基因组学与应用生物学杂志 北大期刊 CSCD期刊 统计源期刊

基因组学与应用生物学 2009年第04期杂志 文档列表

基因组学与应用生物学杂志研究报告

融合基因umcel5N-CBM的构建、表达及融合酶性质分析625-630

摘要：碳水化合物结合组件（carbohydrate—binding module，CBM）是一些糖基水解酶分子上的结构域，它在纤维素酶降解不可溶纤维素中起着重要的作用。本研究的目的是检测一个新的内切葡聚糖酶Umcel5N（GenBank登录号为ACH67609）加上一个碳水化合物结合组件后得到的融合酶是否获得降解结晶纤维素的能力。本文将编码内切葡聚糖酶Umcel5N的催化结构域（catalytic工能力domain，CD）的序列与编码Umcel6A的CBM序列通过接头序列进行基因融合，得到融合基因umCel5N-CBM，并实现了融合基因在大肠杆菌BL21（DE3）pLysS中的表达。研究结果表明，融合酶Umcel5N-CBM与结晶纤维素（avicel）以及滤纸粉末的结合能力比原始酶Umcel5N提高了约一倍，但未显示出降解结晶纤维素的新活性，说明在结晶纤维素的降解过程中，纤维素酶的催化功能域起到关键作用。

花生果种皮发育相关特异基因的克隆和表达分析640-644

摘要：本实验从花生果皮种仁抑制消减文库中筛选出了一个255bp的EST序列并进行了研究。构建了花生果种皮全长cDNA库并从中筛选出该基因的全长，命名为AhPSG8。此基因全长1118bp，开放阅读框第33～833个碱基，编码266个氨基酸残基组成的多肽。由生物信息学分析表明该基因编码多个活性位点蛋白，可能与细胞内DNA的转录有关；结构分析揭示出AhPSG8具有一个跨膜区，N端是一个由20个氨基酸组成的信号肽;该基因与已发表的基因序列没有明显的同源性，为一新基因；RT—PCR研究该基因在花生中的表达，结果显示该基因在果种皮中特异表达，10～40d果皮中丰富表达，推测为与花生果种皮发育相关基因。

花生防御素基因的克隆及原核表达645-650

摘要：植物防御素是植物免疫系统的一员，具有防御病原菌侵染植物的功能。本文采用RACE法成功地克隆花生防御素基因，并对其原核表达蛋白进行研究。研究结果表明，采用RACE方法克隆花生防御素基因（AhORRP），得到的cDNA全长为585bp，含一个225bp的开放阅读框（open reading frame，ORF），编码75个氨基酸；经同源分析，花生防御素蛋白与其它物种具有33％～70％的同源性。原核表达获得大小约28kD AhDRRP融合蛋白。该基因的克隆及其原核表达融合蛋白的获取为花生防御素功能鉴定打下一定基础。

利用EST数据克隆大豆天冬氨酸代谢途径关键酶基因651-658

摘要：电子克隆（in silico cloning）是随着基因组计划和EST计划实施而发展起来的利用生物信息学手段进行基因克隆的新方法。本研究根据物种间同源基因相对保守的特点，利用生物信息学方法以不同物种的基因序列为信息探针，运用Blast软件与所下载的大豆EST数据库进行比对拼接，获得基因全长cDNA序列。首次克隆了大豆天冬氨酸代谢途径上AHRI、AHAS、ASADH、BCAT、CBL、DAPD、DAPE、DHDPR、DHAD、HK和TD等11个关键酶基因的cDNA序列。其中AHRI、DAPD、DAPE、DHDPR和DHAD基因经RT—PCR克隆和序列分析验证，长度分别为1764bp、1467bp、1080bp、1035bp和1806bp，结果与电子克隆序列基本一致。本实验通过与不同物种的这些基因蛋白序列比较，发现与双子叶植物拟南芥、蓖麻和马铃薯的同源性较高，而与单子叶植物水稻的同源性略低。

利用甘薯质体同源片段构建多顺反子表达载体659-667

摘要：本研究利用质体基因组的进化保守性，根据烟草质体基因组全序列设计引物，从甘薯（lpomoea batatas L．）质体基因组中克隆了两个相邻的功能基因rbcL（GenBank登录号为AY942199）和HaccD（GenBank登录号为AY942200），以此作为定点整合外源基因的同源重组片段。选用水稻质体基因组强启动子prm及psbA3’非翻译区调控选择标记基因aadA和报告基因gfp，构建多顺反子表达盒prm—aadA-gfp-psbA-3＇，之后将表达盒克隆进甘薯质体同源片段中，获得甘薯质体多顺反子定点整合表达载体pSAG，酶切鉴定结果表明所构建的载体符合预期设计。这为后期甘薯质体转化体系的建立和通过质体基因工程手段将更多目的基因导入甘薯进行遗传改良奠定了基础。

三倍体毛白杨PtDRG02基因启动子的瞬时表达分析668-672

摘要：本研究利用PCR技术从三倍体毛白杨（（Populus tomentosaxP．bolleana）xP．tomentosa）基因组DNA中扩增获得抗病相关PtDRG02基因的一个启动子区（包括其下游5’端非编码区序列），命名为Ptp01。以β-葡萄糖苷酸酶（舢）基因为报告基因，构建了PtDRG02基因启动子植物表达载体Ptp01／gus。以根癌农杆菌EHA105及LBA4404感受态细胞为受体，转化植物表达载体Ptp01／gus进行瞬时表达，并对启动子进行了功能活性分析，结果表明该启动子能够驱动gus报告基因在毛白杨叶片组织中表达，但表达强度弱于花椰菜花叶病毒（CaMV）35S启动子。

拒盐型盐生植物小花碱茅肌动蛋白基因片段的克隆及序列分析673-677

摘要：本研究根据其它植物Actin基因的保守序列设计一对简并性引物，以拒盐型盐生植物小花碱茅根部总RNA为模板，采用RT-PCR的方法扩增出Actin基因片段并克隆到PUCm-T载体，阳性克隆经PCR检测后进行测序，在GenBank中注册；序列分析结果表明：该片段长约600bp，编码198个氨基酸；所得序列与GenBank中注册的其它植物Actin基因序列同源性均在84％以上，与其它肌动蛋白的氨基酸序列同源性达94％以上。

马铃薯愈伤组织中色素含量与4个花色苷合成相关基因的表达差异678-684

摘要：本研究从马铃薯（Solanum tuberosum cv．Chieftain）茎的愈伤组织中分离得到绿色、白色和红色3种愈伤组织，并利用鲜重法和分光光度法分别测量愈伤组织的生长量、叶绿素和花色苷的含量；通过半定量RT—PCR法分析4个花色苷生物合成相关基因的表达差异。结果表明：绿色愈伤组织生长最快，叶绿素含量最高，红色愈伤组织生长最慢，叶绿素含量最低；绿色和白色愈伤组织中几乎不含花色苷，红色愈伤组织中花色苷含量最高，达2．1OD513/mgFw；对CHS、F3H、DFR和F3’5’H四个花色苷生物合成相关基因表达分析发现，绿色和白色愈伤组织不合成花色苷可能与DFR基因不表达有关。本实验结果为进一步阐明花色昔生物合成机理和花色苷色素的生产应用提供一定的理论依据。

黑龙江凉水自然保护区苏云金芽孢杆菌的收集与鉴定685-690

摘要：黑龙江凉水自然保护区是我国现有保存下来的较大片原始红松林基地之一，总面积6394hm^2，森林覆盖率95％以上。本研究从小兴安岭凉水自然保护区采集土样782份，采用醋酸钠培养基结合高温方法筛选土壤中的芽孢杆菌，通过光学显微镜观察鉴定产生伴胞晶体的苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis．Bt）。总计分离得到芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌分别为1735株和33株，Bt菌株的分离率和出菌率分别为1．90％和4．22％。利用SDS-PAGE和PCR—RFLP方法对筛选获得的成分离株进行了杀虫晶体蛋白和基因型分析，结果表明14株产菱形伴胞的＆菌株，SDS-PAGE电泳分析芽孢后期产生分子量大小130kD蛋白带，PCR-RFLP分析初步鉴定为crylAc基因，其它产圆形或其它不定形晶体蛋白的＆分离菌中，芽孢后期主要蛋白大小为20～150kD不等，PCR—RFLP方法鉴定结合PCR片段测序分析这些菌株含有新型cry4、cry39和cry40基因等。本研究是“中国助资源收鉴与利用”项目组成部分之一，凉水自然保护区苏云金芽孢杆菌的收集与鉴定目的是要对整个东北地区成资源分布和多样性作一个初步评估，实验结果表明东北森林地区具有丰富多样的威菌株和杀虫基因资源。

原核表达Cry3Aa蛋白对椰心叶甲的杀虫活性691-694

摘要：椰心叶甲是近年来传入我国的危险性有害生物，严重危害了我国海南省、广东省、台湾省和香港地区的椰子、槟榔等棕榈科植物，并有蔓延趋势，。Bt Cry3Aa毒蛋白对鞘翅目害虫有较强的杀虫活性。本研究首次发现大肠杆菌原核表达的Cry3Aa重组蛋白对椰心叶甲成虫具有快速杀灭作用，工程菌表达的包涵体重组蛋白处理叶片，饲喂椰心叶甲成虫，浓度为2．0mg／mL时，24h内死亡率为100％。一次性饲喂处理24h、48h和72h的LC50分别为0．7516mg／mL、0．4755mg／mL和0．3714mg／mL，连续性饲喂即使低浓度也达到较高死亡率。本试验结果为cry3A口基因在转基因技术方面的应用或研发生物农药防治椰心叶甲害虫提供了重要的理论与技术支撑。

嗜热菌和假单孢菌及其融合子质粒DNA的RAPD分析695-702

摘要：本研究选用15个RAPD随机引物，对白琼海温泉分离的嗜热菌（HSR001）和海口琼山红城湖分离的假单孢菌（HSP002），以及二者的融合子RH004、RH006、RH009、RH012等共6个样株无性系作了RAPD多态性分析。其中3个引物未扩增出质粒DNA的条带，其余12个引物扩增出了有效的谱带。并对各无性系的指纹图谱中的DNA条带进行了统计，利用Clustal-w对其进行分析建立系统树和相似系数比较。结果表明：6个样株均具有丰富的RAPD多态性，6个菌株可分为2个类群，两亲本为一类，4个融合子为另一个类群。

磷脂酶Dα在拟南芥低温驯化过程中的作用途径分析703-708

摘要：本研究对低温驯化和未经低温驯化的磷脂酶仅基因敲除突变体与野生型拟南芥植株进行冻害胁迫处理后，通过观测植株表型和膜离子渗漏率的变化，鉴定两种基因型植株的抗冻性。结果发现，低温驯化后，PLDα敲除突变体的抗冻性明显低于野生型，表明PLDα参与植物的低温驯化过程。对其作用途径进行分析发现，PLDα不参与低温驯化过程中ABA信号转导作用，也没有参与SOD、CAT和POD等3种抗氧化酶活性的调节，但是参与低温驯化过程中膜稳定性调节和渗透调节过程。

α1，3-岩藻糖基转移酶Ⅶ转染对全反式维甲酸诱导的人肝癌细胞凋亡的影响709-714

摘要：为了解α1，3-岩藻糖基转移酶Ⅶ（α1，3FucT-Ⅶ）转染对全反式维甲酸诱导的人肝癌7721细胞凋亡的影响及其分子机理，本研究通过质粒转染把α1，3FucT-Ⅶ导入人肝癌7721细胞，建立了稳定表达不同量α1，3FucT—Ⅶ的H7721细胞株。采用流式细胞术测定细胞表面SLex的表达及细胞凋亡、Western blot方法检测Caspase-3、免疫荧光染色法观测细胞骨架蛋白——肌动蛋白F—actin的变化、caspase-3抑制剂DEVD—CHO抑制caspase-3的活化。研究结果表明，用全反式维甲酸诱导细胞凋亡，α1，3FucT—Ⅶ的过量表达使凋亡细胞数量明显增多，caspase-3的活性和细胞骨架F-actin的破坏均增高，抑制剂DEVD—CHO可明显抑制细胞凋亡，但F—actin的破坏程度并未得到改善。通过caspase -3通路转染α1，3FucT—Ⅶ增加了肝癌细胞对全反式维甲酸诱导的凋亡的敏感性，从而为肝癌的防治提供了实验依据。

一株从金钱树上分离的产纤维素降解酶的菌株的分离及特性鉴定715-719

摘要：本研究从金钱树（Zamioculcas zamiifolia）白绢病（Southern blight）病株上分离到一株产纤维素酶菌株SM，经形态观察和rDNA—ITS序列分析鉴定为齐整小核菌（Sclerotium rolfsii Sacc），经以羧甲基纤维素钠为唯一碳源的培养基培养和刚果红染色测定，证明SM菌株可产生高活性纤维素降解酶。本文对SM菌株产纤维素降解酶的液态发酵条件进行了研究，结果表明：在起始pH6．0，无机氮：有机氮：纤维素碳源之比为0．07g：1．4g：1．6g，温度为30℃，摇床转速为160r／min，发酵培养时间为5d的条件下，该菌株发酵液的CMC酶活性达到11．7U／mL，滤纸酶活性达到2．156U／mL，β-葡萄糖苷酶活性达到3．911U／mL。

四川邛海湖湿地鸟类种群多样性及邛海湖生态评价720-724

摘要：本研究采用定点取样，统计与分析采集数据，于1988年、1999年及2006年冬季至2007年春先后对四川西昌邛海湖及其湖周湿地进行实地考察，对湖区鸟类进行调查统计，记录鸟类25种，隶属6目6科，该湿地鸟类的多样性变化较为明显，物种稳定性差，这表明邛海湖湿地鸟类的生存状况不容乐观。随着经济的发展和人类活动的加剧，邛海湿地遭受不同程度的破坏，导致湿地不断萎缩退化，环境功能与生物多样性逐渐衰减，邛海湿地的生态环境状况需进一步的研究和保护。

甘蓝型油菜幼苗对NaCl胁迫的抗氧化应答725-729

摘要：本文主要研究了甘蓝型油菜幼苗对NaCl胁迫的抗氧化应答情况。结果表明，在200mmol／L NaCl胁迫下，随着胁迫时间的延长，油菜幼苗叶片的相对含水量逐渐下降，细胞内的电解质渗出物逐渐增多，电导率逐渐升高；POD、SOD和CAT三种抗氧化酶活性在开始时都逐渐提高，24h后达到最大值，随后逐渐降低。对NaCl胁迫过程中这三种抗氧化酶基因进行实时荧光定量PCR分析，分析结果显示这三种抗氧化酶基因的表达与其酶活性的变化一致。因此，NaCl胁迫诱导了POD、SOD和CAT三种抗氧化物酶基因的过量表达，抗氧化酶活性相应提高，从而在一定程度上提高了植物对NaCl胁迫的耐受能力。

抑菌剂和筛选剂对香蕉受体系统的影响730-736

摘要：本研究将抑制农杆菌生长的两种抑菌剂头孢霉素和特泯丁，以及3种筛选剂潮霉素B、卡那霉素和PPT除草剂，以不同浓度添加到香蕉的3种受体系统中，研究它们对香蕉组织生长与分化的影响。实验结果表明：不同抑菌剂和筛选剂对香蕉再生体系的影响程度不同，不同香蕉再生体系对相同抑菌剂和筛选剂的敏感性也不同，因此不同香蕉再生体系需要选择不同的抑菌剂与筛选剂的最佳的配比和组合配比。3种筛选剂在香蕉的3种再生体系中的筛选能力顺序都为：PPT〉潮霉素B〉卡那霉素。

袋口高度、光照、CO2等因子对杏鲍菇工厂化栽培的影响737-739

摘要：本研究通过研究开袋袋口高度、光照、CO2浓度等因子对杏鲍菇工厂化栽培的影响，明确杏鲍菇工厂化栽培所需的必要条件，为国内模式工厂化栽培杏鲍菇提供现实和理论依据，结果表明：开袋采用长袋颈产量比短袋颈高，子实体菌柄比短袋颈更长、更细，菌盖直径比短袋颈大。子实体形态发育，光照强度以200Lx为宜。用红袋、黑袋同时滤光比单独用红袋或黑袋滤光效果好，可抑制袋壁和袋底原基形成，减少营养消耗，比对照增产34％。栽培房CO2浓度随层架升高而递减，开袋前CO2浓度高达2．5％，平均值为2．01％，开袋后袋内CO2浓度保持在0．8％-0．97％，该浓度下杏鲍菇子实体发育正常。