FasL和Der p2双基因共表达真核表达载体的构建及其在树突状细胞中的表达
摘要：目的构建小鼠FasL基因和屋尘螨主要抗原Der p2双基因共表达载体,并检测其在树突状细胞（DC）中的表达。方法以plambd-Der p2为模板扩增Der p2基因,双酶切pIRES2EGFP和Der p2基因,将Der p2基因克隆入pIRES2EGFP得pIRES2EGFP-Der p2。双酶切pMD18T-FasL质粒获得FasL片段,克隆入pIRES2EGFP-Der p2,获得FasL和Der p2共表达重组载体pIRES2EGFP-FasL-Der p2,采用酶切及测序鉴定重组质粒。将重组质粒转染DC,采用RT-PCR和Western Blot法检测FasL和Der p2基因的mRNA及蛋白水平的表达。结果测序证实FasL和Der p2基因序列完全正确。重组质粒转染DC后,能表达FasL和Der p2的mRNA和蛋白。结论成功构建FasL和Der p2双基因共表达重组载体pIRES2EGFP-FasL-Der p2,转染DC后能在体外正确表达FasL和Der p2基因。胃癌染色体7q31.1杂合性缺失的精细作图及其相关基因探讨
摘要：目的显微切割胃癌细胞检测染色体7q31.1区域的杂合性缺失（LOH）,绘制胃癌7q31.1区域等位基因缺失图谱,确定其常见最小缺失区域,揭示胃癌细胞的分子遗传学改变,分析7q31.1杂合性缺失与胃癌临床病理特征的关系。方法在胃癌组织石蜡切片上行显微切割获得胃癌细胞。采用Chelex-100方法分别抽提切割的胃癌细胞和相应正常对照细胞的DNA。利用高密度微卫星标志结合PCR技术,检测胃癌染色体7q31.1杂合性缺失,绘制胃癌染色体7q31.1等位基因的缺失图谱,确定其常见最小缺失区域。结果胃癌染色体7q31.1至少有一个位点存在杂合性缺失者21例,占70.0%（21/30）;D7S2459、D7S523、D7S2502、D7S486、D7S480、D7S650、D7S2486各位点杂合性缺失频率分别为10.0%、6.7%、23.3%、43.3%、26.7%、26.7%、20.0%;缺失图谱分析显示常见最小缺失区域位于D7S2502~D7S480之间。统计学分析表明这一区带微卫星位点的等位基因缺失阳性率与患者年龄、性别、原发灶位置、病理分期、分化程度以及淋巴结转移不相关（P〉0.05）。结论胃癌染色体7q31.1常见最小缺失区域在D7S2502~D7S480之间,在D7S486附近可能存在与胃癌相关的抑癌基因。垂直应力作用对复方壳多糖组织工程皮肤培养系统中层黏蛋白表达的影响
摘要：目的通过对培养系统中层黏蛋白（LN）合成表达的影响,观察垂直应力对组织工程皮肤生长及基底膜构建的作用。方法常规制备复方壳多糖组织工程皮肤,并根据应力作用与否分成两组培养。应力作用组每天接受垂直应力作用15 min,其他与对照组相同。在浸没培养3 d后,继续进行气-液界面三维培养。培养10、15 d后,行HE和免疫组化染色,观察组织工程皮肤的基底膜构建情况。采用Western Blot方法测定陈旧培养基中游离LN的含量。结果实验组在垂直应力作用下,复方壳多糖组织工程皮肤表皮分层分化较对照组的组织工程皮肤好,免疫组化染色结果显示实验组LN染色良好,且陈旧培养基中游离型LN-5的含量也高于对照组。结论垂直应力作用有助于组织工程皮肤系统中LN的表达,并最终促进体外基底膜结构的构建。COX-2特异性的siRNA诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡
摘要：目的利用RNA干扰（RNAi）技术在体外抑制COX-2基因表达,探讨RNAi诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的可能途径。方法设计靶向COX-2基因的小干扰RNA（si RNA）,构建重组表达质粒pTZU6＋1-si RNA-COX-2,并导入SGC-7901细胞,在体外诱导RNAi,用RT-PCR、免疫细胞化学、末端标记细胞凋亡检测法（TUNEL）和Western Blot检测COX-2基因表达、细胞凋亡和凋亡相关基因的表达。结果重组质粒pTZU6＋1-si RNA-COX-2导入SGC-7901细胞株后,COX-2表达明显下调,细胞出现凋亡（P〈0.05）,Caspase-9和Caspase-3表达明显上调。结论 RNA干扰明显抑制了靶基因COX-2的表达,并可能通过激活Caspase途径诱导SGC-7901细胞凋亡。口虾蛄提取物对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖及凋亡的影响
摘要：目的探讨口虾蛄乙酸乙酯提取物对鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖及凋亡相关蛋白表达的影响。方法用MTT比色法检测药物对细胞增殖的作用,流式细胞术和PI/Hoechst33258荧光双染法检测细胞凋亡,Western Blot法检测用药前后凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的改变。结果口虾蛄乙酸乙酯提取物对CNE-2Z细胞的增殖有显著抑制作用,且可诱导细胞凋亡;随着口虾蛄乙酸乙酯提取物浓度升高,Bax蛋白的表达逐渐增多,而Bcl-2蛋白表达改变不明显。结论口虾蛄乙酸乙酯提取物对CNE-2Z细胞有显著抗增殖及诱导凋亡作用,其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制与凋亡相关基因Bcl-2/Bax蛋白比值下降有关,但诱导凋亡不是主要机制。快速老化小鼠耳蜗传出神经的增龄性变化
摘要：目的研究快速老化小鼠耳蜗传出神经的增龄性变化。方法选择1、3、5、7、9月龄的快速老化小鼠亚系1（SAMP1）作为实验组,而同龄抗快速老化小鼠亚系1（SAMR 1）作为SAMP系的正常对照组,观察其耳蜗传出神经末梢的增龄性变化。结果第7、9月龄SAMP 1小鼠耳蜗传出神经纤维及末梢较同龄SAMR 1小鼠明显缺失（P〈0.05）,并伴有传出神经纤维突触结构损伤。结论 SAMP 1小鼠随月龄增长耳蜗传出神经出现增龄性损伤。不同异氟醚全凭吸入法麻醉大鼠安全性与实用性比较
摘要：目的比较不同异氟醚吸入麻醉方法对大鼠麻醉的安全性、稳定性及可操作性。方法将4月龄SD大鼠60只随机分为3组,分别通过吸入箱麻醉（A组）、不插管面罩麻醉（B组）、气管插管吸入麻醉（C组）5 h,进行吸入麻醉药浓度可控性、大鼠生命体征、术中及术后死亡率比较。结果麻醉2 h A组大鼠死亡率为15%,处理结束时共死亡6只,并且麻醉箱内麻醉药气体浓度波动明显,目标浓度难以维持。B组与C组异氟醚吸入浓度恒定,维持平稳。B组麻醉3 h内未出现大鼠呼吸抑制及死亡,麻醉结束时死亡率为20%。处理结束后1 d C组死亡2只,术后7 d C组共死亡3只,A、B组无大鼠死亡,麻醉后死亡率C组高于A、B组。结论异氟醚面罩及气管插管吸入麻醉能保证准确、平稳的麻醉药吸入浓度;大鼠异氟醚吸入麻醉3 h内行面罩吸入是简便安全的,同时减少术后死亡率;长于3 h的吸入麻醉最好进行气管插管,但同时也会使术后死亡风险增高。N-乙酰半胱氨酸对慢性阻塞性肺疾病缓解期TNF-α含量及祛痰效果的影响
摘要：目的探讨N-乙酰半胱氨酸（NAC）对慢性阻塞性肺疾病（COPD）缓解期肿瘤坏死因子（TNF）-α含量及祛痰效果的影响。方法将93例COPD缓解期患者随机分为对照组44例和NAC观察组49例。测定两组治疗前、后血TNF-α含量以及对祛痰效果的影响。结果观察组治疗前、后血TNF-α含量分别为（54.48±5.15）ng/L、（46.25±4.96）ng/L,二者比较差异有统计学意义（P〈0.01）;对照组治疗前、后血TNF-α含量分别为（56.80±6.73）ng/L、（54.24±6.15）ng/L,二者比较差异无统计学意义（P〉0.05）;观察组治疗后的痰量评分较治疗前下降（P〈0.05）;对照组治疗前、后痰量评分比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 NAC有抗炎及抗黏液高分泌作用。无肝期、冷缺血期、热缺血期对小儿活体肝移植术中肝功能影响的研究
摘要：目的探讨小儿活体肝移植术中无肝期、冷缺血期、热缺血期对术中肝功能影响,为指导临床手术提供帮助。方法 2006年6月至2009年3月共收治23例肝移植患儿,分别记录术中无肝期、冷缺血期、热缺血期时间及术中肝功能,分析肝功能变化与术中无肝期、冷缺血期、热缺血期长短是否相关。结果术中无肝期长短与无肝期后总胆红素（TB）上升明显相关（r=0.82,P〈0.000 1）。除此之外,术中无肝期、冷缺血期、热缺血期长短与术中肝功能变化无关。结论小儿活体肝移植无肝期长导致未结合胆红素无法经肝代谢为结合胆红素而排出体外,可引起总胆红素上升。因活体肝移植较全肝原位肝移植冷、热缺血时间均短,因此,对术中肝功能影响较小。骨髓间充质干细胞诱导肝纤维化大鼠肝星状细胞凋亡和Caspase-3表达
摘要：目的研究大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）诱导肝纤维化大鼠肝星状细胞（HSCs）凋亡及Caspase-3表达。方法分离培养大鼠MSCs。将肝纤维化模型SD大鼠60只平均分为A（鼠尾静脉注射等量的生理盐水）、B（鼠尾静脉注射含MSCs细胞悬液）、C（鼠尾静脉注射经肝细胞生长因子诱导14 d后的MSCs细胞悬液）组。鼠尾静脉输注2×10^5MSCs细胞悬液,于第1、2、3、4周末取肝组织,经HE、Masson染色观察肝纤维化程度,用TUNEL法检测各组HSCs凋亡,免疫组化检测Desmin,RT-PCR和Western Blot检测凋亡因子Caspase-3。结果 B、C两组肝组织学改善明显,肝纤维化程度减轻,HSCs数量明显减少,Desmin、TUNEL染色阳性的细胞均增多,Caspase-3基因mRNA和蛋白表达增强,且呈时间依赖性,与A组比较差异有统计学意义,且C组较B组明显（P〈0.01,P〈0.05）。结论 MSCs可在体内诱导HSCs凋亡并上调Caspase-3表达,肝细胞生长因子诱导MSCs抗肝纤维化较单纯MSCs作用更强。siRNA对体外培养红系细胞α-珠蛋白基因表达的影响
摘要：目的研究针对α-珠蛋白基因的小分子干扰RNA（si RNA）对体外培养红系细胞α-珠蛋白肽链mRNA表达的影响。方法将针对α-珠蛋白肽链设计、化学方法合成的si RNA通过脂质体转染体外培养正常人的红系细胞,在转染后24、48、72 h,用流式细胞术检测转染效率,RT-PCR检测α链mRNA表达水平。结果脂质体转染FCM标记的si RNA进入红系细胞后,24、48、72 h的转染效率分别为61.2%、44.3%、33.7%。si RNA作用于体外培养的红系细胞,经RT-PCR检测,转染后α-珠蛋白基因mRNA相对表达量下降,浓度越高,相对表达量越低。随着作用浓度增加,红系细胞台盼兰拒染率越低;且作用时间越长,台盼兰拒染率也越低。结论脂质体转染si RNA能特异性地抑制体外培养的红系细胞中α-珠蛋白基因表达,可能会成为β-珠蛋白生成障碍性贫血基因治疗的一个新靶点。螺旋CT在矽肺诊断中的应用价值
摘要：目的探讨螺旋CT与常规数字X线摄影检出矽肺病灶的差异。方法随机选择2004-2009年通过螺旋CT和常规数字X线摄影检查确诊的矽肺患者60例,回顾性分析两者的病灶检出率及影像学表现,用SPSS10.0统计软件对检查结果进行相关的统计学分析。结果螺旋CT检查与常规数字X线摄影检出结果分别为：0.2-1.0 cm散在中、高密度结节34、25例;大于1.0 cm的结节20、16例;大小病变同时存在6、4例;肺气肿征象52、35例;胸膜病变49、39例;伴有新或陈旧结核灶19、15例;肺门、纵隔淋巴结肿大或钙化45、25例。两者在对0.1-0.5 cm散在病灶发现率、肺气肿的评判、伴发结核病灶、淋巴结肿大或钙化等方面比较差异有统计学意义（P〈0.001）;对大于1.0 cm病灶两者比较,差异也有统计学意义（P〈0.05）。结论螺旋CT扫描有利于矽肺的正确诊断和鉴别诊断,尤其有利于矽肺微小病灶的确定,在判定肺气肿、淋巴结肿大等方面明显优于常规X线检查。高碳酸酸化预处理对脐静脉血管内皮细胞凋亡的影响
摘要：目的研究高碳酸酸化预处理对脐静脉血管内皮细胞（EC）凋亡的影响。方法脐静脉EC培养传代后按处理方式不同分为6组（n=12）：正常对照组（C组）,缺氧复氧组（H/R组）,缺氧预处理组（HPC组）,30%CO2预处理内皮细胞10、30、60min组（10、30、60 min HCA组）。H/R组将细胞置于95%N2、5%CO2的缺氧培养箱中缺氧培养4 h,再在21%O2、5%CO2、74%N2的正常培养箱中复氧孵育24 h。HPC组将细胞置于缺氧培养箱中先行2个循环的缺氧10 min及正常培养箱中复氧10 min,其余处理方法同H/R组。10、30、60 min HCA组将细胞置于21%O2、30%CO2、49%N2培养箱中先行高碳酸酸化预处理10、30、60 min,其余处理方法同H/R组。C组将细胞置于正常培养箱至实验结束。用流式细胞仪测细胞凋亡指数。结果 HPC组,10、30、60 min HCA组凋亡指数小于H/R组,差异有统计学意义（P〈0.01）。30 min HCA组的凋亡指数小于10 min HCA组,差异有统计学意义（P〈0.01）。30 min HCA组的凋亡指数小于60 min HCA组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论高碳酸酸化预处理可抑制离体EC的凋亡,30 min的抑制作用最强。甲状旁腺素相关肽对INS-1细胞株胰岛素分泌的影响
摘要：目的探讨甲状旁腺素相关肽（PTHrP）对大鼠胰岛β细胞瘤株INS-1胰岛素含量的影响。方法根据不同干预条件分为空白对照组、PTHrP干预组（分别应用1、10、100 pmol/L的PTHrP干预）,48 h后应用放射免疫法检测各组葡萄糖刺激胰岛素分泌作用,Fura-3/AM荧光负荷技术测定Ca2＋。Western Blot检测细胞胰岛素及胰腺-十二指肠同源框1（PDX-1）的表达。结果 PTHrP对INS-1细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌能力及Ca2＋负荷呈浓度依赖性关系。PTHrP组上调胰岛素及PDX-1表达,与空白对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 PTHrP可以促进胰岛β细胞胰岛素分泌及合成。TSA对食管癌细胞系EC9706细胞周期作用及分子机制的探讨
摘要：目的研究去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A（TSA）对食管癌细胞EC9706细胞周期的作用及机制。方法将浓度为0.5、1.0、1.5μmol/L TSA作用EC9706细胞24 h,用MTT观察不同浓度TSA对EC9706细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞生长及周期;Western Blot检测TSA对食管癌细胞周期相关基因的表达。结果 1.0μmol/L浓度的TSA对EC9706细胞有明显的生长抑制作用,并呈现一定的量效关系,在1.0μmol/L浓度之上可明显诱导食管癌细胞EC9706细胞周期阻滞,明显增强p21、p27基因的表达,明显降低CCND1、CDK4D基因的表达。结论一定剂量的TSA可抑制食管癌EC9706细胞的生长,通过调控多个细胞周期相关基因诱导食管癌细胞细胞周期阻滞,细胞阻滞的发生与p21、p27基因表达的增加及CCND1、CDK4D基因表达的减少相关。高糖状态下晚期糖基化终产物诱导NRK-52E细胞氧化应激及普罗布考干预研究
摘要：目的探讨高糖状态下晚期糖基化终产物（AGEs）诱导大鼠肾小管上皮细胞株NRK-52E氧化应激及普罗布考干预作用。方法作用72 h后,用Western Blot检测空白对照组（0 mmol/L葡萄糖）、高糖组（25 mmol/L葡萄糖）、AGEs组（100mg/L AGEs）、高糖AGEs组（100 mg/L AGEs加25 mmol/L葡萄糖）、普罗布考预处理高糖AGEs组（100μmol/L普罗布考加100 mg/L AGEs加25 mmol/L葡萄糖）中核因子κB（NF-κB）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在NRK-52E细胞的表达。用CM2H2DCFDA试剂检测活性氧（ROS）含量。结果高浓度葡萄糖及AGEs均上调NF-κB及TNF-α表达。普罗布考显著抑制调高浓度葡萄糖状态下AGEs诱导NF-κB及TNF-α表达,以及抑制ROS生成。结论普罗布考能抑制高浓度葡萄糖状态下AGEs诱导细胞氧化应激。雌激素与人尿酸盐转运子（hUAT）基因表达的相关性研究
摘要：目的观察不同浓度雌激素对肾小管上皮细胞（HK-2细胞）人尿酸盐转运子（hUAT）基因表达的调节作用。方法根据培养液中所含雌激素浓度由低到高,将HK-2细胞分为5组,每组均培养6瓶细胞。上述细胞在不同培养液中分别培养48h。采用荧光定量PCR法检测HK-2细胞中hUAT mRNA的相对表达量。结果所有标本均能检测到hUAT mRNA的表达,其中,与B0组（乙醇对照组）比较,B3（10^-8mol/L）、B4（10^-6mol/L）组hUAT mRNA水平明显升高（P〈0.05）,B1（10^-12mol/L）、B2（10^-8mol/L）组hUAT mRNA水平变化不明显（P〉0.05）。与B1、B2组比较,B3、B4组hUAT mRNA水平明显升高（P〈0.05）。B3组与B4组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。B1组与B2组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。B4组hUAT mR-NA水平最高,是B0组的1.87倍。结论雌二醇可上调hUAT mRNA的表达,且可能存在相应的作用阈值。CK19 mRNA在45例乳腺癌患者外周血中的表达
摘要：目的检测CK19 mRNA在乳腺癌外周血中的表达情况,并探讨其与临床病理因素的相关性。方法采用RT-PCR技术检测45例术前乳腺癌患者、30例乳腺良性病变患者外周血中CK19 mRNA的表达情况。结果 CK19 mRNA在乳腺癌患者中阳性率为62.2%,在30例乳腺良性患者中阳性率为3.3%。乳腺癌患者和良性病变患者比较差异有统计学意义（P〈0.01）。CK19 mRNA阳性率与临床分期、淋巴结转移均有关,二者表达呈正相关（P〈0.01）。与ER、PR无显著相关性。结论乳腺癌患者外周血中CK19 mRNA显著高于乳腺良性病变者。
