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中国肿瘤生物治疗 2009年第03期杂志 文档列表

中国肿瘤生物治疗杂志专家论坛

不同单核细胞亚群来源树突状细胞的特性及其在肿瘤免疫治疗中的作用211-215

摘要：树突状细胞由多种表型特征及生物学功能特性不同的亚群组成，单核细胞源性树突状细胞是其中的重要组成群体。近年来研究表明，人体内外周血单核细胞由CD14^＋＋CD16^-和CD14^＋CD16^＋两个群体组成，小鼠体内则由CD115^＋Ly6Chigh和CD115^＋Ly6Clow组成；不同亚群单核细胞可发育分化成为具有不同表型特征的树突状细胞，在体内外诱导产生不同类型的免疫应答反应。小鼠体内CD115^＋Ly6Clow群体是机体稳定状态下外周组织器官树突状细胞的重要前体细胞，CD115^＋Ly6Chigh单核细胞是炎症状态下外周淋巴器官中树突状细胞的重要来源。CD115^＋Ly6Chigh来源的树突状细胞，一方面可以直接提呈外周摄取的抗原，另一方面还可将MHC-I／抗原肽复合物传递给淋巴组织中原住性树突状细胞。不同来源树突状细胞间的协同和交互作用确保机体诱发针对不同外源抗原刺激的有效免疫应答。

中国肿瘤生物治疗杂志研究快报

PRMT1通过精氨酸甲基化作用修饰剪接因子SF2／ASF216-220

摘要：目的：探讨蛋白质精氨酸甲基转移酶1（protein arginine methyltransferase1，PRMT1）对剪接因子SF2／ASF（splicing factor2／alternative splicing factor）的甲基化修饰位点。方法：构建SF2／ASF野生型和Arg93／97／109突变体质粒，在体外表达和纯化GST标签的PRMT1、SF2／ASF及其Arg突变体融合蛋白，以甲基化活性实验检测PRMT1对SF2／ASF的甲基化作用及其甲基化修饰位点，以免疫荧光实验观察甲基化修饰对SF2／ASF亚细胞定位的影响。结果：PRMT1对SF2／ASF有明显的甲基化修饰作用；当Arg93／97／109突变为赖氨酸后，PRMT1对SF2／ASF突变体的甲基化修饰程度明显降低，其中Arg97突变后SF2／ASF甲基化程度减弱最明显。甲基化修饰不影响SF2／ASF的亚细胞定位。结论：发现SF2／ASF是PRMT1新的底物蛋白，Arg93／97／109均为PRMT1的甲基化修饰位点，其中Ar@7是主要修饰位点；PRMT1对于SF2／ASF的甲基化修饰并不改变后者细胞内的定位。

中国肿瘤生物治疗杂志基础研究

流感疫苗促进髓系白血病骨髓细胞来源树突状细胞的功能221-226

摘要：目的：研究流感疫苗对髓系白血病骨髓源性树突状细胞（dendriticcells，DCs）功能的影响及其机制。方法：分离髓系白血病患者[急性髓细胞白血病（acutemyeloid leukemia，AML）19例，慢性髓细胞白血病（chronicmyeloid leukemia，CML）8例]骨髓单个核细胞（mononuclearcell，MNC），用GM—CSF和IL4诱导7d，获得未成熟白血病DCs，然后加入全病毒灭活流感疫苗（whole inactivated influenzavaccine，WIV）、裂解病毒流感疫苗（split influenza vaccine，SIV）或TNF-d继续培养24h。R显带法分析DCs染色体核型，流式细胞仪检测DCs表型，ELISA法测定DCs培养上清IL-12的水平，CCK8法检测DCs诱导的CTL对自体白血病细胞的细胞毒作用。结果：19例AML患者中的15例及8例CML患者的MNC全部成功诱导出DCs。与TNF。仪刺激的白血病DCs相比，流感疫苗刺激的白血病DCs表面分子（CD80、CD83、CD86、HLA—DR）表达明显上调（P〈0．05），培养上清中IL-12的分泌水平明显增加（P〈0．05），其诱导的CTL可显著杀伤自体白血病细胞（P〈0．05）；WIV刺激的DCs在表型、IL-12分泌水平及细胞毒作用方面均较SIV刺激的DCs显著增高（P〈0．05）。结论：流感疫苗促进髓系白血病源DCs表型成熟及IL-12的分泌，增强其诱导的CTL对自体白血病细胞的杀伤作用。

中国肿瘤生物治疗杂志科技动态

调节性T细胞从移植物局部迁移至引流淋巴结抑制同种异体排斥反应的发生226-226

摘要：调节性T细胞（Treg）在维持免疫稳态中发挥了重要作用。Treg的功能发挥需要其向组织或二级淋巴组织的迁移。根据CD103的表达情况可将Treg分为两个亚群：表达L选择素和CCR7的CD103-初始Treg主要在淋巴组织内循环；高表达E、P选择素和黏附分子CD54、ICOS、LFA-1的CD103^＋效应Treg高表达趋化因子受体CCR2、CCR6和CXCR3，可以有效地向免疫反应部位迁移。Treg恰当的迁移定位对其免疫抑制功能有效的发挥是至关重要的。

中国肿瘤生物治疗杂志基础研究

Survivin HLA—A2^＋高亲和性CTL表位的预测及鉴定227-231

摘要：目的：采用生物信息方法预测和鉴定survivin抗原HLA—A2^＋限制性CTL表位，为探索基于survivin的肿瘤免疫治疗奠定基础。方法：采用超基序法和量化基序法对靶抗原survivinHLA—A2^＋限制性CTL表位进行预测；选取得分〉10的表位肽为候选对象，并进行人工合成。采用T2细胞，以HLA—A2结合实验和流式细胞术（FITC染色）检测候选CTL表位肽的结合亲和力[以荧光系数（fluorescence index，FI）表示]；以HLA—A2解离实验和流式细胞术检测其结合稳定性[以复合物解离50％的时间DC50（dissociation complex50％）表示]。结果：预测到的候选survivin CTL表位肽分别是：20STFKNWPFL28（SV20-28）、23KNWPFLEGC31（SV23-31）、96LTLGEFLKL104（SV96-104）、6LPPAWQPFL14（SV6-14）33CTPERMAEA41（SV33-41）、46CPTE—NEPDL54。（SV46-54）、130KVRRAIEQL138（SV130-138）、37RMAEAGFIH45（SV37-45）、88SVKKQFEEL96（SV88-96）。亲和力分析显示：SV20-28、SV96-104、SV130-138、SV23-31的F1分别为8．61、6．88、5．89、3．81；SV33-41、SV6-14、SV46-54、SV37-45、SV88-96的F1分别为0．31、-0．29、-0．4、-0．16和-0．03；稳定性分析结果DC50为：SV20-28、SV96-104、SV130-138〉8h；SV23-31为4～6h；SV6-14、SV33-41、SV88-96为2-4h；SV46-54、SV37-45为0～2h。结果提示，SV20-28、SV96-104、SV130-138为高亲和力表位肽，SV23-31为中等亲和力表位肽，SVⅢ33-41、SV6-14、SV46-54、SV37-45、SV88-96为低亲和力表位肽。结论：超基序法、量化基序法可快速有效地预测抗原表位，SV20-28、SV96-104、SV130-138有可能是survivin HLA—A2^＋CTL表位，可用于后续研究。

bcl-2、IL-6、IL-6R反义寡脱氧核苷酸对小细胞肺癌细胞作用的比较232-237

摘要：目的：比较bcl-2、白介素-6（interleukin-6，IL-6）、白介素-6受体（interleukin-6receptor，IL-6R）反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸（antisense phosphorothiate oligodeoxynucleotide，As—PS—ODN）对小细胞肺癌细胞株NCI—H446细胞增殖及诱导凋亡的作用，初步探讨反义核苷酸技术治疗中靶基因的选择策略。方法：合成反义寡脱氧核苷酸bcl-2AS—PS-ODN、IL-6AS-PS-ODN、IL-6RAS—PS—ODN，分别作用于NCI—H446细胞株，通过细胞克隆形成实验检测细胞增殖活性的变化，细胞凋亡线粒体流式检测及DNA倍体分析检测细胞凋亡，半定量RT-PCR检测相关基因表达水平的变化。结果：（1）bcl-2AS—PS．ODN、IL-6AS．PS—ODN、IL-6RAS．PS—ODN均能够抑制肺癌细胞增殖活性和诱导细胞凋亡，其中以IL-6AS—PS—ODN抑制作用最强，bcl-2AS．PS—ODN次之，IU-6RAS—PS-ODN作用最弱。（2）3种反义寡脱氧核苷酸均能下调肺癌细胞相应基因的表达水平，其中以IL-6下调幅度最大，达（84．1±5．01）％；bcl-2和IL-6R基因下调幅度相近，分别为（62．6±3．42）％和（60．3±4．45）％。（3）反义核苷酸作用后除了引起自身基因表达下调外，还伴对其他基因表达的调节作用，如IL-6AS—PS—ODN作用使bcl-2基因表达下调（32．2±0．20）％；而bcl-2AS—PS—ODN作用使IL一6基因表达上调（74．34-4．13）％。结论：IL-6AS—PS—ODN较bcl-2AS—PS—ODN和IL-6RAS—PS—ODN能更有效地诱导小细胞肺癌细胞凋亡，IL-6是NCI—H446小细胞肺癌反义核苷酸治疗较为合适的靶基因。

抗ATPase F1α抗体MAb3D5AB1对荷A549肺腺癌小鼠的抑制作用238-242

摘要：目的：探讨一种新型抗ATPaseF1d抗体，人血管抑制和肿瘤转移相关蛋白（human angiostatin interacting and tumor metastasis involving protein，HAI—TMIP）抗体MAb3D5ABl（简称GX）对A549肺腺癌小鼠移植瘤的抑制作用。方法：在C57BL／6小鼠右前腋窝接种A549肺腺癌细胞，制备小鼠荷瘤模型，32只荷瘤小鼠随机分为对照组（无任何处理）及A、B、c治疗组（分别腹腔注射125、250、500ng／mlGX）。观察各组移植瘤小鼠肿瘤体积、生长延迟时间（t：tlmorgrowthdelay，TGD）及小鼠生存期。免疫组织化学法检测瘤组织内微血管密度。TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。结果：成功建立了荷A549肺癌小鼠模型，治疗组小鼠移植瘤的体积明显减小（P〈0．05）、TGD随GX剂量增加而显著延长（P〈0．01）、瘤组织内微血管密度明显减少（P〈0．05），TUNEL法检测发现各治疗组瘤细胞凋亡率均显著高于对照组（均P〈0．01）。结论：GX可以抑制肿瘤新生血管生成，促进肿瘤细胞调亡，使A549肺腺癌小鼠移植瘤生长减慢，并延长小鼠生存期。

中国肿瘤生物治疗杂志科技动态

c-myc通过抑制miR-23a／b增强线粒体谷氨酰胺酶表达和谷氨酰胺代谢242-242

摘要：如今，生命科学的研究已经渐渐转向功能蛋白组学的方向，确定蛋白质在机体细胞中的相互作用和机制是个复杂而艰巨的任务。Westernblotting这样的传统的蛋白质表达分析法费时费力，于是，以双向电泳和质谱为主要代表的蛋白组学，一种以蛋白质为基础的整体生物学研究方法应运而生，并在生命科学领域里占据了越来越重要的地位。其中双向电泳从1975年发展到现在，已成为蛋白质组学中一种流行的蛋白分离手段。

中国肿瘤生物治疗杂志基础研究

模拟乳腺癌骨转移微环境中CGRP对成骨细胞OPG和RANKL表达影响243-247

摘要：目的：以乳腺癌细胞与成骨细胞共培养模拟乳腺癌骨转移微环境，观察在此微环境中降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP）对成骨细胞护骨素（osteoprotegerin，OPG）及细胞核因子KB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor-kappa B ligand，RANKL；又称破骨细胞分化因子）表达的影响。方法：将转移性乳腺癌细胞MDA—MB-231或MDA—MB-435与成骨细胞MG63共培养，建立模拟乳腺癌骨转移微环境。行CGRP（1×10^8mol／L）干预，应用RT—PCR和Western Blotting技术检测干预后OPG和RANKL在mRNA和蛋白水平表达的变化。结果：MG63与MDA—MB-231或MDA—MB-435共培养环境中，RANKLmRNA及蛋白水平升高，而OPGmRNA和蛋白水平表达下降；CGRP处理后，共培养环境中RANKLmRNA及蛋白水平降低，OPGmRNA和蛋白水平升高（均P〈0．05）。结论：乳腺癌细胞能调节成骨细胞OPG／RANKL轴的表达，进而可能促进破骨细胞的活性，造成溶骨性破坏；CGRP干预可逆转此调节作用，在乳腺癌骨转移的治疗中有潜在应用价值。

Smad4过表达对人胃癌细胞增殖和NF-κB通路的影响248-252

摘要：目的：构建pEGFP-CI-Smad4表达载体，观察Smad4过表达对人胃癌SGC7901细胞增殖的影响，探讨其与NF—KB的相关性。方法：构建增强绿色荧光蛋白（EGFP）与Smad4的融合表达载体，转染人胃癌SGC7901细胞，荧光显微镜观察转染后细胞EGFP的表达，Westernblotting检测SGC7901-Smad4细胞中Smad4和NF—KB的表达，电泳迁移率变异分析（electro-phoretic mobility shif assay，EMSA）检测过表达Smad4对胃癌SGC7901细胞NF—KB活化的影响，MTT法检测过表达Smad4对SGC7901细胞增殖的影响。结果：在转染pEGFP—C1-Smad4的人胃癌SGC7901细胞（SGC7901-Smad4）中观察到EGFP的表达；Westernblotting检测显示，SGC7901-Smad4细胞中Smad4过表达，并伴随核转录因子NF—KB065的表达水平下调；EMSA检测显示Smad4过表达可下调NF—KB活化；MTF法显示过表达Smad4显著抑制SGC7901细胞增殖（P〈0．05或P〈0．01）。结论：Smad4过表达显著抑制人胃癌细胞增殖，其机制可能与下调NF—KB信号通路有关。

中国肿瘤生物治疗杂志简讯

本刊已被英国《公共健康研究数据库》（GH）收录252-252

摘要：2009年4月28日，本刊收到中国科学技术期刊国际交流委员会通知，《中国肿瘤生物治疗杂志》已被英国《公共健康研究数据库》（GlobalHealth，GH）收录。该数据库是由英国国际农业和生物科学研究中心主办的国际权威的公共健康数据库，

中国肿瘤生物治疗杂志基础研究

肝癌细胞特异性IL-1β反义RNA对小鼠移植肝癌的抑制253-257

摘要：目的：构建肝癌细胞特异性小鼠IL-1β反义RNA表达载体，观察其对H22肝癌细胞小鼠移植瘤生长的影响及其相关机制。方法：构建由AFP最小启动子和CMV增强子嵌合序列调控的携IL-1β反义RNA表达载体pafpIRES2-antiIL-1β1和pafpIRES2-antiIL-1β2，经质粒PCR、限制性酶谱分析、序列测定进行鉴定。反义RNA表达载体转染小鼠H22肝癌细胞，分H22／mock组、H22／antilL—1β1组、H22／antilL-1β2三组，RT—PCR检测IL-1β的表达水平。以转染后的H22细胞皮下接种建立荷肝癌小鼠模型，观察移植瘤体积和重量，MTF法检测荷瘤小鼠脾脏中分离的NK细胞对H22细胞的杀伤活性。结果：经质粒PCR、限制性酶谱分析、序列测定证实成功构建能够在肝癌细胞中特异性表达IL-1β反义RNA的表达载体pafpIRES2-anti-IL-1β1和pafpIRES2-antiIL-1p2，转染I-1β2细胞后细胞中IL-1p表达水平明显下降，以pafpIRES2-antiIL-1β2更为显著。成功建立荷肝癌小鼠模型，与H22／mock组小鼠相比，H22／antilL-1β2组小鼠移植瘤体积较小，生长显著减慢（P〈0．05）。H22／anti—IL-1β1、H22／antilL-1β2组荷瘤小鼠的NK细胞对H22细胞的杀伤活性明显增强（P〈0．05或P〈0．01）。结论：成功构建的肝癌细胞特异性IL-1β反义RNA表达载体可有效抑制小鼠移植肝癌的生长，其机制与靶向阻断IL-1β表达、上调NK细胞的杀伤活性有关。

携突变减毒Stx1编码序列重组腺病毒的构建及其抗乳腺癌的活性258-262

摘要：目的：构建携带1／100、1／1000减毒活性的突变减毒志贺样毒素I（Shiga—like toxinl，Stxl）编码序列的复制缺陷型腺病毒，并观察其抗人乳腺癌细胞裸鼠移植瘤的活性。方法：重叠PCR法构建毒性为原毒素毒性1／100、1／1000的突变减毒Stxl编码序列，T—A克隆并测序后构建携带该编码序列的复制缺陷型腺病毒载体Adv—Stx-1R170L。制备人乳腺癌T47D细胞移植瘤裸鼠模型，Adv—Stx-1R170L。肿瘤局部注射给药，评价其体内抑瘤能力。结果：经测序证实正确克隆了1／100、1／1000减毒活性的突变减毒Stxl编码序列，成功构建携带该突变减毒Stxl编码序列的复制缺陷型腺病毒载体Adv·Stx-1R170L。体内实验显示，Adv—Stx-1R170L。可以有效抑制裸鼠体内移植瘤的生长，与携带绿色荧光蛋白编码序列的腺病毒对照组、PBS对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：成功构建了携带1／1000原毒素活性的突变减毒Stxl编码序列的重组复制缺陷型腺病毒载体，该病毒载体可以有效抑制裸鼠体内移植瘤的生长，且未见明显毒性作用。

Exosomes联合卡介苗的体内抗肿瘤效应263-266

摘要：目的：探讨exosomes（Exo）联合卡介苗（bacillus Calmette-Guerin vaccine，BCG）的体内抗肿瘤效应。方法：通过密度梯度离心法分离和纯化E．G7-OVA肿瘤细胞来源的Exo，Westernblotting检测其蛋白成分。分别以Exo、BCG、Exo＋BCG、PBS免疫小鼠，以E．G7-OVA细胞攻击，观察各组免疫保护效应；建立E．G7-OVA荷瘤小鼠模型，观察各组免疫治疗效应。LDH法检测4组免疫小鼠脾细胞CTL细胞毒性。结果：Westernblotting检测显示，Exo含有HSP60、OVA、HSC70和CD63分子；免疫保护实验结果显示，Exo＋BCG组免疫小鼠90d无瘤率显著高于Exo组和BCG组（60％vs20％、0％，P〈0．01）；免疫治疗实验结果显示，Exo＋BCG对小鼠移植瘤的抑制显著强于Exo组和BCG组（P〈0．01）。CTL检测结果显示，Exo＋BCG免疫小鼠的CTL细胞特异性杀伤E．G7-OVA细胞的活性显著高于其他各组（P〈0．01）。结论：BCG作为免疫佐剂能显著增强exosomes的体内抗肿瘤效应。

细胞因子诱导杀伤细胞对裸鼠胃癌移植瘤的靶向抑制作用267-271

摘要：目的：探讨细胞因子诱导杀伤细胞（cytokine—induced killer cell，CIK）对裸鼠胃癌移植瘤的靶向抑制作用。方法：将人胃癌细胞SGC-7901注射到裸鼠腹股沟皮下建立胃癌移植瘤裸鼠模型，荷瘤裸鼠随机分为CIK细胞组与成纤维细胞组，分别注射荧光染料SP—DiI标记的CIK细胞与成纤维细胞（HFL—I）于裸鼠种植瘤对侧腹股沟皮下，观察其在荷胃癌裸鼠体内各种组织中的分布情况；同时观察CIK治疗后肿瘤的体积大小并计算抑瘤率，病理观察肿瘤的坏死面积。结果：SP—DiI标记的CIK细胞注射后10d主要浓集在荷瘤裸鼠的肿瘤组织，注射局部、肝脏、脾脏和肺脏组织中无CIK细胞或分布极少（P〈0．01）；标记的成纤维细胞没有出现在肿瘤组织、肝脏、脾脏和肺脏组织，主要集中于注射局部。CIK细胞治疗后裸鼠的移植瘤体积显著小于对照组（P〈0．05），其抑瘤率为29．82％；移植瘤组织坏死面积评分显著高于对照组（P〈0．01）。结论：CIK细胞对裸鼠胃癌移植瘤有良好的靶向性和杀伤性。

中国肿瘤生物治疗杂志临床研究

食管癌患者血清蛋白指纹图谱的检测及食管癌诊断模型的建立272-276

摘要：目的：利用蛋白质组学基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption／ionization time-offlight mass spectrometry，MALDI—TOFMS）技术检测食管癌患者血清蛋白指纹图谱，建立食管癌蛋白指纹图谱诊断模型，探讨其临床应用价值。方法：收集河北医科大学第四医院2008年5月至9月间胸外科食管癌患者血清32例和健康志愿者血清28例，采用弱阳离子交换蛋白质芯片（WCX磁珠）提纯血清蛋白，MALDI—TOFMS技术进行血清蛋白质质谱检测，所得结果用ZUCI一蛋白芯片数据分析系统进行分析。运用遗传算法结合支持向量机运算建立食管癌蛋白指纹图谱诊断模型；将60例标本随机分成训练组和盲法测试组，训练组为21名食管癌患者和19名健康人，盲法测试组为11名食管癌患者和9名健康人，验证诊断模型的特异性和敏感性。结果：采集食管癌患者和健康对照者的血清蛋白指纹图谱，经数据对比分析找到44个有显著性差异的质荷比峰（P〈0．05）；从中筛选出差异最显著的6个蛋白质荷比峰（m／z分别为2210、2864、6634、4068、2083和8131），并以此建立食管癌蛋白指纹图谱诊断预测模型；验证该模型诊断食管癌的特异性为88．9％、敏感度为100％。结论：应用MALDI．TOFMS技术检测食管癌患者血清蛋白指纹图谱建立的食管癌蛋白指纹图谱诊断模型在食管癌的诊断中具有较高的敏感度和特异性。

中国肿瘤生物治疗杂志科技动态

专职性的CD4^＋记忆细胞以静息状态定位在骨髓中276-276

摘要：免疫记忆细胞在生成之后发生自稳性增殖以维持机体免疫记忆，这个过程发生在何处一直是免疫学研究的一个关注点。记忆性CD8和B细胞在生成后定位在骨髓中，依赖于周围环境中的生长因子存活和增殖。传统观念认为，记忆性CD4^＋细胞生成后一直在外周循环，以便能在第一时间发现外周可能出现的抗原并将其清除。而新近研究表明，抗原特异性的记忆性CD4^＋细胞在生成之后主要定居在骨髓中，在一种表达IL-7的骨髓基质细胞的龛位中静息。

中国肿瘤生物治疗杂志临床研究

负性协同刺激分子B7-H1和B7-H3在乳腺癌组织中的表达及其临床意义277-281

摘要：目的：探讨负性协同刺激分子B7-H1、B7-H3在乳腺癌组织中的表达及其与患者临床病理参数、预后及CD3^＋T淋巴细胞浸润程度的相关性。方珐：选取2003年3月至2004年1月在苏州大学附属第三医院乳腺外科接受手术治疗的女性乳腺癌患者49例（均经病理诊断确认为浸润性导管癌）的乳腺癌组织标本，免疫组织化学方法检测乳腺癌组织中协同刺激分子B7-H1、B7-H3的表达以及CD3^＋T淋巴细胞浸润程度。结果：（1）乳腺癌组织中B7-H1阳性表达率为53．06％（26／49），其表达水平与肿瘤大小呈正相关（P〈0．05）、与Her2／neu表达水平呈正相关（P〈0．05）、与CD3^＋T淋巴细胞浸润程度呈负相关（P〈0．05）；（2）乳腺癌组织中B7-H3阳性表达率为59．18％（29／49），其表达水平与病理分期呈正相关（P〈0．05）、与患者预后呈负相关（P〈0．05）；（3）乳腺癌组织中B7-H1和B7-H3的表达水平呈正相关（r=0．3316，P〈0．05）。结论：负性协同刺激分子B7-H1和B7-H3在乳腺癌中的表达水平与临床病理因素及预后密切相关，对该两分子的检测在乳腺癌诊断和预后判断中具有潜在的临床应用价值。