两种不同配方含前S表位乙型肝炎疫苗的免疫原性及抗原活性比较
摘要：目的对共表达的含前S1（PreS1）和前S2（PreS2）表位的乙肝表面抗原（SS1S2）及分别表达的含PreS1表位乙肝表面抗原（SS1）和含PreS2表位乙肝表面抗原（SS2）混合物的免疫原性及抗原活性进行比较,为疫苗配方的选择提供依据。方法将SS1S2抗原、SS1抗原与SS2抗原的混合物（1∶1混合,以下简称SS1＋SS2）分别用氢氧化铝佐剂吸附,制成SS1S2疫苗和SS1＋SS2疫苗,总抗原含量均为20μg/ml,分别经BALB/c小鼠腹腔单次注射两种疫苗1.0、0.25和0.06μg,免疫后1、2、4周采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清中HBV S、PreS1和PreS2抗体水平。分别以纯化的SS1抗原或SS2抗原为参考品,采用ELISA法检测6批SS1S2抗原所对应的SS1或SS2抗原含量。结果免后1、2、4周,3个剂量的SS1S2疫苗S抗体阳转率均高于同剂量的SS1＋SS2疫苗,0.25μg剂量的SS1S2疫苗PreS1抗体阳转率高于同剂量的SS1＋SS2疫苗;免后1、2周,3个剂量的SS1S2疫苗PreS2抗体阳转率与SS1＋SS2疫苗相近;免后4周,1.0和0.25μg剂量的SS1S2疫苗PreS2抗体阳转率高于SS1＋SS2疫苗。免后4周,3个剂量的SS1S2疫苗的S和PreS1几何抗体平均滴度（GMT）均高于同剂量的SS1＋SS2疫苗;1.0和0.25μg剂量的SS1S2疫苗的PreS2抗体GMT高于同剂量的SS1＋SS2疫苗。6批SS1S2抗原中,每10μg SS1S2抗原所包含的PreS1抗原活性相当于（12.1±0.84）μg的SS1,每10μg SS1S2抗原所包含的PreS2抗原活性相当于（7.0±0.52）μg的SS2;SS1S2抗原中SS1和SS2抗原活性之和远超过100%。结论共表达的SS1S2抗原比单独表达的SS1抗原、SS2抗原具有更强的免疫原性;共表达的SS1S2抗原中PreS1和PreS2抗原活性也得到增强。水痘-带状疱疹病毒（VZV84-7株）在人二倍体细胞（2BS株）中感染复数的分析
摘要：目的探讨水痘-带状疱疹病毒（VZV84-7株）在人二倍体细胞（2BS株）上的感染活性,确定感染复数（MOI）。方法使用100 ml小方瓶培养人二倍体细胞（2BS株）,待长成致密单层后,接种病毒滴度为5.5 lgPFU/ml的水痘-带状疱疹病毒（VZV84-7株）,每瓶接种量分别为0.02、0.1、0.3、0.5、0.8、1、1.5和2 ml,于显微镜下连续观察细胞病变情况及病变比例,并连续记录收获时间;采用蚀斑法测定病毒滴度。结果当病毒接种量为0.02 ml时,细胞大部分生长正常,呈极性排列,无形态典型、广泛的病变,通过延长收获时间也无法获得形态典型、广泛的病变;当病毒接种量不低于0.1 ml时,呈典型、广泛的病变,随着病毒接种量的增加,收获时间逐渐缩短;仅病毒接种量为0.02 ml组细胞的病毒滴度低于3.7 lgPFU/ml;确定MOI在0.004 0~0.019 9之间,均可制备出质量稳定、符合成都生物制品研究所有限责任公司《水痘减毒活疫苗制造及检定规程》要求的毒种。结论确定了水痘-带状疱疹病毒（VZV84-7株）感染人二倍体细胞（2BS株）合适的MOI,为水痘疫苗生产工艺的优化提供了参考依据。SF/COL/PLCL静电纺丝三维纳米纤维支架与人脐带血间充质干细胞的细胞相容性研究
摘要：目的 研究SF/COL/PLCL静电纺丝三维纳米纤维支架与人脐带血（human umbilical cord blood,hUCB）间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）的细胞相容性。方法 分离、培养hUCBMSCs,并进行传代,取第3代hUCBMSCs,茜素红染色和Von Kossa染色检测其体外诱导成骨分化的能力;流式细胞术检测其表面相关抗原的表达。制备SF/COL/PLCL静电纺丝三维纳米纤维支架,扫描电镜观察其形貌表征,并检测其力学性能。将hUCBMSCs接种于静电纺丝三维纳米纤维支架上,观察细胞在支架上的生长及增殖情况。结果hUCBMSCs具有成骨诱导分化能力,其表达CD44、CD29、CD90和CD105,不表达CD45和CD34。SF/COL/PLCL复合纳米纤维的纤维形貌良好,随着PLCL含量的增加,纤维的直径和力学性能均逐渐增加。hUCBMSCs能够在三维纳米纤维支架上很好地黏附,并相互连接向周围扩展,三维纳米纤维支架能很好地促进细胞黏附和增殖,与常规培养的细胞相比,差异有统计学意义（P约0.05或P约0.01）,当SF/COL与PLCL的质量比为30颐70时,最有利于细胞的生长。结论hUCBMSCs能够在SF/COL/PLCL静电纺丝纳米纤维支架上生长、增殖,这种支架材料具有良好的力学性能及细胞相容性,有望成为一种新型组织工程支架材料。人呼吸道合胞病毒适应株筛选及其生物学特性
摘要：目的建立在Vero细胞上低温传代的人呼吸道合胞病毒（human respiratory syncytial virus,HRSV）适应株,并分析其生物学特性。方法从155份肺炎儿童痰样中经PCR、测序鉴定出14株RSV,将其在Vero细胞上37℃传代第1次收获的病毒记为野毒株（wild-type,WT）,通过逐步降低培养温度的方法在Vero细胞传代获得1株适应株（adapted-strain,AS）KM516-AS。将RSV适应株感染A549细胞后,分别至37、25、32和39℃培养,测定其冷适应性和温度敏感性。分别将RSV适应株及其对应的野毒株KM516-WT经鼻腔免疫小鼠,于免疫后第8天,取肺组织制作病理切片,显微镜下观察病变程度;取鼻甲和右肺匀浆组织,制备上、下呼吸道匀浆液,测定上、下呼吸道病毒滴度;于免疫后第13天,经小鼠尾部静脉采血,分离血清,于免疫后第14天,取肺组织制备匀浆液,采用ELISA法测定总抗体滴度,病毒中和试验法测定中和抗体滴度。结果 RSV野毒株KM516-WT的适应温度范围较广,4个不同温度下的病毒滴度变化不大;RSV适应株KM516-AS的适应温度范围较窄,25℃时的病毒滴度最高,随着温度的升高,病毒滴度逐渐降低,且仅有温度敏感性而无冷适应性。野毒株组小鼠肺部呈暗褐色,无严重的实质化,且肺泡和毛细血管中有明显的淋巴浸润;适应株组小鼠肺泡和毛细血管中淋巴浸润较少。适应株在体内的复制水平低于野毒株,并同野毒株一样具有较好的免疫原性。结论获得1株RSV适应株,并具有一定的减毒效果。诺如病毒衣壳蛋白在293T细胞中的表达及纯化
摘要：目的在293T细胞中表达诺如病毒衣壳蛋白,并进行纯化。方法将合成的人诺如病毒GII.4悉尼大流行株VP1基因（全长1 623 bp）插入真核表达载体pcDNA3.1（＋）中,构建重组表达质粒,测序验证无误后,通过磷酸钙共沉淀法将质粒转染至293T细胞中,收获转染细胞上清,进行Western blot鉴定。转染3~5 d后,收获细胞上清,经氯化铯平衡密度梯度离心纯化衣壳蛋白,收集各组分,离心沉淀病毒样颗粒（virus-like particles,VLPs）,PBS重悬后,SDS-PAGE分析目的蛋白的纯度;电镜观察VLPs;BCA法测定蛋白含量。结果 Western blot分析显示,重组表达质粒转染的293T细胞上清可见特异的蛋白条带。收获的细胞培养上清经氯化铯平衡密度梯度离心后,可见3个明显条带;10%SDS-PAGE分析显示,衣壳蛋白主要位于第3个条带,纯度达95%以上;目的蛋白有2个条带,相对分子质量分别为59 000和56 000;收集的3个组分经电镜观察可见,表达的诺如病毒衣壳蛋白主要位于第3个条带,且组装成了VLPs,颗粒大小约为38 nm;每升培养基可获得约500μg VLPs。结论成功在293T细胞中表达了诺如病毒衣壳蛋白,该衣壳蛋白成功组装成了VLPs。本实验建立了一种小规模制备诺如病毒VLPs的新方法。重组CHO细胞无血清培养基的研制
摘要：目的 研制适合于重组CHO细胞生长的低成本无血清培养基。方法 以无血清培养基SFM为基础,分别向其中加入不同的组分,包括水解物（0.8%大豆蛋白水解物、0.8%超滤植物蛋白栋、0.8%酵母提取物、0.8%谷类水解物、0.4%大豆蛋白水解物＋0.4%酵母提取物）、激素（10μmol/L的地塞米松、氢化可的松）、脂类物质（0.05%脂肪乳剂、50 mg/L氯化胆碱、10 mmol/L磷脂酰胆碱）,培养CHOK1细胞（表达重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白）,检测不同添加物质对细胞密度、活力、蛋白表达量及蛋白中聚体含量的影响。结果 添加大豆蛋白水解物和酵母提取物的混合物、地塞米松及脂肪乳剂可增加细胞密度,提高细胞活力,增加目的蛋白的表达量,降低蛋白中的聚体含量。结论 通过对几种关键组分的优化,研制出适合于重组CHO细胞生长的低成本无血清培养基。PI3K/AKT信号在增强乳腺癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体敏感性中的作用及其机制
摘要：目的 分析磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,AKT）通路是否通过长细胞caspase-8样抑制蛋白（cellular FLICE inhibitory protein,c-FLIP-L）的介导来影响乳腺癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL）的敏感性,并探讨其机制。方法 用40 nmol/L wortmannin（AKT活化的特异性抑制剂）、100 ng/ml TRAIL、40 nmol/L wortmannin＋100 ng/ml TRAIL处理人乳腺癌MDA-MB-231细胞,并设空白对照组。MTT法检测药物作用24、48、72 h后的细胞增殖抑制率;流式细胞术检测药物作用48 h后的细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中磷酸化AKT（pAKT）和c-FLIP-L的表达。结果TRAIL＋wortmannin组24、48和72 h细胞增殖抑制率与其他组比较,均明显升高（P约0.05）;TRAIL＋wortmannin组与TRAIL组和wortmannin组比较,可明显促进细胞凋亡（P约0.05）;随着wortmannin作用时间的延长,pAKT的表达水平明显降低,同时c-FLIP-L的表达水平也随之下降,而TRAIL对pAKT和c-FLIP-L的表达无明显影响。结论抑制PI3K/AKT通路可增强乳腺癌细胞对TRAIL的敏感性,这种作用可能是通过c-FLIP-L的介导来实现的。第一批赖氨酸升压素国家标准品的制备
摘要：目的制备第一批赖氨酸升压素国家标准品。方法以英国国家生物制品检定所（National Institute for Biological Standards and Control,NIBSC）提供的WHO第一批赖氨酸升压素国际标准品作为标准,选择4个实验室,采用《中国药典》二部（2010版）附录ⅫA升压素生物测定法对第一批赖氨酸升压素国家标准品待标品的生物效价进行协作标定,并比较二者的高效液相色谱（HPLC）主峰保留时间;按照《中国药典》二部（2010版）附录ⅧM水分测定法,第一法（费休氏法）B.库仑滴定法测定第一批赖氨酸升压素国家标准品待标品的水分含量。结果第一批赖氨酸升压素国家标准品待标品经协作标定,确定其生物效价为4.0 IU/支;其HPLC主峰保留时间与第一批赖氨酸升压素国际标准品一致;其水分含量为2.9%。结论本批待标品可作为第一批赖氨酸升压素国家标准品,以供赖氨酸升压素效价测定、鉴别及升压物质检查使用。呋喃唑酮代谢物单克隆抗体及其新型免疫层析检测试纸条的制备
摘要：目的制备呋喃唑酮代谢物AOZ单克隆抗体及其胶体金与荧光淬灭免疫层析试纸条。方法将AOZ衍生成CPAOZ后,与载体蛋白BSA偶联,制备完全抗原CPAOZ-BSA,经皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,共5次,取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,获得稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株。利用获得的抗CPAOZ单克隆抗体制备胶体金及荧光淬灭免疫层析试纸条,并对试纸条的灵敏度及特异性进行验证。结果制备的完全抗原经紫外扫描鉴定偶联成功。共获得3株能稳定分泌抗CPAOZ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中效价和特异性最好的1株2H11针对CPAOZ的50%抑制质量浓度（IC50）为0.88 ppb。以该抗体制备的胶体金及荧光淬灭免疫层析试纸条的最低检测限分别为7.5和0.062 5 ppb;两种试纸条与其他3种硝基呋喃类代谢物CPAMOZ、CPAHD、CPSEM均不存在交叉反应。结论成功制备了抗CPAOZ单抗及其胶体金免疫层析和荧光淬灭免疫层析试纸条,两种试纸条均具有较高的灵敏度和较强的特异性,其中荧光淬灭免疫层析试纸条的灵敏度较胶体金免疫层析试纸条高约100倍,具有良好的应用前景。福建省麻疹疫苗强化免疫前后非目标人群麻疹流行病学特征分析
摘要：目的分析2006~2011年福建省麻疹疫苗强化免疫前后非目标人群麻疹流行病学特征,为消除麻疹策略提供依据。方法采用描述性流行病学方法,分析国家疾病监测信息报告系统中福建省麻疹疫苗强化免疫前（2006~2008年）和强化免疫后（2009~2011年）非目标人群麻疹病例的流行病学特征。结果麻疹疫苗强化免疫后,福建省全人群麻疹年均报告发病率下降了95.65%,非目标人群麻疹年均报告发病率下降了92.97%;麻疹强化免疫后,非目标人群麻疹发病呈高度散发,但仍以春季为主,占病例总数的53.75%;所有地市非目标人群报告发病率均大幅下降,下降幅度在84.61%~98.59%之间,地区分布以经济发达地区福州市,经济欠发达地区宁德、南平市为主;发病人群以异地户籍为主,占病例总数的66.87%,与强化免疫前差异有统计学意义（P〈0.05）;性别、年龄、职业构成与强化免疫前差异无统计学意义（P〉0.05）。结论强化免疫有正向外延效应,能大幅降低非目标人群发病率,后续应加强常规免疫、强化监测和应急处置,维持高群体免疫力,特别要关注人员流动频繁、边远贫困的地区以及流动人口,才能实现消除麻疹的目标。屋尘螨变应原制品中铝含量微波消解-电感耦合等离子体原子发射光谱检测方法的建立
摘要：目的建立微波消解-电感耦合等离子体原子发射光谱（inductively coupled plasma atomic emission spectrometry,ICP-AES）法检测屋尘螨变应原制品中铝含量,并进行验证。方法采用微波消解法对样品进行消解处理后,用ICPAES法测定样品中的铝含量,并对建立的方法进行线性范围、精密度、准确性验证,确定最低检出限和最低定量限;用建立的方法检测2批次屋尘螨变应原制剂中的铝含量。结果该方法铝元素浓度在0~0.30μg/ml范围内与分析线的响应值具有良好的线性关系（r=0.999 552）;0.10μg/ml标准品溶液连续进样11次,铝含量平均值为0.100 2μg/ml,相对标准偏差（RSD）为1.2%;6份样品溶液的铝含量平均值为10.90μg/ml,RSD为1.4%;3份样品溶液的平均加标回收率为95.5%,RSD为4.9%;该方法最低检出限为0.008 5μg/ml,最低定量限为0.028μg/ml。2批次共5份屋尘螨变应原制剂样品中铝含量测定结果均符合该企业注册标准中铝含量标准要求。结论微波消解法对样品消解完全,采用微波消解-ICP-AES法可以对屋尘螨变应原制品中的铝含量进行准确定量,该方法操作简便,灵敏度、精密度、准确度良好。重组白喉毒素无毒突变体CRM_（197）柱复性及纯化工艺的优化
摘要：目的 优化重组白喉毒素无毒突变体CRM19（7recombinant cross reacting material 197,rCRM197）柱复性及纯化工艺。方法 将Sephacryl S-200凝胶柱复性和Q Sepharose FF强阴离子交换层析结合,复性和纯化rCRM197;通过正交试验L（934）考察凝胶层析复性时流速、离子交换层析纯化的pH值、淋洗液中NaCl浓度和洗脱液中NaCl浓度4种因素对rCRM197纯度及回收率的影响,筛选rCRM197复性及纯化的最佳工艺。结果 包涵体经Sephacryl S-200凝胶柱复性后,相对分子质量小于36 000的杂质已被去除;经Q Sepharose FF离子交换层析后,rCRM197纯度达95%以上;在复性时流速为10 ml/min、离子交换层析纯化的pH值为7.5、淋洗液为50 mmol/L Tris-Cl＋30 mmol/L NaCl、洗脱液为50 mmol/L Tris-Cl＋50 mmol/L NaCl的条件下,rCRM197能达到纯度和回收率的共平衡。结论 已筛选出rCRM197复性及纯化的最佳工艺,该工艺操作简便,制备的rCRM197纯度高,适用于rCRM197的产业化。重组人IL-12病毒去除/灭活工艺的建立及验证
摘要：目的 建立重组人白细胞介素-12（recombinant human IL-12,rhIL-12）的病毒去除/灭活工艺,并进行验证。方法 采用预过滤器（Viresolve Shield,纳米滤膜3.1 cm2）和除细小病毒过滤器（Viresolve Pro,纳米滤膜3.1 cm2）串联过滤,样品体积为90 ml,过滤时间为2 h,安全系数为1.88,压力为30 psi,建立rhIL-12病毒去除工艺,分析该工艺对产品的比活性及回收率的影响,并以猪细小病毒（porcine parvovirus,PPV）作为指示病毒,对该工艺进行病毒去除效果验证;采用低pH孵放法（用1 mol/L HCl调pH值至3.8依0.1,室温放置180 min后,用1 mol/L NaOH调pH值至7.4）建立rhIL-12病毒灭活工艺,分析该工艺对产品的蛋白含量及比活性的影响,并分别以水疱性口炎病毒（vesicular stomatitis virus,VSV）和伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV）作为指示病毒,对该工艺进行病毒灭活效果验证。结果 纳米膜串联过滤病毒去除工艺中,蛋白回收率为95.14%,比活性为过滤前的95.12%,对rhIL-12活性基本无影响;当滤出液达90 ml时,PPV下降滴度均大于4 log10,符合《生物组织提取制品和真核细胞表达制品的病毒安全性评价技术审评一般原则》的要求。低pH孵放法病毒灭活工艺中,rhIL-12的蛋白含量在病毒灭活前后分别为359和338μg/ml,生物学活性分别为3.392伊106和3.356伊106IU,均无明显变化;室温处理180 min后,指示病毒PRV、VSV的下降滴度均跃4 log10,符合《生物组织提取制品和真核细胞表达制品的病毒安全性评价技术审评一般原则》的要求。结论 建立的rhIL-12膜过滤病毒去除工艺和低pH孵放法病毒灭活工艺均可有效地去除/灭活病毒,保证了产品的质量及安全性。胃酶消化马血浆工艺参数的优化
摘要：目的应用DOE试验优化破伤风抗毒素（tetanus antitoxin,TAT）生产中胃酶消化马血浆过程的工艺参数。方法以破伤风类毒素免疫后的马血浆为原料,通过AKTA avant25中UNICORN 6.0软件设计4因子2水平全因子DOE试验模型,并以抗体F（ab′）2含量为评价指标,对影响胃酶消化的主要因子即胃酶加量、消化反应pH值、反应温度和反应时间进行优化。结果胃酶消化马血浆的最适工艺参数为：胃酶加量为13~15 U/ml,消化反应pH值为3.0~3.1,反应温度为35~37℃,反应时间为90~120 min,在该条件下进行6次稳定性试验,制备的TAT抗体F（ab′）2含量平均值达83.1%,标准偏差为2.47%。结论 DOE试验优化了TAT生产中胃酶消化马血浆过程的工艺参数,建立了有效的消化工艺,为降低过敏反应,提高TAT制品的质量提供了实验依据。HCV疫苗临床试验的研究进展
摘要：丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV）感染可引起慢性肝炎,最终导致肝衰竭、肝硬化和肝癌。目前尚无有效的HCV疫苗,其治疗仍以标准化方案聚乙二醇干扰素联合利巴韦林为主。其疗程长,费用高,副作用大,且不能从根本上解决慢性尤其是难治性丙肝的治疗难题,因此,HCV疫苗的研究迫在眉睫。本文就HCV疫苗临床试验的研究进展作一综述。原位杂交试剂盒在临床诊断领域的应用
摘要：原位杂交（in situ hybridization,ISH）技术是用于细胞内检测和定位某一特定靶核苷酸的新兴分子诊断技术,随着荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）和显色原位杂交（chromogenic in situ hybridization,CISH）技术的问世和发展,其在灵敏度、特异性、实验室安全性等方面均有了较大进步,并逐渐开发出商品化的试剂盒,应用于微生物检测、产前诊断、肿瘤的鉴别诊断及个体化用药等多个领域。本文将对ISH技术的概况、特点及该类试剂盒在临床诊断中的应用作一综述。假单胞菌属合成环脂肽分子的研究进展
摘要：假单胞菌属合成的环脂肽是一类由脂肪酸和肽链组成、通过酯键成环、具有两亲性的分子。环脂肽有多种生理功能,除具表面活性外,还具有抗细菌、抗病毒、抗真菌、抑制肿瘤细胞等活性,可作为潜在的抗生素类药物被开发。本文就假单胞菌属所合成环脂肽的种类、功能和生物合成机制进行总结,同时对分子生物学、生物信息学等新兴学科技术结合传统分离鉴定技术在发现新型环脂肽类物质方面的运用作一综述。关于加强生物制品生产用胰酶质量控制的思考
摘要：采用细胞培养技术获得疫苗抗原成分或重组表达的目的蛋白,是当前世界各国生物制品普遍采用的生产方式。细胞培养过程中,通常使用适宜浓度的胰蛋白酶（简称胰酶）,将细胞从培养容器表面消化下来,进行细胞传代培养,或者将组织消化成含有单个细胞的悬液,再形成次代细胞。胰酶除了具有消化细胞的功能外,在某些病毒性疫苗生产过程中,如细胞培养制备的流感疫苗和轮状疫苗,往往在病毒增殖培养阶段加入适量的胰酶作用于病毒抗原,
