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中国肿瘤生物治疗 2016年第05期杂志 文档列表

中国肿瘤生物治疗杂志专家论坛

液体活检和肿瘤精准医疗589-594

摘要：精准医疗新技术——液体活检，既有极高的科研价值，又具备助力推进精准医疗临床实践的巨大潜能。它可用于癌症早期筛查、诊断、监控、治疗方案指导和疗效评估等众多领域，液体活检的优势使其成为最具发展潜力的肿瘤诊疗手段。本文围绕液体活检在临床肿瘤精准医疗的应用前景，从概念、特点、研究方法和个体化肿瘤治疗、临床应用及研究现状等方面进行阐述，展示了液体活检巨大的临床应用价值和市场前景。

循环肿瘤细胞纳米检测技术用于肿瘤早期诊断的探索595-600

摘要：循环肿瘤细胞（circulating tumor cell，CTC）在外周血中的存在和循环被认为是引起肿瘤远处转移的主要原因。与传统的影像学检测手段相比，CTC检测技术作为一种非侵袭性的检测手段，其操作更简便、更安全和精准。此外，CTC技术也助于研究者深入探讨肿瘤转移复发和耐药的机制。因此，CTC作为一种生物标志物，在肿瘤的早筛、早诊、预后评估和疗效检测等过程中都有着极其重要的临床意义。中科院国家纳米科学中心研发的“肿瘤捕手”技术利用多肽纳米磁珠来捕获外周血中的CTC。目前，CTC检测技术已在国内多家顶级公立医院开展临床研究和试验，大量临床数据表明，其对于肿瘤早期诊断、预后判断和耐药性监测方面具有极大的指导意义。本文就CTC的研究进展，“肿瘤捕手”技术的研发和应用作一阐述。

坚决贯彻执行国家七部委联合的《发表学术论文“五不准”》的规定600-600

摘要：为弘杨科学精神，加强科学道德和学风建设，抵制学术不端行为，端正学风，维护风清气正的良好学术生态环境，重申和明确科技人员在发表学术论文过程中的科学道德行为规范，中国科协、教育部、卫生计生委、中科院、工程院和自然科学基金委等七部委联合下发了《发表学术论文“五不准”》的通知。本刊坚决贯彻执行“五不准”规定，加强对学术论文学术不端行为的审查和处罚措施。希望广大科技工作者、读者和作者，以及本刊的编委专家、审稿专家和相关工作人员都应加强学术道德自律，共同努力，捍卫学术尊严，维护良好学风。

循环肿瘤DNA的研究进展601-608

摘要：循环肿瘤DNA（circulating tumor DNA,ctDNA）是由肿瘤细胞释放到循环系统中的基因组小片段，其来源于机体所有荷瘤部位，具有含量极低、个体间差异大、半衰期短、匀质性、携带有肿瘤特异性遗传学/表观遗传学变异等特点，与肿瘤的发展进化、休眠耐药、转移复发等密切相关，正逐渐成为肿瘤学分子研究领域的热点。目前针对ctDNA的检测方法和平台种类繁多，主要分为基于PCR和二代测序（next-generation sequence，NGS）的方法，二者各有利弊，需要根据研究目的灵活选择并建立统一标准。随着相关技术的发展和法规的不断完善，ctDNA可作为癌症筛查、早期诊断、个体化治疗及预后评估理想的血源性生物标志物，在肿瘤的精准医疗中必将大放异彩。

健康供者来源的TCR可以识别肿瘤新抗原608-608

摘要：肿瘤新抗原（neoantigen）是一类因基因突变而编码出的新的未知蛋白质或多肽，以其良好的肿瘤特异性逐渐被科学家们所重视和利用，成为良好的肿瘤免疫治疗靶点。尽管在各种类型的肿瘤中发现了大量突变导致的肿瘤新抗原，但是真正能被患者免疫系统所识别的肿瘤新抗原不到1％。荷兰癌症研究所的Schumaeher和挪威奥斯陆大学的Olweus团队在癌症免疫疗法上取得新的突破，他们证实即使患者自身的T细胞不能够识别肿瘤新抗原和抵抗他们自身的肿瘤，但是其他人的T细胞可能可以识别。该研究成果发表在2016年6月的Science上。

关于细胞制剂产品质量研究与质量控制的一些思考609-612

摘要：近年来，细胞治疗成为研究热点，为肿瘤等重大和难治性疾病提供了新的治疗手段。本文针对细胞制剂产品的特点，提出细胞制剂产品质量研究和质量控制的一些思路和原则，包括生产质量管理规范、细胞制剂产品生产用原材料、制备工艺与过程控制、质量研究和质量控制等，希望通过不断完善的质量管理推进细胞制剂产品研发的健康发展。

中国肿瘤生物治疗杂志研究快报

靶向CD19的CAR修饰的NK细胞对B细胞淋巴瘤的杀伤613-619

摘要：目的：利用鼠杂交瘤技术筛选和制备治疗性CD19单克隆抗体，探讨以CD19 scFv序列构建CD19-CAR（pCD19-CAR）修饰的NK细胞对CD19＋B细胞淋巴瘤细胞的杀伤作用。 方法：用偶联多肽免疫小鼠制备CD19单克隆抗体，然后用基因测序法获得抗体的序列。分析抗体序列，并通过基因合成和分子克隆技术构建pCD19-CAR片段，然后将其克隆到慢病毒载体上，病毒包装制备后，转染NK-92MI细胞。最后，用流式细胞术检测不同的pCD9-CAR-NK-92MI细胞对CD19＋细胞的杀伤率。 结果：（1）成功筛出特异性强的CD19单克隆抗体-pCD19；（2）抗体检测结果显示CD19＋的Ramos细胞的阳性率为843%，Raji为85.6%，与商业化抗体结果相似；（3）被pCD19-CAR修饰的CD19-CAR阳性率为28.72%的NK-92MI细胞对CD19＋的Ramos和Raji细胞的杀伤效率明显高于未被修饰的NK-92MI细胞株对Ramos和Raji细胞的杀伤率[（47.1±17）% vs （24.7±6.2）%和（51.8±7.9）% vs （27.6±9.6）%，均P〈0.05]；对CD19-细胞Jurkat，不论是未被pCD19-CAR修饰的NK-92MI或是被修饰的NK-92MI细胞，几乎都不存在特异性杀伤作用[（16.1±0.7）% vs （17.7±2.9）%, P〉0.05]。结论：成功构建pCD19-CAR，被pCD19-CAR修饰的NK-92MI细胞能特异性的识别CD19抗原并杀伤CD19＋B细胞淋巴瘤细胞。

中国肿瘤生物治疗杂志基础研究

嵌合抗原受体修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤620-625

摘要：目的：探讨用特异性靶向HER2抗原的嵌合抗原受体（HER2-CAR）修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤效率。方法：通过PCR获得HER2-CAR片段，运用常规分子克隆技术，将其构建到慢病毒载体上，利用包装的慢病毒颗粒对NK-92MI细胞进行转染；应用流式细胞术检测细胞转染效率以及转染前后NK-92MI 的IFN-γ和颗粒酶分泌差异；使用7-AAD和流式细胞术体外检测HER2-CAR-NK92MI细胞对乳腺癌细胞的杀伤效率；构建小鼠乳腺癌原位肿瘤模型进行体内细胞毒性的检测。结果：用HER2-CAR修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌肿瘤细胞MCF-7和T47D的杀伤效率明显高于未被基因修饰的NK-92MI细胞[分别为（62.4±1.3）% vs （22.1±1.2）%和（50.0±1.9）% vs （16.9±0.6）%，P〈001]；而两者对HER2阴性的乳腺癌细胞MDA-MB-468的杀伤效率没有明显差异[（13.6±1.4）% vs （12.7±0.8）%,P〉005]。同时，经HER2-CAR修饰的NK-92MI细胞相比未被基因修饰的NK-92MI细胞，IFN-γ的分泌明显升高（P〈0.01）。结论： 经HER2-CAR修饰的NK-92MI细胞对 HER2 阳性乳腺癌细胞的杀伤效率明显提高，且具有特异性靶向，此为治疗乳腺癌等恶性肿瘤提供了临床依据。

缺乏葡萄糖和谷氨酰胺对黑色素瘤A375细胞增殖与凋亡的影响626-632

摘要：目的：探讨体外培养条件下，缺乏葡萄糖（No-Glu）或谷氨酰胺（No-Gln）对黑色素瘤细胞生长和凋亡的影响。方法：分别利用MTT、流式细胞术、化学发光、Western blotting以及免疫荧光染色等方法检测No-Glu和No-Gln对人恶性黑色素瘤A375细胞初级纤毛形成、增殖、ATP含量、细胞周期以及细胞凋亡等多方面的影响。结果：在No-Glu或No-Gln培养液中培养，A375细胞的细胞增殖率显著低于对照组（正常培养液[（21.0±1.9）%或（46.2±9.8）% vs 100%, P〈0.01或P〈005]。No-Gln培养液使A375细胞纤毛形成阳性细胞率显著高于对照组[（16.8±2.3）% vs （6.2±1.0）%，P〈0.01]，G1期细胞减少（14.4±6.7）%（P〈0.05）、S期细胞增加（75.0±1.9）%（P〈0.05）。No-Glu培养液对A375细胞纤毛形成与G1和S期细胞比例均无显著影响。此外，No-Gln使A375细胞内ATP含量下调了（64.5±4.9）%（P〈0.01），而No-Glu仅使ATP含量下降了（11.1±2.1）%（P〉0.05）。No-Glu使A375细胞的凋亡率显著高于对照组[（26.1±1.5）% vs （6.1±7.1）%，P〈001]，并上调促凋亡蛋白Noxa、降低抗凋亡蛋白Mcl-1的表达水平。No-Gln对细胞凋亡率、Noxa和Mcl-1 蛋白表达无明显影响。结论：No-Glu或No-Gln均可抑制A375细胞增殖，但No-Gln导致S期细胞周期阻滞、抑制ATP合成的作用更明显，而No-Glu诱导细胞凋亡的作用更强。

Ad5-CCL20联合热疗对结肠癌CT-26细胞小鼠移植瘤生长的抑制作用633-639

摘要：目的：探讨重组腺病毒Ad5-CCL20联合热疗对结肠癌CT-26细胞小鼠移植瘤的抑制作用。方法：将Ad5-CCL20转染CT-26细胞，采用ELISA法和趋化实验分别检测CT-26细胞中CCL20的表达及其对DC的趋化作用。Western blotting检测热激结肠癌CT-26细胞中HSP70、GP96的表达。用热激后细胞蛋白（Heat组）对DC进行诱导，并设对照组（Control组）和阴性对照组（Unheat组），流式细胞术检测DC的表型。建立CT-26细胞移植瘤模型，设Ad5-CCL20/Heat、Heat、Ad5-CCL20、Ad5-GFP和Control组，观察各组荷瘤小鼠肿瘤生长和生存时间；采用ELISAPOT法和LDH法分别检测脾组织T淋巴细胞分泌IFN-γ的能力和对CT-26细胞的CTL杀伤活性，免疫组化法检测肿瘤组织DC浸润情况。结果：Ad5-CCL20转染CT-26细胞后可高表达CCL20，且对iDC、mDC都具有趋化活性，对iDC更为明显（P〈0.05）。CT-26细胞热激后可高表达诱导型HSP70和GP96。与Control、Unheat组相比，Heat组细胞蛋白诱导后DC的CD80、CD86、CCR6和MHC-Ⅱ的表达率明显升高（均P〈0.01）。与Control、Ad5-GFP、Ad5-CCL20组和Heat组相比，联合治疗组荷瘤小鼠的肿瘤抑制最为明显（均P〈0.01），生存时间明显延长（均P〈0.05）。联合治疗后的荷瘤小鼠脾组织T淋巴细胞的CTL活性要明显高于另外四组（均P〈005），其瘤组织中CD11c＋ DC的阳性率也明显增高（均P〈0.05）。结论：重组腺病毒Ad5-CCL20联合热疗可召募并促进DC成熟和抗原提呈，明显抑制肿瘤生长，并延长荷瘤小鼠的生存期，提示其对结肠癌有潜在的治疗作用。

文稿中须写成斜体的外文字符639-639

摘要：在科技文稿中出现许多外文字符，它们有的是正体、有的是斜体。正体和斜体外文字符各有其特定含义和用法，切不可混淆使用。现根据有关标准和规则，把生物医学文稿中须要写成斜体的外文字符归纳为以下几类：

下调miR-221表达抑制子宫颈癌细胞恶性生物学行为及其作用机制640-645

摘要：目的：探讨下调miR-221表达对子宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响及其作用机制。方法：运用脂质体2000转染法将miR-221抑制剂和阴性对照核苷酸片段（NC）转染子宫颈癌细胞HeLa、C33A、SiHa和Caski细胞，用Western blotting和Real-time PCR分别检测ARID1A（miR-221靶蛋白）、cleaved caspase 3、caspase 3、cleaved PARP、PARP、MMP-9、MMP-13、TIMP-3蛋白表达水平和miR-221、 MMP-9、MMP-13、TIMP-3 mRNA的表达水平；用MTT法、克隆形成实验、AnnexinV-FITC/PI染色结合流式细胞术分别测定细胞增殖、克隆形成率和细胞凋亡率。结果：与阴性对照组比较,（1）miR-221抑制剂转染的HeLa、CC3A、SiHa和Caski细胞miR-221表达量均显著降低[（0.23±0.01）、（0.31±0.02）、（0.34±0.01）、（0.37±0.02），F=25.44，P〈005]；（2）转染的细胞随着培养时间的增加细胞存活率逐渐下降，具有时间依赖效应，48 h之后细胞存活率显著低于阴性对照组（F=37.42，P〈0.05）；细胞的克隆形成率显著降低（F=43.58，P〈0.05）；培养72 h时细胞凋亡率分别为：HeLa（27.92±3.47）% 、C33A（20.84±4.31）%、SiHa（18.81±2.18）% 、Caski（19.86±3.82）%，均显著高于对照组（F=54.78，P〈005）;（3）转染细胞下调miR-221表达后促进cleaved caspase 3、cleaved PARP、TIMP-3蛋白表达，抑制MMP-13蛋白表达； 降低MMP-13 mRNA表达（t=37.50，P〈0.05），增加TIMP-3 mRNA表达（t=46.30，P〈0.05）。结论：下调miR-221表达能抑制子宫颈癌细胞的恶性生物学行为，其机制与激活caspase信号通路从而诱导细胞凋亡以及调控MMP-13和TIMP-3的表达有关。

shRNA干扰CDX2基因表达对裸鼠结直肠癌肝转移瘤的影响646-650

摘要：目的：建立人结直肠癌裸鼠肝转移瘤模型，探讨干扰尾型同源盒基因2（caudal-related homeobox 2，CDX2）基因表达对结直肠癌肝转移瘤的影响。方法：通过慢病毒载体将CDX2-shRNA体外转染人结直肠癌细胞SW480、HT29，筛选建立稳定干扰 CDX2基因表达细胞株和阴性病毒细胞株；将稳定干扰CDX2基因表达的结直肠癌细胞（SW480-KD、HT29-KD）、空白对照细胞（SW480-CON、HT29-CON）和阴性对照细胞（SW480-NC、HT29-NC）接种到裸鼠脾下极包膜内，建立裸鼠结直肠癌肝转移瘤模型，每天称量裸鼠体质量并观察其摄食、活动及精神情况；50 d后处死裸鼠，分别从大体水平以及镜下观察肝转移瘤情况。结果：成功构建裸鼠结直肠癌肝转移模型，H-E染色确认为结直肠癌肝转移。各细胞干扰组（SW480-KD、HT29-KD）裸鼠体质量明显低于相应空白对照组和阴性对照组[SW480-KD：（15.02±2.00） vs （18.00±2.48）、（18.03±2.05） g；F=3.761，P〈0.05；HT29-KD：（15.39±2.16） vs （17.96±2.48） 、（18.30±1.87） g；F=3.721，P〈0.05]。SW480-KD组肝转移瘤数目明显多于SW480-CON组和SW480-NC组[（57.83±22.56）vs （29.50±16.90）、（28.20±15.40）个；F=4.197，P〈0.05]; HT29-KD组肝转移瘤数目明显多于HT29-CON组和HT29-NC组[（56.83±29.16） vs （26.40±12.76）、（2100±11.50）个; F=4.467，P〈0.05）]。结论：脾注射法裸鼠肝转移模型可作为体内研究基因功能的理想模型；干扰CDX2基因表达可促进结直肠癌SW480和HT29细胞在体内的转移。

上调2型大麻素受体诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡651-655

摘要：目的：通过构建基因真核表达载体,探讨人2型大麻素受体（human cannabinoid receptor 2，hCB2R）对人子宫颈癌HeLa细胞体外凋亡的作用及机制。方法：选用人脑组织的cDNA作为模板,进行hCB2R基因的RT-PCR扩增,构建重组质粒GV230-hCB2R及其对照空质粒GV230并转染HeLa细胞，Western blotting法及免疫荧光细胞化学染色联合激光扫描共聚焦显微镜技术检测hCB2R表达及细胞内定位；流式细胞术检测HeLa细胞凋亡，Western blotting法及实时荧光定量PCR检测HeLa细胞中hCB2R、Bcl-2、Bax、Bad的表达。结果：与空质粒转染组相比，GV230-hCB2R转染HeLa细胞后表达相对分子质量40 000的hCB2R蛋白，且细胞膜和细胞质中均有hCB2R的表达；GV230-hCB2R转染组的细胞凋亡率显著高于GV230空质粒对照组[（14.51±4.51）% vs（6.29±0.57）%，t=1.72, P〈0.05]；与空质粒对照组相比，hCB2R转染组细胞内Bax和Bad的表达水平明显上调（P＜0.05）, 而Bcl-2的表达明显下调（P〈0.05）。结论： hCB2R对子宫颈癌HeLa细胞的生长表现出明显的抑制作用，其作用机制可能与hCB2R直接参与了细胞凋亡相关蛋白的表达变化有关。

肝素酶介导的肝癌细胞与血管内皮细胞黏附及穿内皮迁移656-662

摘要：目的：探讨肝素酶（heparanase，HPSE）对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）细胞与血管内皮细胞黏附及穿内皮迁移的影响。方法：选用人正常脐静脉内皮细胞株HUVEC-C，肝 LO-2细胞，肝癌HepG2、BEL-7402和 HCCLM3细胞，用Real-time PCR筛选高表达HPSE的HCC细胞；设计4个HPSE基因RNA干扰（RNA interference，RNAi）序列、构建质粒，并筛选出最优RNAi质粒；用该RNAi质粒转染高表达HPSE的HCC细胞，同时设空白对照组、阴性对照组和未转染的HCC细胞组；黏附试验观察各组HCC细胞与HUVEC-C细胞的黏附情况；Transwell小室法观察HCC细胞穿HUVEC-C细胞迁移情况；癌细胞均以0.25%玫瑰红染色、光镜下观察；酶标仪法分别测定脱色后各组细胞D值并分析比较。 结果： HCCLM3 细胞HPSE mRNA表达水平显著高于肝LO-2、HepG-2和Bel-7402细胞[（5.72±0.62） vs （1.05±0.09）、（2.65±0.31）和（3.43±0.58）,均P〈0.01）]；设计的4个HPSE之RNAi载体，以siHPSE-3158对HPSE基因表达的抑制效果最佳（P〈0.05）。RNAi组HCCLM3细胞与HUVEC-C细胞黏附率显著低于空白对照组、阴性对照组和未转染的HCCLM3细胞组[（0.31±0.04） vs （046±0.06）、（0.45±0.05）和（0.64±0.09），均P〈0.01）]。RNAi组HCCLM3细胞穿HUVEC-C细胞迁移率也显著低于空白对照组、阴性对照组和未转染的HCCLM3细胞组[（0.28±0.03） vs （0.41±0.04）、（0.41±0.05）和（0.43±005），均P〈005）]。结论： HPSE参与介导HCC细胞与血管内皮细胞的黏附及HCC细胞穿内皮迁移，可能是HCC微血管捕获、血行转移的重要因素。

热烈祝贺本刊主编曹雪涛院士免疫细胞治疗研究项目荣获2016年度陈嘉庚生命科学奖662-662

摘要：在2016年6月1日召开的中国科学院第十八次院士大会上，中国工程院院士、中国医学科学院院长、《中国肿瘤生物治疗杂志》主编曹雪涛教授主持的“树突状细胞与免疫调控、免疫治疗的研究”荣获陈嘉庚生命科学奖，该成果发现了树突状细胞中激活免疫功能的新分子及其调控机制，并显示出良好的应用前景。

γ-氨基丁酸抑制结直肠癌细胞增殖及其对化疗的增敏作用663-669

摘要：目的：通过体内、体外实验，探讨γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，GABA）对结直肠癌SW480、HCT116细胞的抑制作用及其与化疗联用的增敏作用。方法：采用CCK-8方法分析GABA及其与抗癌药5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）或奥沙利铂（Oxaliplatin，OXA）联用对结直肠癌SW480、HCT116细胞增殖的影响，流式细胞术分析GABA对SW480、HCT116细胞周期的影响。通过裸鼠成瘤实验观察移植瘤质量和体积，免疫组化法检测裸鼠肿瘤组织Ki67蛋白的表达，TUNEL染色观察裸鼠结直肠癌细胞的凋亡，体内实验研究GABA与OXA联用对肿瘤细胞生长的影响。结果：100 μmol/L GABA可显著抑制结直肠癌SW480、HCT116细胞的增殖，其抑制率分别为（37.38±2.62）%、（15.54±1.33）%，GABA浓度增加至200 μmol/L时，其抑制作用未见明显增强。GABA使SW480、HCT116细胞S期数量分别减少11.8%及10.7%。GABA与5-FU或OXA联用组对SW480细胞增殖抑制率高于5-FU或OXA组[（72.76±1.07）% vs （63.82±3.29）%或（65.60±1.19）% vs （57.09±125）%；q=4.079或4.128，P〈0.05]，对HCT116细胞增殖抑制率也高于单用5-FU及OXA组[（79.53±1.12）% vs（69.71±0.09）% 或（73.19±0.07）% vs（64.65±1.99）%；q=4.569或4.561，P〈0.05]。实验结束时，GABA与OXA联用组小鼠移植瘤质量、体积显著低于对照组和OXA组[（0.20±0.016） vs （0.42±0.039）、（0.36±0.030）g和（250±27）vs （780±60）、（520±46）mm3，均P〈0.01]；抑制Ki67蛋白在肿瘤组织的表达、促进肿瘤组织细胞的凋亡。结论：GABA对结直肠癌细胞增殖具有较强的抑制作用，与5- FU或OXA联用可增强化疗效果。

中国肿瘤生物治疗杂志临床研究

外周血sCTLA-4作为晚期非小细胞肺癌患者的预后因子670-674

摘要：目的：通过检测晚期非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer，NSCLC）患者外周血可溶性细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（soluble cytotoxic T lymphocyte associated antigen- 4，sCTLA-4）的表达，探讨其与晚期NSCLC患者生存期的关系。方法：采集2010年8月至2013年6月上海中医药大学附属龙华医院肿瘤科经病理证实的58例晚期NSCLC患者和30例正常人的外周血，运用ELISA法检测血中sCTLA-4含量，通过电话随访或上海市疾控中心获得患者生存期数据，分析sCTLA-4表达与NSCLC生存期的关系。结果：NSCLC患者外周血sCTLA-4表达率高于正常人（70.7% vs 6.7%， χ2=32.44，P〈0.01）,外周血sCTLA-4增高的患者中位生存期（MST）较短（41.63个月vs 31.57个月， χ2=7.765，P〈0.01），死亡风险高于其他患者（RR=305， χ2=8.01, P〈0.01）。结论：NSCLC患者外周血中sCTLA-4高表达，sCTLA-4可能成为晚期NSCLC患者的预后因子之一。