hTERT启动子调控下PE38KDEL表达载体的构建及其在MiaPaCa2人胰腺癌细胞中的表达
摘要：目的探讨端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子调控铜绿假单胞菌外毒素衍生物（PE38KDEL）表达载体的构建及其在MiaPaCa2人胰腺癌细胞中的表达。方法通过PCR法扩增hTERT启动子，全基因合成PE38KDEL，将其分别亚克隆到pIRES2-EGFP及phTERTp-IRES2-EGFP质粒的多克隆位点中；均经酶切及测序鉴定。通过脂质体法将两质粒分别转染MiaPaCa2及WI-38细胞，观察荧光表达情况，通过RT-PCR检测PE38KDEL的表达。结果经酶切及测序鉴定证实质粒构建成功，pPE38KDEL-IRKS2-EGFP转染后MiaPaCa2和WI-38细胞中均有PE38KDEL基因表达；但phTERTp—PE38KDEL-IRES2-EGFP转染后仅MiaPaCa2中有PE38KDEL基因表达。结论hTERT调控下PE38KDEL表达载体构建成功，并可在MiaPaCa2人胰腺癌细胞中靶向性表达，为探讨胰腺癌的靶向基因治疗提供了实验依据。角果木二萜Tagalsin的抗肿瘤作用
摘要：目的 探讨中国南海角果木二萜成分Tagalsin的抗肿瘤作用。方法建立小鼠Lewis肺癌和H2肝癌实体瘤模型及H22肝癌腹水瘤模型。随机分为角果木二萜Tagalsin高、中、低剂量组（20、10、5mg／kg）、空白对照组、环磷酰胺（CTX）组。建模后24h开始给药，角果木二萜Tagalsin高、中、低剂量组连续灌胃给予不同浓度Tagalsin7d，空白对照组给予同体积生理盐水，CTX组连续腹腔注射CTX（10mg／kg）7d。末次给药24h后处死动物，计算抑瘤率、脏器指数、生命延长率，流式细胞术检测凋亡率。结果角果木二萜Tagalsin在5—20mg／kg内，对小鼠实体瘤Lewis和H22的抑瘤率分别为12．62％-43．69％和24．49％-48．30％。Tagalsin可明显延长Hz腹水瘤小鼠生存时间；降低Lewis肺癌及H。肝癌小鼠胸腺指数，升高肝脏指数；肿瘤细胞的凋亡率随着角果木二萜Tagalsin剂量的增加而增高（P〈0．05或〈0．01）。结论角果木二萜Tagalsin对小鼠Lewis和H22移植瘤的生长具有明显的抑制作用，其机制可能与其诱导细胞凋亡有关。维生素C诱导人胃癌细胞株MKN45凋亡的实验研究
摘要：目的 探讨维生素C对胃癌细胞株MKN45增殖、凋亡的影响及其相关机制。方法在体外培养的胃癌细胞株MKN45中加入不同浓度（0．05、0．1、0．5、1mg／m1）的维生素C，通过MTT比色法检测维生素C对细胞生长活力的影响；应用荧光显微镜、流式细胞术、DNALadder分析法检测细胞凋亡情况；应用分光光度法检测Caspase-3活性；应用化学显色法测定维生素C作用MKN4524h后细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量。结果维生素C对胃癌细胞株MKN45有显著的生长抑制作用；与对照组比较，1mg／ml维生素C处理后，细胞凋亡率升高（P〈0．01），并呈现凋亡的形态学改变，DNALadder分析呈典型“梯状”条带；Caspase-3活性升高（P〈0．05）。与对照组相比，维生素c处理组细胞内的SOD活性下降，MDA含量增加（P〈0．05）。结论1mg／ml浓度的维生素c作用24h后，可诱导胃癌细胞MKN45凋亡，其机制可能是通过提高Caspase-3的活性以及通过自身自氧化的氧化应激效应而诱导肿瘤细胞凋亡。胃癌变过程中Hp感染与凋亡基因Survivin表达的关系
摘要：目的 研究胃癌变过程中幽门螺杆菌（Hp）感染与凋亡基因Survivin表达、细胞凋亡的关系。方法用快速尿素酶法、W—S银染法和美蓝法联合检测62例慢性浅表性胃炎（CSG）、55例慢性萎缩性胃炎（CAG）、52例肠化生（IM）、46例不典型增生（AH）、65例胃癌（Gc）组织中Hp的感染情况，采用免疫组化及TUNEL法分别检测Survivin蛋白的表达及细胞凋亡情况。结果Hp感染率、Survivin蛋白阳性表达率均随着GC形成中病变恶性程度的加重而明显上升（P〈0．05）。CAG、IM、AH和GC组Hp感染率较CSG组，Gc组较CAG组均明显升高（P均〈0．05）；AH、GC组Survivin蛋白阳性表达率明显高于IM和CAG组（P均〈0．01）；AH、GC组Hp阳性患者Survivin蛋白表达率均高于Hp阴性者（P均〈0．05）；CAG、IM、AH、GC组中Survivin阳性者凋亡指数均低于Survivin阴性者（P〈0．05）；低未分化GC患者Survivin蛋白表达明显高于高中分化者（P均〈0．05）。结论在胃黏膜癌变过程中，Hp感染可能通过逐渐上调Survivin基因的表达、抑制细胞凋亡和分化而发挥致癌作用。丁咯地尔与山莨菪碱联合治疗眩晕45例疗效观察
摘要：2009年1月～2010年8月，我们应用丁咯地尔与山莨菪碱联合治疗眩晕患者45例，效果良好。现报告如下。非小细胞肺癌组织中Mina53、p53、PCNA的表达及意义
摘要：目的 探讨Mina53在非小细胞肺癌中的作用及Mina53、p53、增殖细胞核抗原（PCNA）在其中联合表达的意义。方法用免疫组化S-P法检测34例非小细胞肺癌组织，10例正常肺组织中Mina53、p53、PCNA的表达。结果在正常肺组织中Mina53、p53、PCNA表达量都很少，而在非小细胞肺癌组织中均高度表达。在非小细胞肺癌组织中，Mina53的阳性表达率是52．94％（18／34），其表达与临床病理分型、淋巴结转移有明显的相关性（P〈0．05）。p53、PCNA的阳性表达率分别是64．71％（22／34）、76．47％（26／34），其与各临床病理参数均无相关性（P〉0．05）。Mina53、p53、PCNA在非小细胞肺癌组织中的表达两两之间均有相关性（P均〈0．01）。结论Mina53有可能成为非小细胞肺癌的标记物，Mina53与p53、PCNA在非小细胞肺癌中联合检测，可起到互补作用，较全面地反映非小细胞肺癌肿瘤细胞的增殖情况。干扰CDC25A基因对CNE2细胞连续照射期间增殖的影响
摘要：目的 采用RNA干扰技术沉默CDC25A基因，观察其对鼻咽低分化鳞癌细胞株（CNE-2）在连续照射中后期加速增殖现象的影响。方法构建、培养出CDC25A基因沉默效果稳定的CNE2-psilence4．1-CDC25A，接受射线2Gy／d连续照射5d，分别采用MTT法、流式细胞术检测细胞的生长增殖活性，并在mRNA及蛋白水平上应用RT—PCR、WesternBlot法进行验证。结果MTT法检测结果表明，CNE2-psilence4．1-CDC25A细胞存活分数（SF）在第5天达到高峰，CNE2-psilencc4．1-Control细胞SF在第3天达到高峰。流式细胞术检测结果显示，CNE2-psilenee-4．1-CDC25A细胞在照射第5天S期细胞比（SPF）及增殖指数（PI）为最高值，CNE2-psilence4．1-Control细胞在照射第3天SPF值最高，在照射第4天PI值最高；RT-PCR、WesternBlot法进一步验证CNE2-psilence4．1-CDC25A细胞在照射第1、3、5天的CDC25A的表达与MTT法、流式细胞术检测结果基本吻合。结论与CNE2-psilencer4．1-Comrol细胞相比，基因沉默的CNE2-psileneer4．1-CDC25A细胞在连续分割照射期间，细胞的生长速度减慢、生长高峰延迟。循征护理在预防髋关节置换术后深静脉血栓形成中的应用
摘要：2008年6月～2010年6月，我们对34例髋关节置换患者运用循征护理预防深静脉血栓形成（DVT），取得满意效果。现报告如下。乳腺癌中TSG101与MAPK／ERK信号通路的关系
摘要：目的 研究乳腺癌中TSG101与MAPK／ERK信号通路的关系。方法应用脂质体法将靶向TSG101的siRNA转染入乳腺癌细胞株MCF-7中。分别使用免疫荧光和Westernblot方法检测siRNA干扰后MCF-7中p-ERK蛋白表达的改变。使用免疫组织化学方法检测TSG101、p-ERK蛋白在54例人乳腺癌组织中的表达。结果TSG101siRNA转染后的MCF-7中p-ERK蛋白表达明显减少。TSG101和p-ERK蛋白在乳腺癌组织中的阳性率分别为74．07％、81．48％。TSG101和p-ERK在乳腺癌组织中的蛋白表达存在正相关（r=0．371，P〈0．05）。结论TSG101在乳腺癌中可能通过MAPK／ERK信号通路发挥生物学作用。靶控输注瑞芬太尼-丙泊酚用于乳癌根治术的麻醉效果观察
摘要：2010年1—8月，本文通过对瑞芬太尼-丙泊酚靶控输注（TCI）用于乳腺癌根治术的麻醉效果进行观察，为临床合理用药提供参考。真核表达载体pIRES2-EGFP／TRAIL，pIRES2-EGFP／CD的构建和鉴定
摘要：目的 构建真核表达载体plRES2-EGFP／TRAIL和pinES2-EGFP／CD，为研究其联合表达对恶性胶质瘤的联合治疗作用提供基础。方法将pCMV／CD质粒和pcDNA3．1（＋）／TRAIL质粒行琼脂糖凝胶电泳检测，确定其完整性，并进行序列测定确定有无基因突变。pCMV／CD质粒用SacⅡ／XhoⅠ双酶切，pcDNA3．1（＋）TRAIL质粒用BamHⅠ／XhoⅠ双酶切，将目的基因定向克隆到真核细胞表达载体plRES2-EGFP中，转化E．coliDH5α感受态细胞，通过限制性内切酶双酶切、PCR及核酸序列分析等筛选、鉴定重组质粒。结果所构建的真核表达载体plRES2-EGFP／TRAIL经SacⅡ／XhoⅠ双酶切回收片段分别为1．0、5．2kb；plRES2-EGFP／CD经BamHⅠ／XhoⅠ双酶切回收片段分别为1．3、5．2kb。PCR及测序证实，plRES2-EGFP／TRAIL和plRES2-EGFP／CD质粒基因组中分别包含TRAIL和CD基因。结论成功构建了真核表达载体plRES2-EGFP／TRAIL和plRES2-EGFP／CD，为研究其联合表达对恶性胶质瘤的联合治疗作用奠定了基础。JNK通路在内质网应激预处理诱导脑缺血耐受中的作用
摘要：目的 探讨JNK通路在内质网应激预处理诱导海马CAI区神经元缺血耐受中的作用及其机制。方法将144只SD大鼠随机分为假手术（SH）组、缺血／再灌注（I／R）组、内质网应激预处理（IP））组、IP＋IR组、Curcu-min＋I／R（CU）组、Curcumin＋IP＋I／R（CP）组、Anisomyein＋IR（AN）组、Anisomycin＋IP＋VR（AP）组及溶剂对照＋I／R（VE）组。采用TUNEL法检测海马CA1区凋亡细胞，免疫组化法和Western-Blot法检测GRP78、p-JNK及c—Jun蛋白在海马CA1区的表达。结果SH组GRP78蛋白表达微弱，与其相比，I／R、CU、AN及VE组表达升高（P〈0．05），IP、IP＋IR、cP、AP组表达明显升高（P〈0．01）；与IP组比较，IP＋IR、CP、AP组GRP78蛋白表达升高（P〈0．05）；与I／R组比较，IP＋I／R、cu及cP组海马CA1区凋亡锥体细胞数和p-JNK及c-Jun蛋白表达水平均降低（P均〈0．01），降低程度为CP组〉IP组〉cu组，AN组CA1区凋亡锥体细胞数和p-JNK、c-jun蛋白表达水平升高（P均〈0．01）；Anisomycin可部分抵消内质网应激预处理的保护效应。结论JNK通路参与大鼠海马CA1区神经元缺血性凋亡，内质网应激预处理可通过抑制CA1区JNK磷酸化、减少c-Jun蛋白表达而保护海马细胞，内质网应激预处理与抑制JNK通路激活对脑缺血耐受有相似的保护作用。阿魏菇多糖对小鼠U14宫颈癌抑制作用的研究
摘要：目的观察阿魏菇多糖（PFP）对小鼠宫颈癌细胞株U14移植瘤的抑制作用及其与顺铂（DDP）联合用药的效果，并初步探讨PEP的抗肿瘤作用机制。方法建立昆明小鼠U14宫颈癌模型，并随机分为模型对照组、DDP组、PFP组、PFP＋DDP组，分别给予不同药物干预10d后检测各组小鼠的瘤质量和抑瘤率，采用免疫组化法检测各组肿瘤组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达水平，TUNEL法检测各组瘤组织细胞凋亡指数（AI）。结果模型对照组小鼠体内瘤质量明显高于各干预组（P〈0．01），PFP＋DDP组小鼠体内瘤质量低于DDP组；各实验组瘤组织细胞AI均高于模型对照组，且PFP＋DDP组的Aj最高。PFP、DDP、PFP＋DDP均可降低宫颈癌U14组织内Bel-2蛋白的表达水平，并升高Bax蛋白表达水平，且PFP＋DDP组的作用优于单药组。结论PEP对小鼠宫颈癌U14细胞株移植瘤具有明显抑制作用，且与DDP联合用药效果更显著，其机制可能与下调Bcl-2蛋白及上调Bax蛋白的表达有关。高血糖对骨髓细胞生存与接着的影响
摘要：目的探讨高血糖状态对骨髓细胞的生存与接着是否有影响。方法糖尿病组为采用链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠模型；正常对照组为柠檬酸缓冲液注射的健康小鼠，建模成功8-10周后，测定两组的体质量、血糖后，收集骨髓细胞，接种在fibronectin—coated24孔板上。分别在培养的第1、3、7天时，收集培养皿中细胞，台盼蓝染色后计算生存细胞数。另外，在体外培养2h后，收集培养皿中残留的接着细胞，台盼蓝染色后计数。结果糖尿病组与正常对照组相比体质量明显下降，血糖明显增高（P〈0．01）。两组收集的骨髓细胞生存数均随着培养时间的延长而下降，但两组之间相比，差异无统计学意义（P〉0．05）。两组接着细胞数相比差异也无统计学意义（P〉0．05）。结论高血糖状态对骨髓细胞的生存与接着无不良影响。光污染对小鸡眼轴及屈光度的影响
摘要：目的 通过建立动物模型，观察光污染对近视发展中屈光状态的影响。方法将出生1d的40只小鸡分A、B组，均将右眼眼睑缝合后，A组置于自然环境下生长至6周，B组置于白墙面及地板，白炽灯照射下生长至6周。分别于21、42d测量两组小鸡双眼眼轴及屈光度。结果A组21、42d时左、右眼屈光度及眼轴差异有统计学意义（P〈0．01或〈0．05），B组左、右眼屈光度及眼轴差异无统计学意义。A组左眼与B组屈光度及眼轴差异有统计学意义（P〈0．01）。结论光污染可诱发小鸡模型眼轴及屈光度的变化，导致近视发展。经尿道前列腺电切术的围手术期护理体会
摘要：2007年1月～2009年12月，我院经尿道前列腺电切术治疗前列腺增生症患者46例。现将围手术期护理体会报告如下。胃癌雌激素受体α、β与孕激素受体mRNA的表达及意义
摘要：目的观察胃癌雌激素受体（ER）α、β及孕激素受体（PR）mRNA的表达，并探讨其意义。方法采用sybrgreen荧光定量PCR法检测30例胃癌组织ERα、B及PR的mRNA表达，观察不同病理预后因素与其表达的关系。结果胃癌组织中ERa、B及PRmRNA表达水平分别为1．948±2．905、1．477±1．367、5．520±8．430，以PRmRNA为最高。低分化腺癌及分化程度低的胃癌组织ERβmRNA表达高（P均〈0．05）。ERdmRNA、PRmRNA与病理类型及分化程度无相关关系。结论ERβmRNA的表达差异与胃癌的病理类型和分化程度有关。3D—CRT与GF化疗方案同期与序贯治疗局部晚期胰腺癌疗效观察
摘要：目的观察三维适形放射治疗（3D—CRT）联合吉西他滨（GEM）加氟尿嘧啶（5-FU）（GF方案）同期与序贯化疗治疗局部晚期胰腺癌（LAPC）的疗效和毒性反应。方法应用化疗＋3D—CRT治疗LAPC，化疗予GEM、5-FU，应用5-FU前常规予以亚叶酸钙。放疗前（序贯组）和放疗中（同步组）使用，共2个周期；放疗予3D—CRT，常规分割，每次2Gy，每周5次。两组患者放疗结束后继续巩固化疗2个周期。结果两组总有效率有统计学差异（P〈0．05）。两组中位生存时间分别为12．3个月（95％凹8．8—15．8）和9．6个月（95％C15．9—13．4）；1a生存率比较有统计学差异（P=0．020）。治疗前CA19-9〈400U／ml的患者23例、t〉400U／ml的患者16例，两者的中位生存时间分别为12．3个月（95％c，11．6—12．9）和7．8个月（95％CI6．1—9．6），1a生存率比较有统计学差异（P=0．021）。同步组的血液毒性、胃肠道毒性与序贯组比较无统计学差异。结论3D-CRT加GF同期化疗治疗LAPC疗效优于序贯治疗，治疗前CA19-9高水平提示胰腺癌预后不良。
