维甲酸对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖和相关基因表达的影响
摘要：目的：研究维甲酸对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖和相关基因表达的影响，以探索其对成骨肉瘤细胞的生物学效应。方法：以1μmol／L维甲酸处理人成骨肉瘤MG-63、细胞，生长曲线测定，流式细胞仪分析、光镜观察和免疫细胞化学检测等研究维甲酸对MG-63细胞的生长曲线、细胞周期和相关癌基因、抑癌基因表达的影响，并对其作用机理进行初步分析。结果：维甲酸处理7天后，MG-63细胞生长抑制率达到42．2％，G0／G1期比例达到61．8％，细胞形态铺展，排列趋于规则，癌基因c-myc、c—fos的表达降低，而抑癌基因Rb、p27表达上调。结论：1μmol／L维甲酸可以有效抑制细胞的增殖活动，改变细胞恶性形态特征，下调癌基因c-myc、c-fos和上调抑癌基因Rb、p27的表达，从而对人成骨肉瘤细胞分化具有诱导作用。转基因小鼠模型的载体构建和在人肝癌HepG2细胞中的表达
摘要：目的：构建转基因小鼠模型的载体并检测在人肝癌HepG2中的表达效果。方法：将n-3多不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat-1插入到真核表达载体（pcDNA3．1（＋）myc—HisA）中，构建重组表达载体pcDNA3．1（＋）myc—HisA-fat-1，用脂质体介导的方法转染到人肝癌HepG2细胞中，RT-PCR检测fat-1基因的表达，MTT法分析fat-1基因对HepG2细胞增殖的影响，气相色谱分析检测fat—1基因对HepG2细胞n-6／n-3多聚不饱和脂肪酸（PUFAs）比例的影响。结果：成功地构建了真核表达载体pcDNA3．1（＋）myc-HisA—fat-1，并能在HepG2细胞内有效异源表达，48h后可检测到fat-1 mRMA的条带。与对照细胞相比，fat-1基因有效地抑制了人肝癌细胞HepG2细胞的增殖（70％，p〈0．01），降低了n-6／n-3PUFAs比例。结论：pcDNA3.1（＋）myc—HisA—fat-1重组载体构建成功并能在肝癌细胞中有效的表达，可以作为下一步转基因小鼠的合适载体。HCV核心蛋白、p53、Mdm2及Bcl-2在HCC中的表达意义
摘要：目的：探讨HCC组织中的核心蛋白、突变p53、Mdm2、Bcl-2的表达以及其相关性，探讨HCV核心蛋白是否有可能促进p53突变、Mdm2和Bcl-2的表达。方法：收集手术切除HCC组织42例，采用免疫组织化学EnVision法检测HCC组织核心蛋白、突变p53、Mdm2、Bcl-2的表达，用统计学方法及临床联系分析它们之间的关系。结果：C蛋白、p53、Mdm2和Bcl-2在HCC癌组织中的表达率分别为40．5％、47．6％、75．6％、83．3％；4组强度等级资料Kruskal-Wallis秩和检验H=19．01，差异性显著（p-0．000），Mann—WhitneyUtest：C蛋白和p53、Mdm2、Bcl-2蛋白间的P值分别0．43、0．009、0．00；C蛋白与突变p53、Bcl-2阳性强度两者间相关性检验P值分别为0．000、0．914，相关系数rs分别为0．67、0．08；突变p53与Mdm2、Bcl-2两者相关性检验P值为0．000、0．27，相关系数rp为0．72、0．32。结论：在HCV核心蛋白表达的HCC中核心蛋白可能促进野生型p53突变和表达；突变p53很可能促进Mdm2的表达；核心蛋白和突变p53都有可能促进Bcl-2蛋白的表达；HCV相关的HCC中这些蛋白的变化很可能促进肝细胞增殖或恶性生长。C-MET在大鼠胰腺发育过程中的表达
摘要：目的：研究C-MET在大鼠胰腺发育阶段的表达和细胞定位。方法：运用RT—PCR和WesternBlot技术分别检测C—MET在大鼠胰腺发育阶段的mRNA和蛋白表达水平；运用免疫组化和免疫荧光技术检测不同时期C-MET在胰腺的组织细胞学定位。结果：RT—PCR结果显示E18．5 C—METmRNA高表达。WestemBlot结果显示其蛋白在P14，P21高表达，并存在两种亚型，分子量分别为190KD和170KD。免疫组化和免疫荧光结果显示在不同发育时期C-MET在胰岛B细胞和间充质细胞都有表达。结论：C—MET在大鼠胚胎发育后期及生后出现高表达，并表达于胰岛B细胞和间充质细胞，可能参与了胰岛形成、结构重塑和功能维持。关于2009年继续开展“生物医学”优秀论文评选活动的通知
人CCL20基因打靶载体的构建与鉴定
摘要：目的：构建针对人CC亚族趋化因子配体20（CC chemokine ligand 20，CCL20）基因外显子2的置换型打靶载体。方法：设计和合成引物，利用长距离聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）从永生化人角质形成细胞系（HaCaT）基因组DNA中克隆出CCL20基因组DN段，再以CCL20基因为模板扩增出长度为1969bp的同源短臂和2356bp的同源长臂，分别插入ploxP载体的Neo基因上游和下游，构建针对人CCL20基因外显子2的置换型打靶载体（ploxP-hCCL20）。将打靶载体线性化并以电穿孔方法转移入HaCaT，观察克隆的形成。结果：经过PCR、限制性内切酶鉴定及DNA序列测定，证实该载体的两条同源臂包含人CCL20基因的外显子1、3、4及其邻近的部分内含子。结论：ploxP—hCCL20载体构建成功，增加Neo基因下游同源臂长度的策略有可能提高细胞基因敲除的同源重组率。青蒿素诱导人白血病细胞K562凋亡的线粒体机制
摘要：目的：探讨青蒿素诱导人白血病细胞K562凋亡的线粒体机制。方法：用青蒿素处理K562细胞，通过MTT比色法检测细胞增殖抑制的效果；荧光显微镜观察细胞的凋亡；流式细胞术（flow cytometry，FCM）进行细胞周期分析；Westem-blotting测定药物作用前后线粒体、细胞浆细胞色素C的表达。结果：青蒿素抑制K562细胞的增殖，IC50为1．5×10^-5mol·L^-1；Hoechst33342／PI双荧光染色可观察到明显的核浓缩、凝集等细胞凋亡表现；流式细胞仪检测G2期细胞比例增高，S期减少；Western-blotting检测药物处理细胞后线粒体细胞色素C表达水平下调，细胞浆出现明显细胞色素C蛋白条带。结论：青蒿素可能通过线粒体细胞色素C途径诱导K562细胞凋亡。更正声明
丹参酮ⅡA对人乳腺癌细胞株恶性表型逆转的研究
摘要：目的：研究丹参酮ⅡA体外诱导人乳腺癌细胞分化，逆转其恶性表型作用。方法：在体外培养的基础上，观察细胞形态学、细胞增殖动力学的变化。采用流式细胞仪的方法，定量检测了ER、nm23-1蛋白、抑癌基因c—fos、癌基因c—myc。结果：经无毒剂量的丹参酮ⅡA处理后，人乳腺癌细胞株MDA—MB-231形态趋向良性分化，细胞增殖指数明显降低，ER、nm23-1蛋白、抑癌基因c-fos明显升高，癌基因c-myc明显降低。结论：丹参酮ⅡA对人乳腺癌细胞株恶性表型有逆转作用，可能是通过抑制癌基因的表达，增加抑癌基因的表达，改变细胞形态结构和生物学特性。壳聚糖纳米基因载体介导IL-10和HGF基因重组体在大鼠活体肝移植中的研究
摘要：目的：研究hIL-10和HGF重组体对大鼠活体肝移植术后急性排斥反应的抑制作用。方法：以DA大鼠（RT1a）为供体．Lewis大鼠（RT11）为受体建立异种肝移植鼠模型，实验组于移植后1天及7天，腹腔内注射T—HGF和T-hIL-10重组体（100μg／ml）100μl，对照组注射等量生理盐水。移植后1，7，10，20天取大鼠尾静脉血，ELISA法测定血清HGF、IL-10水平，RT-PCR测定肝细胞HGF、IL-10m RNA的表达水平，常规肝功能测定，活体肝移植动物生存期观测。结果：实验组鼠肝细胞有HGF和IL-10 mRNA表达，对照组肝细胞未见表达。对照组大鼠HGF和IL-10水平一直维持在较低水平，实验组大鼠HGF和IL-10水平明显高于对照组（P〈0．05）。注射重组体的实验组平均生存时间为（19±0．9）天，20天时存活只数为6只，存活率75％；对照组平均生存时间为（8．6±0．5）天，20天时存活只数为2只，存活率75％（P〈0．05）。对照组未注射重组体，ALT和AST值持续升高，注射重组体后ALT和AST值亦有升高，但明显低于对照组（p〈0．05）。结论：活体肝移植大鼠导入IL—10和HGF基因重组体后可抑制移植术后急性排斥反应．西妥昔单抗联合低温热疗诱导CNE细胞凋亡的研究
摘要：目的：观察西妥昔单抗联合低温热疗诱导人鼻咽癌细胞株CNE凋亡的效果，并初步探讨其可能的机制。方法：试验分对照组、单靶组、单热组及热靶组，MTT法测定西妥昔单抗对CNE细胞株48h20-30％抑制的药物浓度；以该浓度药物与低温热疗（43℃，30分钟）联合，Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化；流式细胞术检测24h、48h凋亡率；westernblot检测Bax、Bcl-2、EGFR蛋白的表达。结果：以48h 20-30％抑制率的药物浓度（IC20-30）为试验的工作浓度，确定西妥昔单抗对CNE细胞株的工作浓度为10ug/ml；荧光染色法观察到热靶组CNE细胞发生典型的凋亡形态学改变；流式凋亡检测显示24、48h热靶组凋亡率显著高于相应单靶组、单热组及对照组（P〈0．05）。westernblot检测显示各处理组较之对照组都有上调Bax、下调Bcl-2、EGFR蛋白表达的作用，以热靶组最为显著（P〈0．05）；热疗后EGFR蛋白表达逐渐下调。结论：西妥昔单抗联合低温热疗能显著增加CNE细胞的凋亡率，这可能与EGFR的下调与受抑，进而上调Bax、下调Bcl-2蛋白的表达促进凋亡有关。RNA干扰抑制TGF-βⅡ型受体的表达
摘要：目的：观察针对TGF-βRⅡ的干扰RNA对TGF-βRⅡ表达的抑制作用，探讨RNA干扰TGF-βRⅡ的方法对肾间质纤维化的抑制作用。方法：PCR方法扩增TGF-βRⅡ的cDNA序列，将全长的TGF-βRⅡ cDNA插入pcDNA3中，构建TGF-βRⅡ的真核表达载体，酶切、测序及间接免疫荧光鉴定；根据TGF-βRⅡ的设计针对TGF-βRⅡ的干扰RNA，构建针对TGF-βRⅡ的RNA干扰质粒pSUPER-TGF-βRⅡ并进行酶切及测序鉴定；脂质体介导针对TGF-βRⅡ的RNA干扰质粒和TGF-βRⅡ的真核表达载体共转染293T细胞，western-blot检测293细胞内TGF-βRⅡ的表达。结果：pcDNA3-TGF-βRⅡ测序结果显示TGF-βRⅡ基因未发生突变。间接免疫荧光检测TGF-βRⅡ在293T细胞内的表达；测序显示RNA干扰质粒pSUPER—TGF-βRⅡ序列正确，RNA干扰质粒明显抑制293T细胞内TGF-βRⅡ的表达。结论：成功构建了TGF-βRⅡ的真核表达载体及针对TGF-βRⅡ的RNA干扰质粒，RNA干扰质粒能够抑制TGF-βRⅡ的表达，为进一步研究针对TGF-βRⅡ的RNA干扰对肾纤维化的预防及治疗作用提供有用工具。不同甘蓝型油菜高含油量种质资源的脂肪酸成分分析
摘要：甘蓝型油菜是我国最为重要的油料作物之一，目前我国面临着植物油严重不足的局面。提高含油量是目前甘蓝型油菜育种的主要方向之一。目前，我国育种工作者已经筛选出了大量含油量超过50％的甘蓝型油菜种质。本文对两种类型的高含油量甘蓝型油菜种质进行了脂肪酸组分分析，结果显示芥酸含量高的种质和芥酸含量低的种质的脂肪酸在菜籽油中变化范围和平均值明显不同。油酸和亚油酸在低芥酸高含油量甘蓝型油菜种质中的含量较高，约占整个油分的80％左右，其他脂肪酸组分则在10％以下；而芥酸则是高芥酸高含油量种质的最主要的成分，约占整个油分的44％左右，油酸、亚油酸等的含量则均在10％左右。相关性分析表明：芥酸和其他脂肪酸之间呈现显著负相关，因此，可以通过降低高芥酸油菜种质中的芥酸含量来提高比如油酸和亚油酸的含量，从而使这些种质的油分更适合人类的健康。人β1整合素启动子核心启动序列初步分析
摘要：目的：分析人βl整合素在HaCat细胞中核心启动片段。方法：以本室构建的含整合素β1全长启动子1745by基因序列（-1745bp～＋11bp）的重组载体pGL3—1756为模板，用含有酶切位点的特异性引物扩增出整合素p1启动子-845bp～-304bp间基因序列，克隆至荧光素酶表达载体pGL3basic，构建含正确目的基因重组载体pGL3—542。用pGL3—1756、和pGL3-542质粒转染人表皮细胞株HaCat进行活性分析。结果：酶切及序列测定表明，克隆后插入pGL3basic申的启动子片段与GenBankDNA序列数据库对比分析序列一致，且插入方向正确。在人永生化表皮细胞株（HaCat细胞）中构建的pGL3—542载体具有很强的启动活性。结论：成功构建了整合素β1远端启动子542bp片段载体，在HaCat细胞中具有非常强的启动活性。人整合素β1整合素启动子核心启动序列可能位于-845bp～-304bp，金黄色葡萄球菌特异性卵黄抗体的制备及其影响因素
摘要：目的：考察金黄色葡萄球菌特异性卵黄抗体制备过程中的影响因素。方法：以灭活的金黄色葡萄球菌为抗原，采用不同的浓度（10^8cfu／mL，10^9cfu／mL，10^10cfu／mL）、在不同免疫佐剂（商品弗氏佐剂和自制弗氏佐剂）作用下，对不同日龄（120天和300天）的蛋鸡进行免疫。免疫后收集鸡蛋，蛋黄用6倍体积水稀释，采用ELISA法测定抗体效价。结果：抗原浓度为10^9cfu／mL所得抗体效价最高；免疫120日龄蛋鸡获得抗体效价高于免疫300日龄蛋鸡所得抗体效价；在抗原浓度和蛋鸡日龄相同的情况下，商品弗氏佐剂比自制具有更好的免疫增强作用。结论：特异性卵黄抗体制备受多种因素的影响，抗原浓度、蛋鸡日龄、佐剂质量均对卵黄中特异性抗体水平有影响。人热休克蛋白70和热休克固有蛋白70的基因克隆和表达
摘要：目的：克隆人热休克蛋白70（HSP70）和热休克固有蛋白70（HSC70）基因，并在大肠杆菌中表达，获得重组蛋白。方法：用RT-PCR法从HepG2细胞中扩增HSP70及HSC70cDNA序列。测序后，将相应的cDNA插入pRSET—A表达载体，在大肠杆菌中表达，重组蛋白纯化后用SDS-PAGE及WesternBlotting分析。结果：DNA序列结果显示，本研究所获得的HSP70及HSC70cDNA序列与参考序列一致。将全长cDNA分别插入表达质粒后，转化BL21（DE3）细菌，在IPTG的诱导下，表达产物SDS—PAGE显示相应的分子量（70kDa）位置有明显的蛋白条带。WesternBlotting结果证实了其为目的蛋白，经镍树脂柱纯化，获得了相应的重组多肽。结论：成功构建了原核表达重组质粒HSP70-pRSET—A和HSC70-pRSET-A，并获得了纯化的重组人HSP70和HSC70蛋白，为进一步研究这两种蛋白的结构、功能及临床应用奠定了基础.水分和氯化钙胁迫对麦冬抗逆性生理指标的影响
摘要：为研究麦冬在水分胁迫和盐分胁迫条件下一些抗逆性生理指标的变化，本文以盆栽后以正常浇水处理为对照，设置了不同程度人工水分胁迫和钙离子胁迫处理研究可溶性糖含量、脯氨酸含量及丙二醛含量的变化情况。结果显示，轻度水分胁迫使可溶性总糖和游离脯氨酸含量减低，但随着时间的推移，胁迫程度加剧，可溶性总糖和游离脯氨酸含量开始回升，而MDA含量无显著变化，表明水分胁迫下，麦冬可积累可溶性糖和游离脯氨酸等渗透调节物质，从而改善自身水分状况，保护细胞膜及生理代谢过程，膜脂过氧化程度减轻。钙盐胁迫也可使可溶性总糖和游离脯氨酸含量升高。食管组织和外周血中代谢和DNA修复相关基因的表达谱分析
摘要：目的：研究代谢酶和DNA修复相关基因在食管组织和外周血中的表达谱。方法：收集93例淮安地区食管癌病例的食管癌旁正常组织和外周血，采用实时荧光定量RT-PCR方法定量分析食管正常组织和外周血中的代谢酶和修复酶共计11个基因的mRNA水平。结果：11个代谢酶和修复酶基因在食管组织和外周血的表达水平有明显差异，食管组织中GSTP1〉NQO1、MGMT〉hMLH1、hMSH2、hOGG1、XRCC1、XPD、XPA、CYP2EI〉MTHFR；在外周血中GSTPI〉hMLH1、hMSH2、XPA、MGMT〉hOGG1、NQO1、CYP2E1、XRCC1、XPD〉MTHFR。食管组织基因表达水平与外周血相应基因的表达之间未发现有统计学意义的直线相关关系。结论：代谢酶和修复酶基因在食管组织和外周血的表达谱相似，但基因表达水平有差异，本分析为这些基因的研究提供了基础数据的支持。外周血和食管组织在肿瘤易感性和肿瘤发生相关的生物标志物研究中具有不同的应用价值。
