中国农学通报杂志 统计源期刊

中国农学通报 2008年第03期杂志 文档列表

中国农学通报杂志畜牧兽医科学

植物适合度对食草动物的响应机制1-4

摘要：在不断适应进化过程中，植物在受到动物采食后，逐渐改变了其生活型。植物通过形态、化学、生理生态和生殖等各方面对食草动物做出一定的响应，从而极大地提高了自身的适合度。认识植物适合度与食草动物之间的相互关系，有助于深入探讨植物种群的遗传分化和动植物间协同进化关系。

H5亚型禽流感病毒HA基因在WISH细胞中的瞬时表达5-8

摘要：在WISH细胞中,对H5亚型禽流感病毒HA基因进行了瞬时表达的研究。首先构建了真核表达质粒pVAX-H5HA,通过酶切和PCR筛选阳性克隆后测序。然后将重组表达质粒以脂质体介导法转染WISH细胞。通过RT-PCR在转录水平检测目的基因的表达，间接免疫荧光检测目的蛋白。结果表明，HA基因在WISH细胞中进行了表达。

日粮蛋白质补充料来源对肉牛消化道营养物质流量和表观消化率的影响9-14

摘要：为了研究日粮蛋白质补充料来源对肉牛真胃食糜营养流量和营养物质表观消化率的影响，选择体重600kg左右荷斯坦（Holstein）公牛3头，安装有瘤胃、真胃瘘管，按3×3拉丁方实验设计分别饲喂以豆粕、全脂大豆、过瘤胃蛋白质料为蛋白质补充料来源的3种不同日粮，以三氧化二铬（Cr2O3）作真胃食糜标记物，全收粪法收集粪样，测定真胃食糜和粪中的有机物（OM）、粗蛋白质（CP）、中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）流量及在瘤胃内、真胃后段消化道（简称肠道）的表观消化率。结果表明日粮蛋白质补充料来源对瘤胃及全消化道的OM、NDF、ADF表观消化率没有显著影响（p〉0．05），日粮蛋白质补充料来源明显影响真胃食糜的蛋白质量和小肠蛋白质消化量（p〈0．05），但全消化道CP表观消化率没有明显差异（p〉0．05）。

猪体细胞胞质注射核移植研究15-19

摘要：首例体细胞克隆动物“多利”羊诞生以来，各种体细胞核移植动物相继成功克隆，但其克隆效率很低（低于10％）以及大都表现出不同程度的器官衰竭或发育畸形等。猪体细胞核移植在异种器官移植和克隆性治疗上具有重大意义，但其克隆效率更低（1%-2％）。利用胞质注射技术对比不同供核细胞、是否经血清饥饿和不同时间段激活对重构胚发育的影响，在其重构胚卵裂率上，试验结果表明：颗粒细胞与胎儿成纤维细胞无显著差异（43．37％，45．98％；P〉0．05）；血清饥饿与否无显著差异（45．61％。50．71％；P〉0．05）；在核移植后1-3h和3-5h激活显著高于立即激活（51．82％，56．98％。8．51％；P〈0．05）。

IBDV H1株VP2基因的原核表达20-23

摘要：【研究目的】为了研究鸡传染性法式囊病毒的分子生物学特性，【方法】应用反转录（RT—PCR）技术从河南传染性法式囊发病鸡中总RNA克隆出1461bp的VP2基因，并将其克隆于pET-28a载体，筛选并构建了pVP2表达载体。【结果】经IPTG诱导后，在其宿主菌BL21（DE3）中成功表达了53．7ku蛋白。【结论】经SDS—PAGE和Western blotting分析，VP2表达产物以包涵体形式存在，并与鸡IBDV抗血清及1株IBDV单抗发生特异性反应。

肉牛过瘤胃脂肪进食量对营养物质消化、氮沉积和嘌呤衍生物排出量的影响24-29

摘要：为研究过瘤胃脂肪对内牛营养物质消化代谢和尿中嘌呤衍生物排出量的影响。试验选用15头西杂肉牛分成三组，试验1组和试验2组在对照组的日粮基础上每天补饲300g和500g过瘤胃脂肪粉，用全收粪去和全收尿法分别测定营养物质消化代谢和尿中嘌呤衍生物排出量，试验结果表明，日粮中补饲过瘤胃脂肪对全消化道OM、NDF、ADF消化率没有明显影响（p〉0．05），补饲脂肪明显影响全消化道粗蛋白和粗脂肪的表观消化率，并随补饲脂肪增加粗脂肪消化率提高，但补饲500g脂肪明显降低日粮粗蛋白质消化率（p〈0．05）；补饲脂肪明显影响氮的沉积，补饲300g脂肪比不补或补饲500g脂肪有明显高的可消化氮沉积；日粮过瘤胃脂肪补饲对内牛尿中嘌呤衍生物排出量没有明显影响（p〉0．05）。

重组水貂生长激素真核表达载体的构建及在巴斯德毕赤酵母中的表达30-34

摘要：【目的】构建水貂生长激素（mGH）基因真核表达载体,并在巴斯德毕赤酵母GS115中进行表达,为大量获得水貂生长激素奠定基础。【方法】将体外合成的水貂生长激素基因插入分泌型表达载体pPIC9K。将重组的pPIC9K-mGH用SacI酶切后,LiC1法转化巴斯德毕赤酵母菌株GS115,经G418筛选后进行甲醇诱导表达,并以SDS-PAGE和Western blot检测酵母上清中水貂生长激素的表达。【结果】酵母上清中可见与目的蛋白相对分子量（31kd）相符的条带,该条带可被水貂生长激素多克隆抗体特异识别。【结论】正确构建了水貂生长激素真核表达载体,该蛋白能在巴斯德毕赤酵母中成功表达。

兔排泄物中阿维菌类药物的高效液相色谱检测35-39

摘要：建立了一种同时检测兔排泄物中阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素、爱普菌素的高效液相色谱方法,样品用乙腈提取,Bond Elut C18柱净化,用三氟乙酸酐和1-甲基咪唑的乙腈溶液作衍生化试剂,然后加入冰乙酸和三乙胺进行衍生化反应30min,用液相色谱荧光检测器检测,该方法检测兔排泄物在2～10ng/g的添加范围内兔粪的平均回收率73.17%～101.30%,日内变异系数小于11.61%,日间变异系数小于11.31%,兔尿的的平均回收率在75.69%～101.84%,日内变异系数小于12.20%,日间变异系数小于10.880%,爱普菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素在兔粪中的检出限为0.09～0.25ng·g^-1,在兔尿中的检测限为0.04～0.28ng·ml^-1。4种药在兔t兔粪便和尿液中的定量限分别是2ng·g^-1和2ng·ml^-1。该方法可靠、灵敏,可用于常规的残留检测。

中国农学通报杂志农业生物技术科学

龙眼胚性愈伤组织肌动蛋白基因（actin）片段的克隆与序列分析40-43

摘要：采用同源克隆方法从龙眼胚性愈伤组织分离肌动蛋白基因（actin）。通过保守区和3’RACE扩增,分别获得347bp和837bp的特异片段,经过序列拼接得到895bp的龙眼actin基因3’端序列。与多种植物的肌动蛋白基因进行同源性比较,该片段的核苷酸序列同源性多在80%以上,氨基酸序列同源性大于90%,具有高度保守性。可作为龙眼体胚发生过程中基因表达分析的内参。

一种适用于木犀科苦丁茶的高效DNA提取法44-47

摘要：【研究目的】报道了一种快速简便地提取高质量植物总DNA的改良CTAB法。【结果】应用该法能简便快速地去除多糖等干扰物质,从而获得高质量的木犀科苦丁茶总DNA。所得DNA长度接近21kb,OD260/OD280在1.8左右。【结论】以此DNA为模板获得带条清晰、重复性高的ISSR-PCR扩增结果,且在一定范围内模板用量对ISSR-PCR扩增结果基本无影响。

DNA分子标记技术及其在椰子种质资源研究中的应用48-51

摘要：快速发展的分子标记技术已经在国外椰子种质资源和育种研究中得到了广泛的应用。简要介绍了几种常用的DNA分子标记技术的产生及原理,主要综述了这项技术在国外椰子种质资源研究领域的进展,重点阐述了该技术在椰子遗传多样性和遗传关系分析方面的研究状况,最后指出这项技术在中国的发展状况,并展望了其重大的影响和广阔的应用前景。

崖城割手密11号与拔地拉核型比较分析52-57

摘要：热带种与割手密种是甘蔗有性杂交育种的主要亲本材料,为探讨其染色体的数目、类型等特征,采用核型分析方法对崖城割手密11号（Saccharum.spont.YC No.11）和拔地拉（Badila）进行了研究。结果表明：崖城割手密11号染色体数目为2n=64,核型公式为：2n=64=56m（2sat）＋8sm,核型类型为2A型。拔地拉染色体数目为2n=80,核型公式为：2n=80=80m,核型类型为1B型。崖城割手密11号和拔地拉的核型在进化上属于比较原始的类型,而且崖城割手密11号的核型比拔地拉的核型更原始。

番茄遗传转化体系的建立58-61

摘要：研究以番茄（Lycopersicon esculentum Mill.）栽培品种“中杂9号”、“毛粉802”和“合作908”为试材,通过对番茄茎段的离体培养,研究不同基因型以及不同激素组合对植株再生的影响。结果表明：以茎段为外植体时中杂9号和毛粉802更适合诱导再生植株形成;IAA与IBA比较,IAA利于芽的形成及正常芽的发育。其中中杂9号最适宜诱导愈伤组织和芽分化培养基为MS＋6-BA2.0mg/L＋IAA0.1mg/L、MS＋6-BA2.0mg/L＋IAA0.4-0.5mg/L,分化率均高达100%,毛粉802最适宜诱导愈伤组织和芽分化培养基为MS＋6-BA2.0mg/L＋IAA0.4-0.5mg/L,分化率高达100%。茎段外植体适宜的生根培养基为MS＋IAA0.5mg/L＋6-BA0.6mg/L,生根率高达80.8%。

青枯菌M5菌株特异基因组消减文库的构建62-66

摘要：为筛选青枯菌M5菌株特有的序列,利用SSH技术对青枯菌生理小种5号菌株M5（tester）和生理小种1号菌株GMI1000（driver）基因组进行了比较。分别提取二者基因组DNA,RsaⅠ酶切,将酶切后M5菌株DNA分为两份,分别与接头1和接头2R连接,然后进行两轮杂交和两轮PCR扩增,并检测连接效率与消减效率。将获得的消减PCR产物,即差异基因/差异DN段,与pGEM-T载体连接,转化E.coli DH5α感受态细胞,建立消减文库。随机挑取96个白色克隆,经菌液PCR法测定,80个为预期阳性,含有预期的插入片段。首次构建了青枯菌M5菌株特异基因的抑制消减文库,为进一步筛选、克隆青枯菌M5菌株特异核苷酸片段奠定了基础。

作物单片段代换系的构建及应用67-71

摘要：准确鉴定和定位作物的数量性状基因位点（quantita tivetrait loci,QTLs）是分子标记辅助选择和基因克隆的基础,传统的分离群体遗传背景复杂,很难对单个数量性状基因位点进行准确鉴定和深入研究。单片段代换系具有片段单一、背景一致、遗传稳定等特点,能把复杂性状的基因分解为多个简单的孟德尔因子,在作物数量性状和基因功能的分子研究中将发挥重要的作用。文中概述了作物单片段代换系的构建方法和应用概况,讨论了单片段代换系库构建过程中存在的问题及潜在的利用价值。

鼠尾草属植物基因组DNA提取及RAPD反应条件优化72-77

摘要：以鼠尾草属植物叶片为材料,提取基因组DNA,并对RAPD反应条件进行了系统优化。结果表明,采用核DNA法提取的DNA质量较高,适宜于RAPD分析;RAPD扩增最佳反应体系为：20μl反应体系中,10×buffer2.0μl,模板DNA20ng,Mg2＋浓度2.0mmol/L,引物浓度0.6μmol/L,dNTPs浓度0.2mmol/L,Taq酶1.0U。扩增反应程序为：94℃预变性5min,94℃变性1min,36℃退火1min,72℃延伸2min;40个循环;72℃后延伸10min,4℃保存。

植物生长调节剂对大岩桐离体培养的影响78-81

摘要：以大岩桐（Sinningina speciosa）无菌试管苗为试材,进行了叶片愈伤组织诱导培养、试管苗继代增殖培养和试管苗生根培养的对比实验,以求筛选出离体培养的最佳植物生长调节剂组合及其配比。结果表明：叶片愈伤组织诱导培养基以MS＋BA1.0mg/L＋2.4-D0.1mg/L最有利于愈伤组织生成,而MS＋BA1.0mg/L＋NAA0.1mg/L最有利于不定芽生成;试管苗继代增殖最佳组合为：MS＋BA2.0mg/L＋NAA0.5mg/L;生根培养最佳配比为：1/2MS＋NAA1.0mg/L＋IBA0.5mg/L。

马铃薯Y病毒脉坏死株系（PVY^N）外壳蛋白基因的克隆、表达及其间接ELISA方法的建立82-86

摘要：【目的】制备马铃薯Y病毒脉坏死株系（PVY^N）多克隆抗体,建立间接ELISA法用于检测PVY^N病毒。【方法】依据PVY^N的CP基因序列设计引物,利用RT-PCR方法获得CP基因并连接构建到原核表达载体,进行原核表达,以纯化的重组蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,获得PVY^N的抗血清并纯化。【结果】测序结果与其他已知序列比较,PVYNCP基因的核苷酸同源性95%,推断氨基酸的同源性达98%。以纯化蛋白为抗原进行免疫,成功获得了PVY^N外壳蛋白抗血清,纯化后的IgG采用间接ELISA法检测抗原,抗体效价达1：500,使用该抗体稀释度检测感染植株,结果呈阳性。【研究结论】通过分子生物学途径获得了PVY^N的多克隆抗体,建立的间接ELISA方法可以用于PVY^N的病毒检测。