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摘要:目的探索鼻咽癌外泌体microRNA是否通过靶向凋亡基因而抑制肿瘤相关巨噬细胞(TAM)凋亡。方法通过生物信息学方法确定目标microRNA及其靶基因,检测鼻咽癌患者血清及鼻咽癌细胞培养基中的外泌体内miR-20a的表达量。应用miR-20a的拟似物及抑制物转染巨噬细胞;并检测干预后的凋亡指数及凋亡通路相关蛋白。结果 miR-20a在鼻咽癌外泌体中表达显著上调。miR-20a的靶基因为BCL2L11,过表达miR-20a可以抑制巨噬细胞凋亡,且凋亡通路相关蛋白Bim、caspase-9和caspase-3均显著减少(P〈0.05)。结论miR-20a通过抑制Bim-caspase-9-caspase-3凋亡途径的活化从而抑制鼻咽癌中TAM凋亡。
摘要:目的观察高强度聚焦超声(HIFU)治疗裸鼠肝移植瘤后,再注入载单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因(HSV-TK)的纳米级超声分子探针治疗效果,并探讨其治疗机制。方法用人肝癌HepG2细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型60只,采用CZF型HIFU机治疗后,分别经鼠尾静脉注射200μL的微泡+HSV-TK+磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC3)(A组)、微泡+HSV-TK(B组)、HSV-TK+GPC3(C组)、HSV-TK(D组)、微泡+GPC3(E组)、PBS液(F组),每3天1次,共注射3次。每次注射后,根据超声监测微泡到达靶组织的情况,对A、B、D、E组用DZC型超声转染仪给予2W/cm2、1MHz、5min超声辐照。首次注射48h后,各组经腹腔注射0.2mL更昔洛韦(GCV,100mg·kg-1·d-1),连续注射14d。治疗结束后,用免疫组织化学法测残瘤中微血管密度(MVD)水平,用Western blot和免疫组织化学法测量残癌中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)的变化情况,用Q-PCR检测肿瘤中HIF-1α、VEGF基因的转录水平。结果治疗14d后,B、C、D、E、F组肿瘤组织中HIF-1α、VEGF蛋白表达量,VEGF及HIF-1αmRNA水平,MVD均明显高于A组(P〈0.05)。结论载HSV-TK的纳米级超声分子探针治疗可降低HIFU治疗后残瘤组织中的VEGF、HIF-1α及MVD水平,从而抑制肿瘤的生长,提高HIFU的治疗效果。
摘要:目的本实验旨在探讨Eca109食管鳞癌细胞中血红素加氧酶-1(HO-1)的表达水平与5氟尿嘧啶(5-FU)化疗敏感性的关系。方法培养Eca109食管鳞癌细胞,应用RT-PCR及Western blot方法分别检测不同浓度(0、20、80、100μmol/L)ZnppⅨ处理后细胞HO-1基因及HO-1蛋白表达水平,应用噻唑蓝(MTT)法检测各实验组细胞生长曲线及药物抑制率。结果随着培养基ZnppⅨ浓度的增加,细胞抑制率显著增高,80μmol/L ZnppⅨ组显著高于20μmol/L ZnppⅨ组(P〈0.05)。各组间HO-1mRNA的表达量依次为0.50±0.17、0.55±0.15、0.58±0.09、0.55±0.16,组间比较差异无统计学意义(P〉0.05)。各组间HO-1的表达量依次为0.85±0.07、0.63±0.11、0.43±0.12、0.25±0.10,组间差异有统计学意义(F=20.01,P〈0.01)。结论Eca109食管癌细胞抑制率与ZnppⅨ浓度正相关,而ZnppⅨ不是从基因水平,而是从蛋白的表达水平抑制HO-1的表达。
摘要:目的探讨川陈皮素(NOB)对糖尿病认知功能的改善作用及可能机制。方法实验大鼠均为雄性,分为正常组:12周龄Wistar大鼠8只,清洁级,正常饲料喂养;糖尿病组:12周龄GK大鼠8只,SPF级,正常饲料喂养;NOB组:12周龄GK大鼠6只,SPF级,正常饲料喂养,同时每天给予NOB 10mg/kg灌胃8周。喂养到22周龄时,Morris水迷宫行为学实验评估大鼠认知功能、免疫组织化学和Western blot检测海马中核因子E2相关因子2(Nrf-2)的表达水平。结果与正常组相比,糖尿病组潜逃潜伏期延长(P〈0.05),NOB组潜逃潜伏期较糖尿病组缩短(P〈0.05)。平台撤走后,与正常组相比,糖尿病组在目标象限停留时间较短(P〈0.05),NOB组较糖尿病组延长(P〈0.05)。与正常组相比,糖尿病组Nrf-2的表达增加(P〈0.05);与糖尿病组相比,NOB组Nrf-2的表达水平上升(P〈0.05)。结论 NOB可以升高海马Nrf-2表达水平,改善糖尿病大鼠认知功能障碍,提示可能与增强Nrf-2活性及激活抗氧化应激通路有关。
摘要:目的探讨伊洛前列素对低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠肺部内皮素-1(ET-1)的影响。方法雄性SD大鼠32只,分为正常(NC)组,正常治疗(NT)组,低氧(HC))组,低氧治疗(HT)组,每组8只。NC组和NT组在常氧条件下饲养3周;HC和HT组放置于低氧舱(O2浓度10%)进行缺氧处理3周(8h/d);NT和HT组每天进行伊洛前列素雾化吸入治疗(2μg/kg)。第3周结束时,测量各组平均肺动脉压(mPAP),右心室收缩期末压力(RVSP),右心室肥厚指数。HE染色观察各组肺动脉形态学变化,计算肺小动脉的血管壁厚百分比(WT%),RT-PCR分析各组肺组织匀浆中ET-1的变化趋势。结果 HC组大鼠血流动力学指标较其他组明显升高,HT组相关指标表达与NC组比较差异无统计学意义(P〉0.05)。HC组较其他组肺动脉管壁增厚、管腔狭窄明显;HT组则有不同程度逆转。HC组大鼠肺组织匀浆中ET-1表达较NC组明显升高,HT组中ET-1表达与NC组比较差异无统计学意义(P〉0.05)。结论伊洛前列素对HPH有明显的治疗作用,可以降低HPH大鼠肺部ET-1的释放,阻止肺血管重塑。
摘要:目的探讨中成药坤泰胶囊治疗不同阶段卵巢早衰的效果。方法采用雷公藤多苷片75mg/kg制作卵巢早衰大鼠模型;将60只SD雌性大鼠分别为空白组,模型组,造模前坤泰胶囊组(造模前组),造模中坤泰胶囊组(造模中组),造模后坤泰胶囊组(造模后组),西药组(结合雌激素治疗)。观察大鼠行为学的改变,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、血清雌二醇(E2)及抗缪勒管激素(AMH)的水平。RT-PCR法检测卵巢组织中血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA的表达。结果空白组和各给药组血清FSH及LH水平明显低于模型组(P〈0.05),E2、AMH水平明显高于模型组(P〈0.05)。空白组及各给药组卵巢组织中VEGF、bFGF mRNA的表达明显高于模型组(P〈0.05),其中造模前组VEGF、bFGF mRNA水平高于造模中组、造模后组(P〈0.05),造模前组VEGF mRNA的表达与西药组比较差异无统计学意义(P〉0.05)。结论坤泰胶囊对卵巢性激素水平具有调节作用,能提高血清E2及AMH的水平,降低血清FSH、LH的水平,提高卵巢对性激素水平的敏感性;修复受损的卵巢组织,促进卵泡的生长发育,从而抑制卵泡过早耗竭。
摘要:目的探讨丁苯酞的肾保护机制及核因子E2相关因子2(Nrf2)-抗氧化还原反应元件(Nrf2-ARE)通路在肾间质纤维化中的作用。方法清洁级CD-1小鼠分为4组:假手术组、模型组、治疗组、阳性对照组。假手术组、模型组均给予等量生理盐水灌胃。治疗组、阳性对照组分别给予丁苯酞、贝那普利灌胃。将各组小鼠分别于术后第3、7、14天处死,取梗阻侧肾组织,通过免疫组织化学染色、RT-PCR等实验手段检测肾组织Ⅰ型胶原蛋白、Nrf2及γ-GCS蛋白及mRNA的表达水平。并将Nrf2与γ-GCS及Ⅰ型胶原蛋白与γ-GCS进行相关性分析。结果免疫组织化学及RT-PCR结果均显示模型组Ⅰ型胶原蛋白mRNA及蛋白较假手术组有明显升高,并且随着梗阻时间的延长表达逐渐增多。治疗组及阳性对照组小鼠在各时间点较模型组表达显著减少。动态观察Nrf2mRNA的表达,结果显示:与同期假手术组相比,术后3、7、14d模型组小鼠肾组织中Nrf2、r-GCS、I型胶原蛋白mRNA表达均增加,给予丁苯酞干预后,Nrf2mRNA在7、14d时治疗组与模型组比较表达均显著增加(P〈0.05),治疗组Nrf2在各时间点表达均强于阳性对照组(P〈0.05)。RT-PCR学检测γ-GCS mRNA变化趋势同于Nrf2,其肾保护效应随时间延长呈增强趋势。相关性分析显示:Nrf2与γ-GCS呈正相关(r=0.950,P〈0.05),γ-GCS与Ⅰ型胶原蛋白呈负相关(r=-0.629,P〈0.05)。结论丁苯酞有抗肾间质纤维化作用,机制可能与激活Nrf2-ARE信号通路,提高肾间质中Nrf2、抗氧化酶r-GCS活性水平有关。
摘要:目的探讨黄芪总苷液对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖与凋亡的影响。方法不同浓度黄芪总苷液(10、20、40ng/mL)干预瘢痕疙瘩成纤维细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;实时(real-time)PCR测定成纤维细胞凋亡抑制基因survivin及细胞凋亡因子p53及Bcl-2的表达;Western blot检测成纤维细胞survivin、p53及Bcl-2蛋白水平表达。结果 MTT法检测发现,与对照组(不加黄芪总苷液)比较,各黄芪总苷液各浓度组细胞490nm处吸光度(A)值明显降低,瘢痕疙瘩细胞增殖均明显受抑制且呈剂量依赖性(P〈0.05)。real-time PCR及Western blot检测结果显示,黄芪总苷液对瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡相关因子survivin、Bcl-2有不同程度的抑制作用,对P53有不同程度的促进作用,且呈浓度依赖性。结论黄芪总苷液能抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,调控其凋亡,从而达到有效治疗瘢痕疙瘩的效果。
摘要:目的探讨姜黄素联合放射治疗对肺癌NCI-H460细胞的活性及肺癌小鼠放射敏感性的影响。方法把肺癌NCI-H460细胞分为4组:空白对照组、姜黄素组、γ射线组及γ射线照射与姜黄素的联合组;然后对各组分别应用噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,Annexin-V/PI染色法检测细胞周期分布及凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达,RT-PCR检测核因子κB(NF-κB)基因表达情况。另外,建立小鼠肺癌模型同样分为对应的4组,姜黄素按照1mg/kg经尾静脉注射于小鼠,肿瘤局部进行剂量为5Gy射线照射,处理28d后,比较不同处理组小鼠瘤体体积。结果与空白对照组、姜黄素组和γ射线组比较,联合组NCI-H460增殖率明显降低(P〈0.05),凋亡率明显增加(P〈0.05),抑凋亡蛋白Bcl-2表达明显降低(P〈0.05),促凋亡蛋白Bax表达明显增高(P〈0.05),NF-κB mRNA表达明显降低(P〈0.05),并且肿瘤的体积有明显减少(P〈0.05)。结论姜黄素可通过抑制γ射线处理条件下NF-κB的表达并促进细胞的G2/M期阻滞来增强肺癌NCI-H460细胞对γ射线的敏感性。
摘要:目的观察苦精对哮喘小鼠α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、气道上皮下胶原纤维及气道炎症的影响。方法 45只BALB/c小鼠分为3组,每组15只。A组:正常对照;B组:哮喘模型组;C组:哮喘加苦精干预1周。采用免疫组织化学方法观察小鼠肺组织α-SMA的沉积,用马松(Masson)染色方法观察小鼠气道胶原纤维的沉积,苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠气道炎性程度,并对其进行计算机图像半定量分析。结果 C组小鼠肺内细支气管壁α-SMA、胶原纤维沉积、气道炎症程度较B组明显减少,图像半定量分析结果与B组比较,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论苦精可以改善哮喘小鼠气道炎症及气道重塑。
摘要:目的研究不同骨密度下腰椎椎弓根螺钉固定在疲劳试验前后的生物力学比较,为临床工作提供生物力学参考。方法取新鲜成年绵羊胸腰椎脊柱标本(T12~L5)27具,采用随机数字表法分为3组,分别为A组(盐酸脱钙0h,骨量正常)、B组(盐酸脱钙2h,骨量减少)、C组(盐酸脱钙4h,骨质疏松),每组9具。3组均采用在L4~L5上置入椎弓根钉棒系统。以(300±105)N的载荷对3组模型进行250 000次循环4个方向(前屈、后伸、左侧弯、右侧弯)加载,比较4组模型疲劳试验前后的脊柱活动范围、螺钉的最大拔出力、轴向压缩刚度。结果与疲劳试验前相比,A组脊柱的运动范围值、轴向压缩刚度、螺钉的最大拔出力较试验前未见明显改变,差异无统计学意义(P〉0.05),B、C组脊柱的运动范围值、轴向压缩刚度明显增大,螺钉的最大拔出力明显减小,组内组间差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论疲劳试验后,骨量减少及骨质疏松对腰椎椎弓根螺钉固定影响较大,临床医师在该条件下不应行单纯椎弓根螺钉内固定。
摘要:目的探讨神经内镜下经眶上锁孔入路切除大、中型鞍结节脑膜瘤(TSM)的疗效。方法总结与分析所收治的7例14只眼以视力障碍为主要表现的TSM患者,肿瘤直径2.8~4.7cm,经眉弓切口,形成3.5cm×2.0cm眶上骨窗,在神经内镜下切除肿瘤。结果 7例肿瘤均全切(simpsonⅠ级2例,simpsonⅡ级5例)。术后视力恢复情况:9只眼视力好转,3只眼视力维持,2只眼视力恶化。随访6~13个月未见肿瘤复发。结论神经内镜下经眶上锁孔入路易于处理肿瘤周围的神经血管结构,便于保护视神经与周围血管,是切除大、中型TSM的有效方法。
摘要:目的研究腺样体肥大(AH)患儿中胃内容物鼻咽部反流与腺样体免疫状态的相关性。方法收集AH病例,分为AH不伴扁桃体肥大组(A组),AH伴扁桃体肥大组(B组),收集无腺样体和扁桃体肥大的患儿作为对照组。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测鼻咽部分泌物中胃蛋白酶的表达,免疫组织化学法检测腺样体组织中BCL-2、PCNA、CD45Ro、CD20的表达,进一步分析胃蛋白酶水平与BCL-2、PCNA、CD45Ro、CD20的相关性。此外,分析上述指标表达水平与AH程度的相关性。结果 A组和B组中胃蛋白酶平均水平分别为(2.91±1.69)ng/mL,(2.70±1.42)ng/mL,胃蛋白酶阳性率分别为57.1%和54.6%,均高于对照组(P〈0.01),而A组和B组的胃蛋白酶平均水平和阳性率差异无统计学意义(P〉0.05)。BCL-2、PCNA、CD45Ro、CD20在腺样体组织中的表达,B组有高于A组的趋势,但仅CD20表达差异有统计学意义(P=0.042)。胃蛋白酶与BCL-2、PCNA、CD45Ro,CD20表达呈正相关(均P〈0.01),相关系数分别为0.64,0.66,0.63,0.58。此外,在根据AH程度分组的亚组比较中,胃蛋白酶阳性率差异有统计学意义(P=0.022),BCL-2、PCNA、CD45Ro、CD20的表达水平均与腺样体的分度有关(P〈0.01)。结论鼻咽部分泌物中胃蛋白酶表达水平与腺样体的免疫反应活跃程度相关,胃内容物鼻咽部反流可能是AH的可能病因。
摘要:目的探讨远隔缺血预处理(RIPC)对全身麻醉下开胸手术患者单肺通气(OLV)时肺损伤的影响。方法择期行开胸食管癌根治术患者80例,采用随机数字表法分为2组(n=40):对照组(C组)和肢体RIPC组(RIPC组)。于OLV即刻(T1)、30min(T2)、1h(T3)、2h(T4)时采集桡动脉血样行血气分析,计算氧合指数(OI)、呼吸指数(RI)和PaO2/PAO2,采用酶联免疫吸附法测定血浆TNF-α、IL-1β和IL-10的水平,收集呼出气冷凝液,测定pH值。结果与C组比较,RIPC组T2~T4时OI升高,RI降低,PaO2/PAO2升高,T3~T4时,血浆TNF-α和IL-1β水平降低,呼出气冷凝液pH值升高,T4时血浆IL-10水平升高(P〈0.05)。结论 RIPC可抑制开胸手术患者OLV时的炎性反应,减轻气道酸化,从而减轻肺损伤。
摘要:目的探究血液透析(HD)和血液灌流(HP)联合疗法对糖尿病肾病(DN)患者微炎症状态的影响。方法选择长江大学附属第一医院2014年1月至2015年12月的DN患者共计125例,分为观察组和对照组,观察组患者接受HD和HP联合疗法,对照组只接受HD疗法。比较两组治疗效果及微炎症检测结果。结果与对照组比较,观察组经治疗后总有效率达60.6%,对照组总有效率为45.8%(P〈0.05);观察组患者外周血中IL-17、IL-6、IL-1β、IL-22、TGF-β1、TNF-α、SAA水平均呈降低趋势,与对照组比较,差异有统计学意义(P〈0.01)。结论 HD和HP联合疗法能够改善DN患者体内的微炎症状态。
摘要:目的调查叶酸代谢相关基因5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)、甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)多态性与先兆流产的关系。方法选择海南省三亚市妇幼保健院在2009-2011的139例具有先兆流产症状的育龄妇女(病例组)和139例健康对照(对照组)来进行病例对照研究,通过刮取受检者口腔黏膜上皮细胞,提取其基因组DNA,对受检者MTHFR和MTRR基因多态性采用荧光定量PCR进行分析检测。通过分析病例组和对照组基因多态性的分布差异,评估其与先兆流产的相关性。结果病例组和对照组基因分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律,但经比较分析,病例组MTHFR C677T、MTHFR A1298C和MTRR A66G的基因型构成与对照组比较差异均无统计学意义(P〉0.05)。结论在先兆流产患者和健康人中,基因多态性分布无显著差异,叶酸代谢相关基因是否为先兆流产的风险因子还有待进一步研究。
摘要:目的研究miR-630在人体三阴性乳腺癌组织中的表达情况,探讨miR-630是否通过下调Sox4影响三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的侵袭。方法收集157例行乳腺癌根治术患者癌组织标本及癌旁正常乳腺组织,其中三阴性乳腺癌36例,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组(正常乳腺组、非三阴性乳腺癌组、三阴性乳腺癌组)组织中与乳腺癌相关的miR-630、miR-21、miR-195、miR-134、miR-200a、miR-381、miR-1228的表达情况;蛋白免疫印迹试验(Western blot)检测3组标本中细胞侵袭相关蛋白COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9的表达情况;进一步在细胞实验中,通过转染miR-630mimic或空质粒后,再转染过表达Sox4的质粒或空质粒至离体培养的细胞中,Western blot检测细胞中COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9、Sox4的表达情况,划痕实验和Transwell法观察细胞迁移侵袭情况,利用荧光素酶实验验证Sox4是miR-630的靶基因。结果相比于正常乳腺组,miR-630、miR-21在三阴性乳腺癌组织中的表达降低(P〈0.01);miR-195、miR-134、miR-200a、miR-381、miR-1228的表达在3组间差异无统计学意义(P〉0.05);相比于正常乳腺组及非三阴性乳腺癌组,三阴性乳腺癌组织中COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9、Sox4的表达增多(P〈0.05)。在细胞实验中,相比于空质粒组,转染miR-630mimic后,MDA-MB-231细胞中COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9、Sox4的表达减少(P〈0.05),MDA-MB-231细胞的迁移侵袭能力减弱(P〈0.01);荧光素酶实验结果显示,miR-630能够显著降低Sox4-3′-UTR质粒的荧光素活性(P〈0.05);相比于过表达miR-630+空质粒组,转染过表达miR-630+过表达Sox4组,MDA-MB-231细胞中COL1A1、COL1A5、MMP-2和MMP-9表达增加(P〈0.05),细胞的迁移侵袭能力增强(P〈0.01)。结论在三阴性乳腺癌组织中,miR-630低表达;miR-630可以通过下调Sox4从而抑制MDA-MB-231的迁移和侵袭。
摘要:目的研究YB-1蛋白在宫颈鳞状细胞癌发生发展中的作用及其意义。方法采用免疫组织化学检测YB-1蛋白在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级、CINⅡ~Ⅲ级、宫颈鳞状细胞癌(SCC)中的表达情况,分析YB-1蛋白的表达于SCC各临床病理因素的相关性。结果免疫组织化学结果显示YB-1蛋白主要表达于细胞核,部分表达与细胞质。YB-1蛋白在慢性宫颈炎中无表达,在CINⅠ级、CINⅡ~Ⅲ级、SCC中表达逐渐升高。YB-1蛋白在4组宫颈组织中的表达差异有统计学意义(P〈0.05)。其中,慢性宫颈炎组、CINⅠ级组、CINⅡ~Ⅲ级组分别与SCC组比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。YB-1蛋白的表达与宫颈病变程度之间呈正相关(P〈0.05)。YB-1蛋白的表达在SCC患者各临床病理学特征间差异均无统计学意义(P〉0.05)。结论 YB-1蛋白量的变化可能与SCC的发生发展密切相关。