HDAC2磷酸化区域突变体的构建及其对小鼠成纤维细胞增殖的影响
摘要：目的 应用片段缺失突变技术鉴定HDAC2自身磷酸化对其Sumo-E3连接酶活性及蛋白质翻译的影响。方法以前期获得的鼠源性HDAC2Sumo-E3连接酶结构域基因片段为模板,设计片段缺失突变引物,经长片段重叠延伸PCR技术扩增获得片段缺失突变基因片段,后于Top10大肠杆菌中自然连接扩增获得pcDNA3.1/HDAC2-Sumo-E3连接酶磷酸化结构域缺失突变的真核表达载体。然后将载体转染于L929成纤维细胞瞬时过表达突变基因,再经翻译反应性荧光素酶报告基因实验和Western-blot鉴定HDAC2自身磷酸化修饰对Sumo-E3连接酶介导的报告基因和靶蛋白质表达的影响。最后通过MTT实验检测HDAC2自身磷酸化修饰对其Sumo-E3连接酶介导的L929细胞增殖的影响。结果 成功构建获得磷酸化修饰完全缺失的HDAC2片段缺失突变体pcDNA3.1/HDAC2-Sumo-E3（DEL 394-424AA）。LUC报告基因检测结果显示,DEL 394-424A段缺失突变体促进LUC翻译是对照组的4.24倍,且能显著促进靶蛋白ODC和c-Myc的表达,以及L929小鼠成纤维细胞的增殖效应。结论 HDAC2自身磷酸化修饰对HDAC2Sumo-E3连接酶活性及其调节的蛋白质翻译和细胞增殖作用起负性调节作用。孕期炎症暴露致子代大鼠肾脏组织中甲基化转移酶表达异常的研究
摘要：目的 探讨肾脏DNA甲基转移酶（DNMTs）在孕期脂多糖（LPS）刺激仔鼠高血压发生的作用。方法 将孕鼠分为4组,分别为对照组（孕期的8~14d注射生理盐水）、LPS组（孕期第8、10、12天注射LPS,在9、11、13、14天注射生理盐水）、核转录因子κB（NF-κB）抑制剂PDTC组（孕期的8~14d每天注射PDTC）、LPS＋PDTC组（LPS在孕期第8、10、12天注射,PDTC注射时间及剂量同PDTC组）。用尾动脉无创血压测定仪测仔鼠血压,电子天平称体质量,RT-PCR检测仔鼠肾皮质白细胞介素-6（IL-6）、Fli-1及DNMTs的表达水平。结果LPS组仔鼠血压明显高于对照组（P〈0.05）,体质量较对照组高,肾皮质IL-6、Fli-1、DNMT1、DNMT3b表达较对照组升高（P〈0.05）。而LPS＋PDTC组仔鼠体质量、血压及IL-6、Fli-1、DNMT1、DNMT3b表达均较LPS组降低。结论 孕期LPS刺激会引起仔鼠肾皮质DNA甲基酶变化,提示一些关键基因的甲基化可能是孕期LPS刺激引起子代高血压的原因之一。尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白对急性肾损伤的诊断价值
摘要：目的 探讨尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）鉴别肾前性和肾性急性肾损伤（AKI）的价值。方法酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测197例确诊AKI患者尿NGAL的浓度。研究人员在不知实验室检测结果的情况下进行分类,17例因肾后梗阻或临床资料不足而被排除。其余的180例中有94例诊断为肾性AKI,51例为肾前性AKI、35例不可分类,并进行受试者工作特征（ROC）曲线分析。结果 肾性AKI患者尿NGAL水平明显高于肾前性AKI患者（平均273.3 vs.37.5μg·g^-1·Cr,P〈0.05）,NGAL的ROC曲线下面积（0.90）明显高于所试验的其他标志物,其临界值为125μg·g^-1·Cr时,检出AKI的特异性和敏感性分别为0.80和0.91。尿NGAL〉125μg·g^-1·Cr表示肾性AKI,NGAL〈125μg·g^-1·Cr表示肾前性AKI。结论 确诊AKI患者尿NGAL水平能有效地区分肾前性和肾性AKI。慢性社会应激模型的构建及其对雄鼠生殖健康影响的研究
摘要：目的 构建慢性社会应激模型,探究慢性社会应激对雄性C57BL/6小鼠生殖健康的影响。方法 将C57BL/6小鼠分成应激组和对照组;应激组予以慢性社会应激25d后,通过社会交互作用的行为学实验和体质量变化评估应激模型的构建状况,并对比两组小鼠生殖腺质量、精子计数等指标评估生殖健康的影响。结果 慢性社会应激结束后,通过社会交互作用的行为学实验,发现应激组小鼠在行为上具有明显社会逃避行为;同对照组相比应激组小鼠生殖腺质量、精子数目均明显降低。结论慢性社会应激可以损伤雄鼠生殖功能,主要表现在生殖腺萎缩、精子数目减少等。瑞舒伐他汀对大鼠缺血心肌嗜铬粒蛋白A和MR-proADM表达的影响
摘要：目的 研究瑞舒伐他汀对急性心肌梗死大鼠缺血心肌嗜铬粒蛋白A（CGA）和肾上腺髓质素原中间片段（MRproADM）表达的影响。方法 采用冠状动脉结扎术建立30只急性心肌梗死大鼠模型,分成对照组（n=15）和治疗组（n=15）,以15只正常大鼠作为空白组,其中治疗组接受瑞舒伐他汀治疗。分别在手术治疗后3、7d和14d取5只大鼠的心肌组织。采用荧光定量PCR检测组织内CGA和MR-proADM mRNA转录量,采用Western blot检测组织内CGA和MR-proADM的表达量。结果 治疗后第7天和第14天治疗组CGA和MR-proADM mRNA和蛋白表达量与空白组差异无统计学意义（P〉0.05）,对照组CGA和MR-proADM mRNA和蛋白表达量均显著高于治疗组和空白组（P〈0.05）。结论 瑞舒伐他汀可有效降低急性心肌梗死大鼠心肌组织内CGA和MR-proADM mRNA转录和蛋白表达。高强度聚焦超声阻断金地鼠颊囊白斑癌变的实验研究
摘要：目的 评价高强度聚焦超声（HIFU）治疗口腔白斑的有效性及可行性。方法 将30只金地鼠分为两组,A组（n=5）：为空白对照组,颊囊涂布生理盐水;B组（n=25）两侧颊囊涂布0.5%二甲基苯并蒽（DMBA）丙酮液,每周3次,连续5周,构建白斑动物模型。左侧为超声治疗侧,HIFU剂量参数为功率4周,时间10min,右侧为模型对照侧,不进行超声治疗,均于超声治疗后6周时处死。取颊囊标本进行大体病理观察、光学显微镜下病理切片变化比较。结果 25只金地鼠颊囊超声治疗侧（左侧）白斑、上皮异常增生和肿瘤发生率均低于模型对照侧（右侧）,高于空白对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 HIFU治疗能有效降低金地鼠颊囊白斑的发生率并阻断其癌变。急性微波辐射对雄性大鼠睾丸形态和血浆FSH及抑制素B浓度的影响
摘要：目的 探讨不同功率密度急性微波辐射对雄性大鼠睾丸组织形态及血浆促卵泡刺激素（FSH）及抑制素B（INHB）浓度的影响。方法 36只成年雄性SD大鼠均分为4组（A、B、C、D）,经平均功率密度分别为0、30、60、90mW/cm2微波辐射5min,辐射完成后24h用酶联免疫吸附试验测定大鼠血浆内FSH及INHB浓度,利用光学显微镜观察大鼠睾曲细精管直径及管壁厚度、管腔内精子数量等。结果 辐射组与对照组相比,睾曲细精管直径及管壁厚度、管腔内精子数量等均未见明显差异;辐射组与对照组、各辐射组间血浆FSH浓度差异无统计学意义（P〉0.05）;各辐射组血浆内INHB含量均下降,其中90mW/cm2组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 急性微波辐射对雄性大鼠睾丸曲细精管形态、腔内精子数量等无明显损害;对辐射大鼠24h后血浆FSH浓度无明显影响,高剂量辐射可明显降低大鼠血浆INHB浓度。体外共培养体系中胆管癌细胞对人脐静脉内皮细胞b-FGF和VEGF表达的影响
摘要：目的 探讨体外共培养体系中胆管癌细胞（QBC939）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法 建立胆管癌QBC939细胞与HUVEC体外共培养体系,采用CCK-8法检测共培养不同时相HUVEC的增殖;ELISA检测共培养上清液中b-FGF含量;qRT-PCR和Western blot检测共培养不同时相点HUVEC细胞VEGF mRNA和蛋白质的表达。结果共培养后12、24、48h和72h,HUVEC增殖较对照组显著增高（P〈0.01）。与0h组比较,共培养12、24、48h上清液中b-FGF含量显著增高（P〈0.05）。共培养12h时VEGF mRNA表达显著增加,并持续至72h（P〈0.01）,VEGF蛋白表达在共培养12h后显著增高,24、48、72h时与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 人胆管癌QBC939细胞可促进血管内皮细胞增殖、增加b-FGF分泌和VEGF表达。b-FGF和VEGF表达增加与肿瘤血管新生,以及肿瘤的生长和转移可能具有相关性。DNA甲基转移酶在宫颈癌组织中的表达及其与HPV的相关性分析
摘要：目的 探讨5种DNA甲基转移酶（DNMTs）在宫颈癌组织中的表达情况及其与高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染的关系。方法 应用荧光定量PCR、Western blotting、免疫组化检测40例宫颈癌组织、对应癌旁组织及20例正常宫颈组织中DNMT1、DNMT2、DNMT3a、DNMT3b和DNMT3l的表达情况,应用质谱法检测HPV感染情况。结果宫颈癌组织中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、DNMT3l的阳性表达率分别为90.0%、85.0%、70.0%、80.0%,在癌旁组织内的阳性表达率分别为87.5%、85.0%、72.5%、77.5%,均明显高于正常宫颈组织内的阳性表达率（分别为25.0%、15.0%、20.0%和30.0%）,而DNMT2在宫颈癌和癌旁组织中阳性表达率仅为12.5%和17.5%,明显低于正常宫颈组织（约85.0%）,且DNMT1、DNMT3a、DNMT3b与HPV阳性呈显著正相关（r值分别为0.709、0.538和0.536,P〈0.05）。结论 宫颈癌组织中DNMT的表达谱发生明显改变,且HPV高危亚型感染与DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的表达升高密切相关。HDL影响冠心病患者血小板ox-LDL诱导活化的体外分析
摘要：目的 探讨高密度脂蛋白（HDL）对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人血小板活化的影响。方法 将洗涤血小板按照等体积分为3组,Ⅰ组加入100μg/mL HDL;Ⅱ、Ⅲ组均加入PBS,3组均置于37℃环境下孵育15min。Ⅰ、Ⅱ组加入50μg/mL ox-LDL;Ⅲ组加入PBS,3组均在37℃再孵育15min。应用流式细胞仪检测3组CD62P表达水平,应用透射电镜观察3组血小板的形态结构。结果3组的血小板CD62P表达率差异有统计学意义（P〈0.05）,且Ⅱ组（29.26±5.91）%〉Ⅰ组（15.37±1.49）%〉Ⅲ组（2.05±0.85）%;3组的血小板CD62P平均荧光强度（MFI）存在差异（P〈0.05）,且Ⅱ组（3.97±0.64）〉Ⅰ组（2.51±0.53）〉Ⅲ组（1.50±0.10）。Ⅱ组血小板脱颗粒比Ⅰ组更明显,Ⅲ组未发生脱颗粒。结论 HDL能显著抑制oxLDL体外诱导的血小板活化。血清多种肿瘤标志物联合检测对肺癌的诊断价值
摘要：目的 探讨多肿瘤标志物联合检测对肺癌诊断的临床价值。方法 应用蛋白芯片法检测肺癌组（n=1 021）及健康体检者（n=827）血清中糖类抗原19-9（CA19-9）、癌胚抗原（CEA）、糖类抗原125（CA125）及糖类抗原15-3（CA15-3）的表达水平。结果 不同病理类型肺癌中,4种血清肿瘤标志物在非小细胞肺癌中的阳性率均明显高于小细胞肺癌,差异有统计学意义（P〈0.05）。CA19-9、CEA、CA125及CA15-3 4种肿瘤标志物单项检测对肺癌诊断的敏感性、特异性均不高;联合检测时诊断敏感性未见明显改善,但随着联合检测标志物种类的增加,特异性明显增加,均在98%以上。4项联合检测时对肺癌诊断具有最高的特异性（100%）。结论 CA19-9、CEA、CA125及CA15-3 4种肿瘤标志物联合检测能明显增加诊断的特异性。90例青年肺癌患者的临床特征及预后分析
摘要：目的 探讨青年肺癌的临床病理特征、治疗效果和预后影响因素,为青年肺癌的个体化分层提供依据。方法 回顾性分析该院90例40岁及以下的肺癌患者的临床资料,分别对临床特征、治疗方法及手术后患者无病生存期（DFS）,未手术患者一线治疗效果及无进展生存期（PFS）、总生存时间（OS）等进行评估。结果 90例患者中位年龄38岁,男女比例1.25∶1,以腺癌为主（占71.1%）,临床分期以晚期为主,Ⅲa~Ⅳ期占65.6%。整体人群PFS 9.6个月（6.76~12.44）、总体中位OS 48.5个月（18.51~78.49）。其中手术患者的中位随访时间24个月,总体中位DFS为11.8个月（8.5~15.1）,总体中位OS为52.0个月（33.9~70.2）。T、N、M和临床分期是独立预后因素。非手术患者32例,总体中位随访时间8个月,总体中位PFS为7.0个月（4.2~9.9）,总体中位OS为25.7个月（16.0~35.4）。非手术患者中培美曲塞二钠＋铂类（PP）方案显著降低进展风险,相反,腺癌相对于其他组织学类型进展风险显著增高。对OS的多变量分析表明,化疗周期数是唯一的独立预后因素,患者死亡风险随着化疗周期数增多而显著下降。结论 青年肺癌以腺癌为主,首选手术治疗,晚期不能手术者首选PP方案。大承气汤联合益生菌对严重创伤患者血清蛋白的影响
摘要：目的 探讨大承气汤联合益生菌对严重创伤患者血清蛋白的影响。方法 将2013年4月至2014年6月收治的部位简明损伤定级标准（AIS）≥3分或创伤严重程度评分（ISS）≥16分且无腹部损伤的严重创伤患者70例,按随机数字表法分为单纯肠内营养组（对照组,n=16）、肠内营养＋益生菌组（益生菌组,n=16）、肠内营养＋大承气汤＋益生菌组（联合用药组,n=20）及肠内营养＋大承气汤组（大承气汤组,n=18）;4组患者均于入院后24~72h内经胃管行肠内营养,并于肠内营养第0、4、8、15天清晨通过采集空腹静脉血检测血清总蛋白、清蛋白、前清蛋白、视黄醇结合蛋白、血红蛋白等指标。结果 4组患者在各时间点血红蛋白、清蛋白等差异均无统计学意义（P〉0.05）。视黄醇结合蛋白：联合用药组于肠内营养第4天和15天,含量高于对照组（P〈0.05）;第4天,显著高于大承气汤组（P〈0.01）。总蛋白：第15天,联合用药组含量显著高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）。前清蛋白：第4天,联合用药组含量增加较其他3组显著（P〈0.05）。结论 大承气汤联合益生菌可通过较好地保护严重创伤患者的胃肠功能,改善血清蛋白水平,两种药物联合使用有协同作用,效果更佳。磁共振波谱成像联合fPSA/tPSA、PSAD对PSA灰区前列腺癌的诊断价值
摘要：目的 探讨磁共振波谱成像（MRS）联合前列腺特异性抗原（PSA）比值（fPSA/tPSA）及PSA密度（PSAD）在PSA灰区（4~10ng/mL）对前列腺癌（PCa）的诊断价值。方法 选取PSA位于灰区,病理检查证实为前列腺增生（BPH）或PCa的男性患者60例,收集tPSA、fPSA数据,计算PSAD、fPSA/tPSA、（胆碱＋肌酸）/枸橼酸盐的数值,用受试者工作特征（ROC）曲线分析MRS联合PSAD及fPSA/tPSA对PCa的诊断价值。结果 PCa组（n=24）和BPH组（n=36）的年龄和tPSA差异无统计学意义（P〉0.05）;fPSA、fPSA/tPSA、前列腺体积、PSAD和MRS的差异均有统计学意义（P〈0.05）;MRS、PSAD和fPSA/tPSA诊断PCa的效果相似（P〉0.05）;MRS与PSAD或fPSA/tPSA联合后对PCa诊断效能无明显增加（P〉0.05）;MRS、PSAD和fPSA/tPSA三者联合后,诊断效能显著增加（P〈0.05）。结论 MRS联合PSAD及fPSA/tPSA可提高灰区PCa诊断的准确性,对灰区PCa诊断有较高应用价值。脓毒症患儿早期皮质醇及促肾上腺皮质激素水平变化分析
摘要：目的 探讨脓毒症患儿早期皮质醇、促肾上腺皮质激素（ACTH）水平变化的临床意义及其对脓毒症患儿预后的判断价值。方法 收集2013年2~8月重庆医科大学附属儿童医院重症医学科40例脓毒症患儿资料,分为脓毒症组（n=21）和严重脓毒症组（n=19）,在病情早期监测血清皮质醇、ACTH水平,另选取同期门诊体检儿童20例进行对比分析。绘制受试者工作特征（ROC）曲线并计算曲线下面积、分析血清皮质醇对脓毒症患儿预后的判断价值。结果 （1）严重脓毒症患儿血清皮质醇、ACTH水平均高于脓毒症组和对照组,且脓毒症组高于对照组,差异具有统计学意义。（2）脓毒症组与严重脓毒症组患儿皮质醇、乳酸（LAC）、ACTH、危重评分、降钙素原（PCT）、C反应蛋白（CRP）、国际标准化比值（INR）、血小板（PLT）、尿素氮（BUN）比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）,肌酐（Cr）、活化部分凝血酶时间（APTT）、白细胞（WBC）、血糖（GLU）比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。（3）按预后分组,脓毒症死亡组与存活组患儿皮质醇、ACTH、危重评分、LAC比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,两组INR、PLT、BUN、Cr、APTT、CRP、PCT、WBC、GLU比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。（4）皮质醇水平与ACTH、LAC呈正相关（r=0.445、0.406,P〈0.05）,与危重评分呈负相关（r=-0.339,P〈0.05）,与CRP、PCT、WBC无线性相关性（P〉0.05）。ACTH与皮质醇、LAC、CRP呈正相关（r=0.445、0.560、0.324,P〈0.05）,与危重评分呈负相关（r=-0.332,P〈0.05）,与PCT、WBC无线性相关性（P〉0.05）。（5）皮质醇ROC曲线下面积0.792;ACTH ROC曲线下面积0.881;且差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 脓毒症患儿早期皮质醇、ACTH浓度升高的水平与病情严重程度及预后呈正相关。90岁以上高龄缺血性脑卒中患者颅内外动脉硬化研究
摘要：目的 探讨90岁以上高龄缺血性脑卒中患者颅内外动脉硬化的分布特点及相关危险因素。方法 连续回顾2009年7月至2014年7月在该院住院诊断为缺血性卒中且已行头颈部CT血管造影（CTA）检查的患者。年龄大于或等于90岁者设为研究组,年龄小于90岁者设为对照组,比较两组CTA影像形态学特点及差异,分析两组患者既往病史、体质量指数、血压、血糖、尿酸、血脂等危险因素与颅内外动脉硬化发生的关系。结果 研究组的颅内外动脉狭窄、斑块发生率均显著高于对照组（P〈0.01）。研究组中既往有高血压、冠心病病史者多于对照组（P〈0.05）,收缩压、舒张压水平也高于对照组（P〈0.05）。结论 90岁以上高龄缺血性脑卒中患者的颅内外动脉硬化严重程度及发生率均明显增加。肥胖、IGT、2型糖尿病患者与健康人血浆胰多肽水平的观察
摘要：目的 探讨肥胖、糖耐量异常（IGT）、2型糖尿病患者与健康人血浆胰多肽（PP）水平的变化及意义。方法 肥胖、IGT、2型糖尿病患者及健康对照者共47例,测定其基础、标准蛋白餐后15、30、60、120min血浆PP及空腹血糖、胰岛素,比较并观察在肥胖、IGT、2型糖尿病患者中不同水平PP的意义。结果 单纯肥胖组PP水平最低,肥胖伴糖耐量异常组及2型糖尿病组PP水平升高。结论 肥胖、IGT、2型糖尿病患者中可能出现了影响PP分泌的自主神经功能改变。阿那曲唑对绝经后乳腺癌患者血清脂联素和瘦素水平的影响
摘要：目的 观察阿那曲唑辅助治疗对绝经后乳腺癌患者血清脂联素、瘦素水平的影响。方法 选取该院60例需要术后辅助内分泌治疗的绝经后乳腺癌患者,每天给予1mg阿那曲唑（每天1次）治疗,分别检测其服药前及服药后3、6、12个月的血脂、血清脂联素、瘦素水平。结果 服用阿那曲唑后3个月血脂、血清脂联素、瘦素水平无明显变化,与服药前差异无统计学意义（P〉0.05）;6个月低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）明显升高,与服药前相比差异有统计学意义（P〈0.05）,其余无明显差异;12个月后总胆固醇（TC）、LDL-C、血清瘦素水平明显升高,而血清脂联素则降低明显,差异有统计学意义（P〈0.05）。TC、LDL-C与血清脂联素具有明显负相关性,与血清瘦素水平具有明显正相关性（P〈0.05）;血清脂联素与瘦素具有明显负相关性（P〈0.05）。结论 绝经后乳腺癌患者术后接受阿那曲唑辅助治疗,可影响血清脂联素、瘦素的水平,从而导致血脂代谢紊乱。
