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中国生物制品学 2016年第05期杂志 文档列表

中国生物制品学杂志疫苗研究

吸附无细胞百日咳-白喉-破伤风-乙型肝炎-Sabin株灭活脊髓灰质炎联合疫苗免疫原性分析449-454

摘要：目的评价不同剂量配比及制备工艺的吸附无细胞百日咳-白喉-破伤风-乙型肝炎-Sabin株灭活脊髓灰质炎联合疫苗（DTa P-Hep B-s IPV）的基础免疫效果。方法以中、低剂量s IPV与铝佐剂相互配伍的不同配方,设计4个DTa P-Hep B-s IPV联合疫苗实验组,即中剂量含铝佐剂s IPV组（A组）、中剂量不含铝佐剂s IPV组（B组）、低剂量含铝佐剂s IPV组（C组）、低剂量不含铝佐剂s IPV组（D组）,并设相应各组分的对照组和上市的联合疫苗参考组。按0、1、2月基础免疫程序,经左右腿肌肉接种Wistar大鼠,于免前及每剂免后第30天釆血,检测各组大鼠血清中各组分抗体水平、GMT及阳转率。结果大鼠经全程基础免疫后,A、B组各型别脊灰病毒中和抗体阳转率均达到100%,C、D组为80%~100%;A、C组各剂次免后所诱导的各型别脊灰病毒中和抗体GMT值均高于同等剂量不含铝佐剂的B、D组,且均达到或超过参考组;B、D组所诱导的各型别脊灰病毒中和抗体GMT值均低于同等剂量的对照组。各组百白破抗体阳转率在首剂免后均达到100%,每剂免后,实验组百白破抗体GMT与对照组相比,差异均无统计学意义（P均〉0.05）。基础免疫完成后,实验组和参考组乙型肝炎表面抗体阳转率为40%~88.9%;各实验组乙型肝炎抗体水平与对照组、参考组相比,差异均无统计学意义（P均〉0.05）。结论 s IPV中剂量含铝佐剂的DTa P-Hep Bs IPV联合疫苗可诱导大鼠在基础免疫过程中产生良好且稳定的体液免疫反应。

人甲型H7N9禽流感全病毒灭活疫苗在小鼠中的免疫原性455-457

摘要：目的评价人甲型H7N9禽流感全病毒灭活疫苗在小鼠中的免疫原性。方法分别将H7N9与H1N1、H5N1全病毒灭活疫苗稀释至血凝素抗原（hemagglutinin,HA）浓度分别为30、6、1.2、0.24和0.048μg/ml后,免疫BALB/c小鼠,各10只,0.5 ml/只,采用血凝抑制（hemagglutinin inhibition,HI）试验检测免疫后小鼠血清抗体滴度,计算抗体几何平均滴度（GMT）及半数有效剂量（ED_（50））,并检测免疫后小鼠血清对其他亚型病毒的HI滴度。结果 H7N9组小鼠阳转率与H1N1组较相近,仅H7N9 0.6μg剂量组GMT明显低于H1N1同剂量组（P〈0.001）,其余剂量组差异无统计学意义（P〉0.05）;H7N9与H1N1、H5N1全病毒灭活疫苗免疫小鼠ED_（50）分别为0.27、0.12和15μg HA。免疫后血清对其他亚型病毒无交叉反应。结论 H7N9疫苗在小鼠中的免疫原性略低于H1N1疫苗,但明显优于H5N1疫苗。

霍乱病毒B亚单位作为基因佐剂对单纯疱疹病毒2型DNA疫苗免疫效果的影响458-462

摘要：目的研究霍乱病毒B亚单位（cholera toxin subunit B,CTB）作为基因佐剂对单纯疱疹病毒2型（herpes simplex virus type 2,HSV-2）DNA疫苗pg D免疫效果的影响。方法将CTB片段克隆至真核表达质粒pc DNA3Kan（p Kan）中,构建基因佐剂pc DNA3Kan-CTB（p CTB）。将BALB/c小鼠随机分为p CTB无疫苗组、pg D/p CTB佐剂组、pg D/p Kan空载体组及PBS对照组,经后腿肌肉多点注射,共免疫3次,每次间隔2周。于末次免疫2周后,经小鼠眼球采血,分离血清,ELISA法检测HSV-2特异性Ig G水平及Ig G1、Ig G2a亚型抗体滴度;制备小鼠脾细胞,MTS法检测小鼠脾脏T细胞增殖能力;将病毒稀释后经腹腔接种小鼠,于免疫2周后,进行HSV-2致死剂量攻毒试验。结果p CTB经双酶切及测序鉴定证明构建正确;pg D/p CTB佐剂组小鼠血清中HSV-2特异性Ig G水平明显高于其他3组（P〈0.001）,Ig G1和Ig G2a滴度均明显高于pg D/p Kan空载体组（P〈0.001）,其中Ig G2a增幅更明显,Ig G2a/Ig G1比值与pg D/p Kan空载体组相比,由（1.176±0.11）增加至（1.316±0.07）（P〈0.05）;pg D/p CTB佐剂组小鼠脾细胞在HSV-2刺激下诱导的特异性T细胞增殖反应明显强于PBS对照组及pg D/p Kan空载体组（P〈0.05）;攻毒14 d内,pg D/p CTB佐剂组小鼠存活率高达100%。结论 p CTB作为基因佐剂能够显著提高pg D诱导小鼠产生抗原特异性Ig G抗体水平,增强HSV-2特异性T细胞增殖反应,并介导以细胞免疫为主的Th1/Th2混合型免疫反应。

中国生物制品学杂志基础研究

丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2基因真核表达质粒的构建及其对HeLa细胞增殖和凋亡的影响463-468

摘要：目的构建小鼠丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2（serine/arginine-rich protein specific kinase 2,SRPK2）基因真核表达质粒,建立稳定过表达SRPK2的He La细胞系,并探讨SRPK2过表达对He La细胞增殖和凋亡的影响。方法利用RT-PCR从小鼠睾丸组织中扩增SRPK2基因,与p3×Flag-CMV-14质粒连接,构建重组真核表达质粒p3×Flag-CMV-14-SRPK2,转染He La细胞,通过G418筛选获得稳定转染细胞系。采用RT-PCR检测稳定转染He La细胞系中SRPK2基因的转录,Western blot检测SRPK2的表达;MTT法和流式细胞术分别检测SRPK2过表达对He La细胞增殖和凋亡的影响。结果菌落PCR、双酶切及DNA测序表明重组真核表达质粒p3×Flag-CMV-14-SRPK2构建正确;RT-PCR和Western blot分析表明SRPK2基因在He La细胞中稳定过表达;p3×Flag-CMV-14-SRPK2稳定转染组细胞增殖活力明显高于p3×Flag-CMV-14转染组和未转染组（P〈0.05）,细胞凋亡率明显低于上述两组（P〈0.05）。结论成功构建了SRPK2基因的真核表达质粒,建立了稳定过表达SRPK2的He La细胞系,SRPK2过表达可增强He La细胞的增殖活力,而抑制其凋亡。

A型肉毒毒素轻链蛋白的表达及纯化469-472

摘要：目的构建A型肉毒毒素轻链表达载体重组质粒,在大肠埃希菌中表达后,利用金属螯合层析柱纯化。方法以p GEM-Bo NT/AL轻链质粒为模板,PCR扩增Bo NT/AL基因,克隆至表达载体p ET-28（a）中,构建重组质粒p ET-28（a）-Bo NT/AL,转化E.coli BL21（DE3）,分别于37、30、25℃IPTG诱导表达,表达产物经Chelating Sepharose 4Fast Flow（Cu（2＋））层析柱纯化,纯化产物经尿素梯度复性。结果质粒p ET-28（a）-Bo NT/AL经酶切鉴定及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约52 000,主要以包涵体形式存在,37℃诱导表达量最高,占菌体沉淀总蛋白的41%;包涵体经2%Trition-X100和2 mol/L尿素洗涤后,可去除部分杂蛋白,8 mol/L尿素能溶解大部分包涵体;经再次浓缩后,蛋白浓度可达89μg/ml,纯度达90%。结论成功克隆及表达了Bo NT/A轻链基因,为制备抗Bo NT/A轻链单链抗体以及研究肉毒中毒机制和治疗方案奠定了基础。

柔嫩艾美耳球虫诱导鸡巨噬细胞Toll样受体mRNA转录水平的变化478-481

摘要：目的探讨柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）诱导鸡巨噬细胞Toll样受体（Toll-like receptors,TLRs）m RNA转录水平的变化。方法用有病毒和无病毒E.tenella分别刺激鸡巨噬细胞,于刺激后0、1、2、4、6、8 h收集鸡巨噬细胞,Trizol试剂提取总RNA,经q RT-PCR法检测鸡Toll样受体（chicken TLRs,Ch TLRs）表达的动态变化。结果有病毒E.tenella刺激鸡巨噬细胞的Ch TLR1和Ch TLR21 m RNA的转录水平于刺激4 h时达最高,Ch TLR4、Ch TLR7、Ch TLR15 m RNA的转录水平于刺激2 h时达最高,Ch TLR2、Ch TLR3、Ch TLR5 m RNA转录水平于刺激4 h后显著下调,与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。无病毒E.tenella刺激鸡巨噬细胞各时间点的Ch TLR1、Ch TLR4、Ch TLR21 m RNA的转录水平与对照组差异均无统计学意义（P〉0.05）;Ch TLR15 m RNA的转录水平于刺激2 h时达最高,Ch TLR2、Ch TLR3、Ch TLR5、Ch TLR7 m RNA转录水平于刺激4 h后显著下调,与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 Ch TLR7和Ch TLR21可能与鸡的抗E.tenella病毒的先天性免疫应答有关,为E.tenella感染的天然免疫机制的研究及鸡E.tenella病的防控奠定了基础。

慢性热应激对大鼠肝脏miRNA的影响482-485

摘要：目的分析慢性热应激对大鼠肝脏mi RNA的影响。方法将Wister雄性大鼠随机分为慢性热应激组和常温对照组,提取各组大鼠肝脏组织总RNA,反转录合成c DNA,以其为模板,应用q RT-PCR方法检测大鼠肝脏组织中mir92a、mir151、mir425、mir328a、mir210、mir98的表达。结果与常温对照组相比,慢性热应激组大鼠肝脏组织中mir151、mir425、mir98、mir328a和mir210的相对表达量均明显升高（P〈0.01）,而mir-92a则略有升高（P〉0.05）。结论慢性热应激大鼠肝脏组织中有5种mi RNA相对表达量明显升高,为日后慢性热应激标志物的寻找和抗热应激药物的研发奠定了基础。

中国生物制品学杂志治疗性制剂

狂犬病抗血清在小鼠体内抗感染保护效果评价486-489

摘要：目的探讨被动免疫的狂犬病抗血清和免疫球蛋白（Ig G）对小鼠的攻毒保护作用及其可能的作用机制。方法单独使用Ig G,按照125、250、1 000 IU/kg体重的剂量,分别在攻击致死剂量的强毒前后注射平均体重（20±1）g的昆明小鼠,观察14 d（脑内攻毒）或28 d（外周攻毒）后,记录小鼠发病及死亡情况,计算存活率。同时以类似的方法使用不同效价的抗血清进行试验。结果在攻毒前先注射Ig G或抗血清的条件下,小鼠的存活率与被动免疫的Ig G剂量呈正比,当Ig G剂量达1 000 IU/kg时,小鼠可得到完全保护;在脑内攻毒后注射Ig G或抗血清的条件下,无论被动免疫的Ig G剂量高低,均不能提供任何保护;但在外周攻毒3 d后注射Ig G,高剂量的Ig G可提供部分保护。结论血脑屏障可能允许部分Ig G进入脑内,并在脑内病毒感染早期阻断病毒复制,但病毒在脑内开始复制后,给予任何剂量的Ig G均不能对病毒感染提供保护。

马抗H7N9亚型流感病毒精制免疫球蛋白的制备及其治疗效果评价490-493

摘要：目的制备马抗H7N9亚型流感病毒精制免疫球蛋白,并评价其对BALB/c小鼠的治疗效果。方法应用昆虫细胞-杆状病毒表达系统分别构建的表达H7N9亚型流感病毒HA、NA及M1蛋白的病毒样颗粒制备抗原,免疫健康马匹,当抗体效价达1∶10 000以上时,采血,对血清进行粗处理;采用亲和层析的方法获得纯化的马抗H7N9免疫球蛋白F（ab’）_2。对纯化的免疫球蛋白进行蛋白含量测定和质量检测。用H7N9亚型流感病毒BALB/c小鼠感染模型评价F（ab’）_2的治疗效果。结果免疫马匹血清中产生高滴度的中和抗体,获得的纯化马抗H7N9免疫球蛋白F（ab’）_2中和抗体效价达1∶5 120,质量检测合格。攻毒4 h后给药0.4和0.2 mg,小鼠存活率均达100%。结论获得了安全、高效的马抗H7N9亚型流感病毒精制免疫球蛋白F（ab’）_2,为人禽流感治疗用制剂的研发提供了参考。

人用重组溶瘤单纯疱疹病毒Ⅱ型（OH2）生物学特性的稳定性494-496

摘要：目的分析人用重组溶瘤单纯疱疹病毒Ⅱ型（oncolytic herpes simplex virus type 2,OH2）生物学特性的稳定性。方法将OH2在Vero细胞中连续传20代,测定不同时间点收获的不同代次（P4、P10、P20）病毒的滴度,并绘制病毒的生长曲线;ELISA夹心法检测表达的h GM-CSF的含量;TF-1细胞培养法检测表达的h GM-CSF的活性;CCK-8试剂盒检测OH2的体外癌细胞杀伤能力。结果 OH2在Vero细胞中连续传20代后,不同代次病毒（P4、P10、P20）的生长曲线模式、表达的h GM-CSF含量及活性、体外癌细胞的杀伤能力均无明显差异。结论 OH2生物学特性的稳定性良好,具有新生物药开发前景。

中国生物制品学杂志诊断制剂

甲型副伤寒细菌单克隆抗体的制备及其初步应用503-506

摘要：目的制备甲型副伤寒特异性多糖（O-specific polysaccharide,O-SP）单克隆抗体,建立鉴定甲型副伤寒沙门血清型细菌的全菌体ELISA和O-SP的竞争ELISA定量检测方法。方法用甲型副伤寒全菌体免疫小鼠,通过常规方法融合,以破伤风类毒素（tetanus toxoid,TT）为载体偶联的O-SP为筛选检测抗原,间接ELISA法筛选分泌抗甲型副伤寒O-SP的特异性抗体杂交瘤细胞株;分别以甲型和乙型副伤寒的O-SP-TT及伤寒Vi-TT为包被抗原,检测制备的单克隆抗体与不同血清型细菌多糖的交叉反应;以不同沙门菌菌体为包被抗原,用制备的1株甲型副伤寒O-SP特异性单克隆抗体进行菌体间接ELISA,检测细菌血清型;用该株单克隆抗体为竞争抗体,建立定量检测样品中O-SP的竞争ELISA方法。结果筛选出6株分泌抗甲型副伤寒O-SP抗体的杂交瘤阳性细胞株;其中2株仅与甲型副伤寒O-SP呈特异性反应,其余4株与乙型副伤寒O-SP呈交叉反应;用其中1株单克隆抗体进行的菌体间接ELISA显示,该株单克隆抗体仅与甲型副伤寒沙门菌反应,而不与伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌和肠炎沙门菌反应;竞争ELISA定量检测O-SP的检测范围在0.4~0.003 2μg/ml最准确。结论制备的特异性抗甲型副伤寒O-SP的单克隆抗体可用于甲型副伤寒细菌血清型快速鉴定和O-SP的竞争ELISA定量检测。

中国生物制品学杂志临床研究

上海市某大型工厂风疹暴发的调查分析507-510

摘要：目的调查分析上海市某大型工厂风疹暴发的流行病学特征,以便及时采取有效的疫情控制措施。方法对2012年3~7月该厂301例风疹病例进行流行病学调查,采用描述性方法对本次风疹暴发疫情进行分析。结果此次疫情罹患率为6.26‰,暴发高峰出现在4月16~20日;主要分布于各厂区人员密集的第3、4层厂房;发病年龄以17~28岁为主,男性207例,女性94例,均痊愈;早期10例病例经ELISA法检测风疹病毒Ig M抗体均为阳性。流行病学调查结果表明,此次风疹疫情主要与环境、季节、人员流动、预防接种及健康等因素有关。结论本案例为一起典型的成人风疹暴发事件,人员密集程度高、工作生活环境通风不良易造成风疹暴发,做好流动人口以免疫接种为主的综合防治措施,可有效控制疫情蔓延。

江苏扬中市2013年儿童及老人流感抗体水平分析511-513

摘要：目的分析江苏扬中市儿童及老人的流感流行状况,为预防疾病和制定免疫策略提供依据。方法按照整群分层随机抽样的原则,于2013年9月采集扬中市下辖6个乡镇1 449名健康儿童及老人的静脉血,分离血清,采用微量血凝抑制（hemagglutination inhibition,HI）试验检测血清抗体。结果共采集血清1 449份,其中儿童组739份,老人组710份。H1N1、H3N2和B型3个型别抗体阳性率均在70%以上,抗体保护率分别为44.10%、31.88%和65.98%,抗体几何平均滴度（geometric mean titer,GMT）分别为1∶26.19、1∶18.00和1∶48.76。其中儿童组H1N1型抗体保护率达62.38%,抗体GMT为1∶41.48。结论 B型在儿童和老人中流行较广泛,是该部分人群的流感流行优势毒株。H1N1型在儿童中发生过流行,并已产生了相应抗体。在流感高发季节,对儿童及老人等重点人群进行流感疫苗的预防接种是必要的。

中国生物制品学杂志技术方法

HIV-1gp140蛋白不同聚合体的纯化514-518

摘要：目的对HIV-1 CN54膜蛋白gp140的不同聚合体进行纯化。方法将在哺乳动物细胞Free Style 293F中表达的gp140蛋白经过糖基化亲和层析、阴离子交换层析和凝胶排阻层析3种纯化方法进行分离,并对该纯化方法进行优化。采用ELISA方法检测不同结构抗原与广谱中和抗体的特异性反应。结果选择lentil lectin填料进行糖基化亲和层析,纯化的gp140蛋白为4.56 mg/L,得率为89.9%;选择弱阴离子填料DEAE用于阴离子交换层析,纯化的gp140蛋白为3.87 mg/L,得率为84.8%;凝胶排阻层析纯化获得了gp140蛋白的多聚体、三聚体＋二聚体以及单体3种结构。不同结构的gp140蛋白可与CD4结合位点的广谱中和抗体VRC01以及结构依赖性的V3区特异性广谱中和抗体反应,具有较好的特异性,且不同聚合体在V3区结构依赖性抗体2G12的结合抗体反应上会存在一定差异。结论成功建立了HIV-1 gp140蛋白不同聚合体纯化的方法,该方法对于其他相似蛋白的纯化具有参考作用;不同结构的gp140蛋白的分离为进一步研究其免疫原性奠定了基础。

CXCL4基因敲除小鼠的饲养、繁殖及基因型鉴定519-522

摘要：目的饲养、繁殖并鉴定CXC趋化因子配体4[chemokine（C-X-C motif）ligand 4,CXCL4]基因敲除小鼠,为深入研究CXCL4的生物学功能奠定基础。方法将引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,剪取繁殖成功的子代小鼠耳朵,提取其基因组DNA,采用PCR法鉴定小鼠的基因型;比较野生型小鼠和CXCL4敲除的纯合子小鼠的体重变化及结直肠的长度,通过HE染色观察野生型小鼠和CXCL4敲除的纯合子小鼠的结直肠形态结构;采用ELISA法验证CXCL4野生型和纯合子小鼠血清中CXCL4的表达。结果繁殖成功的子代小鼠有3种基因型：野生型、杂合子及纯合子;4、10周龄雌性纯合子小鼠体重明显重于同龄的野生型小鼠（P〈0.05）,6、10周龄雄性纯合子小鼠体重明显重于同龄的野生型小鼠（P〈0.05）;6周龄雌性纯合子小鼠结直肠长度明显长于同周龄的野生型小鼠（P〈0.05）,但结直肠的形态结构无显著改变;纯合子小鼠血清中CXCL4的表达量明显低于WT小鼠（P〈0.05）。结论成功获得了CXCL4基因敲除纯合子小鼠,为深入研究CXCL4的生物学功能奠定了基础。

A群脑膜炎球菌兔抗血清的制备及鉴定523-527

摘要：目的制备A群脑膜炎球菌兔抗血清内部参考品,并进行鉴定。方法用新鲜培养的A群脑膜炎球菌混悬液按确定的免疫方案免疫日本大耳白兔,免疫完成后,按确定的采血时间点,经颈动脉采血,分离血清,进行凝集试验,观察兔抗血清凝集反应情况;采用免疫双扩散和ELISA法检测兔抗血清效价,同时利用火箭免疫电泳和ELISA法鉴定兔抗血清的血清学特异性。结果确定免疫方案为基础免疫4周后,加强免疫2周;免疫完成后第6天为最佳采血时间点。6份自制A群脑膜炎球菌兔抗血清的凝集试验效价均达到1︰160,与相应的多糖能够产生沉淀线的最大稀释倍数均不低于1︰8,与A群脑膜炎球菌荚膜多糖反应的抗体滴度均在106及以上,与C、Y和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖之间无交叉反应。结论自制的A群脑膜炎球菌兔抗血清可作为A群脑膜炎球菌荚膜多糖疫苗的定性和定量检测的内部参考品,同时也为其他多糖类疫苗血清抗体的制备提供了参考。

牛血清IgG双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立及应用528-532

摘要：目的建立牛血清Ig G（bovine immunoglobulin G,BIg G）抗原的双抗体夹心ELISA定量检测方法。方法用BIg G-Fc免疫BALB/c小鼠,制备抗BIg G单抗,确定包被抗体及酶标抗体后,建立定量检测BIg G抗原的双抗体夹心ELISA方法,并验证该方法的准确度、精密度、稳定性、特异性,确定该方法的线性范围和定量限度。应用建立的方法检测不同厂家、不同批次牛血清及纯化EV71样品中BIg G抗原残留量。结果建立了以3E12D2为包被单抗（8.0μg/ml,100μl/孔）,4A2G1B1-HRP为酶标抗体（1∶1 000稀释,100μl/孔）定量检测BIg G的双抗体夹心ELISA方法,该方法的线性范围为0.3~9.6 ng/ml,R~2〉0.99,定量限度为0.3 ng/ml;回收率在94.1%~108.5%之间,同一实验者重复检测和不同实验者检测的变异系数均〈10%;37℃放置3和6 d的稳定性均〉90%;该试剂样品与BIg G可发生特异性反应,与其他动物源血清无交叉反应。9批牛血清中BIg G含量均存在差异;精纯样品较粗纯样品BSA和BIg G均明显去除,但BIg G占牛血清残留量（BSA＋BIg G）的比例却明显上升。结论建立的BIg G抗原的双抗体夹心ELISA方法符合定量检测需要,可用于牛血清的质量质控及残留量检测。

羧甲基壳聚糖病毒灭活/去除工艺验证533-537

摘要：目的对羧甲基壳聚糖病毒灭活/去除工艺进行验证。方法模拟生产条件,选择猪细小病毒（porcine parvovirus,PPV）、伪狂犬病病毒（pseudo rabies virus,PRV）、鸭肝炎病毒Ⅰ型（duck hepatitis virus-Ⅰ,DHV-Ⅰ）、牛滤过性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus,BVDV）作为指示病毒,采用高温碱化和醇洗灭活/去除病毒,Karber法计算病毒滴度,荧光PCR检测病毒灭活/去除效果。结果 3批甲壳素经碱化反应处理,PRV、PPV、BVDV、DHV-Ⅰ的平均灭活对数值分别为≥6.736、≥6.597、≥6.138和≥5.806 log TCID50/0.1 ml;3批羧甲基壳聚糖经醇洗处理,PRV、PPV、BVDV、DHV-Ⅰ的平均灭活对数值分别为≥6.763、≥6.569、≥6.167和≥5.587 log TCID50/0.1 ml。碱化反应与醇洗处理前感染PRV、PPV、BVDV、DHV-Ⅰ样品荧光PCR检测平均Ct值分别为23.465、23.387,24.873、24.706,26.887、25.376,27.386、24.629,处理后样品的荧光PCR检测平均Ct值均〉40。结论羧甲基壳聚糖经高温碱化和醇洗反应处理均能有效灭活病毒,保证了产品的安全性。