不同浓度配比的CpG ODN和Al（OH）3佐剂乙型肝炎疫苗的免疫原性
摘要：目的比较不同浓度配比的CpG ODN和Al（OH）3佐剂乙型肝炎疫苗的免疫原性。方法按乙肝表面抗原浓度为20μg/ml,分别加入3个浓度的Al（OH）3（300、400、500μg/ml）和CpG ODN（125、250、500μg/ml）佐剂,按不同配比制备9组不同佐剂浓度的疫苗样品,以不加CpG ODN佐剂的疫苗作为对照。将各组疫苗样品分别按1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256共5个稀释度稀释后,经腹腔免疫BALB/c小鼠,第5周检测血清中抗-HBs水平,计算抗体阳转率及半数有效量（ED50）;将各组疫苗样品分别于第0和28天经左前胫肌肉免疫BALB/c小鼠,分别于第1次免疫后第2、4、6、8、10周检测体液免疫应答水平,第5周检测细胞免疫应答水平。结果不同浓度CpG ODN和Al（OH）3的9组疫苗样品免疫小鼠后,ED50均小于0.2,对照组疫苗的ED50为0.235。不同浓度CpG ODN和Al（OH）3的9组疫苗样品小鼠血清抗体滴度均高于对照组,且抗体产生时间略提前;Al（OH）3浓度为400和500μg/ml时,疫苗诱导小鼠产生的抗体滴度与CpG ODN佐剂浓度呈正相关。对照组诱导产生的IFNγ水平均较其他疫苗组低;随着A1（OH）3浓度的升高,同一CpG ODN浓度的疫苗样品诱导IFNγ的水平逐渐下降;相同A1（OH）3浓度下,低浓度CpG ODN组斑点形成细胞数（spot-forming cell,SFC）均值较高,而高浓度组SFC均值较低。结论 A1（OH）3和CpG ODN作为双佐剂系统协同乙型肝炎疫苗,不仅能增强体液免疫应答,还能诱导IFNγ的表达,激活Th1细胞免疫应答,比传统A1（OH）3单佐剂乙型肝炎疫苗更具优势,其中CpG ODN和Al（OH）3浓度均为500μg/ml的疫苗制剂免疫原性最佳。壳聚糖-海藻酸钠包被的副溶血弧菌外膜蛋白K微球疫苗的制备及其口服免疫效果
摘要：目的制备壳聚糖-海藻酸钠包被的副溶血弧菌外膜蛋白（outer membrane protein,omp）K微球疫苗,并检测其对大黄鱼的口服免疫效果。方法采用乳化-离子交联法制备副溶血弧菌ompK微球疫苗,筛选表面活性剂司盘-80添加量及壳聚糖包被浓度,经正交试验优化微球疫苗的制备工艺,筛选微球疫苗的冻干保护剂。检测采用优化条件制备的微球疫苗的理化特性及其在不同条件下的释放特性,并将微球添加到饵料中,连续5 d投喂大黄鱼,第28天以副溶血弧菌zj2003攻击,检测口服微球疫苗的免疫保护率。结果最适司盘-80添加量为2%～4%,壳聚糖包被浓度为0.6%～0.7%;优化的微球疫苗制备条件为：抗原蛋白浓度10 mg/ml,海藻酸钠浓度1.0%,水油比1∶2,搅拌速度2 000 r/min;微球疫苗的最佳冻干保护剂为2%甘露醇;以优化的条件制备的微球圆整性、分散性好,平均直径为（1.91±1.02）μm,表现出酸性条件稳定、中性和弱碱性条件溶胀的特性;微球疫苗口服免疫的大黄鱼对副溶血弧菌zj2003攻击表现出中等程度的保护力。结论制备了壳聚糖-海藻酸钠包被的副溶血弧菌ompK微球疫苗,并验证了其口服免疫的有效性,为鱼类口服弧菌疫苗的研制及应用奠定了基础。柯萨奇病毒A组16型临床分离株的生物学特性分析
摘要：目的对引起手足口病（hand,foot and mouth disease,HFMD）的重要病原体柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus group A type16,CA16）临床分离株的生物学特性进行分析,为后续的疫苗研发奠定基础。方法从昆明地区HFMD临床疑似患者178份咽拭子及粪便标本中分离并鉴定CA16毒株,并对病毒的生长特性、蚀斑形态以及对乳鼠的致病性等生物学特性进行分析。结果共分离出7株CA16病毒：KM1、KM15、KM154、KM165、KM168、KM263、KM881,均属于B1亚型;病毒在Vero细胞上增殖较快,多数毒株4～6 d即可达到增殖高峰,但感染性滴度差别较大,最低为4.75 lgCCID50/ml,而最高可达7.78 lgCCID50/ml;各毒株在Vero细胞上培养相同时间形成的蚀斑形态不同,其中KM15、KM154、KM168蚀斑呈圆形,针尖样大小,边缘较清晰,KM1、KM881、KM263、KM165蚀斑较大,不规则,边缘较模糊;各毒株毒力均较强,经乳鼠颅内注射后,乳鼠均于3～6 d陆续开始发病,除KM168、KM154、KM15组乳鼠为不同程度的发病及死亡外,其他组乳鼠发病率及病毒致死性死亡率均达100%;各毒株对乳鼠的脑、心肌、肺、肌肉、脊髓和肝脏等组织均有不同程度的损伤,其中损伤较严重的组织为脑和肌肉。结论分离的CA16毒株对Vero细胞均具有良好的适应性,蚀斑清晰,毒力较强,且多数毒株感染性滴度较高,可用于CA16病毒致病机理的研究及疫苗的研发。3株我国狂犬病病毒街毒株在细胞和乳鼠脑内的培养及生长特性
摘要：目的比较3株来自我国不同地区的狂犬病病毒街毒株在细胞和乳鼠脑内的生长特性,为建立狂犬病病毒感染模型奠定基础。方法分别通过乳鼠脑内接种和细胞培养法进行连续传代,测定不同代次SXYQ、YN01和GDMMD57株狂犬病病毒街毒株的病毒滴度,计算半数细胞感染量（TCID50）。结果 SXYQ、YN01和GDMMD57株病毒乳鼠脑内接种传代至10代,病毒滴度随传代次数的增加,呈上升趋势,至第8代后,病毒滴度趋于稳定,分别为10^5.85、10^5.63和10^5.97 TCID50/g,不同毒株间病毒滴度存在差异。SXYQ、YN01和GDMMD57株病毒接种N2a细胞后,随着传代次数的增加,病毒对细胞的适应性不断增强,病毒滴度呈上升趋势,至第15代后,病毒滴度趋于稳定,不同毒株间病毒滴度存在差异;第20代SXYQ株病毒的滴度在感染后2.5 d达到峰值（10^6.80 TCID50/ml）,YN01和GDMMD57株病毒滴度在感染后3 d达到峰值（均为10^7.30 TCID50/ml）。结论 3株病毒在细胞和乳鼠脑内经连续传代后均能达到较高滴度,可用于狂犬病病毒感染模型的建立及新型疫苗的研究。抗人T细胞猪免疫球蛋白的有效期研究
摘要：目的研究低温乙醇法工艺生产的抗人T细胞猪免疫球蛋白的有效期。方法将3批经全面检定合格的抗人T细胞猪免疫球蛋白置（6±2）℃贮存36个月,分别于0、3、6、9、12、18、24、30、36个月取样,参考《中国药典》三部（2005版）中抗人T细胞猪免疫球蛋白检测方法和标准,对制品外观、pH值、纯度、蛋白含量、分子大小分布以及效价进行检定。将E玫瑰花环形成抑制试验及淋巴细胞毒试验的标示量与贮存时间结果导入Excel,使用6SQ统计加载项,进行一元线性回归,选择时间和预测区间的上或下限作散点图,在散点图中选择添加趋势线,如可观察到预测区间的上限值呈线性,可在趋势预测/回归分析类型中选择线性,获得拟合方程,将标示量带入方程中,计算获得有效期。结果根据E玫瑰花环形成抑制试验效价测定结果,理论推算在（6±2）℃条件下保存时,有效期可达41～100个月;根据淋巴细胞毒试验效价测定结果,理论推算在（6±2）℃条件下保存时,有效期可达47.9～64.3个月。结论初步确定抗人T细胞猪免疫球蛋白制品有效期为30个月。佛波酯对人单核白血病细胞THP-1中颗粒溶素表达的激活作用
摘要：目的探讨佛波酯（phorbol 12-myristate 13-acetatefor,PMA）对人单核白血病细胞THP-1中颗粒溶素（granulysin,GLS）表达的激活作用。方法分别用不同浓度的PMA（130、160、180 nmol/L）诱导THP-1细胞24 h,RT-PCR法检测细胞中GLS基因mRNA的转录,筛选PMA最佳诱导浓度;用PMA最佳诱导浓度分别诱导THP-1细胞12、24和48 h,RT-PCR法检测GLS基因mRNA的转录,筛选最佳诱导时间;用PMA最佳诱导浓度分别诱导THP-1细胞12、24、48和72 h,Western blot法检测GLS蛋白的表达,免疫细胞化学法检测48 h时GLS蛋白的表达。结果以160 nmol/L的PMA诱导THP-1细胞24 h,细胞中GLS基因mRNA的转录水平最高;诱导48 h后可检测到GLS蛋白大量表达。结论 PMA可激活THP-1细胞中GLS的表达,本实验为后续进一步研究GLS表达的调控机制奠定了基础。国产与进口MEM培养基培养MRC-5细胞效果的比较
摘要：目的对国产及进口MEM培养基培养MRC-5细胞的效果进行比较。方法用国产及进口MEM培养基培养37代MRC-5细胞,于显微镜下观察培养24、48、72 h后的细胞的生长情况,并对细胞在33~37代传代过程中的细胞活性进行检测;以0.008 MOI的Oka株水痘-带状疱疹病毒感染37代MRC-5细胞,观察细胞病变情况。结果国产及进口MEM培养基培养的37代MRC-5细胞,细胞形态、贴壁、伸展、牵手、成网、单层等生长情况均相似,细胞数量也无明显差异,均可使细胞保持较高的活力,两组间细胞存活率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;细胞病变均比较典型、广泛,病变程度均在70%以上,且细胞完整,未见明显撕裂现象。结论国产及进口MEM培养基均可满足MRC-5细胞的生长和病毒培养的宿主条件。水飞蓟宾与阿霉素联合作用对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响及其机制
摘要：目的探讨水飞蓟宾（silibinin）与阿霉素（doxorubicin）联合作用对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度的水飞蓟宾、阿霉素单独或联合作用SGC-7901细胞,采用MTT法检测细胞增殖的活力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡的变化;Western blot法检测细胞周期调控蛋白Cdk1、Cyclin B1和细胞凋亡调控蛋白pro-caspase 3、pro-caspase 8、pro-caspase 9、PARP、Fas、Fas L表达量的变化及Bcl-2/Bax的比例。结果 0.01μmol/L阿霉素联合水飞蓟宾（25、50、100、200μmol/L）作用SGC-7901细胞后,产生了明显的协同作用,联合作用指数（combined index,CI）分别为0.634、0.418、0.224、0.472,有效提高了细胞的抑制率,同时降低了Cdk1和Cyclin B1蛋白的表达量,引起细胞G2/M期阻滞;Fas和Fas L的表达量升高,pro-caspase 3/8/9的表达量降低,PARP被剪切,Bcl-2/Bax的比例降低,促使SGC-7901细胞凋亡。结论水飞蓟宾与阿霉素联合作用SGC-7901细胞后,水飞蓟宾能有效降低阿霉素的使用浓度,并提升其诱导凋亡的效果。人源化抗CD20单克隆抗体的理化性质及结晶条件的筛选
摘要：目的分析人源化抗CD20单克隆抗体的理化性质,并初步筛选其结晶条件。方法分别采用还原、非还原SDS-PAGE及高效液相体积排阻色谱（size exclusive chromatography-HPLC,SEC-HPLC）法检测抗体纯度;还原SDSPAGE测定抗体轻重链相对分子质量;毛细管电泳测定抗体等电点;高效液相阳离子交换色谱（ion exchange chromatographyHPLC,IEC-HPLC）法检测抗体电荷异质体含量;悬滴气相扩散法初步筛选抗体的结晶条件。结果人源化抗CD20单克隆抗体的非还原SDS-PAGE纯度为100%,还原SDS-PAGE纯度（轻链＋重链）为100%,重链、轻链相对分子质量分别为58 000和27 000,SFC-HPLC纯度为99.2%;等电点为9.2;抗体表面电荷分布较均一;得到的蛋白晶体为孪晶,分辨率约为8埃。结论该抗体的纯度达到结晶要求,以其理化性质为基础,初步筛选出了结晶条件,为其结构和功能的研究奠定了基础。高效价抗肠道病毒71型兔血清的制备及鉴定
摘要：目的制备高效价的抗肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）兔血清。方法分别用RD细胞和Vero细胞培养EV71,纯化后,将经甲醛灭活和未灭活的EV71抗原分别加入佐剂或不加佐剂,经不同途径（肌肉、皮下、腹腔）免疫家兔,每周采血,分离血清,分别采用ELISA、免疫双扩散、免疫荧光和中和抗体试验检测兔血清抗体效价,并分析不同方法检测兔血清抗体结果的相关性。结果未灭活和灭活的纯化EV71抗原加弗氏佐剂后,经皮下或肌肉途径免疫家兔均可获得高效价的抗EV71兔血清,其中加弗氏佐剂的灭活疫苗经皮下途径免疫获得了最高滴度的中和抗体;当抗血清ELISA效价达到或接近1∶10^8,免疫双扩散效价达到或接近1∶512,抗血清1∶2 000稀释后荧光强度〉荻时,可进行免疫家兔的全血采集;不同方法免疫家兔全血采集的血清中和抗体效价为29 406～1 280 652 U/0.2 ml;免疫双扩散检测与中和抗体和免疫荧光检测结果的相关性较高。结论获得了高效价的抗EV71兔血清,为EV71疫苗抗原的相关检定创造了条件。2012年北京市顺义区常住人口麻疹抗体水平的调查分析
摘要：目的了解北京市顺义区常住人口麻疹抗体水平。方法选择2012年在北京市顺义区连续居住6个月以上的11个年龄组人群作为调查对象,共243名。采用调查问卷,收集调查对象的人口学特征、麻疹患病史、含麻疹成分疫苗免疫史,并采用ELISA法检测研究对象麻疹抗体水平。结果调查对象麻疹抗体阳性率为83.13%（202/243）,抗体水平中位数为939.23 IU/L。男性与女性的麻疹抗体阳性率、抗体水平以及本市人口与流动人口麻疹抗体阳性率、抗体水平差异均无统计学意义（P均〉0.05）;有免疫史者与无免疫史者和免疫史不详者间,麻疹抗体阳性率及抗体水平差异均有统计学意义（P均〈0.05）,有免疫史者抗体水平高于无免疫史者和免疫史不详者。本市和流动人口麻疹抗体阳性率均以8～11月龄最低,分别为37.50%、14.29%;均以0～7月龄、1～4岁、5～9岁、35～39岁组最高,为100%,其中15～19、20～24、25～29和30～34岁组流动人口麻疹抗体阳性率均高于本市人口,差异有统计学意义（P均〈0.05）。本市和流动人口麻疹抗体水平中位数均以0～7月龄最低,分别为72.51、96.07 IU/L;最高的年龄组本市人口为8～11月龄（3 940.12 IU/L）,流动人口为30～34岁组（3 661.33 IU/L）,其中25～29、30～34、35～39岁组流动人口麻疹抗体水平中位数高于本市人口,差异有统计学意义（P均〈0.05）,1～4岁组本市人口麻疹抗体水平中位数高于流动人口,差异有统计学意义（P〈0.05）。本市和流动人口共调查≤14岁儿童93名,81.72%的人曾接种过含麻疹成分疫苗,接种1、2、3剂次及以上疫苗的人群,麻疹抗体阳性率在92.61%～100%之间,差异无统计学意义（P〉0.05）,抗体水平中位数差异无统计学意义（P〉0.05）。但本市儿童不同免疫剂次间麻疹抗体阳性率、抗体水平中位数差异有统计学意义（P均〈0.05）。结论北京市顺义区常住人口中,应用Logistic回归与多因子降维法分析胃癌易感基因多态性
摘要：目的应用Logistic回归与多因子降维法（multifactor dimensionality reduction,MDR）分析胃癌易感基因多态性,为胃癌的早期诊断和预警奠定基础。方法采用病例-对照研究,以中国西北476例汉族胃癌患者为病例组,361名非肿瘤、非消化系统疾病个体为对照组;通过候选基因策略,应用MassARRAY质谱平台分析与代谢、炎症相关的18个基因的37个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）位点;利用Logistic回归与MDR对基因分型结果进行分析。结果 Logistic回归分析显示,磷脂酶Cε1（phospholipase C epsilon 1,PLCE1）_rs3765524[OR=1.341,95%CI（1.003,1.792）]、还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ醌氧化还原酶1[NAD（P）H：quinone oxidoreductase 1,NQO1]_rs1800566[OR=0.615,95%CI（0.418,0.903）]、X线修复交叉互补基因1（X ray repair cross complementing gene 1,XRCC1）_rs25487[OR=0.688,95%CI（0.490,0.967）]3个SNP位点的基因型分布与胃癌易感性显著相关（P〈0.05）;MDR分析显示,PSCA_rs10216533-XRCC1_rs25487[模型Ⅰ：OR=3.566,95%CI（2.614,4.863）]、MTHFR_rs1801131-PSCA_rs2976392-CYP17A1_rs6163-CYP19A1_rs4646-CYP19A1_rs1902586-MMP2_rs243865[模型Ⅱ：OR=7.257,95%CI（5.337,9.870）]、IL1B_rs16944-PSCA_rs10216533-CYP17A1_rs6163-NQO1_rs1800566-ENOSF1_rs2298581-XRCC1_rs25487[模型Ⅲ：OR=15.837,95%CI（11.252,22.289）]3个模型内部各位点之间具有显著交互作用（P〈0.000 1）。结论 PLCE1、NQO1、XRCC1、PSCA、MTHFR、CYP17A1、CYP19A1、MMP2、IL1B、ENOSF1等基因多态性与我国西北地区汉族人群胃癌发病风险相关;在胃癌的早期诊断与预警中应联合Logistic回归和MDR等方法,兼顾单因素与多因素交互的影响进行综合分析。2010～2012年天津市宁河县百日咳流行特征及直接经济负担分析
摘要：目的分析2010年1月1日～2012年12月31日天津市宁河县百日咳流行病学特征及病例直接花费情况,为下一步预防和控制百日咳提供参考依据。方法利用描述流行病学方法,采用Excel 2003对2010年1月1日～2012年12月31日天津市法定传染病报告系统百日咳个案调查资料进行统计学分析,利用天津市疾病预防控制中心设计的＂百日咳病例疾病负担调查表＂中数据分析病例花费情况。结果 2010～2012年天津市宁河县共报告16例百日咳,平均发病率为1.28/10万;夏秋季高发,6～10月的病例占81.2%;87.5%的病例发生在农村地区;发病年龄最小的为1月龄,最大的为28岁,〈1岁的病例占62.5%,发病率明显高于大龄儿童及成人;16例百日咳中,5例有免疫史,7例未到接种月龄,4例无免疫史;发病至初次就诊时间间隔中位数为13 d;11例为实验室诊断病例,5例为临床诊断病例,临床表现以痉挛性咳嗽、呕吐、口唇青紫等为主,有5例合并支气管肺炎;共有12例住院病例,二、三级医疗机构各6例,住院病例平均花费8 846元。结论农村地区百日咳发病率较高,应提高免疫服务质量并加强百日咳预防知识的宣传。婴幼儿监护人如有咳嗽等相关症状应积极就诊,降低病原传播风险。应加强百日咳的预防和控制,以减轻家庭的经济负担。Vero细胞培养流感病毒的低血清培养基的筛选
摘要：目的筛选Vero细胞生长的最适低血清培养基,用于流感病毒的细胞培养。方法分别以MEM、M199、DMEM/F12、DMEM/F12与MEM混合物（1∶1）为基础培养基,添加5%、2%、1%的小牛血清传代培养Vero细胞,通过细胞形态观察、细胞计数及MTT法检测细胞的增殖活力筛选最适基础培养基;将流感病毒接种低血清适应的Vero细胞,检测病毒收获液的血凝效价及残留BSA含量,电子显微镜观察病毒形态。结果以DMEM/F12与MEM混合物（1∶1）为基础培养基,添加2%小牛血清培养的Vero细胞长势良好,细胞数量较多,增殖活力最强。低血清适应的Vero细胞培养的流感病毒血凝效价最高可达1∶512,平均值为1∶384;病毒液中的残留BSA含量约为正常血清培养条件下的1/18;病毒形态完整。结论成功筛选出Vero细胞培养流感病毒的低血清培养基,为更具生物安全性的流感疫苗的研发奠定了基础。盐析法与低温乙醇法制备抗人T细胞猪免疫球蛋白工艺的对比
摘要：目的两种常用抗人T细胞猪免疫球蛋白（anti-human T lymphocyte porcine immunoglobulin）制备工艺的对比。方法以人T淋巴细胞免疫的健康猪血浆为原料,采用硫酸铵-Sephadex A-50和Cohn低温乙醇法,经醛化人健康红细胞、醛化人胎盘渣及混合人血浆吸收后,制备抗人T细胞猪免疫球蛋白,参考《中国药典》三部（2010版）相关附录,进行中间品及成品检定。结果用硫酸铵盐析法与低温乙醇法连续分别制备了3批产品,每批投浆量约5 000 ml;3批中间品鉴别试验及3批成品检定结果均符合《中国药典》三部（2010版）相关要求,两种工艺方法均适用于制备抗人T细胞猪免疫球蛋白,但在质量和收获率上,低温乙醇法更具优势。结论低温乙醇法制备抗人T细胞猪免疫球蛋白更适用于生产。应用于抗体药物捕获的耐碱亲和层析介质性能的比较
摘要：目的比较应用于抗体药物捕获的耐碱的4种蛋白A亲和层析介质和2种小分子亲和层析介质的性能,为单抗纯化工艺的选择提供参考。方法利用两种单抗纯品（mAb1和mAb2）测定4种蛋白A亲和层析介质MabSelectSuRe、POROS MabCaptureA、Absolute High Cap、TOYOPEARL AF-rProtein A-650F和2种小分子亲和层析介质Mabsorbent A2P HF、Fabsorbent F1P HF在停留时间分别为4、6、8 min时的动态载量;利用含mAb2的发酵液,从回收率和杂质去除方面比较6种亲和层析介质的纯化效果。结果在5%穿透点,各介质对mAb1和mAb2的动态载量在35～73 g/L之间。小分子亲和层析介质Mabsorbent A2P HF纯化mAb2的回收率为89%,其他5种介质纯化mAb2的回收率均≥96%;6种介质纯化mAb2的宿主细胞蛋白（host cell protein,HCP）在2 000 ppm之内,蛋白A残留量在20 ppm之内。结论结合流速、动态载量、回收率和杂质去除效果等指标,可从6种亲和层析介质中挑选适用于抗体类药物下游纯化工艺的耐碱型蛋白A或小分子亲和介质。荧光偏振法测定融合蛋白制剂中聚山梨醇酯20的含量
摘要：目的建立测定融合蛋白制剂中聚山梨醇酯20（Tween 20）含量的荧光偏振检测方法,并进行验证。方法利用疏水性荧光染料DAF（5-dodecanoylaminofluorescein）与Tween 20胶束内的非极性核心结合,在485 nm激发波长下产生的荧光偏振强度与溶液中胶束浓度呈正相关,来确定样品中的Tween 20浓度。对建立的方法进行专属性、准确性、精密性、拟合度验证。结果该方法的专属性较好,可排除检测体系中蛋白的干扰;该方法重复检测3次高（250μg/ml）、中（150μg/ml）、低（50μg/ml）、定量下限（lower limit of quantitation,LLOQ,25μg/ml）浓度样品的平均回收率均在（100±20）%的可接受范围内,批内和批间变异系数均小于15%;标准曲线拟合度良好。结论立的荧光偏振法专属性、准确性、精密性良好,可用于蛋白制剂中Tween 20含量的测定,并适用于稳定性考察过程中Tween 20有效浓度的监测。常规PCR法快速鉴别不同种属来源的粗品肝素钠
摘要：目的采用常规PCR法快速鉴别不同种属来源的粗品肝素钠。方法通过柱回收和胶回收两步回收法,从粗品肝素钠中提取动物残留核酸,以其为模板,通过常规PCR法进行种属来源的鉴定。分别以猪、羊来源的核酸为模板,用3种种属特异性引物（猪、羊1、羊2）进行PCR扩增,验证引物的特异性;对柱回收、胶回收和两步回收法提取的核酸样品及含不同比例（1%、5%、10%、15%）羊来源肝素钠的混合样品进行PCR检测;并检测3批次肝素钠样品的种属来源。结果猪的引物能特异性扩增猪来源的核酸,羊的引物能特异性扩增羊来源的核酸;采用单一胶回收和柱回收法提取的残留核酸,不能有效地利用常规PCR鉴定种属来源,而两步回收法提取的残留核酸,能有效地利用常规PCR鉴定种属来源;采用两步回收法提取核酸,可检测到含1%羊来源肝素钠的混合样品;3批次的肝素钠样品中均混有羊肝素钠。结论常规PCR法操作简便迅速,成本较低,可用于不同种属来源的粗品肝素钠的定性检测。
