丙型肝炎病毒感染的检测
摘要：丙型肝炎病毒（HCV）感染的检测包括血清学检测和核酸检测（NAT）,前者包括HCV抗体（抗-HCV）、核心抗原检测,后者包括定性/定量RNA检测和基因型/亚型检测。抗-HCV检测是应用最广的HCV感染筛查试验,操作简便、耗时短、成本低,但其缺点是窗口期较长,不能判别是活动性感染还是病毒已被清除,不适用于免疫缺陷人群。HCV RNA是病毒感染的直接证据,既往定性RNA检测灵敏度较高,但随着实时定量PCR技术的成熟,定量检测灵敏度不断提高,线性范围不断拓宽,适用于临床抗病毒治疗应答的监测,也正逐步取代定性检测用于血液制品的筛查。近年HCV抗原检测和抗原抗体联合检测试剂盒已用于HCV感染的筛查及治疗监测,但其灵敏度尚不及NAT。目前主流的HCV基因分型试剂检测基因型有较高的符合率,而检测亚型的结果存在较大差异,需要方法学上的改进。丙型肝炎疫苗研究的新理念、挑战与策略
摘要：丙型肝炎病毒（HCV）感染是引起慢性肝病的主要原因之一,严重危害人类健康,目前抗病毒治疗的标准方案为聚乙二醇干扰素α（PEG-IFN-α）联合利巴韦林,其有效率仅为50%70%,且疫苗研究进展缓慢,已成为严峻的公共卫生问题。近10多年来,对HCV感染发病机制、保护性免疫应答和病毒持续感染机制的认识取得了很大进展,中和抗体以及CD4＋和CD8＋T细胞在内的强烈的T细胞免疫应答已被证明与HCV的清除相关,这将是研制丙型肝炎疫苗的希望所在。当前HCV疫苗的研究主要集中在多肽疫苗、核酸疫苗、病毒载体疫苗、重组多表位疫苗、以抗原递呈细胞为载体的树突状细胞（DC）疫苗等,已有多种疫苗正在研制并进行进入临床试验前的测试。我们结合多年来对HCV的研究基础,通过与国内外同行交流,提出变＂单纯预防＂为＂防治结合,以诱导持续免疫应答和维持病毒抑制状态为基本目标＂的HCV疫苗研究新理念,发展以诱导细胞免疫为主的预防和治疗性疫苗,尤其是既能在体内有效激发HCV特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应,又能维持CD4＋记忆T细胞功能的治疗性细胞疫苗。本文综述关于HCV保护性免疫应答及持续感染的机制,HCV疫苗研究新理念,目前面临的挑战以及研究策略。丙型肝炎病毒感染与治疗药物
摘要：丙型肝炎病毒（HCV）通过在宿主细胞内持续复制,导致慢性感染。目前用于治疗慢性丙型肝炎（CHC）的药物主要是聚乙二醇干扰素（PEG-IFN）和利巴韦林的联合用药。本文将就HCV的细胞入侵、复制、逃避宿主的固有和获得性免疫,以及抗HCV临床试验药物的最新进展做一综述。抗丙型肝炎病毒小分子化合物的研究进展
摘要：目前慢性丙型肝炎（CHC）的标准疗法为聚乙二醇干扰素-α（PEG-IFN-α）联合利巴韦林,但该疗法存在一定的局限性。近年来针对HCV生活周期的小分子抗病毒药物迅速发展,给将来的治疗带来了新的希望。丙型肝炎病毒实验性疫苗免疫学评价
摘要：丙型肝炎病毒（HCV）属于黄病毒科,其基因组为单股正链RNA,易变异,慢性感染可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化,部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌,对患者的健康和生命危害极大,已成为严重的社会和公共卫生问题,目前尚无有效的疫苗。本文综述了HCV实验性疫苗的免疫学评价方法,为疫苗的研制及应用提供参考。白细胞介素28B的基因多态性与丙型肝炎病毒感染转归的关系
摘要：丙型肝炎病毒（HCV）急性感染的患者,大约30%发生自发清除,已经进展为慢性丙型肝炎（CHC）的患者,经过抗病毒治疗,大约40%得到持久的HCV清除。近年来宿主基因变异在HCV感染治疗中的关键作用备受瞩目。今就近期的国内外报道,对白细胞介素（IL）28B的基因变异与HCV感染转归的关系进行综述。增强丙型肝炎病毒DNA疫苗免疫原性的策略
摘要：当前全世界有超过1.7亿慢性丙型肝炎（CHC）感染者,目前尚无有效的疫苗。最近丙型肝炎病毒（HCV）实验性疫苗的研制有不少进展。本文综述了增强HCV DNA疫苗免疫原性的策略及相关进展。《临床肝胆病杂志》关于基金论文优先录用及标注的说明
摘要：为了进一步提升《临床肝胆病杂志》的学术水平，提高优秀论文刊发的时效性，特向各医学院校、医院、医学科研机构广泛征集国家、省部级自然科学基金资助项目或重点攻关项目的论文。同时为规范基金论文，特提出如下说明：丙型肝炎病毒小鼠实验模型的研究进展
摘要：丙型肝炎病毒（HCV）感染是导致慢性肝病的主要原因。大部分HCV感染者呈持续性感染，这与肝硬化和肝细胞癌紧密相关。近十年来，许多学者通过不懈的努力建立了各种行之有效的小鼠实验模型，基于这些模型的研究极大地丰富和加深了对HCV感染、致病、免疫等方面分子机理的认识，同时也极大地促进了新的抗病毒策略和特异药物筛选的发展。本文就目前最常见和未来有应用前景的两类小鼠实验模型作一综述。丙型肝炎病毒多CTL表位树突状细胞疫苗的构建及体外刺激T细胞应答
摘要：目的构建丙型肝炎病毒（HCV）多细胞毒性T淋巴细胞（CTL）表位树突状细胞（DC）疫苗,观察其体外刺激的T细胞反应,为下一步做体内免疫实验提供一定的资料。方法构建和制备出含绿色荧光蛋白（GFP）标签的HCV两个CTL表位的重组腺病毒,感染DC,直接在荧光显微镜下或用流式细胞仪检测其感染率;RT-PCR和Western Blot方法检测HCV多CTL表位的表达。流式细胞术分析感染前后DC的CD80、CD83、CD86和人类白细胞抗原（HLA）-DR的表达,CCK-8法观察感染重组腺病毒的DC促进T细胞的增殖效应。ELISA检测重组腺病毒刺激后的DC培养上清液内白细胞介素（IL）-12及DC和T细胞混合培养上清液内干扰素（IFN）-γ的含量。用乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测特异性CTL的杀伤活性。结果成功构建含GFP标签的HCV多CTL表位的重组腺病毒,并在DC中表达。重组腺病毒能促进DC成熟,DC的CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达分别为（71.19±3.29）%、（81.21±5.07）%、（91.23±4.24）%、（97.95±5.31）%。感染DC后促进同源T细胞增殖,DC：T为1：10时增殖指数为6.806±0.247。分泌的IL-12和IFN-γ也明显增多,分别达到（193.83±6.25）pg/ml和（111.14±2.09）pg/ml。感染DC刺激的CTL能特异性杀伤转染FL-J6/JFH的Huh-7.5细胞,当效靶比为100：1时,AD1-DC-L的杀伤率为35.99%。结论重组多CTL表位腺病毒在体外能有效感染DC,促进了T细胞反应,为下一步抗HCV的DC疫苗研制打下基础。丙型肝炎病毒CTL表位基因真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立
摘要：目的构建含丙型肝炎病毒（HCV）复合多表位基因的真核表达载体,转染CHO细胞,建立稳定转染细胞系。方法通过生物信息学预测分析的方法得到涵盖HCV不同基因型与小鼠H2复合体的多个细胞毒性T淋巴细胞（CTL）表位,串联后人工合成基因序列,将其克隆入真核表达载体pEGFP-N3中,然后利用脂质体法转染CHO细胞,通过持续G418筛选建立稳定转染细胞株。最后通过荧光显微镜观察、RT-PCR和Western Blot等方法证实多表位基因的表达。结果所构建的含有HCV复合多表位基因的真核表达载体pEGFP-mEpi在CHO细胞中能稳定表达。结论真核表达载体的成功构建和稳定转染CHO细胞系的建立为进一步研究复合多表位疫苗的基因免疫奠定了基础。丙型肝炎病毒NS5A在肝癌细胞对TLR4表达的影响
摘要：目的探讨丙型肝炎病毒非结构蛋白质5A（HCV NS5A）对Toll样受体4（TLR4）表达的影响。方法用含HCV NS5A基因的表达质粒pcNS5A瞬时转染QSG7701细胞,采用免疫细胞化学技术检测HCV NS5A及TLR4蛋白质的表达;采用逆转录聚合酶链反应观察HCV NS5A和TLR4的mRNA表达。结果转染pcNS5A质粒细胞内有HCV NS5A蛋白的表达。转染pcNS5A组TLR4 mRNA及蛋白质表达均较转染pRc/CMV和未转染质粒组明显增强,而后两组细胞TLR4 mRNA和蛋白质表达相似。结论 HCV NS5A可上调TLR4 mRNA和蛋白的表达。《临床肝胆病杂志》关于2011年重点号的启事
摘要：为便于集中组稿，《临床肝胆病杂志》编委会研究确定了本刊2011年各期重点号的选题，欢迎广大作者不拘内容与题材，踊跃投稿。对于围绕中心选题的文章，本刊将择优优先发表。本刊2011年各期选题：第1期丙型肝炎；第2期布加综合征及门脉高压症；第3期肝胆胰外科及肝纤维化、肝硬化;第4期肝胆胰肿瘤；第5期中西医结合肝病；丙型肝炎病毒HLA-A2限制性复合多表位基因重组腺病毒的包装、筛选及鉴定
摘要：目的构建丙型肝炎病毒（HCV）HLA-A2限制性复合多表位基因的重组转移质粒pAdtrack-CMV-Ub-Mep,转染HEK293细胞,包装重组腺病毒rAd-Ub-Mep。方法复合表位Ub-Mep基因克隆到pAdTrack-CMV穿梭质粒,得到重组的穿梭质粒pAdtrack-CMV-Ub-Mep,将穿梭质粒pAdtrack-CMV-Ub-Mep和腺病毒骨架质粒pAdEasy1共转染HEK293细胞,产生重组腺病毒rAd-Ub-Mep,通过检测绿色荧光蛋白（GFP）的表达和PCR扩增目的基因的方法鉴定重组腺病毒,并测定重组腺病毒滴度。结果经酶切鉴定、PCR鉴定和荧光分析,均证实得到重组的腺病毒。测定病毒滴度为1.2×1011cfu/L。结论成功包装出重组腺病毒rAd-Ub-Mep,构建了HCV HLA-A2限制性多表位基因的重组腺病毒疫苗,为进一步研究HLA-A2限制性复合多表位基因诱导的细胞免疫应答奠定了基础。携带IFN—β基因的丙型肝炎病毒微型基因组构建及抑制病毒复制的效应
摘要：目的构建丙型肝炎病毒（HCV）反应性干扰素（IFN）-β的微型基因组及其抑制效应的初步评价。方法提取poly I：C刺激的淋巴细胞总RNA,RT-PCR扩增IFN-β基因,克隆入前期构建的HCV微型基因组pT7-5U△131-315rI3Urz;PCR并鉴定插入方向,将反向插入的质粒命名为pT7-5U△131-315rIFNI3Urz。将微型基因组5U△131-315rIFNI3URz克隆入pcDNA3.1载体,获得pCMV-5U△131-315rIFNI3URz。将体外转录的5U△131-315rIFNI3URz RNA转染Huh7.5BB7细胞,48 h后检测IFN-β的表达。将pCMV-5U△131-315rIFNI3URz转染Huh7.5 JFH-1细胞系,荧光实时定量PCR法测定细胞中HCV RNA。结果成功建立了Huh7.5JFH-1细胞系;含有IFN-β的微型基因组在复制子细胞和HCV感染细胞中可以特异表达IFN-β;携带IFN-β的HCV微型基因组可以降低细胞中病毒的RNA拷贝水平,具有一定的剂量依赖效应。结论反向插入IFN-β基因的HCV微型基因组进入HCV感染细胞内表达IFN-β并靶向抑制病毒的复制,为抗HCV感染研究提供了一个新的方法和思路。不同基因型丙型肝炎病毒Core蛋白HLA-DRBl^＊0311、0401表位预测
摘要：目的预测各型丙型肝炎病毒（HCV）Core区的人类白细胞抗原（HLA）-DRB1＊0311及0401抗原表位。方法从NCBI数据库中检索出十条包含六种分型的HCV完整氨基酸序列,使用生物信息学工具剪切Core区氨基酸序列并对其二级结构、可塑性、亲水性和抗原性指数进行预测,选择可能区域预测HLA-DRB1＊0311及0401的抗原表位。结果 HCV Core区二级结构、可塑性、亲水性和抗原性指数预测分析可认为16～28、60～74、98～120区域或为抗原表位区域。HLA-DRB1＊0311预测中,HCV-1a/b、4a、6a预测评分高的区域为28～36,HCV-2a/b为63～71,HCV-3a为29～37,HCV-5a为94～102。HLA-DRB1＊0401中,HCV-1a、2b、4a、6a预测评分高区域为84～92,HCV～5a为120～128,HCV-1b中120～128可以预测到表位但评分低。结论 HCV Core区HLA-Ⅱ类分子抗原表位具有型间差异。荧光RT-PCR法检测丙型肝炎病毒基因型
摘要：目的应用荧光RT-PCR方法对慢性丙型肝炎（CHC）患者血清进行HCV基因型分析。方法采用荧光RT-PCR方法与测序方法比较,对118例CHC阳性患者血清进行HCV RNA分型,比较两种方法分型结果的一致性;为了考察该方法的特异性,对98例慢性乙型肝炎（CHB）患者血清进行HCV RNA分型检测。结果在118例HCV RNA阳性血清标本中,用荧光RT-PCR方法检测有HCV基因1型79例（66.9%）,2型29例（24.6%）,1/2混合型8例（6.8%）;另有2例（1.7%）HCV RNA定量为1×103IU/ml弱阳性标本未分出型。测序法分出1型81例（68.4%）,2型29例（24.6%）,1/2混合型6例（5.1%）,与荧光RT-PCR方法一致2例（1.7%）HCV RNA定量结果为1×103IU/ml的阳性标本测序法未分出型。未发现其他基因型的病例。98例CHB患者血清检测结果均为阴性。结论荧光HCV基因分型的方法具有良好的敏感性、特异性、可重复性且省时省力,可选择该方法为临床诊断服务。《临床肝胆病杂志》关于稿件优先数字出版的启事
摘要：“优先数字出版”是以印刷版期刊录用稿件为出版内容，先于印刷版期刊出版日期出版的数字期刊出版方式。《临床肝胆病杂志》已与“中国知网”签订《学术期刊优先数字出版合作协议》，实现本刊稿件即时数字出版。自数字出版之日起，即可在中国知网（CNKI）全文数据库全文检索并下载该稿件。相关说明如下：