摘要：营养期杀虫蛋白3A（vegetative insecticidal protein 3A,Vip3A）对鳞翅目（Lepidoptera）害虫具有广谱杀虫活性,具有重要研究意义。本研究以对玉米螟（Ostrinia nubilalis）具有高毒力的野生型苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringienesis,Bt）NBIC-380菌株总DNA为模板,PCR扩增vip3Aa（Gen Bank登录号：KT307982）全长基因约2.4 kb。将vip3Aa基因插入大肠杆菌（Escherichia coli）表达载体p GEX-6p-1和p ET-28a以及Bt表达载体p BMB1A中,构建重组表达载体p GV3、p EV3和p BV3。将p GV3和p EV3转化大肠杆菌BL21（DE3）,p BV3转化Bt BMB171和枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis,Bs）168菌株。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE）分析表明,vip3Aa基因在BL21（DE3）、Bt BMB171和Bs168中均有表达,蛋白质相对分子质量为88 k D。纯化后的蛋白及Bt中表达的蛋白对棉铃虫（Helicoverpa armigera）二龄幼虫进行了生物测定,在大肠杆菌表达的蛋白没有杀虫活性,而在芽胞杆菌中表达的蛋白有杀虫活性,半数致死浓度（medium lethal concentration,LC50）值分别为6.185 6（Bt BMB171）和2.984 6 mg/m L（Bs168）。生测结果表明,Bt NBIC-380菌株的vip3Aa基因表达的蛋白对棉龄虫具有一定杀虫活性。本研究为丰富Vip的基础研究和构建高效广谱的工程菌提供基础资料。