过表达ER恢复雌激素对子宫内膜癌KLE细胞中Notch信号通路的调控
摘要：目的：通过观察雌激素对子宫内膜癌KLE细胞中Notch信号通路的影响，探讨过表达雌激素核受体（estrogenreceptor，ER）是否可以恢复雌激素对Notch信号通路的调控作用，继而调节细胞增殖活性。方法：MTT检测雌激素及Notch信号通路对细胞增殖活性的影响；RT．PCR及Westem．blotting检测雌激素及Notch通路抑制剂DAPT对Notch表达的影响；质粒的抽提及转染使KLE细胞中的雌激素核受体ER过表达。结果：雌激素呈剂量依赖效应促进KLE细胞的增殖活性，其中以雌激素浓度为1．0×10-9M时最明显（相对于对照组为1．25±0．026，P〈0．05）；抑制Notch信号通路的表达可以明显下调KLE细胞的增殖活性（0．76±0．02，P〈0．05）；在KLE细胞中，雌激素对Notch的表达没有明显的调控作用，但是将其雌激素核受体过表达后，雌激素可明显上调Notch的表达，并显著促进细胞的增殖活性（1．24±0．02，P〈0．05）。结论：在ER阴性的子宫内膜癌细胞中过表达ER，可以恢复雌激素对Notch信号通路的调控，从而进一步的调控细胞增殖活性。热CO2气腹处理后结肠癌细胞株COLO 205的蛋白组学变化
摘要：目的：研究热CO2气腹处理后结肠癌细胞株COLO205的蛋白组学变化，为阐明热CO2气腹对结肠癌细胞的杀伤作用机制提供依据。方法：用热CO2气腹处理结肠癌细胞株COL0205，按有无处理分为处理组与对照组。分别抽提两组细胞的总蛋白质，采用同位素标记的相对和绝对定量（isobaric tags for relative absolute quantitation, iTRAQ）技术标记，液相色谱（LC）分离蛋白质，质谱仪（MS）进行蛋白质鉴定及Western blot检测。结果：共筛选得到18个差异表达的蛋白，其中8个蛋白表达上调，10个蛋白表达下调。Western blot显示热休克蛋白HSP70在细胞表达明显高于对照组（P〈0．01）；蛋白Myosin-9的表达量在处理后显著下降。结论：热CO2气腹处理后结肠癌细胞株COL0205的蛋白组学发生差异性变化。三江源地区高寒草甸土壤氨氧化细菌多样性研究
摘要：目的：利用16SrDNA-PCR—DGGE方法首次对青藏高原核心区三江源自然保护区的高寒草甸样地的土壤氨氧化细菌进行了多样性研究。方法：从土壤中抽提微生物总DNA，运用巢式PCR扩增氨氧化细菌16SrRNA基因的V3可变区，结合DGGE（denaturing gradient gel electrophoresis）技术分析样品氨氧化细菌群落组成，并利用相关性分析探讨了群落结构多样性与环境因子的联系。结果：4个样地（玉树S1；囊谦S2；治多S3和S4）共检测到14个多态性条带，多样性指数为1．69～2．00。相关性分析显示多样性指数与海拔、C／N呈负相关，与NO3-呈显著正相关。结论：海拔、C／N及NO3-可能是影响土壤氨氧化细菌多样性的重要因子。CD59、CD55在T细胞活化信号转导中的协同作用
摘要：目的：研究糖基磷脂酰肌醇（GeD）锚固蛋白CD59、CD55在脂筏介导T细胞信号转导通路中的协同效应。方法：应用siRNA技术，构建特异性针对CD55与CD59基因的重组载体pSUPER—siCD55，pSUPER—siCD59。实验分为未转染的Jurkat细胞组（I组）、转染pSUPER空质粒的Jurkat细胞组（Ⅱ组）、转染pSUPER—siCD59重组质粒的Jurkat细胞组（Ⅲ组）及转染pSUPER—siCD55重组质粒的Jurkat细胞组（Ⅳ组）。RT—PCR检测转染细胞中CD55和CD59基因的表达。噻唑蓝（MTT）比色法和激光共聚焦扫描显微镜分别检测CD55与CD59联合作用对4组Jurkat细胞的增殖效应以及细胞内钙离子的变化。结果：稳定转染后，Ⅲ组细胞CD59分子的表达和Ⅳ组细胞CD55分子的表达被成功抑制。Ⅰ组和Ⅱ组细胞CD55与CD59联合作用后增殖能力和钙离子浓度均明显高于Ⅲ组、Ⅳ组（P〈0．05），Ⅰ组和Ⅱ组之间无差异。结论：CD59和CD55在T细胞活化信号转导通路中存在协同效应。iCare眼压计测量小鼠眼压值与真实眼压的相关性研究
摘要：目的：通过前房插管技术调节小鼠眼压，研究iCare眼压计测量小鼠眼压值与小鼠真实眼压之间的相关性。方法：取20只12周龄的C57BL／6J小鼠，麻醉后行前房穿刺置管，通过改变BSS液瓶高度调节其眼压。使用iCare眼压计测量其眼压值。采用SPSS软件分析iCare眼压计测量值和小鼠真实眼压之间的相关性。结果：iCare眼压计测量值与真实眼压之间相差较大，较真实眼压低约54％-71％，然而两者之间遵循如下线性回归方程：真实眼压（mmHg）=3．3988x（iCare眼压计测量值）-5．6292．r2=0．9506．P〈0．05。结论：iCare眼压计测量值较小鼠真实眼压低，然而在应用线性回归公式的情况下，iCare眼压计的测量修正值可以反映小鼠实际眼压值．骨髓间充质干细胞对大鼠急性肾损伤的修复作用
摘要：目的：观察外源性骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）对庆大霉素（Gentamycin，GM）诱导的大鼠急性肾损伤是否具有治疗作用，并初探其机制。方法：建立腹腔注射庆大霉素致大鼠急性肾损伤模型。实验分为舡常对照组、模型组、MSCs治疗组（模型＋MSCs）、生理盐水组（模型＋生理盐水）。于不同处理后4d分别检测血尿素氮（BUN）和肌酐（Scr）水平，观察肾组织病理改变，免疫印迹及RT-PCR法检测肾组织肝细胞生长因子（Hepatocyte growth factor，HGF）水平。结果：模型组大鼠的BUN及Scr较正常对照组显著升高，且肾小管组织病理损伤严重；而MSCs治疗组大鼠的BUN及Scr水平较生理盐水组显著降低，肾小管组织病理损伤明显减轻。此外。促肾小管损伤修复的肝细胞生长因子（HGF）表达在MSCs治疗组显著高于生理盐水组。结论：MSCs输注可促进庆大霉素所致急性肾小管损伤的修复，改善肾功能，其作用机制可能是与上调肾组织中肝细胞细胞生长因子的表达有关。促卵泡激素结合片段通过P13K／Akt—cyclinD1通路抑制卵巢癌细胞增殖活性
摘要：目的：研究促卵泡激素（FSH）结合片段对卵巢上皮性细胞癌细胞株hey增殖活性的影响。方法：应用卵巢上皮性细胞癌细胞株hey作为实验对象，分别加入FSH、FSH结合片段、FSH＋FSH结合片段。用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测卵巢癌hey细胞的生长状况，Westernblot检测cyclinD1、Akt、pAkt分子的表达。结果：FSH对卵巢癌hey细胞的生长有明显的促进作用，细胞生长活性提高21％。FSH结合片段对卵巢癌细胞的生长有明显抑制作用，对细胞平均抑制率为22％，且能下调cyclinD1的表达，在2．5×10^-9Mol／L达70％。FSH结合片段对FSH有竞争抑制作用，细胞抑制率为18％，能抑制FSH上调cyclinD1的作用，抑制率为61％。FSH能上调pAkt的表达，对Akt的袁达没有明显影响，在40mlU／ml的浓度时pAkt／Akt上调率达224％。FSH结合片段对Akt的表达没有明显影响，但能明显下调pAkt的表达，且呈时间依赖性（在15分钟时达66％）和剂量依赖性（在2．5×10^-9Mol／L达31％）。FSH结合片段能抑制FSH上调pAkt的作用，抑制率为80％。结论：FSH结合片段可通过抑制FSH诱导的P13FdAkt-cycl—inD1信号通路进而抑制上皮性卵巢癌hey细胞的增殖活性，转化生长因子β1质粒对新鲜同种异体骨移植的免疫影响
摘要：目的：研究局部含注射转化生长因子β1（TGF-β1）基因的质粒时大鼠同种异体骨移植的免疫排斥反应的影响。方法：将64只Wister大鼠完全随机分成4组，每组16只，切取SD大鼠的胫骨移植到Wister大鼠人工建模后形成的胫骨缺损区。TGF-β1组于移植骨局部一次性注射含有TGF-β1基因的质粒（40μg／只）；空质粒组于移植局部注射空质粒；免疫抑制剂组术前3天开始腹腔内注射环孢素A（10mg／kg）直至处死；异体移植组仅行异体骨移植，不予特殊处理。术后3、6、12周行光镜和电镜检查。结果：异体移植组和空质粒组骨基质排列紊乱，骨细胞消失，基质区内见块状低电子密度区。TGF-β1组和免疫抑制剂组可见骨细胞和完整的成骨细胞，骨小管状态良好。混合淋巴细胞培养（MLC）结果显示TGF-β1组（0-331±0．017）与免疫抑制剂组（0．501±0．004）差异无统计学意义（P〉0．05），TGF-β1组与空质粒组（1．104±0．023）和异体移植组（1．206±0．019）差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：新鲜骨移植过程中局部注射TGF-β1质粒可发挥免疫抑制作用，降低宿主的免疫排斥反应：Fra-1对大鼠C6胶质瘤细胞侵袭转移能力的影响
摘要：目的：观察Fra-1对C6胶质瘤侵袭转移能力的影响。方法：以大鼠C6胶质瘤细胞为研究对象，Fra-1siRNA通过脂质体转染C6，realtimeRT-PCR和westernblot法检测C6细胞中Fra-1的表达、Elisa法检测细胞培养上清中MMP一9的含量，Transwell小室观察C6细胞的转移侵袭能力。结果：干扰Fra-1后能降低C6细胞中Fra-1的表达，显著降低C6细胞中MMP-9的含量，降低C6细胞的转移侵袭能力。结论：干扰Fra-1能抑制C6细胞的转移侵袭。IL-10基因启动子-627位点多态性与过敏性哮喘
摘要：目的：探讨白细胞介素-10（IL-10）启动子-627C／A基因多态性和等位基因频率与过敏性哮喘血清IgE、IL-10浓度以及病情严重程度的相互关系。方法：从哮喘病人DNA文库中选择青岛地区过敏性哮喘病人518例和健康志愿者501例，采用PCR—RFLP方法对IL．10基因启动子．627位点多态性进行观察，比较两组基因型和等位基因的分布频率，同时测定血清中总IgE、IL-10浓度和肺功能检查（FEV1、FVC、FEV1／FVC）。结果：轻度和中一重度哮喘组AA、CA和CC基因型所占比例分别为38．1％、46．0％、15．9％和45．6％、46．2％和8．2％（P=0．0168，X2=8．232，df=2）。A等位基因与哮喘病轻的严重程度有明显相关性（P〈0．05）。AA基因型哮喘病人血清的IgE浓度显著升高（P〈0．01），但其血清IL-10浓度比CC基因型携带者明显降低（P〈0．01）。结论：IL-10基因启动子-627位点多态性与过敏性哮喘的发生有一定的相关性，等位基因A是哮喘患病的风险基因，而等位基因C则是哮喘病的保护基因。曲古霉素A增强肺癌细胞对放射线敏感性及机制
摘要：目的：探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A（trichostatin A，TSA）增强人非小细胞肺癌（NscLc）A549对γ-射线敏感性作用及机制。方法：以TSA（0．51zM）预处理细胞18h，再以5Gyγ-射线照射细胞，24h后采用MTT法检测细胞存活率，AnnexinV—PI染色检测细胞凋亡，Westernblot法检测胞浆中和线粒体促凋亡蛋白Bax的表达，流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位变化。结果-5Gyγ-射线照射可轻度降低细胞存活率，仅有少量细胞发生凋亡，以TSA预处理再以γ-射线处理细胞，细胞存活率显著下降，凋亡细胞明显增多，伴有线粒体膜电位下降，以及Bax蛋白的激活，表现在线粒体Bax表达较单纯照射组显著增高。结论：TSA通过促进Bax蛋白的活化激活线粒体凋亡途径，增强增强A549细胞对γ-射线的敏感性。重组人小分子抗体ScFv-Fc发酵条件的优化及纯化
摘要：目的：研究重组人小分子抗体ScFv—Fc在毕赤酵母中分泌表达的最佳条件，以及ScFv—Fc的纯化方法。方法：分别从甲醇浓度、pH、诱导时间等方面对毕赤酵母重组菌株产生ScFv-Fc的发酵过程进行了优化；通过硫酸铵沉淀结合proteinA亲和层析柱，对ScFv—Fc的纯化方法进行了研究。结果：确定ScFv—Fc在毕赤酵母中分泌表达的最佳条件为：在pH5．2的条件下，以0．5％甲醇诱导72h。经过proteinA亲和层析柱纯化后，ScFv—Fc纯度可达94％以上。结论：确定了ScFv-Fe在毕赤酵母中分泌表达的最佳条件以及纯化方法，为重组抗体分子诊断、治疗试剂的开发以及抗体的人源化奠定了物质基础。矩形车轮虫的再描述
摘要：目的：我们对泸州市鲇类寄生车轮虫进行调查，对于已经发现，但由于原来的技术水限制需要重新描述的，或缺少资料的车轮虫，给予重新描述或补充新的资料。方法：用国际间统一的千银法染色以显示车轮虫的附着盘结构和口围绕度，用Lom（1958）倡导的”统一的特定方法”（Uniform specific characteristic system）进行测量，用Van＆Bassion（1989）提供的方法描述车轮虫的齿体。结果：对寄生在泸州地区养殖鱼类斑点叉尾鲴（Ietalums punetaus）的鳃上的车轮虫进行了描述，该车轮虫是矩形车轮虫（ Trichodina rectangli）。结论：矩形车轮虫是陈启鎏和谢杏人1964年在青鱼、草鱼等鱼身体上发现的，但是没有显微照片。国际上有许多它的同种异名的车轮虫的描述，这些文献也只有附着盘的显微照片。斑点叉尾鲡是矩形车轮虫的新寄主记录。本研究用国际统一的方法对矩形车轮虫进行描述，并绘出了矩形车轮虫的齿体定位图，提供了完整的统计数据，以及完整的显微照片，即附着盘、口围绕度和细胞核显微照片。不同剂量甲泼尼龙对大鼠急性百草枯中毒肾脏的影响
摘要：目的：观察不同剂量甲泼尼龙治疗大鼠百草枯中毒肾脏损伤的疗效。方法：将120只Wistar大鼠随机分为五组，空白组，染毒组和干预组（根据甲泼尼龙剂量不同分为三组），除空白组外，均予百草枯（22mg／kg）稀释后腹腔注射，2h后依照组别、体重注射甲泼尼龙，在第1、3、7天共3个时间点，按抽签法处死实验对象6只获取标本，观察肾功能和病理变化。结果：各组血尿素氮（P=0．001〈0．05）和肌酐（P=0．01〈0．05）差异有统计学意义，干预组中5mg／kg甲泼尼龙组同染毒组比较差异有统计学意义。不同时间点血尿素氮（P=0．007〈0．05）和肌酐（P=0．016〈0．05）差异有统计学意义，其中第七天明显低于第一、三天。病理评分各组（P=O．21〉0．05）差异无统计学意义。讨论：早期应用糖皮质激素治疗PQ中毒大鼠，可以显著减轻PQ中毒所致的肾损伤程度，改善肾功能，尤其小剂量改善显著，传统的大剂量糖皮质激素冲击治疗不值的推崇。《分子影像学》第二版已正式出版发行
摘要：由哈尔滨医科大学附属第四医院中宝忠教授主编的《分子影像学》第二版（ISBN：978—7—117-13344—9／R·13345）一书已于2010年9月14日中国新疆维吾尔族DXS101遗传多态性研究
摘要：目的：研究DXS101位点在中国新疆维吾尔族群体中的遗传结构分布特征。方法：采用PCR扩增，变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结合银染显带技术，检测100名（女42，男58）维吾尔族无关个体DXS101位点等位基因及基因型频率分布。结果：在女性样本中，DXS101位点检出9种等位基因和17种基因型；在男性样本中，DXS101位点检出7种等位基因：该位点在女性中的个体识别率为0．8937，多态信息量为0．8072，杂合度为0．8156，在男性中的个体识别率为0．6674。结论：群体遗传多态性指标显示DXS101位点在新疆维吾尔族群体中具有较高多态性，在维吾尔族群体法医学个体识别、亲权鉴定及群体遗传学研究中有重要应用价值。羟基喜树碱抑制人眼Tenon囊成纤维细胞增殖的实验研究
摘要：目的：研究羟基喜树碱（HCPT）对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞（Human Tenon＇s capsule fibroblasts，HTFs）增殖、移行的影响。方法：取正常供体新鲜的Tenon囊组织，采用组织块培养法，进行成纤维细胞的体外培养，并用光镜、免疫荧光法观察鉴定；MTT法、划痕法检测不同浓度的HCPT（0、0．031、0．062、0．125、0．25、0．5、1、2、4mg／1）对HTFs增殖、移行的影响，并与MMC对比。结果：HTFs体外生长良好，经光镜和免疫荧光法观察鉴定为成纤维细胞；与空白对照组比较，HCPT（0．031-4mg／1）、MMC（0．0031-0．4mg／1）均能有效抑制HTFs的增殖，且呈一定的剂量、时间依赖性，HCPT作用24h、48h、72h的IC50分别为2．24mg／1、O．76mg／1、0．39mg／1，MMC作用24h、48h、72h的IC50分别为0．34mg／1、0．24mg／1、0．07mg／1；与空白对照组比较，HCPT（0．031-4mg／1）、MMC（O．0031-0．4mg／1）均能抑制HTFs迁移，呈剂量依赖性，而与时间无显著相关。结论：HCPT、MMC均能有效抑制HTFs的增殖和移行,其效应MMC约为HCPT的10倍。TGF-β3在动物面神经损伤后修复中的应用研究
摘要：目的：探讨外源性转化生长因子β3（Transforming growth factorβ3，TGF—β3）对动物面神经愈合的作用。方法：采用新西兰大白兔面神经损伤模型，将50ng/μgTGF—β3注射到神经切断嵌入的硅胶管明胶海绵内，16只成年兔随机分为1周组及3月组。两组内右侧面神经上颊支为实验组，左侧为对照组；通过GFAP（胶原纤维酸性蛋白）及Nestin（巢蛋白）等免疫组织化学染色方法进行愈合评估。结果：给予TGF—β3的1周组Nestin及GFAP，3月组Nestin及GFAP及1周组与3月组Nestin及GFAP与对照组之间都统计学有差异。结论：在外源性TGF—β3作用可促进内源性TGF—β3产生或共同通过Smad通路引起神经损伤后修复标志物Nestin及GFAP的表达增加，这表明TGF-β3在面神经的损伤后修复起促进愈合作用。
