人胰岛素原基因突变体的构建
作者：兰丽珍; 邓华聪; 孙辽; 郑丹; 郑宏庭; 刘东方; 弓军胜
摘要：目的完成人胰岛素原基因的定点突变,使之能在普通细胞中被Furin蛋白酶识别去除C肽分泌成熟胰岛素.方法采用PCR体外定点突变技术(PCR site-directed mutagenesis,PCR-SDM),设计4对引物,引入5个Furin识别的突变位点,通过重叠延伸法PCR扩增,使人胰岛素原编码基因B10密码子由CAC突变为GAC;C3密码子由GAA突变为AAA;C4密码子由GCT突变为CGT;C32密码子由CTT突变为CGT,将扩增片段克隆入T载体并测序.结果 DNA测序结果表明在预期位点突变符合要求.结论应用PCR诱导突变技术,在体外能准确、简便有效的诱导胰岛素原基因突变,使体外应用非内分泌细胞构建高效分泌成熟胰岛素的细胞克隆成为可能.
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关键词：
- 人胰岛素原基因
- 体外
- 定点突变技术
- pcr
- 位点突变
- c肽
- gct
- 密码子
- 突变体
- t载体
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