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摘要:目的 利用RNAi重组腺病毒下调第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)的表达,探讨PTEN基因对慢性偏头痛大鼠三叉神经脊束核尾核(TNC)内N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基酪氨酸磷酸化(NR2B-pTyr)蛋白表达水平和一氧化氮(NO)含量的影响。方法 将SD雄性大鼠分为对照组、对照干预组、模型组和模型干预组。硬脑膜滴注炎性汤(IS)建立慢性偏头痛大鼠模型,TNC注射AdR-siPTEN,7d后观察大鼠行为学改变,检测大鼠TNC内PTEN、NR2B-pTyr和NO含量。结果 AdR-siPTEN可下调慢性偏头痛大鼠模型TNC中PTEN的表达;与模型组比较,IS干预慢性偏头痛大鼠的行为学症状明显缓解,大鼠的TNC内NR2B-pTyr表达水平及NO水平明显减少,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论 PTEN参与调节慢性偏头痛的病理过程,下调PTEN基因可缓解IS诱导的慢性偏头痛大鼠的疼痛行为学,其机制可能与下调PTEN引起NR2BpTyr表达量及NO水平降低有关。
摘要:目的 研究罗格列酮对胰岛素抵抗(IR)3T3-L1脂肪细胞脂联素、瘦素及抵抗素的分泌及mRNA表达的影响。方法将3T3-L1脂肪细胞分为5组:A组为对照组,B、C、D、E组为不同水平罗格列酮处理的IR组,分别给予终浓度为0、0.1、0.5、1.0μmol/L的罗格列酮。检测各组细胞培养液的葡萄糖消耗量,分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)及实时荧光定量聚合酶链式反应(Q-RT-PCR)检测瘦素、脂联素及抵抗素的分泌及mRNA表达水平。结果 与B组比较,D、E组细胞分泌的瘦素及抵抗素水平及其mRNA表达水平均降低,分泌的脂联素及其mRNA表达水平与葡萄糖消耗量均升高,差异均有统计学意义(P〈0.05)。B组与C组细胞分泌的瘦素、脂联素及抵抗素水平比较,差异均无统计学意义(P〉0.05)。结论 罗格列酮可以通过调节瘦素、脂联素及抵抗素的表达及分泌减轻脂肪细胞的IR。
摘要:目的 观察丹芍化纤胶囊(DSHX)对四氯化碳(CCl4)所致肝纤维化大鼠肝脏骨形态发生蛋白Ⅰ型受体(BMPR-Ⅰ)中的激活素受体样激酶2(ALK2)、磷酸化Smad1/5/8(p-Smad1/5/8)与DNA结合(分化)抑制因子2(Id2)表达的影响,探讨该药治疗肝纤维化的可能机制。方法 雄性Wistar大鼠50只分为对照组(A组)、肝纤维化模型组(B组)、自然恢复组(C组)、DSHX低剂量治疗组(D组)、DSHX高剂量治疗组(E),每组10只。除A组外,其余各组用CCl4复合因素复制大鼠肝纤维化模型,共8周。D、E组分别用0.5、1.0g/kg DSHX灌胃8周,1次/日。实验结束后分别采用酶联免疫吸附试验测定大鼠肝匀浆透明质酸(HA)、羟脯氨酸(Hyp)水平,Masson染色法观察肝组织内胶原纤维沉积程度,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肝组织ALK2、Id2mRNA水平,蛋白质印迹法(Western blotting)分析肝组织ALK2、Id2及p-Smad1/5/8蛋白的表达。结果 B组肝匀浆HA、Hyp水平高于A组(P〈0.01),肝组织ALK2、Id2mRNA和蛋白的表达及p-Smad1/5/8蛋白表达均低于A组(P〈0.01);D、E组大鼠肝纤维化程度较B组和C组明显改善,肝匀浆HA、Hyp水平均低于B组和C组(P〈0.01),肝组织ALK2mRNA和蛋白及p-Smad1/5/8蛋白表达均高于B组和C组(P〈0.01),肝组织Id2mRNA的表达高于B组和C组(P〈0.01),但Id2蛋白表达与B组、C组比较,差异均无统计学意义(P〉0.05)。结论 DSHX对大鼠肝纤维化的治疗作用机制可能与上调ALK2、p-Smad1/5/8的表达有关。
摘要:目的 探讨新生期大鼠反复惊厥后8-羟基-2′-脱氧鸟嘌呤核苷(8-OH-dG)和细胞色素C(CytC)的表达与细胞凋亡的关系。方法 将24只日龄8d的大鼠分为惊厥组和对照组,惊厥组进一步分为惊厥后3h、24h、48h,每组6只。采用吸入三氟乙醚诱导新生期大鼠反复惊厥持续状态模型,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清8-OH-dG水平,实时荧光定量PCR(RTPCR)和原位末端标记法(TUNEL)分别检测海马CytC的表达和细胞凋亡。结果 与对照组相比,TUNEL显示惊厥组海马神经元细胞凋亡明显增多(P〈0.01),呈棕黄色颗粒。血清8-OH-dG水平在末次惊厥后各时间点均明显高于对照组(P〈0.05或P〈0.01)。与对照组相比,CytC在末次惊厥后3h、24h增高(P〈0.01),48h后下降至正常水平。8-OH-dG、CytC与细胞凋亡呈正相关(r=0.662、0.565,P〈0.05)。结论 线粒体损伤可能参与了发育期反复惊厥后脑损伤。
摘要:目的 探讨右美托咪定抑制丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的机制。方法 体外原代培养7d的大鼠皮层神经元,给予500μmol/L丙泊酚和(或)不同浓度右美托咪定处理12h后,分为丙泊酚组、右美托咪定+丙泊酚组,对照组给予同溶剂的20%脂肪乳,用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测各组神经元存活率的变化,Hoechst33258核染色法检测神经元调亡,蛋白质印迹法(Western blotting)测定神经元磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(pCREB)和细胞色素C(Cyt-C)蛋白水平。结果 与对照组比较,丙泊酚组神经元存活率明显下降,神经元凋亡率明显增加,pCREB蛋白水平明显降低,Cyt-C蛋白水平明显增加,差异均有统计学意义(P〈0.01)。与丙泊酚组比较,右美托咪定+丙泊酚组神经元存活率明显增加,神经元凋亡率明显下降,pCREB蛋白水平明显增加,Cyt-C蛋白水平明显下降,差异均有统计学意义(P〈0.01)。结论 右美托咪定可对抗丙泊酚引起的原代培养皮层神经元凋亡,其机制可能与增加pCREB蛋白水平,降低Cyt-C蛋白水平有关。
摘要:目的 探讨微小RNA-199a(miR-199a)调节缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达对缺氧状态下胃癌细胞上皮间充质转化(EMT)的影响及可能的机制。方法 低氧处理胃癌细胞24h,通过转染si-HIF-1α和miR-199amimic,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测miR-199a的表达水平,蛋白质印迹法(Western blotting)检测HIF-1α及相关EMT蛋白的变化,镜下观察胃癌细胞形态。结果 低氧处理后,能下调miR-199amRNA表达,上调HIF-1α和间叶细胞标志蛋白表达,下调E-钙黏素(E-cadherin)蛋白表达。转染miR-199amimic后能抑制HIF-1α的蛋白表达,转染si-HIF-1α和miR-199amimic后能部分逆转低氧的作用,抑制EMT过程的发展。结论 miR-199a可能通过降低HIF-1α的表达抑制缺氧状态下胃癌细胞的EMT过程的发生。
摘要:目的 构建胃癌循环肿瘤细胞(CTC)动物模型,为CTC运用于临床提供依据。方法 构建4种裸鼠胃癌肿瘤模型,分别为皮下移植瘤、原位移植瘤、腹腔移植瘤、尾静脉移植瘤,检测各组肿瘤生长、转移水平,比较各组循环血中CTC数目,并进一步行单细胞实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-QPCR)分析转移相关基因在CTC与原细胞中的表达变化,免疫组织化学法检测肿瘤组织中血管的生成情况。结果 胃癌细胞原位移植模型是研究胃癌CTC的理想模型,裸鼠死亡率低,肿瘤转移明显,CTC数量较其他造模方法明显升高。结论 成功构建了CTC裸鼠模型,为CTC应用于临床奠定了基础。
摘要:凡投本刊的临床研究论文(主体是以人为研究对象),作者应说明其遵循的程序是否符合负责人体试验的委员会(单位性的、地区性的或国家性的)所制订的伦理学标准,并提供(上传)该委员会的批准文件复印件及受试对象或其亲属的知情同意书复印件。
摘要:目的 探讨斑螯酸钠维生素B_6注射液(商品名:艾易舒)联合化疗对非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌变组织FAS蛋白表达及细胞超微结构的影响。方法 选取84例NSCLC患者为研究对象,随机数字表法分为联合组和对照组,每组42例。对照组中途剥落2例,共40例有效病例入组,予以单纯吉西他滨+顺铂(GP)化疗方案;联合组剥落4例,共38例有效病例入组,予以艾易舒注射液联合GP化疗方案。对比两组受试者2个化疗周期后临床疗效及毒副反应发生率的差异,记录其治疗前后Karnofsky功能状态量表(KPS)评分、癌变组织FAS蛋白阳性表达水平变化情况,分析联合组治疗前后细胞超微结构变化差异。结果 联合组治疗总有效率明显高于对照组(44.7%vs.22.5%,P〈0.05)。治疗后,两组发热、神经反应降低、肾损伤等毒副反应发生率比较差异无统计学意义(P〉0.05),联合组骨髓抑制、恶心呕吐中重度毒副反应发生率明显低于对照组(P〈0.05)。治疗后,两组受试者KPS评分及癌变组织FAS蛋白阳性表达率均较治疗前明显提升,且联合组高于对照组(P〈0.05)。联合组受试者癌细胞的超微结构均出现不同程度的改变,部分可见癌细胞细胞质萎缩、染色质破裂、细胞器退变或凋亡;多数存在膜性结构裂隙、内质网结构松散或脱颗粒等变化。结论 艾易舒注射液联合GP化疗方案对促进NSCLC患者病情转归、改变癌细胞超微结构、减轻毒副作用等具有积极意义。
摘要:目的 比较经皮内镜下胃/空肠造瘘术(PEG/PEJ)和鼻-空肠管(NT)置管在晚期上消化道恶性肿瘤患者家庭肠内营养(HEN)支持中的应用。方法 选取2013年1月至2015年6月该院收治的111例接受HEN支持的晚期上消化道恶性肿瘤患者,根据肠内置管途径将其分为PEG/PEJ组(51例)和NT组(60例),比较两种置管方式在HEN中的应用情况、患者并发症发生率、病死率,并进行生存分析。结果 PEG/PEJ组肠内营养相关并发症和管道相关并发症发生率均低于NIT组,差异有统计学意义(P〈0.05),而两组病死率比较差异无统计学意义(P〉0.05)。出院后6个月累计生存率为43.9%。COX分析显示,肿瘤部位和置管方式是影响患者生存时间的独立因素(P〈0.05)。结论 PEG/PEJ较NT置管可降低上消化道恶性肿瘤患者HEN支持的并发症发生率,延长患者生存时间。
摘要:目的 运用尖端放电喷雾电离质谱技术鉴定肺癌差异性磷脂。方法 在不对肺组织进行任何预处理的前提下,采用自制的甲醇萃取辅助的尖端放电喷雾离子源对14例肺癌患者的肺癌组织和癌旁组织的差异性磷脂[质荷比(m/z)756.7]及标准品[二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)+Na+]进行多级质谱检测,萃取剂甲醇的流速为4μL/min,设置离子源为正离子模式,一级质谱扫描范围为m/z 750~850,多级谱图扫描范围为m/z 200~800,离子传输管温度150℃,喷雾电压3.5kV,透镜电压65.0V,选定离子的隔离宽度为1.6Da,碰撞能量为13%。结果 m/z 756.7的多级质谱图与标准品[DPPC+Na+]完全相符,即肺癌的差异性物质为DPPC。结论 尖端放电喷雾电离质谱技术利用多级质谱分析可以很好地对肺癌和癌旁组织的差异性磷脂进行定性,DPPC可能成为新的肺癌分子标志物,为肺癌的诊断提供新的方法。
摘要:目的 研究重庆地区脑卒中患者血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平及亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因多态性的分布。方法 选取2015年4~11月在该院神经内科住院并诊断为脑卒中的患者共292例,其中排除52例未检测Hcy水平的患者,选取剩余的240例(男116例,女124例)作为本次研究对象。采用酶循环法检测患者Hcy水平。提取患者全血DNA,采用基因芯片技术检测其MTHFR C677T基因的多态性。结果 共检测出3种不同的MTHFR基因型:C677C型、C677T型、T677T型,频率分别为42.9%、44.2%、12.9%,其中C等位基因频率为65%,T等位基因频率为35%。CC基因型在男女之间的分布比较,差异有统计学意义(P=0.003),C等位基因在男性患者中的频率明显高于女性患者(P〈0.05)。重庆地区与河南豫北地区脑卒中患者MTHFR C677C基因型与T677T基因型分布比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。TT型的Hcy水平与CC、CT型比较差异有统计学意义(P〈0.01)。结论 重庆地区脑卒中患者MTHFR C677T基因存在多态性分布,且与河南豫北地区存在差异;MTHFR C677T基因多态性与Hcy水平相关,TT基因型的Hcy水平明显高于CC、CT基因型。
摘要:目的 探讨野生型p53诱导磷酸酶1(Wip-1)基因在子宫内膜癌组织中的表达及与细胞凋亡的关系。方法 选取子宫内膜癌患者68例,子宫内膜不典型增生患者30例,并留取正常子宫内膜组织标本40份。培养子宫内膜癌细胞系ECC-1(ER阳性)和KLE(ER阴性),将细胞分为Wip-1siRNA组、siRNA对照组和空白对照组。利用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测不同组织及不同转染组细胞中Wip-1基因表达,四甲基噻唑蓝(MTT)比色法检测不同处理组细胞增殖能力,Annexin V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染色检测不同处理组细胞凋亡及细胞周期。结果 子宫内膜癌组织中Wip-1mRNA表达水平(2.37±0.16)高于子宫内膜不典型增生组织(1.59±0.14)和正常子宫内膜组织(1.14±0.12),且子宫内膜不典型增生组织高于正常子宫内膜组织,差异均有统计学意义(P〈0.01);子宫内膜癌组织中Wip-1mRNA表达水平与病理分期、病理分级、淋巴结转移、p53有关(P〈0.01);Wip-1siRNA组ECC-1细胞和KLE细胞在转染后24、48、96h细胞存活率均低于siRNA对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(P〈0.05);Wip-1siRNA组ECC-1细胞和KLE细胞G0+G1期比例均高于siRNA对照组和空白对照组,而S期和G2+M期比例均低于siRNA对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(P〈0.01);Wip-1siRNA组ECC-1细胞和KLE细胞凋亡率均高于siRNA对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论 Wip-1基因参与了子宫内膜癌细胞增殖和凋亡过程。
摘要:目的 探讨血清胃蛋白酶原(PG)Ⅰ、PGⅡ、PGⅠ/PGⅡ(PGR)及胃泌素-17(GAS-17)水平在胃癌患者中的诊断价值及相关性。方法 选取该院454例胃部疾病患者,104例健康者(对照组),分别检测各组血清PGⅠ、PGⅡ、PGR及GAS-17水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价血清PGⅠ、PGⅡ、PGR及GAS-17水平在胃癌和非胃癌组中的诊断价值,并应用Logistic回归模型分析胃癌的独立危险因素。结果 胃癌组、萎缩性胃炎组和非萎缩性胃炎组血清PGⅠ及PGR明显低于对照组(P〈0.05),且胃癌组血清PGⅠ及PGR明显低于萎缩性胃炎组、非萎缩性胃炎组和胃溃疡组(P〈0.05)。胃癌组血清GAS-17水平明显高于对照组、非萎缩性胃炎组和胃溃疡组(P〈0.05)。胃癌组与对照组血清PGⅡ水平比较差异无统计学意义(P〉0.05)。进展期胃癌组血清PGⅠ及PGR明显低于早期胃癌组(P〈0.05),而血清GAS-17水平明显高于早期胃癌组(P〈0.05)。胃癌TNM分期越高,血清PGⅠ水平降低越明显(P〈0.05),血清GAS-17水平升高越明显(P〈0.05)。ROC曲线显示,血清PGⅠ、PGⅡ、PGR、GAS-17及联合检测对胃癌组的诊断效能优于非胃癌组,且4项联合检测的曲线下面积(AUC)高于单项检测,其灵敏度和特异度分别为83.7%和76.8%。多元Logistic回归分析发现胃癌家族史、不正确的饮食习惯、PGⅠ及GAS-17进入回归模型,其OR值及95%CI分别为6.481(3.562~11.316)、2.843(1.103~6.918)、2.624(1.094~4.521)、1.735(1.046~3.912)。结论 血清PGⅠ、GAS-17及PGR水平变化与胃癌的病程进展及分化程度相关,联合检测有助于提高胃癌的阳性诊断率。
摘要:目的 观察原位肝移植手术新肝期静脉泵注前列地尔(PGE1)对血流动力学的影响,为临床合理用药提供参考。方法 选取2011~2015年在该院移植中心接受原位肝移植的患者30例,采用计算机随机数字表法将其分为对照组、E1组和E2组,各10例;在原位肝移植手术新肝期,E1组与E2组患者分别以5、10ng/(kg·min)静脉泵注PGE1,对照组泵注等量生理盐水,其余处理相同;在新肝期30min分别纪录心率(HR)、平均动脉压(MAP)、肺动脉压(PAP)、心排血量(CO)、外周血管阻力(SVR)。结果 3组患者年龄、体质量、手术时间、无肝期时间、失血量及输注量比较,差异均无统计学意义(P〉0.05)。在门静脉、肝上下腔静脉开放后30min,与对照组比较,E1组及E2组HR、CO均增加,MAP下降,但差异均无统计学意义(P〉0.05);E1组及E2组SVR和PAP均下降,且随PGE1使用剂量增加而下降,E1组及E2组患者PAP与对照组比较,差异均有统计学意义(P〈0.05),仅E2组SVR与对照组比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论 在处理肝移植新肝期PAP增高和CO降低时,静脉泵注PGE1可作为有效的处理办法。
摘要:目的 观察2型糖尿病患者骨骼肌乙酰CoA羧化酶(ACC)的表达和活性的变化,探讨其在骨骼肌脂质堆积和胰岛素抵抗中的作用。方法 于2012年6月至2013年6月在石家庄市第二医院骨科住院择期行髋关节及下肢手术患者中,选取2型糖尿病病程5年之内的患者10例为糖尿病组(DM组),另选取10例非糖尿病者为对照组(NC组)。采集静脉血检测空腹血糖(FBG)、血脂、游离脂肪酸(FFA)等,计算胰岛素敏感性指数(ISI)。骨科手术中留取骨骼肌标本,测定骨骼肌三酰甘油(TG)、总的长链脂酰辅酶A(LCACoA)水平。骨骼肌ACC、磷酸化乙酰辅酶A羧化酶(P-ACC)蛋白表达用蛋白质印迹法(Western blotting)测定。结果 DM组FBG、空腹胰岛素(FINS)、FFA及血清TG水平高于NC组(P〈0.05),而ISI低于NC组(P〈0.01)。DM组骨骼肌TG及LCACoA水平高于NC组(P〈0.05)。两组骨骼肌ACC蛋白表达比较差异无统计学意义(P〉0.05),DM组骨骼肌P-ACC蛋白水平低于NC组(P〈0.05)。结论 ACC活性的改变可能在2型糖尿病患者骨骼肌脂质堆积和胰岛素抵抗发生中起了一定作用。
摘要:目的 了解重庆地区儿童2009~2014年感染阴沟肠杆菌的临床分布特征及耐药性,为合理应用抗菌药物和预防控制医院感染提供依据。方法 分析2009~2014年检出的阴沟肠杆菌对15种抗菌药物的耐药性,采用BD Phoenix 100全自动微生物鉴定/药敏系统,以最小抑菌浓度(MIC)结合K-B纸片扩散法进行药敏试验,按美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准判断结果。结果 共分离阴沟肠杆菌3 384株,检出率为4.18%;以呼吸道标本多见,占83.04%。阴沟肠杆菌对美洛培南和亚胺培南的耐药率最低,分别为0.88%和0.94%;对左氧氟沙星、环丙沙星、哌拉西林/他唑巴坦的耐药率分别为4.38%、5.17%,26.49%。2009~2014年阴沟肠杆菌对15种抗菌药物的耐药率比较,差异均有统计学意义(P〈0.05)。共检出产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)阴沟肠杆菌87株,占2.57%。新生儿病房和呼吸病房检出阴沟肠杆菌的构成比高于其他病区,分别为26.92%、24.32%。结论 阴沟肠杆菌的耐药性呈上升趋势,新生儿科与呼吸科是预防控制的重点科室。
摘要:目的 探讨多种心脏标志物与冠状动脉钙化积分(CACS)的关系及其临床诊断价值。方法 选取2013年10月至2014年4月在贵州省人民医院住院的冠心病(CHD)患者70例(疾病组)和体检健康者50例(对照组),检测其血清白细胞介素-10(IL-10)、妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、脂联素(APN)、1,25二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、白细胞介素-18(IL-18)、基质γ-羧基谷氨酸蛋白(MGP)及骨桥蛋白(OPN)9种标志物水平;使用双源CT对疾病组进行冠状动脉成像检查以计算患者CACS,并根据CACS将患者分为重度、中度、轻度患者;比较各组血清心脏标志物水平,分析其与CACS的关系,并评价其临床诊断价值。结果 疾病组与对照组血清1,25(OH)2D3、HIF-1α、IL-18、MGP及OPN水平比较,差异均有统计学意义(P〈0.05);不同CACS患者与对照组血清IL-10、PAPP-A、1,25(OH)2D3、HIF-1α、IL-18、MGP及OPN水平比较,差异均有统计学意义(P〈0.05);CACS与1,25(OH)2D3呈负相关(P〈0.05),与HIF-1α、IL-10、MGP呈正相关(P〈0.05),且与1,25(OH)2D3、HIF-1α、IL-18、MGP及OPN存在明显的线性关系(P〈0.05);绘制受试者工作特征(ROC)曲线显示,HIF-1α、MGP、1,25(OH)2D3对CHD的诊断价值较高,其ROC曲线下面积分别为0.826、0.667和0.616,灵敏度分别为73.30%、58.80%、48.50%,特异度分别为73.50%、83.70%和95.80%,3项标志物联合检测的AUC为0.845,灵敏度和特异度分别达到90.0%和70.0%。结论 多项心脏标志物对CHD具有较高的诊断价值,加强心脏标志物与动脉粥样硬化及钙化的相关性研究,有利于促进心脏标志物的临床应用。