EB病毒膜抗原与系统性红斑狼疮相关性的实验研究
摘要：目的：探讨EB病毒膜抗原（MA）的表达与系统性红斑狼疮的关系。方法：用直接免疫荧光抗体法（DFA）检测MA在转基因小鼠体内的表达，用间接免疫荧光法（IFA）和免疫印迹法（IBT）分别检测血清中的抗核抗体（ANA）和抗ENA抗体，用Bradford法检测小鼠24h尿蛋白浓度。常规病理HE染色观察小鼠的肾脏病理改变，冰冻切片免疫荧光检测肾脏是否有免疫复合物沉积。结果：表达MA的转基因小鼠组，有8只小鼠ANA阳性，5只小鼠抗ENA抗体阳性，24h尿蛋白浓度平均值为4153．8g／ml，小鼠肾脏存在多种病理改变及大量免疫复合物在肾小球沉积。对照组小鼠ANA、抗ENA抗体均为阴性，24h尿蛋白浓度平均值为382．7g/ml，肾脏未见病理改变。结论：EB病毒MA的表达可能引发SLE。Netrin-1诱导促性腺素释放激素神经元迁移的研究
摘要：目的：建立神经导向研究的模型，并鉴定netrin-l的神经导向功能。方法：用促性腺素释放激素（Gonadotropin-releasing hormone，GnRH）神经细胞为研究模型，建立双细胞团培养方法，用netrin-1诱导GnRH神经元亚克隆系NLT，观察细胞生长的诱导情况。结果：NLT细胞团在体外培养条件下，具有自发放射状迁移能力。在netrin-1诱导作用下，NLT细胞朝向netrin-1浓度梯度的方向生长，在靠近netrin-1细胞团的部位，netrin-1浓度梯度高，迁移出的细胞数目较多，约占总数目的68％，并且细胞迁移的平均距离较长为107-31μm；而在远离netrin-1细胞团部位，其netrin-1浓度梯度较低，迁移出的细胞数目相对较少约占32％，细胞迁移的平均距离较短为56．52μm。结论：netrin-1能诱导培养的NLT细胞发生明显的定向迁移，这为进一步深入研究netrin-1在神经系统中的功能和分子机制奠定了基础。ω-3多不饱和脂肪酸和三羟异黄酮孕期营养干预对子代大鼠乳腺癌PCNA、ER、BRCA1表达的影响
摘要：目的：探讨ω-3多不饱和脂肪酸和三羟异黄酮孕期营养干预对子代大鼠乳腺癌增殖细胞核抗原（PCNA）、雌激素受体（ER）、乳腺癌易感基因1（BRCA1）表达的影响。方法：怀孕大鼠随机分为正常对照组、ω-3多不饱和脂肪酸组、三羟异黄酮低剂量组、三羟异黄酮高剂量组、ω-3多不饱和脂肪酸和三羟异黄酮混合组。选用其雌性子代进行甲基亚硝基脲（MNU）诱导乳腺癌。其中母体为正常对照的分别为子代的正常对照纽（Con）和模型组（Mod），其余分组按照母体暴露情况进行划分，分别为ω-3多不饱和脂肪酸组（ω-3PUFA）、三羟异黄酮低剂量组（LGEN）、三羟异黄酮高剂量组（HGEN）、ω-3多不饱和脂肪酸和三羟异黄酮混合组（ω-3PUFA＋GEN）。观察其乳腺癌发生情况，同时采用RT-PCR和免疫组化检测正常乳腺组织和乳腺癌组织中PCNA、ER和BR-CA1的mRNA或蛋白表达水平。结果：ω-3多不饱和脂肪酸和三羟异黄酮孕期营养干预后可以减少雌性子代MNU诱导乳腺癌的发生，与Con组比较，Mod组乳腺癌组织中BRCA1和ERmRNA表达水平上调，PCNA、ER表达量增加。与Mod组比较，ω-3PUFA组、GEN组乳腺癌组织中BRCA1、ERmRNA及PCNA、ER表达量明显降低。结论：孕期暴露于ω-3PUFA和GEN可降低雌性子代MNU诱导乳腺癌的发生，并下调PCNA、ER和BRCA1的表达量。焦山楂醇提物对大鼠离体胃、肠平滑肌条收缩性的影响
摘要：目的：观察焦山楂醇提取液对大鼠离体胃、肠平滑肌的影响。方法：本研究以大鼠的离体胃、肠平滑肌条为模型，观察在正常克氏液条件下加入焦山楂醇提取液后大鼠胃、肠平滑肌条收缩状况。同时观察乙酰胆碱、阿托品作用下加入焦山楂提取液对大鼠胃、肠平滑肌运动的影响。结果：焦山楂醇提取液在4-8mg生药／ml浓度范围内可显著抑制大鼠胃、肠平滑肌条的运动，且具有明显剂量依赖性。焦山楂醇提取液（8mg生药／ml）拮抗乙酰胆碱引起的胃肠平滑肌的强烈收缩和阿托品引起的肠平滑肌的舒张作用。结论：焦山楂醇提取液对大鼠胃、肠平滑肌条的收缩具有明显的抑制作用。HDL能抵抗内毒素引起得小鼠损伤
摘要：目的：观察HDL、LPS和（HDL＋LPS）对小鼠血液SOD及MDA的影响，研究HDL抗LPS的作用。方法：（1）用不同浓度的PEG-6000离心人血浆脂蛋白，提取HDL并脱脂；（2）给小鼠注射HDL，LPS或HDL＋LPS，对照组小鼠注射生理盐水；观察小鼠存活时间，测定其血液中SOD活性及MDA含量。结果：（1）相比对照组及HDL组，LPS组和HDL＋LPS组小鼠的存活时间明显缩短，且后两者之间存在显著性差异；（2）LPS组小鼠血浆中SOD活性降低，MDA含量升高，均和其他三组有显著性差异。结论：LPS能使内毒素损伤小鼠血浆中SOD活性降低，MDA含量升高，HDL有抗内毒素损伤的作用。应用Ad Easy载体系统构建人β2-AR基因重组腺病毒
摘要：目的：利用Adeasy腺病毒表达系统构建含人β2-肾上腺素能受体（β2-AR）基因重组腺病毒，并在HEK293细胞中扩增制备重组腺病毒。方法：将β2-AR全长cDNA插入到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV，构建pAdTrackCMV-β2AR重组质粒，经PmeⅠ酶切线性化后经电击法转入含Adeasy质粒的电感受态茵BJ5183进行重组。挑选同源重组质粒，PacI酶切线性化转染HEK293细胞包装成重组腺病毒颗粒。将重组病毒和sD大鼠心肌细胞共培养，western-blot检测BrAR的表达。结果：琼脂糖凝胶电泳显示在1242bp处有特异性条带后被克隆至腺病毒穿梭质粒。重组穿梭载体经HindⅢ和XbaⅠ限制性酶切可以得到目的条带并经测序证实。电击法转化BJ5183所得候选重组予经PacⅠ酶切后得到30Kb腺病毒基因组片段和4．5Kb氨苄抗性片段，证实获得同源重组质粒。转染293细胞可以看到绿色荧光蛋白，以MOI100转染SD大鼠心肌细胞发现携带β2-AR的腺病毒可以在心肌细胞中过表达。结论：利用新型腺病毒载体在短时间内成功构建了携带有人β2-AR基因的腺病毒，为进一步研究人B2-AR基因治疗奠定了基础。胚胎干细胞在体外模拟心肌生长环境中向心肌分化
摘要：目的：探讨获得大量成熟同质有功能的心肌细胞（cardiomyocytes，CMs）的方法。方法：胚胎干细胞（embryonic stem cells，ESCs）经悬滴培养法形成拟胚体（embryoid bodies，EBs），将EBs用抗坏血酸处理后与天然心肌细胞共培养诱导ESCs的分化，采用免疫组化、流式细胞技术、RT-PCR、超微分析等方法分析分化细胞（ESC-derived CMs，ESCMs）的结构和功能。结果：共培养组，常规组和对照组中有（90．143．40）％，（29．6±6．03）％和（20．1±3．82）％的EBs表现节律性收缩，差异有统计学意义（P〈0．05）。在体外模拟的心脏微环境中，不但跳动EBs的数目明显增加，且单个跳动EBs中含有功能CMs的百分比也明显增加。兴奋收缩的自律性能维持更长时间，在后期分化得到的有功能ESCMs在细胞形态上接近于天然的心肌细胞。结论：心脏微环境是促使ESCs特定地分化为CMs的关键因素，抗坏血酸处理和共培养诱导策略可使ESCs定向分化为CMs。缬沙坦对气道平滑肌增殖的影响及机制探讨
摘要：目的：观察血管紧张素Ⅲ型受体拮抗剂对气道平滑肌细胞增殖的影响。方法：体外培养人体气道平滑肌细胞（HASMCs），用血管紧张素ⅡAngⅡ）和AngⅡ的Ⅰ型受体桔抗剂缬沙坦予以干预，四甲基偶氮唑蓝（MTT）微量比色法测定HASMCs生长率，流式细胞术检测HASMCs细胞周期，实时荧光定量PCR（Real time PCR）检测HASMCs转化生长因子β1（TGF-β1）mRNA的变化。结果：（1）AngⅡ刺激HASMCs后细胞生长率明显高于对照组（P〈0．05），AngⅡ＋缬沙坦组细胞生长率明显低于AngⅡ组（P〈0．05）；（2）AngⅡ刺激HASMCs后细胞周期S期比例显著高于对照组（P〈0．05），AngⅡ＋缬沙坦组细胞周期S期比例低于AngⅡ组（P〈0．05）；（3）AngⅡ刺激HASMCs后TGF-β1mRNA表达量明显高于对照组（P〈0．05），AngⅡ＋缬沙坦组TGF-β1mRNA表达量低于AngⅡ组（P〈0．05）。结论：血管紧张素Ⅲ型受体拮抗剂能抑制气道平滑肌的增殖，可能通过下调TGF-β1起作用。人NDRG2基因截短体在pEGFP-C2真核表达载体中的表达和鉴定
摘要：目的：在pEGFP-C2真核表达载体中表达人NDRG2基因的截短部分并进行鉴定。方法：以含有人NDRG2基因的pGKBT7质粒为模板，通过PCR的方法扩增获得截短的人NDRG2基因，然后克隆入表达载体pEGFP-C2；以荧光显微镜观察和Western Blotting方法对表达产物进行鉴定。结果：表达产物中在分子量67kD左右可见与目的蛋白分子量相符的条带，该条带可被Ndrg2单克隆抗体特异性识别。结论：构建了截短的人NDRG2基因真核表达载体，并在真核细胞中（HEK-293）获得成功表达。软骨多糖对MCF-7乳腺癌细胞VEGF和bFGF的表达影响
摘要：目的：研究软骨多糖对乳腺癌血管生成抑制作用的机制。方法：选用MCF-7人乳腺癌细胞系体外培养，应用MTT法检测细胞生长抑制率；HE染色法观察细胞形态学变化；免疫荧光检测VEGF、bFGF蛋白表达。软骨多糖浓度为200μg．ml^-1。结果：MTT实验结果表明软骨多糖能够显著抑制人乳腺癌细胞MCF-7的生长，且呈现一定的浓度依赖性和时间依赖性。HE染色观察结果表明乳腺癌细胞MCF-7经软骨多糖作用后，细胞开始出现凋亡现象，如产生空泡、胞膜扩散、胞质外溢、形态变圆、胞核皱缩等，最终导致大量细胞破碎死亡。免疫荧光实验结果表明软骨多糖对乳腺癌细胞MCF-7的VEGF和bFGF两种血管生长因子的合成与分泌有显著的抑制作用，且抑制呈浓度与时间依赖性。结论：软骨多糖对乳腺癌细胞MCF-7有直接杀伤作用，并可能通过抑制乳腺癌细胞VEGF和bFGF的合成分泌而抑制乳腺癌的血管生成。AMPK在姜黄素诱导CaOV3人卵巢癌细胞凋亡中的作用
摘要：目的：探讨AMPK（腺苷酸活化蛋白激酶）系统在姜黄素诱导CaOV3人卵巢癌细胞凋亡中的作用及姜黄素对AMPK磷酸化水平及其信号通路的影响。方法：实验分为对照组、姜黄素单独作用组、compoundC（AMPK抑制剂）预给药组，SB203580（p38抑制剂）预给药组，AMPK抑制剂单独作用组以及p38抑制荆单独作用组。Western blotting法检测AMPK、p38和p53的磷酸化水平，MTT法检测细胞活力。结果：与对照组相比，姜黄素作用组的AMPK和p38磷酸化水平增加（P〈0．05），与姜黄素单独作用组相比，SB203580预处理组的AMPK磷酸化水平下降（P〈0．05）。姜黄素作用组的细胞活力低于对照组（P〈0．05），compoundC和SB203580预处理组的细胞活力高于姜黄素单独作用组（P〈0．05）。与对照组相比，姜黄素作用组的p53磷酸化水平（Ser15）增加（P〈0．05），与姜黄素单独作用组相比，compoundC（AMPK抑制剂）和SB203580预处理组的p53磷酸化水平（Ser15）下降（P〈0．05）。结论：姜黄素能激活CaOV3细胞的AMPK，而AMPK的激活依赖于p38。AMPK和p38调节p53的磷酸化，并介导姜黄素诱导的细胞凋亡。Sunitinib对哮喘气道重塑小鼠PDGFR-β磷酸化和MMP-9表达的影响
摘要：目的：探讨sunitinib对支气管哮喘气道重塑的干预作用及可能的作用机制。方法：BALB／c小鼠随机分为正常对照组、哮喘气道重塑组、sunitinib干预组。鸡卵清蛋白致敏和激发建立哮喘小鼠气道重塑模型；收集支气管肺泡灌洗液（BALF）做细胞计数；取右肺组织行苏木精．伊红（HE）染色和Masson三色染色；免疫沉淀（IP法）测定小鼠肺组织PDGFR-β受体磷酸化及western blot（WB）法检测MMP-9蛋白质的表达。结果：HE和Masson三色染色提示哮喘组黏膜下层和平滑肌增厚、气道管腔狭窄、胶原纤维增生、大量炎症细胞浸润，sunitinib干预组上述改变较哮喘组为轻；哮喘组BALF中炎症细胞总数和嗜酸性粒细胞（EOS）计数在哮喘组表达较对照组为高（P〈0．05），而sunitinib组低于哮喘组（P〈0．05）；PDGFR-β受体的磷酸化和MMP-9的表达在哮喘组表达较对照组为高（P〈0．01），而sunitinib干预组表达量低于哮喘组（P〈0．01）。结论：sunitinib能够抑制哮喘小鼠PDGFR-β的磷酸化和MMP-9表达，减轻气道炎症反应、延缓气道重塑进程。氧化苦参碱对K562肿瘤细胞增殖的影响
摘要：目的：研究氧化苦参碱（0M）对人白血病细胞系K562生长增殖的影响。方法：运用MTT比色法、活细胞计数法、集落形成法以及透射电镜观察检测OM对人白血病细胞系K562增殖抑制作用。结果：MTT实验、生长曲线及集落形成实验显示OM能明显抑制K562细胞的增殖。随着OM浓度的增加，K562细胞存活细胞显著降低，呈现明显的剂量依赖性，经相关分析，细胞抑制率与OM浓度呈正相关（r=0．9010），其半数抑制浓度（ICS0）为0．33mg／ml。透射电镜下显示在低浓度即有明显的诱导细胞凋亡的作用，出现核固缩、核碎裂、凋亡小体等典型的凋亡形态。结论：OM具有抑制K562白血病细胞增殖诱导肿瘤细胞凋亡的作用。参芎注射液对脑缺血再灌注大鼠的神经元保护作用
摘要：目的：观察参芎注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白／免疫球蛋白结合蛋白（GRP78／Bip）表达的影响。方法：100只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、脑缺血再灌注组、参芎治疗组；后两组根据再灌注时间不同各分为6、12、24、72h四个亚组；采用大鼠大脑中动脉线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型。TUNEL法观察细胞凋亡情况；免疫组化和RT-PCR法检测各实验组中缺血周围区GRP78／Bip的表达。结果：TUNEL法表明参芎治疗组大鼠大脑神经细胞凋亡程度较缺血再灌注组明显减轻。免疫纽化和RT-PCR检测均发现各时间点缺血再灌注组大鼠GRP78／Bip表达高于假手术组及正常组；脑缺血再灌注组及参芎治疗组GRP78／Bip的表达于缺血后12h最高，72h恢复至正常水平，且均呈现先升高后降低的趋势；各时间点缺血再灌注组GRP78／Bip表达均高于参芎治疗组。结论：再灌注损伤后12h内出现GRP78／Bip表达升高，参芎注射液可以下调其表达，从而可能通过减轻内质网应激而减轻缺血再灌注损伤起到神经元保护的作用。关于2009年继续开展“生物医学”优秀论文评选活动的通知
木犀草素对哮喘小鼠转录因子GATA-3表达的影响
摘要：目的：观察木犀草素对哮喘小鼠转录因子GATA-3表达的影响。方法：将30只BALB／c小鼠随机分为正常对照组、哮喘气道重塑组、木犀草素干预组，每组10只；鸡卵清蛋白致敏和激发建立哮喘小鼠气道重塑模型；HE染色观察各组气道炎症发生及气道结构改变；采用Western blot及Realtime PCR技术检测治疗前后哮喘小鼠肺组织中GATA-3蛋白和GATA-3mRNA的表达。结果：HE染色提示哮喘组出现黏膜下层和平滑肌增厚，气道管腔狭窄，大量炎细胞浸润的表现，木犀草素纽上述改变较哮喘组为轻；Western blot结果显示哮喘组小鼠肺组织GATA-3蛋白表达较对照组为高（P〈0．01），木犀草素治疗组表达量低于哮喘组（P〈0．01）。Real time PCR结果与Western blot结果一致。结论：木犀草素干预可下调哮喘引起的GATA-3的表达；木犀草素抑制GATA-3表达可能是其缓解气道炎症的机制之一。猪腹部火器伤肠管穿透后心肌损伤的变化
摘要：目的：观察腹部火器伤肠管穿透后心肌损伤的变化。方法：健康长白仔猪42头随机分为对照组以及伤后1h、2h、4h、8h、12h和24h组。实验组建立腹部火器伤肠管穿透模型后，分别测定伤后1h、2h、4h、8h、12h和24h组各组动物血清中LDH、CK、CK-MB水平，并与对照组比较，观察实验组各时间点心脏组织学变化？结果：伤后各组血清LDH、CK、CK．MB水平均高于对照组。伤后8h、12h、24h组光镜下出现逐渐加重的心肌细胞水肿、变性；电镜下4h、8h、12h、24h组出现逐渐的线粒体肿胀、溶解；对照组光、电镜下未见明显的损伤性变化。结论：腹部火器伤肠管穿透导致心肌形态和酶的损伤性变化，随着伤后时间的延长而加重。锌协同三羟异黄酮对成骨细胞MC3T3-E1的影响
摘要：目的：观察锌协同三羟异黄酮对成骨细胞MC3T3-E1增殖、细胞中碱性磷酸酶（ALP）含量、骨形成蛋白-2（BMP-2）表达的影响，探讨锌协同三羟异黄酮对骨质疏松的防治作用。方法：采用四甲基偶氮噻唑蓝比色法检测（1×10^-7）mol／L、（1×10^-6）mol／L、（1×10^-5）mol／L、（1×10^-4）mol／L的三羟异黄酮以及与（1×10^-5）mol／L锌联合作用时对MC3T3-E1增殖的作用；应用Western blot法检测三羟异黄酮与锌联合作用前后，成骨细胞中BMP-2蛋白的表达水平，用比色法检测MC3T3-E1中ALP的含量。结果：锌与三羟异黄酮单独作用或协同作用于MC3T3-E1细胞，其增殖率随着三羟异黄酮浓度的增加和作用时间的延长而升高，（1×10^-5）mol／L的三羟异黄酮协同（1×10^-5）mol／L的锌作用72h，其细胞增殖率为（160．1±14．3）％。细胞中的ALP含量及BMP-2的表达也随着三羟异黄酮浓度的增加及作用时间的延长而增加。三羟异黄酮和锌联合作用后，对ALP活性的增强、BMP-2表达的增加作用均较各自单独作用时更为明显（P〈0．05）。结论：三羟异黄酮与锌协同作用表现出雌激素效应，可通过促进骨形成蛋白的合成从而促进成骨细胞的增殖、增加骨量。
