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中国生物制品学 2008年第11期杂志 文档列表

中国生物制品学杂志基础研究

骨髓基质干细胞对大鼠肝纤维化细胞凋亡的影响929-932

摘要：目的探讨骨髓基质干细胞（BMSCs）对大鼠肝纤维化细胞（CFSCs）凋亡的影响。方法常规培养BMSCs、CFSCs和大鼠肝细胞系BRL，并双层共培养CFSCs与BMSCs。用ELISA方法检测BMSCs培养上清中NGF、HGF和TGF-β1的浓度；RT—PCR检测与BMSCs共培养的CFSCs及BRL的p75表达；TUNEL法检测BMSCs分泌的细胞因子封闭后对CFSCs凋亡的影响。结果BMSCs可分泌NGF、HGF、TGF-β1等细胞因子，且随着培养时间的延长，其分泌量逐渐增多；BRL不表达p75，CFSCs表达p75，且与BMSCs共培养后，其表达量增高；分别用p75的阻断剂TAT—Pep5、HGF的中和抗体和JNK的阻滞剂sp600125作用后，BMSCs诱导CFSCs凋亡的比例均明显降低；封闭TGF-β1后，BMSCs诱导CFSCs凋亡的比例增高。结论BMSCs能够通过分泌NGF和HGF促进CFSCs的凋亡，这种凋亡诱导作用依赖于JNK的活性，并且在封闭TGF-β1后增强。

EGFP-PDGFRβ融合基因表达载体的构建及其转染COS-7细胞条件的优化933-937

摘要：目的构建EGFP—PDGFRβ融合基因表达载体，并优化PEI介导基因转染COS-7细胞的条件。方法PCR扩增EGFP和PDGFRβ基因，依次连接至pcDNA3．1（＋）质粒中，构建融合基因表达载体H—E-P-pcDNA3．1（＋），经PEI介导转染COS-7细胞，并对转染条件进行优化。结果融合基因表达载体经酶切及测序证明构建正确。经PEI介导转染COS-7细胞的最佳条件为：DNA浓度2μg／ml，N／P比值15．5，在无血清条件下转染。此条件适用于滚瓶培养细胞的转染。结论已成功构建了EGFP-PDGFRβ融合基因表达载体，并优化了经PEI介导转染COS-7细胞的条件。

腺病毒载体介导gag基因在小鼠体内的生物分布938-940

摘要：目的研究腺病毒载体介导gag基因在C57BL／6小鼠体内的生物分布。方法经C57BL／6小鼠左后肢般四头肌部位单次注射0．05ml Ad—gag，于给药后不同时间摘取组织脏器，采用Taqman探针实时荧光定量PCR法，以小鼠β-actin基因作为内参，外标绝对定量法分别定量样本中gag和β—actin基因拷贝数。计算每10^4个小鼠细胞中gag基因的拷贝数，比较各脏器的分布数量。结果外标绝对定量法精密性良好。gag基因主要分布在注射位点、淋巴结、脾脏和肝脏，其他脏器没有分布。给药后3d，gag基因在靶器官分布达峰值，注射位点分布最多，伴随时间延长逐渐减少。结论Ad—gag疫苗在体内不会蓄积并产生全身的特别是生殖系统毒性。本研究可作为重要的安全性试验数据，支持药物在临床应用。

不同代次S191株麻疹病毒的基因序列分析941-944

摘要：目的分析不同代次S191纯化株麻疹病毒（MV）的主要蛋白基因序列。方法将S191纯化株MV在原代鸡胚细胞（CEC）上连续传4代，观察每代病毒培养特性。选择其中的CEC28、30和31代病毒，测定主要蛋白N、M、F和H基因序列，并与GenBank中标准株S191（1994）和S191（2008）序列进行比对。结果S191纯化株病毒在CEC上连续传4代，其培养特性、致细胞病变效应（CPE）及病毒滴度均基本稳定。S191株病毒CEC各代与S191（1994）株比较，在15个核苷酸位点上有区别，其中N蛋白基因6个、M蛋白基因3个、H蛋白基因1个核苷酸的差异对其编码的氨基酸产生了影响；与S191（2008）株比较，在2个核苷酸位点上有区别，且均导致氨基酸的改变。各代之间主要蛋白基因未见突变。结论S191纯化株病毒在《中国药典》三部（2005版）规定的代次范围内比较稳定，在CEC30代内均可作为工作代毒种使用。

两种CpG寡核苷酸对乙型肝炎疫苗免疫小鼠淋巴细胞增殖的影响948-950

摘要：目的观察人工合成的两种CpG寡核苷酸（CpG ODN）对乙型肝炎疫苗免疫小鼠淋巴细胞增殖效应的影响。方法BALB／c小鼠分别经乙肝疫苗、乙肝疫苗＋CPG1826和乙肝疫苗＋CpG2006免疫后，取小鼠脾和胸腺淋巴细胞，进行非特异性和特异性淋巴细胞增殖试验，应用MTT法分别检测淋巴细胞增殖效应。结果CpG两组与疫苗组及对照组相比，脾淋巴细胞增殖效应均显著增强，CPG1826组均优于CpG2006组，且差异有统计学意义；CpG两组的胸腺淋巴细胞非特异性增殖效应也显著增强，但CpG两组之间差异无统计学意义。结论CPG1826和CpG2006均能明显刺激BALB／c小鼠脾脏及胸腺淋巴细胞增殖，且CPG1826显示出更强的脾淋巴细胞免疫刺激效应。

中国生物制品学杂志消息

征稿950-950

中国生物制品学杂志基础研究

穿膜肽HIV-TAT与呼吸道合胞病毒G蛋白片段G1及CTL表位融合蛋白的表达及纯化951-953

摘要：目的在大肠杆菌中表达含穿膜肽HIV-TAT与呼吸道合胞病毒（RSV）G蛋白片段G1及CTL表位的融合蛋白，并进行纯化。方法以质粒pET＋G1F／M2为模板，扩增含TAT、RSV G蛋白片段G1和CTL表位F／M2的融合基因片段，与原核表达质粒pET-His连接，构建融合表达质粒pET-TAT-G1F／M2，转化E.coli BL21（DE3）plysS进行诱导表达，采用Ni^2＋螯合亲和层析法纯化经尿素变性的包涵体，梯度透析复性纯化的目的蛋白，并进行Western blot鉴定。结果在E.coli中可高效表达重组蛋白TAT-G1F／M2，表达量占菌体总蛋白的30%以上，目的蛋白主要存在于包涵体中。经变性、纯化、复性可获得高纯度（〉95％）特异性的TAT-G1F／M2蛋白。结论已在大肠杆菌中成功表达了融合蛋白TAT-G1F／M2，为进一步进行RSV体内体外免疫学研究奠定了基础。

尾加压素Ⅱ对体外高糖培养大鼠肾小球系膜细胞周期的影响954-956

摘要：目的观察尾加压素Ⅱ（UⅡ）对体外高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞周期的影响。方法体外高糖培养大鼠肾小球系膜细胞，加入不同浓度的UⅡ（10^-7、10^-8、10^-9和10^-10 mol／L），37℃孵育24h，用碘化丙啶染色流式细胞术分析肾小球系膜细胞周期分布。结果UⅡ对体外高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞有明显的促增殖作用，表现为细胞周期S期比例增加，以浓度为10^-8 mol／L时最明显。Ca^2＋阻断剂尼卡地平、Ca^2＋螯合剂EDTA及抗UⅡ抗体能明显抑制其促增殖作用。结论UⅡ能提高体外高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞S期DNA合成速率，提示UⅡ对其具有明显的促增殖作用。

神经内分泌因子对体外培养肝细胞ApoB100 mRNA丰度的影响957-960

摘要：目的分析神经内分泌因子胰岛素、胰高血糖素和瘦蛋白对体外培养肝细胞ApoB100 mRNA丰度的影响，以阐明其在奶牛肝极低密度脂蛋白（VLDL）组装与转运中的调控作用。方法在体外培养的肝细胞培养液中分别添加胰岛素、胰高血糖素和度蛋白，应用实时荧光定量PCR法检测神经内分泌因子对体外培养肝细胞中载脂蛋白B100（ApoB100）mRNA丰度的影响。结果随着细胞培养液中胰岛素和瘦蛋白浓度的增加，肝细胞中ApoB100 mRNA的水平逐渐降低；而随着培养液中胰高血糖素浓度的升高，ApoB100 mRNA水平呈先升高后降低的趋势。结论神经内分泌因子胰岛素、胰高血糖素和瘦蛋白通过影响ApoB100 mRNA的表达水平来调控肝细胞中VLDL的组装与转运。

中国生物制品学杂志消息

《中国药学大辞典》（2008年版）征订启事960-960

中国生物制品学杂志基础研究

FABP7基因真核表达载体的构建及其对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响961-964

摘要：目的构建脑脂肪酸结合蛋白（BLBP／B-FABP，FABP7）基因的真核表达载体，并检测其对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。方法采用逆转录方法从星型细胞瘤组织中扩增FABP7基因，双酶切后插入线性化的pcDNA3．1载体真核启动子下游，构建重组真核表达载体，转染人乳腺癌细胞MCF-7后，采用半定量RT-PCR检测FABP7基因mRNA的表达，MTT法检测细胞的增殖活性、流式细胞术检测细胞的周期变化情况，并对细胞进行计数。结果FABP7基因重组真核表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确，转染MCF-7细胞后48、72和96h，pcDNA3．1-FABP7组的细胞数和细胞的A490值均比pcDNA3．1空质粒组明显降低，G1期细胞百分含量均明显升高。结论已成功构建了FABP7基因的真核表达载体，该载体可抑制人乳腺癌细胞MCF-7的增殖。

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药性分析965-968

摘要：目的分析临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的分布情况及耐药性。方法收集吉林大学中日联谊医院临床标本中分离的221株大肠埃希菌和152株肺炎克雷伯菌，采用纸片扩散法检测抗菌素的敏感性；双纸片协同试验和纸片表型确证试验筛选并确证产超广谱β-内酰胺酶的菌株；按照美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）2005年版的标准判断结果。结果大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对亚胺培南和美罗培南的敏感性最高，均达100％；对头孢他啶、哌拉西林／他唑巴坦和头孢西丁的敏感性也较高，均大于70％，而对氨苄西林的耐药性均大于90％。共检出产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌118株，检出率为53．4％；肺炎克雷伯菌21株，检出率为13．8％；产超广谱β-内酰胺酶的两种菌株与非产超广谱β-内酰胺酶的同种菌株相比，对抗菌素的耐药性均明显增加。结论大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌仍是产超广谱的β-内酰胺酶的主要菌株，且对常用抗菌素产生了较高的耐药性。

中国生物制品学杂志消息

《中国药学术语词库与主题词表》征订启事968-968

中国生物制品学杂志基础研究

轮状病毒P[2]G3株在人二倍体细胞KMB17上的适应性969-971

摘要：目的探讨轮状病毒P[2]G3株存人二倍体细胞KMB17上的适应性。方法轮状病毒P[2]G3株在猴肾细胞MA104上经蚀斑筛选纯化后，得到的克隆以不同MOI接种至人二倍体细胞KMB17上。用微量滴定法与蚀斑法平行检测病毒滴度，用免疫荧光法检测病毒的增殖情况，最后进行病毒基因组稳定性检测。结果经MA104细胞培养的轮状病毒P[2]G3株在人二倍体细胞KMB17上可产生明显的细胞病变（CPE），但病变出现的时间随病毒传代次数的增加而延迟，抗原性也逐渐减弱。通过蚀斑筛选纯化得到的克隆病毒，可存KMB17细胞上稳定地增殖。以0．05 MOI病毒量接种可产生稳定的CPE，时间为72～96h。连续传代至第10代，病毒滴度达10^5.5 PFU／ml，病毒基因组稳定。结论轮状病毒P[2]G3株在人二倍体细胞KMB17上表现出毒力及增殖能力的衰退；经蚀斑筛选纯化可获得毒力较强的病毒株，并在KMB17细胞中稳定复制、增殖。

Lipocalin-2基因表达产物对人胚肾细胞增殖的影响972-976

摘要：目的构建Lipocalin-2（Lcn-2）基因真核表达质粒PL-2，并检测其及前期原核表达的重组Lcn-2蛋白对人胚肾细胞HEK293增殖的影响。方法利用RT—PCR从鼠巨噬细胞RAW264．7中扩增Lcn-2基因，克隆入真核表达质粒pEGFP-C1中，构建重组质粒PL-2。转染HEK293细胞，通过荧光观察和RT-PCR鉴定Lcn-2基因的表达。将重组质粒PL-2和前期原核表达的重组Lcn-2蛋白作用于HEK293细胞，通过MTT法检测细胞增殖情况，Western blot法检测细胞增殖核抗原（PCNA）的表达。结果重组真核表达质粒PL-2经酶切和测序鉴定，证明构建正确。经荧光观察和RT-PCR鉴定，转染重组质粒PL-2的HEK293细胞中有Lcn-2基因的表达。加入重组Lcn-2蛋白后，HEK293细胞较对照组明显增殖，细胞中PCNA的表达也较对照组明显升高，而重组质粒PL-2对HEK293细胞增殖以及细胞中PCNA的表达均无影响。结论已成功构建了Lcn-2基因真核表达质粒，其对HEK293细胞的增殖无影响，而原核表达的重组Lcn-2蛋白对HEK293细胞的增殖有一定的促进作用，推测Lcn-2基因的表达产物可能通过与细胞膜受体结合促进HEK293细胞的增殖。

中国生物制品学杂志实验技术

地高辛标记探针检测Vero细胞残余DNA试验条件的改进976-976

摘要：目前，应用地高辛标记探针检测Veto细胞残余DNA含量仍是最常用的检测方法，该方法具有特异性强、无放射污染、操作简便等特点。在实际操作中，地高辛探针的灵敏度及杂交的条件对检测结果均有很大的影响。为此，我们就提高探针灵敏度及优化杂交条件进行了摸索。

中国生物制品学杂志基础研究

苏木精染色对冰冻切片组织RNA及蛋白质浓度和质量的影响977-980

摘要：目的探讨苏木精染色对冰冻切片组织RNA及蛋白质浓度和质量的影响。方法将10份乳腺癌组织冰冻切片进行苏木精染色以及苏木精染色后酸洗处理，利用显微切割技术从冰冻切片中获取特定乳腺癌细胞，Trizol提取相应的RNA及总蛋白。琼脂糖凝胶电泳和RT—PCR分析RNA质量，SDS—PAGE和Bandscan软件分析蛋白质电泳结果，并进行RNA和蛋白质的浓度测定。结果从10份乳腺癌组织冰冻切片中提取的RNA经琼脂糖凝胶电泳检测，苏木精染色组和苏木精染色后酸洗组的28S、18S、5S条带均有不同程度的降解，RT—PCR结果显示，RNA完整性较好；提取的蛋白电泳图谱处理前后无明显差异；苏木精染色以及苏木精染色后酸洗处理对乳腺癌组织中的RNA及蛋白质浓度无显著影响。结论苏木精染色对乳腺癌冰冻切片组织中RNA及蛋白质浓度和质量无显著影响，为肿瘤蛋白质组学的进一步研究提供了理论支持。

中国生物制品学杂志消息

《生物技术药物研究开发和质量控制》（第2版）征订启事980-980