西农萨能奶山PPA4Rγ基因启动子结构与功能分析

作者:张雪莹; 罗军; 陈筱影; 田慧彬; 赫秋亚; 张天颖; 史怀平

摘要:过氧化物酶增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPART)是核受体家族成员,作为配体激活型转录因子,在调控脂肪酸代谢和脂滴形成等方面发挥重要作用。为分析PPARy基因启动子结构及功能,完善奶山羊(Capra hircus)乳脂代谢调控网络,本研究以西农萨能奶山羊全血DNA为模板,通过PCR技术扩增PPARγ基因5’侧翼序列,并克隆得到7个长度不同的缺失片段,分别连接pGL3-basic载体构建重组体,利用双荧光素酶报告系统检测各重组质粒活性,结合生物信息学分析确定其转录核心区域;并通过启动子定点突变和过表达CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT enhancer binding protein alpha,C/EBPα)研究转录因子C/EBPa对PPARγ基因的转录调控。结果表明,克隆得到的艘ARy基因启动子序列全长为2328bp(包含转录起始位点上游2181bp,GenBank登录号:MG770492.1),启动子上无典型的真核生物元件TATA框,但存在C/EBPα、肝X受体(1iver X receptor,LXR)、胆固醇调节元件结合蛋白(sterol-regulatory element binding protein,SREBP)及特异性蛋白l(specificity protein1,SPl)等多个转录因子结合位点;缺失片段分析结果表明,PPARγ7基因启动子核心区域位于转录起始位点上游194~108bp,且启动子上存在负调控元件;转录因子C/EBPa通过结合位于启动子上游119bp处的C/EBPa结合元件而调控PPARγ基因的转录。本研究为后续开展PPARγ调控羊奶脂肪酸代谢的机理研究提供了资料。

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关键词:
  • 西农萨能奶山羊
  • 启动子
  • 基因克隆
  • 活性分析

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期刊名称:农业生物技术学报

期刊级别:北大期刊

期刊人气:1708

杂志介绍:
主管单位:中华人民共和国教育部
主办单位:中国农业大学;中国农业生物技术学会
出版地方:北京
快捷分类:科学
国际刊号:1674-7968
国内刊号:11-3342/S
邮发代号:2-367
创刊时间:1993
发行周期:月刊
期刊开本:A4
下单时间:1-3个月
复合影响因子:0.98
综合影响因子:0.94