火焰兰属SRAP-PCR体系的建立优化及验证
作者：姚婧 唐燕琼 黄明忠 丁亚操 杨光穗
摘要：为建立火焰兰SRAP-PCR体系,采用U20（55）均匀试验设计,以10份火焰兰种质基因组DNA为模板,用3对SRAP引物对DNA模板、Mg^2＋、引物、Taq DNA聚合酶和dNTPs等5个因素的浓度进行优化组合和验证.结果表明,提取的火焰兰基因组DNA纯度高、完整性好;利用引物对Me6/Em6进行PCR扩增,对20个处理初步筛选出扩增条带较清晰,多态性丰富的处理,再用2个DNA模板进行复筛,获得最佳反应体系（20μL）：模板DNA 60 ng、Mg^2＋2.0 mmol/L、引物1.0 μmol/L、Taq DNA聚合酶1.2 U、dNTPs 0.20 mmol/L.最后用2对引物、8份火焰兰种质来验证优化SRAP-PCR体系,其所获条带清晰,多态性丰富.
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关键词：
- 火焰兰
- 体系优化
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