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中国生物制品学 2006年第05期杂志 文档列表

中国生物制品学杂志基础研究

四川地区宫颈癌患者组织中部分高危HPV亚型感染及E6基因序列分析441-444

摘要：目的 调查四川地区宫颈癌患者组织中高危人乳头瘤病毒（HPV）33、52和58亚型的感染状况及E6基因突变特性,为制备适合中国人群的HPV疫苗提供流行病学资料.方法 采用PCR技术,并结合基因测序分析.结果 对四川地区2003～2004年60份宫颈癌患者癌组织DNA进行HPV检测,获得HPV52和HPV58亚型各4份,检出率为6.7%;HPV33亚型1份,检出率为1.7%.对所获得的各份HPV33、52和58E6基因测序,均有碱基突变.结论 HPV52型感染率在四川地区相对较高.与GenBank标准株相比,四川地区发现的HPV33和HPV52 E6基因有多处突变,与日本发现的HPV33和HPV52突变株相近.

红系造血相关转录因子在红系诱导分化中表达的变化445-447

摘要：目的 探讨红系细胞分化中细胞生长及相关转录因子表达的变化.方法 利用红白血病细胞株HB60-5的生长特性,通过改变培养条件,促使细胞向成熟细胞分化.绘制细胞生长曲线,应用Northern blot方法检测诱导分化过程中红系造血相关基因表达变化.结果 HB60-5细胞随着诱导分化时间的延长,生长减慢,红系分化标记α-珠蛋白表达逐渐升高,同时伴有GATA-1、p45NF-E2、EDRF等基因表达上调,Fli-1基因表达下调.结论 红系分化过程中,细胞增殖受到抑制,红系细胞分化的基因表达上调,红系细胞增殖的基因表达下调.

转基因人参细胞中HBsAg的表达及稳定性研究448-449

摘要：目的 对转基因人参CS83细胞系表达HBsAg的特异性、稳定性及表达效率进行分析.方法 提取CS83细胞表达蛋白,分别以Lowry法和ELISA法检测总蛋白含量和HBsAg含量,SDS-PAGE和Western blot分析表达蛋白的HBsAg特异性.采用冷冻干燥、干燥和低温处理方法检测CS83细胞中HBsAg的稳定性.结果 CS83细胞表达产物中总蛋白含量为2.024 mg/g,HBsAg含量为504 ng/g,占总蛋白含量的0.025%.表达的目的蛋白相对分子质量约为25 000,具有HBsAg特异性.经不同方法处理后的保存结果表明,冻干保存稳定性最好.结论 所建立的CS83细胞系能够稳定地表达特异性HBsAg.

幽门螺杆菌VacA-HpaA融合蛋白的表达及其免疫学特性450-453

摘要：目的 构建H.pylori细胞空泡毒素VacA与黏附素HpaA融合基因的原核表达载体,诱导其表达融合蛋白,并检测表达产物的抗原性与免疫原性.方法 用PCR从pQE30-VacA质粒扩增出VacA基因,克隆至pTrc99A-HpaA载体中,与HpaA基因融合后,插入原核表达载体pQE30中,再将pQE30-VacA-HpaA转化入大肠杆菌DH5α,诱导表达并提纯融合蛋白,SDS-PAGE检测融合蛋白的表达,Bradford法检测融合蛋白含量,Western blot鉴定特异性.将融合蛋白免疫家兔,得到多克隆抗血清,用双向免疫扩散和ELISA检测免疫原性.结果 SDS-PAGE显示融合蛋白相对分子质量约为65 000,表达量在35%以上,主要以包涵体形式表达,蛋白含量为0.72 mg/ml,具有良好的VacA和HpaA抗原性与免疫原性.结论 VacA-HpaA融合蛋白已成功表达,且具有良好的免疫原性,为进一步研究制备H.pylori疫苗创造了条件.

产气荚膜梭菌α-β2-β1融合基因的构建及表达454-456

摘要：目的 构建产气荚膜梭菌α-β2-β1融合蛋白基因表达载体,并对表达产物进行鉴定.方法 利用PCR技术,从含α毒素基因的质粒pXCPA02中扩增出α毒素基因,经NcoⅠ酶切,回收0.95kb的α基因片段,再与经NcoⅠ酶切并含融合基因β1-β2的质粒pXETB1B2连接,获得重组质粒pXETAB2B1,经Nco Ⅰ、BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切鉴定,并对其表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果 重组质粒pXETAB2B1含有α-β2-β1融合基因.表达产物相对分子质量约为95 000,并可被特异性抗体识别.结论 已获得高效表达α-β2-β1的重组菌株.

丙型肝炎病毒C区和NS3区嵌合基因的克隆及表达457-460

摘要：目的 获得丙型肝炎病毒（HCV）C-NS3嵌合抗原,以提高HCV酶联免疫吸附试验诊断试剂的质量.方法 应用SOE-PCR（拼接重叠延伸PCR）的方法,构建了HCV的C区和NS3区的嵌合基因,克隆于表达载体pGEX-4T3,并转化于大肠杆菌BL21,经筛选,IPTG诱导HCV的C-NS3嵌合抗原的表达.经SDS-PAGE检测表达水平,Western blot检测抗原特异性.结果 SOE-PCR构建的HCV C区和NS3区嵌合基因在BL21中获得表达.经鉴定,其相对分子质量约为75 000,并具有高度特异性.结论 已获得HCV C-NS3嵌合抗原,为提高HCV酶联免疫吸附试验诊断试剂的质量奠定了基础.

Vif-△N28和Cullin5-N138蛋白的表达及纯化461-463

摘要：目的 获得高纯度的Vif-△N28和Cullin5-N138蛋白.方法 以Vif/VR1o12质粒为模板,PCR扩增出Vif-△N28基因并插入pRSETB质粒.将构建的原核表达载体Vif-△N28/pRSETB以及已有的Cullin5-N138/pRSETB质粒分别转化大肠杆菌BL21（DE3）,经IPTG诱导表达,产物经Ni-NTA离子纯化柱纯化、复性.结果 所表达的Vif-△N28和Cullin5-N138蛋白约占各自菌体总蛋白的20%,纯化后蛋白纯度均可达90%以上.结论 已成功构建了Vif-△N28原核表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达,获得了可溶性的纯化的Vif-△N28和Cullin5-N138蛋白.

HLA-DR/DQ等位基因与HBV感染的相关性464-467

摘要：目的 对大连地区不同人群的HLA-DR/DQ基因型与乙型肝炎病毒（HBV）感染的相关性进行初步分析.方法 利用微量聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）技术,分别检测乙型肝炎后肝硬化患者、乙型肝炎病毒携带者和正常对照人群的HLA-DR/DQ基因型.结果 随机选择的乙型肝炎后肝硬化患者的HLA-DR7的抗原频率与正常对照人群比较显著升高（P＜0.05）;乙型肝炎病毒携带者的HLA-DQ8的抗原频率与正常对照人群比较显著升高（P＜0.05）;乙型肝炎后肝硬化患者与乙型肝炎病毒携带者比较,后者的HLA-DQ8抗原频率明显高于前者,差异有显著意义（P＜0.05）.其它HLA等位基因频率在不同人群中差异无显著意义（P＞0.05）.结论 HLA-DR7/DQ8基因型与HBV感染之间可能存在一定相关性.

结核分枝杆菌RD1区重组11 kD蛋白的克隆表达及效力468-470

摘要：目的 在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌RD1区11kD蛋白,并检测表达产物的效力.方法 构建11kD蛋白编码基因原核表达载体,转化大肠杆菌BL21（DE3）IPTG诱导表达,离子层析柱分离纯化重组蛋白.以结核分枝杆菌致敏豚鼠进行皮肤变态反应（DTH）测定.结果 结核分枝杆菌11kD蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达,表达蛋白占总菌体蛋白的33%以上,纯化后纯度达95%以上,并可诱导结核分枝杆菌致敏豚鼠产生迟发型超敏反应,5 μg/ml11kD蛋白的效力与50 IU/ml TB-PPD相当.结论 重组11 kD蛋白已在大肠杆菌中成功表达,并有望成为结核病皮试鉴别诊断用新试剂.

pET28a-Chaperonin 10重组载体的构建及SARS-CoV蛋白高效表达471-473

摘要：目的 建立在大肠杆菌中高效表达SARS-CoV蛋白的表达系统.方法 PCR扩增BCG分子伴侣10基因,并将其连接到pET28a载体上,构建成分子伴侣10融合蛋白表达载体.在该载体Chaperonin 10基因的3＇端克隆SARS-N、SARS～E、SARS-S和SARS-M基因,在BL2.1（DE3）中进行诱导表达.结果 SARS-E、SARS-N在与分子伴侣10融合后能获得高效表达.结论 该表达系统可使部分在大肠杆菌中难于表达的SARS-CoV蛋白获得高表达.

中国生物制品学杂志临床观察

社区人群乙型肝炎疫苗接种状况及影响因素调查473-473

摘要：预防接种乙型肝炎疫苗是控制乙肝发生最科学、经济和有效的手段.为了解人群乙肝疫苗接种状况,找出影响疫苗接种的因素,我们于2003～2005年,在新乡铁路社区进行了乙型肝炎疫苗接种情况调查,现将调查结果报道如下.

中国生物制品学杂志基础研究

治疗性乙型肝炎病毒载体疫苗的构建474-476

摘要：目的 研制治疗慢性乙型肝炎的重组修饰的Ankara痘病毒（MVA）载体疫苗.方法 将HBV的表面抗原基因克隆到MVA病毒的重组载体pSC11上,重组质粒与空MVA病毒共转染鸡胚成纤维细胞（CEF）,进行同源重组.经过10轮筛选,挑选出阳性的重组MVA病毒.经PCR鉴定,感染不同细胞系,确定病毒表达量.结果 获得目的重组MVA病毒,ELISA检测到表面抗原在不同细胞系中的表达.结论 已成功地构建了表达HBV表面抗原的重组MVA病毒.

重组人红细胞生成素二聚体工程细胞的建立477-479

摘要：目的 建立重组人红细胞生成素二聚体工程细胞株.方法 用重组人红细胞生成素二聚体表达载体转染COS-7细胞,通过dot blot进行检定.然后对CHO-dhfr^-细胞进行稳定转染,再经过稀释克隆和MTX的加压扩增,筛选二聚体工程细胞株并进行传代及无血清培养基培养、目的蛋白纯化及检测.结果 瞬时转染70 h细胞有目的蛋白表达.稳定转染后选取表达量最高的细胞株为工程细胞株.该细胞株连续传15代及经无血清培养基培养,目的蛋白表达量均无明显下降.所表达的目的蛋白相对分子质量为70 000,并具有高度特异性.结论 已获得稳定高效表达重组人红细胞生成素二聚体的工程细胞株.

中国生物制品学杂志消息

《中国生物制品学杂志》被《剑桥科学文摘（CSA）》收录479-479

中国生物制品学杂志基础研究

乙型肝炎病毒X基因DNA竞争子的构建及鉴定480-481

摘要：目的 构建乙型肝炎病毒X基因DNA（xDNA）竞争子L180,为竞争PCR定量分析xDNA打下基础.方法 以扩增的xDN段为模板,用引物1434和Lx PCR扩增竞争子DNA,并将扩增产物克隆到pUCm-T载体,转化感受态大肠杆菌DH5α,酶切鉴定和测序,筛选阳性竞争子质粒,并建立竞争PCR定量分析xDNA的方法.结果 所构建xDNA竞争子L180,经测序及PCR定量分析证实,PCR扩增的产物即为目的xDNA.初步建立了竞争PCR定量分析xDNA的方法.结论 已成功构建乙肝病毒xDNA竞争子.

中国生物制品学杂志预防制品

冻干甲乙型肝炎联合疫苗组分相容性的研究482-483

摘要：目的 研究冻干甲乙型肝炎联合疫苗组分的相容性.方法 将所制备的联合疫苗与同批单价甲型肝炎减毒活疫苗及重组乙型肝炎疫苗进行甲肝病毒滴度和乙肝疫苗效力检测,同时分别以联合疫苗与甲型肝炎减毒活疫苗及重组乙型肝炎疫苗接种恒河猴,检测甲肝抗体和HBsAb阳转率.结果 该联合疫苗与同批单价疫苗的甲肝病毒滴度和乙肝疫苗效力及诱导猴体的甲肝抗体和HBsAb阳转率差异均无显著意义.结论 冻干甲乙型肝炎联合疫苗组分间无拮抗作用,具有相容性.

黄热疫苗病毒17D株在Vero细胞上的适应性传代484-487

摘要：目的 建立黄热疫苗病毒17D株的Vero细胞适应株.方法 将2批鸡胚黄热疫苗病毒在Vero细胞上进行2次蚀斑筛选,并连续传代培养,然后对获得的4株Vero细胞适应株病毒YFV-Vero（5）-A1、YFV-Vero（5）-A2、YFV-Vero（5）-B1和YFV-Vero（5）-B2进行稳定性和免疫原性检测.结果 4株Vero细胞适应株病毒可被黄热病毒（17D）猴免疫血清中和.在传代过程中,不同代次的病毒滴度稳定在6.90LgPFU/ml以上,高峰病变出现时间为5～7 d.家兔和小鼠的免疫血清中和抗体效价分别为1：640～1：5 120和1：640～1：2 560.结论 4株Vero细胞适应株病毒生物学性状稳定,免疫原性良好.

人用皮内注射布氏菌活疫苗毒理及药效学研究488-491

摘要：目的 研究人用皮内注射布氏菌活疫苗的毒理及药效学作用,以评价其可行性.方法 对布氏菌活疫苗进行小白鼠急性毒性试验、局部刺激试验、全身过敏试验、长期毒性试验及豚鼠皮肤变态反应试验并免疫小鼠,进行血清抗体检测.结果 小鼠皮内注射布氏菌活疫苗的最大耐受量为1.0×10^9个菌,用布氏菌素注射足底,可引起明显的迟发型变态反应.局部刺激试验,只有注射1.0×10^9个菌的部位会在48 h后化脓,但在1～2周内可自愈.全身过敏试验均未出现任何异常反应,毒性试验、各项血常规、血生化检查均未见显著差异,各脏器组织的病理学检查亦未见病理改变.免疫12周后,对豚鼠骨髓造血细胞亦无影响.对皮内免疫12周的豚鼠作背部皮肤变态反应试验,24～48 h结果为阳性.皮内免疫小鼠14 d后可测得小鼠体内有抗体产生,50 d后测得小鼠体内抗体均呈强阳性,对照组小鼠14 d与50 d抗体检测均为阴性.结论 毒理和药效学试验结果显示,布氏菌活疫苗用皮内注射的途径进行免疫是可行的.