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中国生物制品学 2008年第04期杂志 文档列表

中国生物制品学杂志基础研究

HPV16 MuE6／E7嵌合蛋白的原核表达、纯化及其免疫效果257-260

摘要：目的表达HPV16型MuE6／E7嵌合蛋白，并检测其免疫原性及抗肿瘤活性。方法将构建的重组MuE6／E7蛋白的表达载体转化大肠杆菌BL21（λDE3）进行诱导表达，表达的包涵体蛋白经分离、纯化、变性及复性后，通过离子交换和分子筛层析进行纯化。纯化蛋白经SDS-PAGE、Western blot、HPLC和质谱分析鉴定，并免疫C57BL/6小鼠，检测其免疫原性和抗肿瘤活性。结果重组MuE6／E7蛋白相对分子质量约为21000，表达量约为23．06％，表达形式为包涵体，经复性、纯化后，纯度达97．17％。免疫3针后，小鼠可产生高滴度的HPV特异性抗体，并且与注射剂量呈正相关。免疫小鼠能抵抗TC-1肿瘤细胞的攻击，并可延长TC-1致瘤小鼠的存活期。结论已表达并纯化了重组MuE6／E7蛋白，其对TC-1致瘤小鼠具有一定的免疫治疗作用，为进一步研制HPV治疗性疫苗奠定了基础。

携带人6Ckine／IFNγ,融合基因腺病毒载体的构建和鉴定261-264

摘要：目的构建携带人次级淋巴组织趋化因子（6Ckine）和γ-干扰素（IFNγ-）融合基因的重组腺病毒载体Ad-6Ckine／IFNγ，并在真核细胞中表达。方法RT-PCR法分别从人淋巴结和外周血单个核细胞中扩增人6Ckine cDNA和IFNγ cDNA，分两步先后将6Ckine cDNA和IFNγ cDNA连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点上，二者之间以XbaⅠ酶切位点相连，应用AdMax腺病毒包装系统在HEK293细胞内同源重组，构建重组腺病毒载体Ad-6Ckine／IFNγ，经扩增和纯化后感染真核细胞HepG2，并检测6Ckine／IFNT融合蛋白的表达。结果所构建的重组腺病毒Ad-6Ckine／IFNγ经扩增和纯化后，滴度为1．26×10^10IFU／ml。PER法鉴定无野生型腺病毒的污染，所携带的6Ckine／IFNγ融合基因能在真核细胞中得到表达，表达形式为分泌型。结论已成功构建重组腺病毒载体Ad-6Ckine／IFNγ，并在真核细胞中表达，为进一步研究肿瘤的基因和免疫治疗奠定了基础。

Neurturin基因的克隆及其在Vero细胞中的表达265-268

摘要：目的克隆Neurturin（NTN）基因，并在Vero细胞中表达。方法用RT-PCR方法扩增hNTN cDNA，并克隆至pcDNA3真核表达载体中，经Lipofectamine2000转染Vero细胞，挑选稳定表达克隆，用RT-PCR及免疫荧光分析鉴定，并对转染后细胞的形态及生长状况进行分析。结果重组质粒pcDNA3／hNTN转染Vero细胞后获得了稳定表达克隆，且有目的蛋白表达，转染后细胞形态和生长特性发生了一定改变。结论获得了稳定表达NTN蛋白的Vero细胞株，为其移植并进行帕金森病猴基因治疗动物实验奠定了基础。

抗菌肽Dermaseptin S4及其突变体基因在大肠杆菌中的表达269-272

摘要：目的构建表达抗菌肽Dermaseptin S4（DS4）及其突变体K4-S4的工程菌，并表达目的蛋白。方法采用重叠延伸PCR法设计和扩增抗菌肽DS4及K4-S4基因，定向克隆入载体pUC-18中，经酶切、测序鉴定，重组至表达载体pGEX-4T-1中，构建抗菌肽DS4及K4-S4基因表达载体，转化大肠杆菌BL21（DE3）plyS，经IPTG诱导表达，12％SDS-PAGE鉴定。结果构建的抗菌肽DS4及K4-S4基因工程菌所表达的目的蛋白，经SDS-PAGE鉴定可见相对分子质量34000的特异性目的条带，37℃诱导5h的蛋白表达量最高，且多数以包涵体形式存在。结论已成功构建抗菌肽DS4及K4-S4工程菌，并表达目的蛋白，为进一步研究其功能和应用奠定了基础。

中国生物制品学杂志消息

《中国生物制品学杂志》被两大国际重要检索刊物收录272-272

摘要：俄罗斯国家科学技术信息研究所（VINITI，All-Russian Institute of Scientific and Technical Information）和美国生物科学信息服务社（BIOSIS）于2008年3月31日分别给本刊发来电子邮件称：经过专家评估，认为《中国生物制品学杂志》适合美国《生物学文摘》（BA）和俄国《医学文摘杂志》检索刊物，决定正式收录。

中国生物制品学杂志基础研究

猪血凝性脑脊髓炎病毒HE基因的克隆及原核表达273-276

摘要：目的构建猪血凝性脑脊髓炎病毒株（67N）血凝素酯酶蛋白（HE蛋白）原核表达系统，为建立特异性免疫学诊断方法提供备选材料。方法克隆猪血凝性脑脊髓炎病毒（67N）HE蛋白抗原表位富集区基因，构建重组表达质粒pET-HE，并在大肠杆菌中诱导表达。经包涵体的初步纯化，金属螯合层析进一步纯化HE蛋白，SDS-PAGE和Westem blot进行检测。结果大肠杆菌可高效表达HE蛋白，目的蛋白表达量可占菌体总蛋白的42．2％。纯化后蛋白浓度为0．6mg／ml，纯度为85．4％。所表达的蛋白可被兔抗猪血凝性脑脊髓炎阳性血清所识别。结论已成功构建猪血凝性脑脊髓炎病毒HE蛋白原核表达载体，重组HE蛋白抗原具有良好的特异性，可作为检测猪血凝性脑脊髓炎病毒血清抗体的候选抗原。

大肠癌相关基因PGDH原核表达质粒的构建及表达277-280

摘要：目的构建15-羟基前列腺素脱氢酶（PGDH）原核表达质粒，并在大肠杆菌中诱导表达PGDH蛋白。方法以人正常大肠黏膜组织总RNA为模板，利用RT-PCR扩增PGDH基因的编码序列，克隆入原核表达载体pBV220，转化E．coliDH5α，经温控诱导表达，并经Ni^2＋-NTA亲和层析纯化，目的蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果重组质粒pBV220-PGDH-His6经PCR及酶切鉴定，证明质粒构建正确。经温控诱导后，可表达出相对分子质量约为29000的PGDH-His6蛋白，表达产物以包涵体形式存在，3h诱导表达量最高，约占菌体总蛋白的30％。Western blot验证了表达蛋白的特异性。纯化后目的蛋白纯度大于95％。结论已成功构建PGDH原核表达质粒，并在大肠杆菌中表达了PGDH蛋白。

梅毒螺旋体特异性抗原TpN47基因片段的克隆与表达281-284

摘要：目的在大肠埃希菌中表达梅毒螺旋体（Tp）TpN47（68-410aa）重组蛋白。方法采用PCR法从Tp全基因组中扩增TpN47（202—1230bp）片段，T-A克隆后构建原核表达质粒pET-22b（＋）-TpN47，经酶切鉴定后转化E coli BL21（DE3），IPTG诱导表达，表达产物经Ni^2＋亲和层析柱纯化，Westem blot鉴定其免疫反应性。结果PCR法扩增出约1000bp的目的片段，原核表达质粒pET-22b（＋）-TpN47经酶切鉴定正确，表达的蛋白约占菌体总蛋白的43％，相对分子质量约为39000，以包涵体形式存在。经纯化后蛋白纯度达95％以上，Western blot证实该蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应。结论所表达的TpN47重组蛋白具有良好的免疫反应性，为开发临床检测效果更好的梅毒诊断试剂盒奠定了实验基础。

旋毛虫对BALB／c小鼠体内人结肠癌HCT-8细胞的作用285-287

摘要：目的观察旋毛虫感染对BALB／c小鼠体内人结肠癌HCT-8细胞生长的作用。方法用不同剂量的旋毛虫感染BALB／c小鼠，并在不同时间接种HCT-8细胞，荷瘤20d后解剖小鼠，测定小鼠体内肿瘤的体积、重量，计算抑瘤率，并检测T淋巴细胞亚群。结果各实验组小鼠肿瘤体积和重量均显著低于对照组，CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋比值、未长瘤小鼠比例、小鼠死亡率和抑瘤率均显著高于对照组；先接虫后荷瘤组抑瘤效果优于先荷瘤后接虫组。结论旋毛虫对BALB／c小鼠体内的人结肠癌HCT-8细胞的生长有一定的抑制作用。

蚯蚓组织脱氧核糖核酸酶EWD3的生化性质288-291

摘要：目的研究赤子爱胜蚓组织中1种脱氧核糖核酸酶（EWD3）的主要生化性质。方法采用Lowry法测定酶的蛋白含量，SDS-PAGE和MALDI-TOF方法测定相对分子质量，毛细管等点聚焦电泳法测定等电点，并测定EWD3酶的酸、碱稳定性、温度稳定性、激动剂和抑制剂对酶活性的影响及酶促反应米氏常数Km值。结果EWD3酶的蛋白含量为2．1mg／ml，相对分子质量为63460，等电点为6．20，Km值为1．52mg／ml，最适pH值为4．4～5．2，不耐高温。Mg^2＋、ca^2＋、Mn^2＋、10和20mmol／LEDTA对EWD3酶活性有抑制作用。这些参数与已发现的各种DNases相比有明显差异。结论蚯蚓组织中已发现的脱氧核糖核酸酶EWD3具有特殊的酶学特征。

基质金属蛋白酶MMP-2及MMP-9在淋巴系肿瘤中的表达292-294

摘要：目的探讨基质金属蛋白酶ProMMP-2、MMP-2、ProMMP-9和MMP-9与淋巴系肿瘤的相关性。方法应用明胶酶谱（SDS-PAGE Zymograph）和计算机蛋白定量测定系统，对62名淋巴系肿瘤患者（初发组35名，复发组12名，缓解组15名）和20名正常人，测定其血清中ProMMP-2、MMP-2、ProMMP-9和MMP-9的表达水平。结果初发组、复发组患者血清中ProMMP-2、MMP-2和MMP-9的表达水平明显高于缓解组和对照组。而初发组、复发组患者血清中ProMMP-9表达水平与缓解组和对照组差异无显著意义；初发组患者血清中ProMMP-2、MMP-2、ProMMP-9和MMP-9表达水平与复发组相比差异无显著意义。缓解组患者血清中ProMMP-2、MMP-2、ProMMP-9和MMP-9表达水平与对照组差异无显著意义。结论MMP-2和MMP-9与淋巴组织恶性肿瘤发生及发展呈正相关；ProMMP-2、MMP-2和MMP-9可作为判断病情及评价治疗效果的指标；为进一步研制相关MMP抑制剂及为淋巴组织肿瘤治疗提供新的靶向位点奠定了基础。

中国生物制品学杂志消息

欢迎订阅《中国生物制品学杂志》294-294

中国生物制品学杂志基础研究

金黄色葡萄球菌中毒休克综合征毒素1基因的检测295-297

摘要：目的检测编码金黄色葡萄球菌中毒休克综合征毒素1（TSST-1）的tst基因，了解该基因的携带情况。方法用PCR法对产毒素金黄色葡萄球菌染色体上编码TSST-1的tst基因进行体外扩增，并对临床分离的84株金黄色葡萄球菌进行tst基因检测及序列分析。结果对tst基因进行了检测及测序，84株受检的金黄色葡萄球菌中，tst基因阳性株占19．05％（16／84），测序结果与GenBank公布的金黄色葡萄球菌产TSST-1基因的同源性较高。结论用PCR法检测tst基因，具有良好的重复性、特异性和敏感性。tst基因阳性株在临床分离的金黄色葡萄球菌中占有较高的比例。

中国生物制品学杂志预防制品

肺炎链球菌补体结合蛋白C3-BP的纯化及其免疫效果298-301

摘要：目的对9V型肺炎链球菌补体结合蛋白C3-BP进行纯化及免疫效果分析。方法通过三氧醋酸沉淀、离子交换层析、凝胶过滤层析和亲和层析等方法，从9V型肺炎链球菌培养上清中提取C3-BP，Lowry法检测其浓度，SDS-PAGE检测其纯度及大小，Western blot检测其补体C3结合活性。将纯化蛋白免疫NIH小鼠，ELISA法测定小鼠血清IgG抗体，MTF法测定小鼠脾淋巴细胞增殖情况，活菌攻击，检测其交叉保护效果。结果经纯化的表面蛋白C3-BP，其相对分子质量约为90000，为单链蛋白，浓度为0．21mg／ml，纯度为90．7％，具有与补体C3结合的特性。免疫小鼠后，抗体滴度达到1：38 802。免疫组小鼠脾脏与胸腺淋巴细胞代谢活性明显增强，与对照组相比，二者刺激指数之间差异有显著意义。9V型C3-BP免疫小鼠后，不仅对9V型肺炎链球菌株有保护作用，对2型、6B型和14型肺炎链球菌菌株也有保护作用。结论摸索出了一种纯化肺炎链球菌表面蛋白C3-BP的方法，纯化的C3-BP具有不依赖血清型的交叉保护作用，而且体液免疫及细胞免疫效果良好。

中国生物制品学杂志《中国生物制品学杂志》稿约见1期插页

更正303-303

中国生物制品学杂志预防制品

流感病毒在Vero细胞上的适应性304-307

摘要：目的研究WHO指定流感疫苗生产用毒株在Vero细胞上的适应性，为用Vero细胞制备流感疫苗奠定基础。方法优化不同培养基、胰酶浓度、pH值等培养病毒的条件及收毒时间，将流感疫苗生产用毒株在Vero细胞上连续传代，并进行血凝效价检测及RT-PCR分析。结果在病毒维持液为F12＋DMEM、pH为7．5、胰酶含量为1．5μg/ml、培养3d收获病毒时，可获得较高的病毒血凝效价，连续传4代，病毒血凝效价降为0，RT-PCR检测结果为阴性。结论WHO推荐的流感疫苗生产用毒株在Vero细胞上连续传代，病毒血凝效价逐渐降低。

中国生物制品学杂志治疗制品

抗ICAM-1单克隆抗体的制备及其活性308-311

摘要：目的制备具有生物活性的抗人细胞间黏附分子-1（ICAM-1）单克隆抗体。方法以人ICAM-1为抗原免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术并经HAT选择培养和克隆化，筛选出稳定分泌抗人ICAM-1 McAb的杂交瘤细胞株，并对McAb进行纯化。用ELISA间接法测定效价并鉴定其亚类，Westerm blot鉴定其抗原特异性，细胞黏附试验检测其中和活性。结果筛选出1株可稳定分泌抗人ICAM-1抗体的杂交瘤细胞株3F2，杂交瘤染色体众数为98～104。纯化后的单抗蛋白浓度为1．253mg／ml，纯度达83．6％，效价可达2．56×10^5。其分泌的抗体亚型为IgG1，腹水效价达5．12×10^5，可与ICAM-1特异性结合，可抑制ICAM-1与淋巴瘤细胞间的黏附，具有明显的中和ICAM-1的活性。结论已成功制备出抗ICAM-1的McAb，为其进一步的研究和应用奠定了基础。

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