SL7207/pEGFP-N1-AQP9及SL7207/pshRNA-AQP9重组沙门菌的构建及表达
摘要：目的将人水甘油通道蛋白9（AQP9）真核表达质粒pEGFP-N1-AQP9及干扰质粒pshRNA-AQP9通过电穿孔转化减毒沙门菌株SL7207,并验证其表达情况,为阐明AQP9在非酒精性脂肪肝病（NAFLD）中的作用奠定基础。方法从人肝脏组织中通过RT-PCR获得AQP9基因,克隆到载体pEGFP-N1上,构建真核表达质粒pEGFP-N1-AQP9,设计合成针对人AQP9的siRNA,退火形成双链shRNA,并插入pGenesil-1质粒中,构建干扰质粒pshRNA-AQP9,电穿孔转化减毒沙门菌株SL7207,通过PCR、Western blot验证其表达情况,并检测其稳定性。结果成功构建pEGFP-N1-AQP9及pshRNA-AQP9重组质粒,将其转化SL7207后,能在重组沙门菌中表达。结论成功构建SL7207/pEGFP-N1-AQP9及SL7207/pshRNA-AQP9重组沙门菌,为进一步研究AQP9对NAFLD的基因治疗奠定基础。钙视网膜蛋白在先天性无神经节细胞症中的表达特点及临床意义
摘要：目的探讨将钙视网膜蛋白（CR）用于诊断先天性无神经节细胞症（HD）的可行性。方法采用免疫组织化学法检测CR在50例HD（HD扩张段组、HD痉挛段组）和10例对照组结肠壁的表达,并与常规HE染色进行对比分析。用Image-Pro-Plus图文分析系统定量分析染色结果。结果 HD痉挛段组与对照组及HD扩张段组黏膜下层、肌层间CR表达的平均光密度值（MOD）差异均有统计学意义（P〈0.01）;HE染色扩张段肠壁神经丛中可见神经节细胞,痉挛段神经节细胞缺失,CR免疫组织化学染色与HE染色诊断结果一致;新生儿与年长儿HD痉挛段黏膜下层CR表达差异无统计学意义（P=0.816）。结论 CR免疫组织化学染色用于新生儿HD的诊断与传统方法比较具有明显优越性。GFP标记成年大鼠表皮神经嵴干细胞的分离培养与形态学特征
摘要：目的建立绿色荧光蛋白（GFP）标记大鼠表皮神经嵴干细胞（EPI-NCSC）的分离培养方法,为EPI-NCSC在体移植研究脊髓损伤修复奠定基础。方法分离成年GFP大鼠胡须毛囊,取毛囊隆突部贴附于胶原包被的培养板上。在培养第4天有大量细胞游出,取出贴附的毛囊隆突部,细胞传代培养。细胞采用SOX10和Nestin免疫细胞化学染色鉴定,并计算细胞纯度。结果 EPI-NCSC在胶原基质上从隆突部游出,细胞为圆形或梭形,呈强绿色荧光。免疫细胞化学染色SOX10和Nestin双阳性,纯度在99%以上。结论本实验方法简便易行,能分离出高纯度的GFP-EPI-NCSC,可作为一种有效的工具细胞用于损伤脊髓修复研究。不同构型人α防御素-5多肽抗HSV-2感染的实验研究
摘要：目的探讨不同构型人α防御素-5（HD-5）多肽对单纯疱疹Ⅱ型病毒（HSV-2）感染的抑制作用,分析不同构型HD-5抗HSV-2活性的差异。方法 HSV-2病毒感染体外培养的绿猴肾细胞（Vero细胞）,分别给予100μg/mL的HD-5/N、HD-5/Acm和HD-5/A肽处理,72h后观察细胞病变效应（CPE）,并通过CCK-8法测定细胞保护率;建立HSV-2感染豚鼠生殖器实验动物模型,按照症状评分方法对不同构型HD-5多肽的体内抗HSV-2病毒感染作用进行分析。结果 HD-5/N与HD-5/Acm均能显著抑制HSV-2感染体外培养的Vero细胞（P〈0.01）,而HD-5/A的抗病毒作用不明显;阴道内给予HD-5/N多肽12.5μg.kg-1.d-1治疗8d能显著改善HSV-2感染豚鼠的生存状况,提高动物30d存活率（P〈0.01）,外阴感染症状评分显著降低（P〈0.01）,而HD-5/Acm治疗效果并不明显。结论天然结构HD-5多肽（HD-5/N）在体外或豚鼠阴道内应用均可发挥显著抗HSV-2感染的作用,二硫键缺失会显著影响HD-5多肽的体内抗病毒效果。甘氨酸对烧伤大鼠心肌细胞能量代谢的影响
摘要：目的探讨甘氨酸对烧伤后大鼠心肌细胞能量代谢的影响。方法将72只Wistar大鼠随机分成正常对照组（C组）、烧伤对照组（B组）、甘氨酸组（Gly组）。B、Gly组建立30%体表面积Ⅲ度烧伤大鼠模型,观察伤前及烧伤后12、24、48、72h大鼠心肌细胞能量代谢的变化,同时检测伤后高能磷酸化合物（AMP、ADP和ATP）、血浆乳酸和谷胱甘肽（GSH）的水平。结果烧伤大鼠心肌能量代谢发生障碍,与C组相比,B组和Gly组大鼠心肌ATP及GSH水平大幅下降（P〈0.01）,而AMP、ADP、血乳酸水平则大幅上升（P〈0.01）;Gly组大鼠心肌ATP、GSH下降以及AMP、ADP、血乳酸上升幅度均明显低于B组（P〈0.01）。结论甘氨酸能改善烧伤后心肌有氧代谢,减少乳酸生成,有效降低烧伤后心肌受损程度,具有很好的心肌保护作用。正畸治疗对青少年前磨牙牙根吸收影响的相关因素研究
摘要：目的探讨正畸治疗中影响青少年患者前磨牙牙根吸收的相关因素。方法选择接受MBT固定直丝弓矫治完成的青少年患者60例,根据是否拔除第二前磨牙分为非拔牙组和拔牙组,以第一前磨牙为研究对象,通过曲面断层片测量治疗前、后的冠根比（牙冠长度比牙根长度）,冠根比的变化反映牙根长度的变化,分析拔牙、性别、牙位等因素对青少年前磨牙牙根长度的影响。结果非拔牙组治疗前、后第一前磨牙平均冠根比之差,上颌：0.033 9±0.023 5,下颌：0.032 8±0.021 7,男：0.032 6±0.021 7,女：0.033 6±0.02 26;拔牙组治疗前、后第一前磨牙平均冠根比之差,上颌：0.049 7±0.019 1,下颌：0.048 0±0.023 5,男：0.047 9±0.021 1,女：0.049 8±0.020 8;两组间正畸治疗前、后冠根比之差比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;两组内不同性别和牙位正畸治疗前、后冠根比之差比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论拔牙矫治对前磨牙牙根吸收有影响,性别和上下颌牙位对前磨牙牙根吸收无影响。穴位注射对非酒精性脂肪肝胰岛素抵抗的影响
摘要：目的观察穴位注射对非酒精性脂肪肝（NAFLD）胰岛素（IR）抵抗的影响。方法将符合诊断标准的NAFLD患者100例,随机分为观察组（n=50）和对照组（n=50）。观察组：取足三里、丰隆穴（单侧）,每穴每次注射凯西莱注射液1.5mL,左右侧穴间次轮换,1周3次,疗程3个月。对照组：口服凯西莱片,每次200mg,3次/天,疗程3个月。检测两组肝功能（ALT、AST）、血清游离脂肪酸（FFA）、空腹血糖（FBG）及空腹胰岛素（FINS）、肝脏CT,并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）。结果观察组ALT、AST、FBG、FINS、FFA、HOMA-IR均明显下降,优于对照组（P〈0.05）,观察组肝脏CT值上升,优于对照组（P〈0.05）。结论穴位注射可通过改善IR,增加肝细胞对胰岛素的敏感性达到治疗NAFLD的作用。中晚期非小细胞肺癌维持治疗的对比研究
摘要：目的了解中晚期非小细胞肺癌（NSCLC）维持治疗的必要性和有效性及不同维持治疗的疗效。方法采用多中心、随机、空白对照的研究方法以SAS6.12软件模拟产生随机数据分为3组（靶向治疗组、常规治疗组、对照组）,通过对NSCLC进行常规治疗方案和靶向治疗方案作为维持治疗,两两对比分析,然后再与对照观察组做两两对比分析,分析不同维持治疗的疗效、中位生存时间、有效生存率及不良反应等。结果靶向治疗组与常规治疗组治疗有效率和疾病控制率比较差异有统计学意义（P〈0.05）,靶向治疗组和常规治疗组与对照观察组治疗有效率和疾病控制率比较差异有统计学意义（P〈0.01）;中位生存时间：靶向治疗组18.3个月,常规治疗组17.8个月,对照观察组10.8个月。生存率：靶向治疗组和常规治疗组的生存率差异无统计学意义（P〉0.05）,两组生存率与对照组的生存率比较差异有统计学意义（P〈0.05）;在不良反应方面,常规组的皮疹发生率高于靶向治疗组（P〈0.05）,两组间的其他不良反应发生率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论维持治疗能明显提高中晚期NSCLC的有效生存率和中位生存时间,患者在接受常规治疗后继续进行维持治疗是十分必要的。亚低温对急重型颅脑损伤患者脑脊液中S-100B蛋白和血糖水平及预后的影响
摘要：目的观察亚低温治疗对急重型颅脑损伤患者脑脊液中S-100B蛋白水平和血糖以及预后的影响,并探讨其治疗意义。方法将46例急性重型颅脑损伤的患者随机分为亚低温组和常规组。亚低温组在常规治疗的基础上,予亚低温治疗,直肠温度维持在33～35℃,根据病情维持3～5d。所有患者于治疗前及治疗后第2、4、6天动态检测脑脊液中S-100B蛋白及血糖水平。3个月后对患者行格拉斯哥预后评分（GOS评分）。结果亚低温治疗后脑脊液S-100B蛋白及血糖水平与常规组相比差异有统计学意义,GOS评分亚低温组明显优于常规组（P〈0.05）。结论早期亚低温治疗能显著降低急性重型颅脑损伤患者脑脊液中S-100B蛋白水平,改善糖代谢紊乱,从而改善患者预后。老年高血压患者动态血压与认知功能的关系
摘要：目的探讨动态血压参数与老年高血压患者认知功能的关系。方法收集老年高血压患者60例进行24h动态血压监测及简易智能状态检查表（MMSE）行认知功能测定,根据MMSE得分分为对照组（n=35）和减退组（n=25）,比较两组患者动态血压参数有无差异。结果对照组与减退组患者中24h平均收缩压[（127.38±19.14）mm Hg vs（132.00±15.09）mmHg]、白昼平均收缩压[（131.64±17.55）mm Hg vs（137.09±13.77）mm Hg]、夜间平均收缩压[（118.78±18.75）mm Hg vs（126.00±11.37mm Hg）]、昼夜节律比[（15.89±7.45）%vs（10.74±4.89）%]比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;24h平均舒张压、白昼及夜间平均舒张压比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论收缩压、血压节律异常与老年高血压患者认知功能损害有关。颈椎牵引结合按摩治疗椎-基底动脉扩张延长症的临床研究
摘要：目的通过临床症状改善及经颅多普勒（TCD）检测脑血流的变化,判断颈椎牵引结合按摩治疗椎-基底动脉扩张延长症（VBD）的疗效。方法选取160例患者符合头颈部计算机断层血管成像（CTA）诊断VBD的标准,将其随机分为观察组80例和对照组80例,均给予常规扩管改善脑循环（罂粟碱、甲磺酸倍他司汀）、抗血小板聚集（拜阿司匹林片）;观察组加用颈椎牵引结合按摩治疗,均连续治疗7d。治疗前后用TCD检测脑血流速度的变化,并根据临床症状评定疗效。结果治疗前两组TCD检测、各血流变参数差异无统计学意义（P〉0.05）,两组椎动脉及基底动脉的血流速度与治疗前比较均有提高（P〈0.05）,与对照组比较,观察组提高更明显,差异有统计学意义（P〈0.05）。两组临床疗效对比,观察组总有效率明显高于对照组（95%与70%,P〈0.05）。结论 VBD有明显的脑血管功能的紊乱,专业化的颈椎牵引结合按摩可明显提高VBD的临床疗效。彩色多普勒超声在乳腺小结节鉴别诊断中的价值
摘要：目的探讨彩色多普勒超声对乳腺小结节的鉴别诊断价值。方法观察86例乳腺小结节的二维声像图及彩色多普勒血流的表现,分析不同性质结节的声像图特征。结果乳腺恶性结节在纵横经、边界、砂砾样钙化等方面与良性结节比较差异有统计学意义,恶性结节总的血流显示率100%,良性结节总的血流显示率为32.8%,恶性结节中Adler分级大于Ⅱ级的血流显著高于良性结节（P〈0.01）,且恶性结节的收缩期峰值流速（PSV）、动脉血流阻力指数（RI）值显著高于良性结节（P〈0.05）。结论对小于2cm的乳腺结节性质的判定主要依据二维超声声像图改变,彩色血流的分布特点有助于结节性质的鉴别。YN33系列化合物抗肿瘤作用的初步研究
摘要：目的从8个YN33系列表皮生长因子受体（EGFR）蛋白酪氨酸酶抑制剂中筛选具有抗肿瘤活性的化合物,并进一步评价其在体外的抗肿瘤效果。方法首先采用体外激酶实验对YN33系列化合物进行初步筛选,观察它们对EGFR蛋白酪氨酸酶的抑制作用;采用MTS法观察筛选出的活性化合物在体外对人表皮癌A431细胞株、人胃癌N87细胞株和人乳腺癌BT474细胞株的增殖抑制作用,以及体外筛选出的YN33-5化合物对人正常胚肺成纤维MRC-5细胞增殖的抑制作用。结果激酶实验结果,发现4个具有抑制EGFR活性的化合物：YN33-3,YN33-5,YN33-6,YN33-8。YN33-5对A431、BT474、N87细胞株的半数抑瘤浓度（IC50）分别为：（9.743 3±2.795 9）μmol/L,（4.611 7±2.222 5）nmol/L和（44.048 3±21.793 1）nmol/L,抑制效应呈剂量依赖性。结论 YN33-5具有较好抗肿瘤活性,可抑制多种肿瘤细胞的增殖。miR-19b在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及临床意义
摘要：目的研究miR-19b在儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）中的表达及其与ALL临床特征和PTEN mRNA表达的相关性。方法采用实时定量PCR的方法检测67例儿童ALL（初诊组38例、完全缓解组20例、难治复发组9例）骨髓单个核细胞（BMMNC）中miR-19b的表达,分析其表达与临床特征及PTEN mRNA表达水平的关系。以15例原发性免疫性血小板减少症（ITP）患儿作为对照组。结果 miR-19b在初诊组和难治复发组的表达量显著高于完全缓解组和对照组（P〈0.01）。动态观察6例ALL患儿发现完全缓解后miR-19b表达量较初诊时显著降低（P〈0.05）。miR-19b高表达与外周血高WBC计数（≥50×109/L）、危险度分型（中、高危）、脾肿大、BCR-ABL融合基因阳性有相关性（P〈0.05）,与发病年龄、性别、免疫分型、形态学分型、MLL-AF4融合基因、肝及淋巴结肿大、早期泼尼松反应等因素无相关性（P〉0.05）。miR-19b与PTEN mRNA表达量无相关性（r=0.107,P〉0.05）。结论 miR-19b可能在儿童ALL发生、发展及不良预后中发挥一定作用,未发现miR-19b表达量同PTEN mRNA的表达量存在相关性。NF-κB基因RNA干扰质粒的构建与鉴定
摘要：目的构建转录因子NF-κB的RNA干扰（RNAi）质粒,为研究NF-κB参与的细胞信号通路及以其为靶点的基因治疗提供稳定转染的RNAi质粒。方法设计针对NF-κB的shRNA特异性序列,应用基因重组技术克隆到pSilencer 1.0-U6表达载体,EcoRⅠ和ApaⅠ双酶切及DNA测序鉴定重组克隆;脂质体转染RNAi重组载体至前列腺癌细胞PC-3后,Western blot分析各组NF-κB蛋白表达水平。结果双酶切和DNA测序证实shRNA正确插入pSilencer 1.0-U6质粒;Western blot结果显示与空质粒对照组比较NF-κB转染组细胞NF-κB表达明显下调。结论成功构建人NF-κB基因RNAi质粒,为研究NF-κB参与的细胞信号通路提供了稳定转染细胞的干扰质粒,为靶向NF-κB的基因治疗提供了有力工具。livinβ对胶质瘤细胞增殖和凋亡能力的影响
摘要：目的探讨livinβ基因阻断对胶质瘤细胞增殖和凋亡能力的影响。方法脂质体法转染重组质粒于人星形胶质瘤细胞（U251）,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡值,RT-PCR、Western blot分别检测细胞中caspase-3基因及蛋白的表达。结果 MTT法检测转染组细胞增殖明显低于对照组和空载体组,差异有统计学意义（P〈0.05）;PI单染流式细胞术检测转染组细胞凋亡值明显低于对照组和空载体组,差异有统计学意义（P〈0.05）;转染组caspase-3基因及蛋白表达均明显高于对照组和空载体组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论阻断人星形胶质瘤细胞（U251）中livinβ基因表达,caspase-3基因及蛋白表达均明显增加,激活细胞凋亡蛋白酶级联反应,导致凋亡增加,细胞增殖减少,进一步证实了livinβ基因在胶质瘤的发生、发展中起着重要作用。半胱氨酰白三烯受体抑制剂在骨折修复中作用的实验研究
摘要：目的观察半胱氨酰白三烯受体抑制剂孟鲁司特钠对大鼠胫骨骨折愈合的影响,并探讨花生四烯酸中5-脂氧合酶（5-LO）代谢途径中半胱氨酰白三烯途径影响早期骨愈合的可能机制。方法将42只SD雄性大鼠随机分为孟鲁司特钠治疗组（A组）、生理盐水对照组（B组）,每组21只,于建模成功后的10、20、30d随机抽取7只摘取眼球取血,检测血清中碱性磷酸酶（ALP）和骨钙素水平;处死动物后术侧胫骨X线照片分析,并取骨痂行组织学观察及骨形态计量分析。结果术后10、20、30dX线片观察,A组骨愈合速度明显快于B组;X线片评分术后10、20d,A组与B组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）;术后10dA组血清中ALP、骨钙素水平高于B组,差异有统计学意义（P〈0.05）;HE染色观察A组骨折端愈合方式相对B组有更明显的软骨内成骨;术后10、20dA组沿骨小梁每单位长度成骨细胞指数、骨小梁宽度、新生骨小梁面积百分比明显高于B组,与B组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论孟鲁司特钠作为半胱氨酰白三烯受体抑制剂,在骨损伤后的早期阶段表现出明显加快骨愈合速度的作用。锝气体肺通气显像在家兔急性肺栓塞模型制备中的作用
摘要：目的探讨颈静脉插管、聚酯海绵栓子制备实验家兔急性肺栓塞模型的可行性;研究实验家兔锝气体（Technegas）肺通气显像的技术方法,初步评价肺通气显像的成像质量。方法 20只实验组家兔抽签法随机分为2h组、24h组、3d组和7d组4个实验组,每组5只,另设2只作为对照组。每只实验组家兔经颈静脉插管注入4个聚酯海绵栓子,术后按设定时间分组行Technegas肺通气显像,显像结束后行病理解剖;对照组插管注入生理盐水,于第1天和第3天对照观察。结果 24h组1只家兔术中死亡,19只建模成功,成功率95%。实验组及对照组家兔均顺利完成Technegas肺通气显像,肺轮廓显像均清楚。实验组家兔处死后共解剖肺动脉285支,发现栓子74个,栓塞肺动脉61支。结论颈静脉插管、聚酯海绵栓子制备实验家兔急性肺栓塞模型,其操作简便、重复性好、成功率高。实验家兔Technegas肺通气显像经改良后简单易行,成像质量满意。
