉0．05）。结论：ProExC反映了细胞的增殖活性，促进宫颈癌的发生发展，可作为诊断及监测预后的指标。
