磷转运蛋白基因TaPHT2;1在染色体上定位及对小麦磷素吸收和利用效率的影响
摘要：【目的】以中国春遗传背景的整套B染色体双端体为材料，鉴定磷转运蛋白基因TaPHT2;1，的染色体定位特征。解析不同供磷水平下，上述材料和不同磷利用效率小麦品种该基因的表达特征及其与植株干物质生产能力和磷效率特征的联系。【方法】采用溶液培养法水培中国春（CS）及该品种遗传背景的整套B染色体组双端体和不同磷效率小麦品种材料。以B染色体组供试端体为材料进行TaPHT2;1 PCR扩增，鉴定TaPHT2;1在染色体上的定位。采用半定量RT—PCR及qRT-PCR技术分析B染色体组供试端体和小麦品种TaPHT2;1的表达水平。采用常规分析技术，测定供试材料单株干重和磷吸收参数。【结果】①PCR检测发现，在CS及所有供试B染色体组双端体材料中，除缺失1B长臂的1BS外，其它所有材料均能特异扩增出目标基因TaPHT2;1，表明TaPHT2;1，定位在1B长臂。②丰、缺磷条件下，乃册』在cs及除1BS外双端体根、叶中的表达均表现为叶片优势表达特征，且在叶片中表达受到低磷胁迫的诱导。乃鹏J在根系中的表达不受低磷逆境调控。表明厅职J在介导丰磷下磷素吸收、转运及增强低磷下植株体内磷素再度调运中可能发挥重要功能。③丰磷条件下，与CS相比，1BS的单株干重和全磷含量显著降低；缺磷条件下，1BS的单株干重与CS相比也显著下降，但全磷含量增加。表明位于1B染色体长臂后的磷转运蛋白基因乃职，对丰、缺磷条件下的植株磷素吸收、转运具有较大影响，进一步对不同供磷水平下的植株干重产生重要调控效应。④丰磷条件下，与CS相比，1BS的单株磷累积量显著增加，磷利用效率没有改变；缺磷条件下，与CS相比，1BS的单株磷累积量没有变化，磷利用效率显著降低。不同磷利用效率品种相比，丰磷条件下，随着品种磷利用效率提高，叶片中TaPHT2;1的表达水平、单�紫花苜蓿盐诱导HD-ZiP类转录因子MsHB2的克隆及功能分析
摘要：【目的】在已有的一条紫花苜蓿（Medicago Sativa L．CV．Zhongmu-1）盐诱导未知基因的EST序列基础上，克隆其（MsHB2）全长序列并分析其功能，以进一步了解其在紫花苜蓿中的耐盐调控机理。【方法】以先前获得的EST序列为基础设计引物，使用RACE法从紫花苜蓿中克隆得到MsHB2的Y和5’末端序列，经DNAMAN软件拼接后得到其全长序列。使用多种生物信息学软件对MsHB7的开放阅读框，编码蛋白等电点、分子量、疏水性、亚细胞定位、进化关系等进行预测分析。构建MsHB2的亚细胞定位瞬时表达载体，使用基因枪转化法将MsHB2与GFF在洋葱表皮细胞中融合瞬时表达并观察其亚细胞定位荧光信号。将生长30d的中苜一号分别进行300mmol-L^-1NaCI和0．1mmol·L^-1ABA胁迫处理，取胁迫处理0、2、4、10、24h后的根和茎叶组织提取总RNA并进行荧光定量PCR分析。构建了MsHB2的植物超表达载体，转化农杆菌GV3101菌株，使用农杆菌花序侵染法转化拟南芥并在盐胁迫条件下对转基因株系进行相关表型分析。【结果】将RACE法克隆得到MsHB2的3’和S＇末端序列拼接后得到1126bp的全长序列，序列分析表明，其编码蛋白包含247个氨基酸，具有一个同源异型结构域和一个亮氨酸拉链结构域，与拟南芥HD—zip第1类转录因子ATHB12具有较高相似性。进化树聚类分析表明MsHB2属于第1类同源异型域亮氨酸拉链蛋白。洋葱亚细胞定位分析表明MsHB2定位于细胞核。转录水平表达分析表明MsHB2受300mmol·L^-1 NaCl和0．1mmol.L^-1。ABA胁迫诱导而表达量显著升高。转基因研究表明在NaCI和ABA胁迫下，过量表达MsHB2的转基因拟南芥表现比野生型拟南芥更敏感。【结论】从紫花苜蓿中克隆得到一个定位于细胞核的同源异型域亮氨酸拉链蛋白基因MsHB2，其在紫花苜蓿中受NaCl和ABA胁迫诱导，并在NaCI和ABA胁迫条件下抑制转基因拟�不同抗旱性花生品种的叶片形态及生理特性
摘要：【目的】筛选叶片抗旱相关性状，探索性状指标大小的评价方法，揭示不同抗旱性花生品种抗旱的叶片形态及生理机制。【方法】以12个花生品种为试验材料，在人工控水条件下，于苗期及结荚期给予干旱胁迫及正常灌水对照2个土壤水分处理，苗期处理以盆栽种植方式进行，称重法控水，结荚期处理在池栽条件下进行，测墒补灌法控水，控水期间以电动防雨棚遮雨。测定苗期干旱及正常供水对照的叶片组织结构、厚度、比叶重、叶面积、光合速率、叶绿素含量等叶片性状指标，对比分析上述叶片性状与花生品种抗旱性的关系，以性状指标大小评价不同花生品种抗旱的叶片机制，以生物量抗旱系数评价苗期抗旱性，以收获期产量抗旱系数评价结荚期抗旱性。【结果】通过2年的试验发现，干旱胁迫下，不同花生品种生物量抗旱系数及产量抗旱系数有显著差异，苗期与结荚期抗旱性基本一致。根据产量抗旱系数可将12个花生品种抗旱性分为强、中、弱3级，抗旱性强的品种为A596、山花11号、如皋西洋生，花育20号、农大818、海花1号、山花9号和79266为中度抗旱品种，抗旱性弱的品种有ICG6848、白沙1016、花17和蓬莱一窝猴。干旱胁迫改变了叶片组织结构，降低了单株叶面积、功能叶面积、气孔导度、光合速率和蒸腾速率，增加了比叶重。不同抗旱性花生品种叶片性状有显著差异，抗旱性强的品种在对照及干旱胁迫下均具有较高的叶片厚度、栅／海比、比叶重、单株叶面积、光合速率。干旱胁迫下，较大的叶片栅／海比值、比叶重和光合速率是如皋西洋生和山花11号抗旱的叶片机制；山花9号与花育20号较大的单株光合面积，A596较大的光合速率是它们重要的抗旱机制。相关分析表明，干旱胁迫下的叶片栅／海比、比叶重、单株叶面积和光合速干旱胁迫对持绿性高粱光合特性和内源激素ABA、CTK含量的影响
摘要：【目的】研究干旱胁迫对不同持绿性高梁光合特性以及叶片和根系中内源激素含量的影响，为高粱持绿性资源的发掘和应用提供理论依据。【方法】采用盆栽试验的方法，选用持绿性高梁B35和非持绿性高梁三尺三为试验材料，设置无干旱胁迫（土壤含水量为田间最大持水量的75％-80％）和干旱胁迫两种水分处理（土壤含水量为田间最大持水量的45％-50％），分别在开花期和灌浆期进行干旱胁迫，研究干旱胁迫下不同持绿性高梁光合作用、叶绿素荧光特性以及叶片和根系中内源激素（脱落酸和细胞分裂素）含量的变化，并分析干旱胁迫下叶片和根系中内源激素含量的动态平衡以及叶片中内源激素含量与光合特性参数间的相关性。【结果】开花期和灌浆期干旱胁迫均抑制了不同持绿性高粱的光合作用，但干旱胁迫下B35的叶绿素含量（chl）、光合速率（Pn）、气孔导度（Gs）、光系统II（PsII）的初始叶绿素荧光（F0）、最大光化学效率（Fv／Fm）、光化学淬灭系数（qL）以及电子传递速率（ETR）的降低幅度均明显小于三尺三；且在灌浆期三尺三Chl的衰减程度更为明显，Pn的下降程度也更大。同时，干旱胁迫使三尺三在灌浆期PsII反应中心结构受到了损害或失活。开花期和灌浆期干旱胁迫提高了不同持绿性高粱根系和叶片中脱落酸（ABA）的含量，B35叶片和根系中ABA含量的增幅显著高于三尺三，且在灌浆期的增幅更大；干旱胁迫降低了不同持绿性高梁根系和叶片中细胞分裂素（CTK）的含量，三尺三根系和叶片中CTK含量的降低程度明显高于B35，且在灌浆期减幅更大。B35和三尺三叶片中ABA的含量高于根系，CTK的含量低于棍系；干旱胁迫降低了叶片和根系中CTK／ABA的比值，并且在开花期和灌浆期B35的降低程度均大于三尺三。A台A含量与Pn呈显著负相关水稻基腐病菌HrpX／HrpY在致病性中的功能分析
摘要：【目的】由Dickeyazeae5I起的水稻基腐病是水稻上重要细菌病害之一，迄今对该病原细菌的致病性调控研究尚不完善。论文旨在分析水稻基腐病菌（Diokeyazeae）双组分调控系统HrpX／HrpY的序列特征，研究该系统在水稻基腐细菌中的功能作用以及与下游基因的调控关系。【方法】对HrpX／HrpY序列进行生物信息学分析，构建带有反向筛选标记基因scab的自杀重组质粒pKNG-AhrpX和pKNG-AhrpL通过三亲转化方法分别将重组质粒导入野生型菌株ECl中，通过2次等位基因同源重组筛选获得基因缺失突变体AhrpX和AbzpY,比较突变体与野生菌的生长速率、胞外酶活性、毒素活性、运动性、菌膜形成能力，以及对水稻的致病性和对烟草的过敏性反应（HR）；进一步提取细菌总RNA，采用实时荧光定量PCR研究HrpX／HrpY双组分系统对下游基因表达量的影响。【结果】水稻基腐病菌ECl基因组中，hrpX和hrpY均为单拷贝，hrpX编码区长1473bp，编码490个氨基酸，hrpY长642bp，编码213个氨基酸，hrpX和五印，两者之间相隔32bp，具有相同的转录方向，在功能上具有相关性。其中，HrpX是一个结合在膜上的组氨酸蛋白激酶，HrpY是存在细胞质中的效应调节蛋白，HrpX／HrpY两者构成双组分系统，并对下游hrp基因的表达具有调控作用。进一步通过遗传操作手段，成功构建了基因缺失突变体AhrpX和AhrpY,表型测定结果表明，突变体AhrpX和AhrpY的运动性减弱、菌膜形成能力降低、对水稻种子萌发的抑制作用减弱，且降低了对水稻的致病力，但AhrpX和AhrpY的生长速率、胞外酶和毒素的活性变化不明显，也不影响其在烟草上的HR。实时荧光定量PCR结果显示，突变体菌株AhrpX和AhrpY相对野生菌ECl表达量明显下降的基因有hrpA、hrpF和hrpN,而对毒素合成基因zmsA表达量的差异不明显，HrpX／HrpY双组分系统对hrp基因簇中大部分�寒地稻田土壤氮素矿化特征的研究
摘要：【目的】土壤供氮能力是影响稻田氮效率的主要指标之一，寒地稻田与南方稻田相比具有氮肥用量低和氮素利用效率高的特点，通过比较南北方稻田土壤供氮能力的差异，以期揭示土壤氮素矿化与寒地稻田氮素高效利用的关系。【方法】选择江苏省高肥力的乌栅土和中等肥力勤沙土，以及黑龙江三江平原高中肥力白浆土型水稻土，采用淹水密闭培养法，在25℃、30℃和40℃条件下恒温培养28d，测定培养前后土壤铵态氮的含量，并分析土壤有机质、全氮和有机氮各组分的含量；通过一级动力学模型和有效积温模型拟合土壤氮素矿化与培养时间的关系。【结果】南方高中肥力土壤酸解氮、氨基酸态氮占土壤全氮比例均高于北方高中肥力土壤，北方稻田土壤碳氮比较高。在25℃培养28d，南方和北方高肥力土壤间，以及中等肥力土壤间累积矿化氮量无明显差异。当温度为40℃时，南方高肥力和中等肥力土壤28d累积矿化氮显著高于对应肥力的北方土壤。这与南方土壤有机氮含量或者有机氮所占比例较高有关。One-p001模型拟合显示，在25℃时北方土壤矿化势（N。）比对应肥力南方土壤增加了35．9％一36．3％；当温度为30℃和40℃时，北方土壤与南方对应肥力土壤相比No降低了6．1％一32．7％和20．9％一36．7％。北方土壤微生物不耐高温，是其40℃矿化势较低的原因。有效积温模型拟合显示，随温度增加同一土壤氮矿化特征常数n值逐渐减小；南方土壤的氮矿化特征常数K值较高，而北方土壤n值高，表示南方中高肥力土壤的初期矿化速率高，而北方中高肥力土壤后期矿化速率高。【结论】土壤矿化氮含量和矿化势受土壤微生物活性、土壤碳氮比、土壤有机氮含量及其占全氮的比例影响，25℃下北方稻田土壤可矿化氮量较高，而且相对南方稻田土壤而�粗糙集理论在土壤肥力评价指标权重确定中的应用
摘要：【目的】土壤肥力是土壤诸多基本特性的综合反映，科学、合理、实用地评价土地肥力将为指导农业生产、土地利用规划和管理提供理论依据。其评价过程是一个无决策属性的多属性决策过程，而解决多属性决策问题的重要前提是各属性权重分配问题。【方法】确定指标权重的方法主要有主观赋权法和客观赋权法，然而，主观赋权法往往需要大量的先验知识，评价结果有一定的主观随意性，而且较少考虑评价指标之间的依赖关系；客观赋权法没有充分考虑到各参评因素对评价的重要度不同，统计数据有相关性也并不意味着两个事件具有因果联系。综合考虑主、客观赋权法各自的优缺点，利用粗糙集理论中知识约简和相对正域理论在消除冗余信息和处理不确定性信息等方面的优势，探究土壤肥力评价过程中一种主观和客观相结合的权重确定方法，并利用作物产量对评价结果进行验证。【结果】粗糙集理论在土壤肥力评价中的具体赋权思路包括：数据的离散化、土壤肥力综合等级的初步确定、属性值约简、等价类划分、属性重要度的计算和指标权重计算等步骤。以北京大兴区农田土壤样点的肥力评价对上述赋权思路进行实例分析，对比传统特尔斐法和粗糙集理论赋权结果发现，特尔斐法确定的土壤有机质、全氮、有效磷和速效钾等指标的权重分别为0．300、0．250、0．250和0．200，利用其评价得到的土壤综合肥力指数（IFI）与产量显著线性相关，R^2为0．77，均方根误差（RMSE）为1．25；而粗糙集理论确定的土壤有机质、全氮、有效磷和速效钾等指标的权重依次为0．455、0．111、0．111和0．333，利用其评价得到的IFI与产量也显著线性相关，斤达0．83，RMSE为1．09，精度均较特尔斐法有了提高，其中RMSE相对精度提高值达12．80％。【结论】�生姜种质遗传多样性和亲缘关系的SRAP分析
摘要：【目的】生姜为无性繁殖作物，千百年来，在经历气候变迁、自然选择和人工选择过程中，其生物学性状呈现出多方面变异，造就了许多地方品种。因此，研究生姜种质资源的遗传多样性及亲关系，对生姜资源进行科学分类，为生姜种质的收集、保护和创新利用提供理论依据。【方法】采用CTAB法提取生姜幼叶基因组DNA，利用SRAP（相关序列扩增多态性，sequence-related amplified polymorphiSill）分子标记技术，对来源于世界不同地区的51份生姜种质的基因组DNA进行多态性扩增，PCR产物采用6％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，采用银染法显色。根据电泳结果得到“0，1”矩阵，利用POPGENEversionl．32软件计算每对BI物的多态性位点数、多态性位点百分率，以及有效等位基因数Ne、Nei’S遗传相似系数（GS）、遗传距离（GD）、Nei’S遗传多样性指数、Shannon信息指数等指标，并采用NTSYSversion2．1Oe软件进行种质问的UPGMA（非加权组平均法，unweightedpair-groupmethod）聚类分析和基于Nei’S遗传距离的组群间的聚类分析，对生姜资源进行分类；同时，根据不同生态区之间生姜种质资源的遗传多样性和亲关系，结合植物起源中心相关特性及历史记载，探讨生姜的起源与传播。【结果】筛选出的15对5I物共扩增出305条带，其中188条为多态性条带，多态性比率为61．68％，平均每对引物扩增出20．33个位点和12．53个多态性位点，说明生姜的遗传变异较为广泛。51份生姜种质的Nei’S遗传多样性指数、Shannon信息指数平均值分别为0．3689、0．5510，据此可将生姜种质分为3个大类、9个亚类，分析比较发现，每一类的生姜多来源于相同或相近区域。进一步研究表明，7个不同地理来源群体的Shannon信息指数范围是0．2901—0．4807，在遗传相似系数为0．9时，可将7个群体分为4类，华北群�‘乔纳金’苹果及其脆肉芽变果实质地发育机理
摘要：[目的]研究‘乔纳金’苹果及其脆肉芽变果实发育后期硬度与脆度的变化、果实香气成分含量以及果实软化相关基因的表达差异，旨在为全面认识该脆肉芽变的发育机理提供科学依据，并为进一步丰富苹果果实质地品质发育的理论体系提供基本资料。【方法】以‘乔纳金’苹果及其脆肉芽变苹果发育后期的果实为试材，检测果实硬度、脆度、香气成分含量以及乙烯生物合成基因ACO．ACS和果实软化有关基因PG、PME，β-Gal．α-L-Af．XET．AM．LOX及β-xy1的表达量。【结果】‘乔纳金’苹果及其脆肉芽变果实发育后期的果实硬度与脆度整体均呈下降趋势，其中在采前50-35d有个快速下降过程，但脆肉芽变的果实硬度与脆度均显著高于‘乔纳金’；‘乔纳金’苹果酯类化合物的种类数与含量分别是其脆肉芽变的1．5倍和1．2倍，而醇类和醛类化合物含量分别仅是其脆肉芽变的15．1％和14．3％；‘乔纳金’苹果ACO基因表达量前后变化很大，在花后120d有一个明显的表达峰，花后113-120d表达量（2995．8）占总表达量（3039．6）的98．6％，而‘乔纳金’硬肉芽变果实ACS和ACO基因表达量前后变化不大，总表达量仅分别相当于‘乔纳金’的73．9％和1．1％，且表达峰均滞后于‘乔纳金’；‘乔纳金’苹果彤及XgT等6个基因在花后113-120d表达量均占总表达量的35％以上，是引起‘乔纳金’苹果果实硬度与脆度快速下降的主要原因，而‘乔纳金’脆肉芽变果实参试的12个基因总表达量（1021．9）仅是‘乔纳金’（4399．1）的23．2％，其中PG．α-L-Af．XET和β-Gal等4个基因表达量分别是‘乔纳金’的12．5％、62．7％、72．6％和75．3％。【结论】‘乔纳金’苹果酯类成分种类多、含量高，而脆肉芽变醇类和醛类成分种类多、含量高；两份材料果实发育后期果实硬度和脆度的差氧化羊骨油对羊肉味调味基料挥发性风味物质的影响
摘要：【目的】确定添加适度氧化的羊骨油对热反应型羊肉味调味基料挥发性风味物质的影响，为高品质羊肉味调味基料风味的开发提供理论依据。【方法】评价以过氧化值、酸价和茴香胺值表征的氧化羊骨油对调味基料挥发性风味物质的影响，利用Pen3型电子鼻对不添加羊骨油、添加未氧化羊骨油和添加适度氧化羊骨油的3个热反应体系进行研究，以电子鼻主成分分析中的区分指数作为检测指标，确定3个热反应体系的区分度；应用固相微萃取-气质联用技术分离鉴定基料的挥发性风味物质，通过“相对气味活度值（ROAV）”评价各挥发性风味物质对调味基料总体风味的贡献，并结合聚类分析方法，确定添加氧化羊骨油后羊肉味调味基料的关键挥发性风味物质。【结果】电子鼻结果显示，未添加羊骨油与添加未氧化羊骨油的调味基料间区别指数为0．589，未添加羊骨油与添加氧化羊骨油的调味基料间区分指数为0．917，添加未氧化羊骨油与添加氧化羊骨油的调味基料间区分指数为0．787。气质联用结果显示，不添加羊骨油、添加未氧化羊骨油和添加适度氧化羊骨油的3组调味基料中挥发性风味物质的种类分别为42种、63种和61种，主要为醛类、烃类；在添加未氧化羊骨油组和添加氧化羊骨油组中，含硫、含氮杂环化合物的相对含量差异不显著，而对调味料风味改善贡献较小的烃类物质相对含量显著降低，同时醛类物质的相对含量显著增加，添加羊骨油尤其是氧化羊骨油可使热反应体系生成更多的醛类挥发性风味物质；确定3组调味基料中关键挥发性物质（ROAV〉1）有11种：辛醛、壬醛、癸醛、反，反-2，4-癸二烯醛、桃醛、庚醛、反-2-壬烯醛、十二醛、卜辛烯-3-醇、庚醇、反，反-2，4-壬二烯醛，这些关键挥发性物质主要以脂肪香气为主，并包含甜�基于DGGE和T-RFLP分析采食不同粗饲料梅花鹿瘤胃细菌区系
摘要：【目的】细菌区系在梅花鹿（Cervus nippon）瘤胃发酵中发挥着重要作用，然而有关梅花鹿瘤胃细菌区系的研究鲜有报道。研究梅花鹿瘤胃细菌区系，为梅花鹿瘤胃发酵调控提供分子生物学依据。[方法]选取4头2岁龄的装有永久性瘤胃瘘管的成年雄性梅花鹿为研究对象，分别饲喂以柞树叶（0L组，梅花鹿A和B）和玉米秸秆（cs组，梅花鹿C和D）为主要粗饲料的日粮，持续饲喂30d。通过瘤胃瘘管取瘤胃内固液混合物，提取瘤胃微生物基因组DNA。扩增瘤胃细菌16SrRNA基因V3区以及16SrRNA基因，分别用于DGGE和T-RFLP分析。DGGE图谱进行聚类分析，并切取优势条带进行克隆测序，鉴定瘤胃内细菌组成。根据T-RFLP图谱结果计算细菌群落的多样性、优势度、均匀度和丰富度，通过Microbial Community AnalysiSIll（MiCAIII）数据库推测T-RFs可能代表的微生物种类，并进行T-RFLP图谱的聚类分析。【结果】DGGE图谱聚类表明，cs组和0L组瘤胃细菌区系相似性度于65%，表明粗饲料种类影响梅花鹿瘤胃细菌区系。0L组梅花鹿A和B的DGGE图谱相似度大于70％，CS组梅花鹿c和D的DGGE图谱相似性大于75％，而且同组不同个体之间瘤胃细菌区系存在差异。OL组和cs组分别获得20和24个DGGE特异性条带。序列分析表明，cs组条带可归类为拟杆菌门、厚壁菌门和变形菌门，而OL组条带可归类为拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门和互养菌门。OL组与cs组中存在大量Prevotellaspp．，但不同组中Prevotellaspp．在种水平组成不同，主要纤维降解菌为Olostridiumspp．与Eubacteriumspp．T-RFLP结果显示，梅花鹿D（cs组）具有最高的丰富度、多样性、均匀度和最低的优势度，梅花鹿A和B的各项指数相近但低于梅花鹿D，说明OL组中的粗饲料（柞树叶）影响瘤胃中微生物的相对生物量。梅花鹿C和D的各项指数相差较大而且梅花鹿c的指数�人凝血因子Ⅸ乳腺特异表达载体的构建及细胞转染
摘要：【目的】人凝血因子IX（human coagulation factor IX，hFIX）是凝血过程中的关键因子，对临床治疗血友病有着极其重要的意义。研究旨在构建人凝血因子IX乳腺表达载体，在猪乳腺上皮细胞中验证其乳腺特异表达能力，获得hFIX转基因雌性乳腺上皮细胞和猪胎儿成纤维细胞，为克隆乳腺特异表达人凝血因子IX的转基因猪做准备。【方法】按照TaKaRa公司RNAiso Reagent和Prime Script RT—PCR试剂盒的说明书，从人胎儿肝脏中提取RNA并扩增出入凝血因子Ix（humancoagulation factorIX，hFIX）cDNA序列，利用PCR方法扩增牛生长激素（BGH）polyA序列，将hFIX的cDNA序列与BGHpolyA序列分别连接到表达载体pbCSN2-Rc的牛酪蛋白（CSN2）启动子之后，构建带有新霉素抗性和红色荧光蛋白双筛选标记的乳腺特异性表达载体pbcsN2-hFIx—pA—Rc。取本地屠宰的泌乳期猪乳房组织，利用组织块种植法培养猪乳腺细胞，并通过控时消化分离纯化猪乳腺上皮细胞，进行染色体分析后，挑选含有正常染色体数目的细胞，通过脂质体法将表达载体导入，经过G418筛选获得稳定表达红色荧光蛋白的转基因细胞，反转录、实时定量PCR验证乳腺表达载体构建的合理性和有效性。为了只对雌性胎儿成纤维细胞进行转基因操作，首先对培养的猪胎儿成纤维细胞进行SRY基因PCR扩增，确定其性别。之后，利用脂质体将证明有效的表达载体导入细胞，并进行G418和红色荧光蛋白表达筛选，对经过鉴定的阳性细胞进行扩大培养和冷冻保存，为下一步的体细胞克隆做准备。【结果】经PCR和酶切鉴定，人凝血因子IXcDNA和BGHPoIyA成功克隆到载体pbCSN2-RC中，获得具有双筛选标记的pbCSN2-hFIX—pA—Rc。转染后G418和红色荧光蛋白表达阳性的猪乳腺上皮细胞，经实时定量PCR鉴定，hFIX有高效表达，证明所构建载体具有指导人FIX在乳腺特异�F4ac型产肠毒素大肠杆菌菌液上清对仔猪小肠上皮细胞的免疫刺激作用
摘要：【目的】猪源产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）是一类世界范围内流行的致仔猪腹泻的病原菌。依据养猪业生产实践中对致仔猪腹泻病原菌血清学鉴定结果可知，F4ac型ETEC的流行性最为广泛。到目前为止，对ETEC导致仔猪腹泻的机理已经有了比较透彻的阐释。但对ETEC培养液的免疫原性尚未有研究和描述。论文以F4ac型ETEC为研究对象，探索其菌液上清（即培养液）对仔猪小肠上皮细胞（IPEC—J2）的免疫刺激作用。【方法】首先收集Fgac型ETEC菌株2OO培养12h后的培养液，后经4℃，4000r／min，离心15min收集培养液上清，将该上清液经0．22“m滤器过滤，并与DMEM／F12培养基以1：1的比例混合，以此混合液共孵育IPEC—J2细胞3h，重复此处理3次获得处理组细胞；同时设新鲜的LB培养基与DMEM／F12培养基同样以1：1的比例共孵育3h的IPEC—J2细胞为对照组细胞，对照处理亦重复3次。然后用TRIZOL试剂按照说明书提取对照组和攻毒组IPEC-J2细胞的总RNA，并用TaKaRa公司的Prime Script RT reagent Kitwithg DNAEraser（反转录试剂盒）按照说明书将提取的总RNA反转录成eDNA。应用文献报道或自行设计的跨内含子的引物通过实时荧光定量PCR方法，以猪的持家基因β-actin作为内参，检测儿占、TNF-α、CXCL2，IL6．ILIA．TLR4，TLR4．PLAU和MUCl3共9个免疫相关基因和黏蛋白基因在攻毒组和对照组中的mRNA表达差异性。【结果】较之对照组，在攻毒组中，3个重要的促炎细胞因子基因儿汐，mp甜和CXCL2的mRNA均出现了显著性地过表达。其中，在攻毒组中，儿占的表达量为对照组的3．24倍（P〈0．05）；TNF-α的表达量亦为对照组的3．24倍（P〈0．01）；CXCL2的表达量为对照组的1．65倍（P〈0．001）。在攻毒组和对照组之间，其他6个基因（IL6．ILIA，TLR4，SLP，PLAU和MUC13）的表达差异未达到统�耕地资源非农化价值损失评价模型与补偿机制研究
摘要：【目的】耕地资源生态价值和社会价值长期被忽视是我国耕地保护中最大的不足和缺陷，耕地非农化价值损失远远超过传统意义上的经济价值损失。耕地资源流失、非农化的核心问题之一是对耕地资源非农化价值理论认知的缺失，是对耕地资源（保护）非农化价值构成、体系、方法等科学问题研究还不够透彻、不够深入，这是必须认识到的一个基础理论问题。通过构建耕地价值评价方法与模型，实现耕地资源（保护）非农化价值损失定量评价与模拟，以期为耕地保护、耕地补偿决策等提供理论和实践参考。【方法】以耕地资源价值分类为基础，运用收益还原法、等效替代法、市场价值法构建耕地资源经济价值、社会价值和生态服务价值综合评价模型。耕地资源经济价值主要通过修正不同农作物的收益差异权重指数，运用收益还原法计算经济价值；耕地资源社会价值主要运用等效替代法计算，其中采用城镇养老保险金修正参数代替基本保障价值，用农民农业生产效益参数代替农民就业工资水平，用区域粮食供需差额参数代替社会稳定价值；耕地资源生态服务价值在修正单位耕地面积生态当量因子的基础上，考虑生态服务当量因子的经济价值与平均粮食单产市场价值的相关关系，运用市场价值法进行计算。【结果】（1）评价模型客观地还原了耕地资源货币化价值，具有一定的可行性和科学性，并可以实现不同区域耕地价值的评价与模拟，具有较强的通用性和适用性。（2）实证研究表明，四川省耕地资源保护价值为122．85万元／hm。，其中经济价值、社会价值与生态服务价值分别占5．74％、64．17％、30．09％。（3）以2010年为基准年，四川省耕地资源保护价值为82555．20亿元，是四川省当年GDP的4．8倍，耕地非农化价值损失量为436．1基于种业市场份额的中国种业国际竞争力分析
摘要：【目的】种业是国家战略性、基础性核心产业，中国巨大的种业市场正成为主要跨国公司竞争的焦点。种业竞争力不仅决定种业自身发展，而且也决定农业产业安全，不断提升种业竞争力是保障现代农业持续健康发展和国家粮食安全的根本。随着经济全球化、全球市场一体化进程的加快，市场份额竞争成为现代种业国际竞争的焦点，因此，从种业市场份额角度开展中国种业国际竞争力研究，以期全面、准确、科学的认识中国种业国际竞争力水平。【方法】运用国际种子联盟（ISF）、世界贸易组织（WTO）以及中国海关统计资讯室的相关数据，利用统计分析与显示性比较优势指数（RCA）、出口质量升级指数（Qc）等常用市场份额分析指数对中国种业国际竞争力进行描述性与实证分析。【结果】中国虽然拥有世界上第二大的种子市场（2012年为99．50亿美元，仅次于美国120亿美元），但在全球种子市场份额竞争中，得到的国外市场份额少，失去的国内市场份额多；出口市场主要集中在亚洲（59．04％），而种子大额市场非洲（0．83％）和南美洲（0．18％）等占据的份额较少；竞争优势品种缺乏，相对来说，目前蔬菜-9水稻种子占有的市场份额较多，均在1亿美元左右，而全球种子市场需求旺盛的小麦、玉米、大豆等种子占据的市场份额较少，均不到0．01亿美元。整体来看中国种业国际竞争力较差。从RCA计算结果来看，中国种业RCA指数较低且远小于评价标准值0．8，与美国、荷兰等种业强国相比还有很大差距，中国种业不具备显示性比较优势，种业国际竞争力较差但竞争力上升趋势明显，相对来说，蔬菜品种竞争力要高于农作物品种；从Qc计算结果来看，中国种业种子出口质量升级指数大于评价标准值1且高于美、荷等种业强国，出口的�亚洲璃眼蜱不同发育阶段及其组织中microRNA-10表达分析
摘要：【目的】MicroRNA（miRNA）是一类长度为20—22个核苷酸（nt）且高度保守的非编码小RNA。迄今为止，在病毒、动物、植物中都有发现，如在Mareks病毒、果蝇、斑马鱼、人类以及拟南芥等多种生物中都有存在。其通过与靶基因特异性的碱基互补配对使靶基因降解或者受到抑制，在转录后水平调控靶基因的表达水平。miRNAs参与多种生物的细胞增殖、分化、代谢与死亡等多种生物学过程。为了解microRNA-10在亚洲璃眼蜱中的潜在生物学功能，试验获得亚洲璃眼蜱miR-10的前体、成熟体序列；分析亚洲璃眼蜱不同发育阶段及组织miR-10的表达水平，及亚洲璃眼蜱miR-10的生物学意义；为进一步研究miR-10与亚洲璃眼蜱生长发育间的关系奠定基础。【方法】用TrizolReagent分别提取不同发育阶段及组织的总RNA，用SYBR Prime Script。MmiRNART—PCRKit（TaKaRa Code：RR716）制备eDNA。参考miRBase数据库中isc-miR-10（登录号：M10012262）序列，设计特异性5l物，通过PCR的方法从亚洲璃眼蜱中扩增获得miR-10前体序列，通过MEGA4软件将此前体序列与已知物种的miR-10前体序列进行比对分析；利用qPCR技术分析亚洲璃眼蜱不同发育阶段及组织miR-10的表达情况；推测miR-10在亚洲璃眼蜱中的生物学功能。【结果】获得亚洲璃眼蜱miR-10的前体序歹IcuAcAucuAcccuGuAGAuccGAAuuuGuuuGccAcuAGAcuAcAAAuucGGuucuAGAGAGGcuuuGuGuGG，大小为73bp；亚洲璃眼蜱的miR-10前体序列与肩突硬蜱的相似性最高，是95．9％，且与其他节肢动物相似性在88．9％--91．7％之间；miR-10在不同物种问高度保守。miR-10的成熟体序列为UACCCUGUAGAUCCGAAUUUGU，种子序列为ACCC06U。在亚洲璃眼蜱的不同发育阶段中，饥饿若蜱的miR-10的表达水平最高，是卵的48．3倍；饥饿成蜱是卵的7．78倍；饥饿幼蜱是卵的2．78倍。在饥饿雌性成蜱吸血过程中，吸血3d的成蜱是饥饿成伊拉兔宰后肌糖原变化及其与兔肉品质的相关性
摘要：【目的】探讨伊拉兔宰后36h内肌糖原变化规律及与肉品品质变化的相关性。【方法】伊拉兔经屠宰之后，肌肉内的糖原会在一定时间内酵解转化为乳酸，从而改变胴体的pH值，并进一步影响肉品的持水力、剪切力、肉色等品质指标。以伊拉兔背最长肌（LD）和左后腿肌（LL）为原料，用试剂盒法分别测定了伊拉兔宰后45min、4h、8h、12h、24h、36h肌糖原含量的变化，并对兔宰后相应时间点的肉品品质指标如pH值、蒸煮损失、滴水损失、剪切力、色泽变化进行了检测与分析。此外，将主要设计因子（pH、蒸煮损失、滴水损失、总损失、剪切力、L＊、a＊、b＊、C＊）作为X变量，以肌糖原的含量作为Y变量，用偏最小二乘回归分析法（PLS2）对伊拉兔宰后LD和LL肉品品质与肌糖原变化规律的相关性进行探讨。[结果]伊拉兔宰后36h内部位LD和LL的肌糖原含量均下降显著（P〈0．05），二者分别从屠宰初期的（2．61±0．50）mg·g^-1和（2．77±0．55）mg·g^-1减少为宰后36h的（0．94±0．05）mg·g^-1和（0．99±0．07）mg·g^-1与此同时，伊拉兔LD和LL的pH分别从宰后初期的（6．91±0．02）和（6．85±0．04）下降至（5．62±0．09）和（5．61±0．09）。在此期间，随着pH的下降，伊拉兔肉品品质指标也发生了相应地改变，如剪切力、亮度L＋值、红度a＊值降低；蒸煮损失、滴水损失、总损失、b＊值和c＊值升高。PLS2分析显示，以上各肉品品质指标与兔宰后肌糖原含量变化的相关性均较大，部位LD和LL的回归系数R值分别达0．796-0．972和0．890-0．996。其中，2个部位的总损失指标（蒸煮损失与滴水损失之和）较其他肉品品质的差异来源更为显著。此外，可以用以上兔肉宰后品质指标为自变量，运用Unscrambler建立回归方程对肌糖原变化评分较好地进行预测。【结论】伊拉兔宰后36h内肌�
