MicroRNA与肝癌诊治:新的机遇和挑战
摘要：MicroRNA(miRNA)广泛参与机体各项生理和病理过程,近年来受到广泛关注且研究进展迅速。肝癌尤其是乙型肝炎相关肝癌是我国的重大疾病,miRNA在肝癌发生、发展过程中发挥着重要作用,在肝癌发生、肿瘤进展、预后判断和生物治疗等方面,miRNA均能通过调控其靶基因的表达参与其中。由于大规模平行测序等miRNA组学研究的新技术进展迅速,肝脏与肝癌miRNA组的研究进一步加深了科研工作者对肝癌相关miRNA的理解。在肝脏中富集表达的miRNA在肝癌组织中均出现表达失调,这些表达失调的重要miRNA已被证明是肝癌基因治疗的潜在靶点。此外,肝癌患者血清中存在的游离miRNA被证实是肝癌诊断和个体化治疗的潜在生物标志物。笔者简要阐述肝癌相关miRNA的表达和作用机制及其在临床肝癌诊断和干预中的潜在意义与价值,并对miRNA给肝癌诊治带来新的机遇和挑战作一展望。肿瘤免疫细胞治疗的质量管理和疗效评价
摘要：针对肿瘤的治疗策略中,抗肿瘤免疫逃逸成为普遍关注的治疗手段,肿瘤免疫治疗成为快速发展的研究领域,特别是FDA批准肿瘤免疫细胞疫苗用于治疗前列腺癌、针对PD-1和CTLA-4单克隆抗体的成功上市。从2010年开始,国内肿瘤免疫细胞治疗研究迅速发展,围绕免疫细胞治疗临床工作的一些问题摆在面前。如何选择肿瘤免疫细胞治疗方法和时机?治疗过程中的质量管理和疗效评价应当怎么做?如何得到更有说服力的循证医学证据?都是值得深入探索的重要问题。肿瘤免疫细胞治疗临床研究中的质量管理和疗效评价与传统的生物药和化疗药相比,有共同点也有差别。质量管理涉及组织结构、人员培训、试验方案等多个环节。免疫细胞治疗的疗效评价不能简单套用传统实体瘤治疗的评价方法,国外学术界已经提出了一些免疫治疗评价标准,但还处在发展与完善的阶段。笔者通过对上述这些问题的讨论,希望能得到国内从事该领域临床研究和技术研发同行们的重视,只有在解决好这些问题的基础上不断前行,才能促进肿瘤生物治疗的不断发展,更好地服务于肿瘤患者。携Apoptin和PEG3启动子双特异性溶瘤腺病毒对结直肠癌的抑制作用
摘要：目的:探讨携带凋亡素基因(Apoptin)和进行性增量基因3(progression-elevated gene 3,PEG3)启动子的双特异性溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a对结直肠癌的体内、外抑制效果。方法:以Ad-Apoptin-PEG3p-E1a、Ad-PEG3p-E1a、AdApoptin、Ad-mock(均为前期工作构建)分别感染人结直肠癌SW1116细胞和胃黏膜上皮GES细胞,MTT法检测感染后细胞的增殖水平;流式细胞术检测细胞的凋亡情况;采用DCFH-DA和Rho123染色流式细胞术分别检测细胞活性氧水平和线粒体膜电位,Western blotting检测细胞色素C的释放。建立BALB/c小鼠结直肠癌CT26细胞皮下移植瘤模型,观察Ad-ApoptinPEG3p-E1a对结直肠癌皮下移植瘤的抑制作用。结果:Ad-Apoptin-PEG3p-E1a抑制SW1116细胞增殖,并具有一定的剂效和时效关系,以MOI=100感染72 h后抑制率达到(56.23±6.64)%,其抑制能力明显强于Ad-p EG3p-E1a和Ad-Apoptin等对照组(均P<0.05)。Ad-Apoptin-PEG3p-E1a感染导致SW1116细胞活性氧水平上调、线粒体膜电位下降以及细胞色素C释放增加,最终诱导SW1116细胞凋亡,凋亡率为(37.97±3.78)%,但对正常GES细胞的上述各项指标均无明显影响。Ad-ApoptinPEG3p-E1a能显著抑制小鼠皮下移植瘤生长(P<0.05);有效延长模型动物平均生存期,Ad-Apoptin-PEG3p-E1a治疗组平均生存期为(41.0±0.7)d,显著高于Ad-PEG3p-E1a的(34.4±1.6)d、Ad-Apoptin的(33.2±1.2)d和Ad-mock的(28.4±1.4)d(均P<0.05)。结论:Ad-Apoptin-PEG3p-E1a可以特异性有效抑制结直肠癌细胞增殖及皮下移植瘤的生长。法氏囊活性肽-Ⅱ对肿瘤细胞增殖的抑制作用及其可能机制
摘要：目的:研究法氏囊活性肽(Bursal-derived pentapeptide,BPP)-Ⅱ对肿瘤细胞增殖的抑制作用及其可能的作用机制。方法:采用不同质量浓度(0.02、0.2、2、20μg/ml)的BPP-Ⅱ分别处理小鼠B细胞淋巴瘤细胞WEHI-231、人鼻咽癌细胞CNE、大鼠肝癌细胞RH-35和正常细胞系人胚肾细胞293、猪肾细胞PK15、中国仓鼠卵巢细胞CHO,48 h后采用MTT法检测细胞增殖情况;以双荧光素酶报告系统和Western blotting方法检测BPP-Ⅱ对荧光素酶标记的p53-Luc质粒转染的Vero细胞中p53转录活性和P53蛋白表达的影响;利用噬菌体随机12肽库筛选BPP-Ⅱ特异性结合肽,人工合成BPP-Ⅱ结合肽,采用MTT法检测BPP-Ⅱ结合肽对BPP-Ⅱ抗WEHI-231细胞增殖能力的影响。结果:2和20μg/ml的BPP-Ⅱ对肿瘤细胞WEHI-231、CNE、RH-35的增殖均有抑制作用(均P<0.05),而对正常细胞系293、PK15、CHO的增殖均不表现出抑制作用。BPP-Ⅱ明显激活p53基因的转录,并上调P53蛋白的表达。应用噬菌体展示技术筛选获得3个BPP-Ⅱ结合肽P3-12、P5-12、P6-12,其中2和20μg/ml的P3-12能显著抑制BPP-Ⅱ的抗WEHI-231细胞增殖能力[(97.5±3.4)%、(98.9±3.5)%vs(86.3±1.9)%,P<0.05];20μg/ml的P5-12和P6-12均能显著抑制BPP-Ⅱ的抗WEHI-231细胞增殖能力[(96.7±3.1)%、(95.4±3.8)%vs(86.3±1.9)%,P<0.05]。结论:BPP-Ⅱ可特异性抑制WEHI-231、CNE、RH-35等肿瘤细胞增殖,其机制可能与激动p53信号通路有关。MiR-29a下调共刺激分子B7-H3的表达及其对脑胶质瘤细胞侵袭的影响
摘要：目的:探讨miR-29a调控共刺激分子B7-H3在脑胶质瘤中的表达及其对脑胶质瘤细胞侵袭能力的影响。方法:通过Real-time PCR检测miR-29a和B7-H3在正常脑组织、脑胶质瘤组织及人胶质瘤细胞株U87中的表达,并利用脂质体将miR-29a的模拟物(mimics)和抑制剂(inhibitors)转入U87细胞,流式术验证miR-29a对B7-H3表达的调节效果;采用CCK-8和Transwell实验观察miR-29a对U87细胞的增殖和侵袭能力的影响,并通过流式术分析miR-29a干预前后U87细胞上与细胞侵袭相关的化学趋化因子的表达变化,以miRtarbase等软件预测miR-29a与CXCR4的结合能力。结果:胶质瘤组织及细胞株中miR-29a低表达而B7-H3 mRNA高表达,且均与瘤组织病理分级相关。转染miR-29a mimics可以有效下调U87细胞中B7-H3 mRNA的表达。转染miR-29a mimics可以显著抑制U87细胞的侵袭能力(P<0.05),但对细胞增殖并无显著影响。miR-29a过表达可同时下调U87细胞中CXCR4的表达,但软件分析CXCR4基因上并不存在miR-29a的结合位点。结论:miR-29a可有效下调B7-H3分子的表达,进而抑制脑胶质瘤细胞的侵袭能力,其作用机制可能与CXCR4途径相关。参考文献题名后须标注文献类型和文献载体标志代码
摘要：本刊参考文献按照国家标准GB/T 7714-2005《文后参考文献著录规则》的要求进行著录。该国家标准要求,每条文献的题名后都须标上[文献类型标志]或[文献类型标志/文献载体标志]。对纸质文献,如为期刊中析出文献,题名后应标上[J];如为专著中析出文献,题名后应标上[M]。对电子文献,如为网络期刊析出文献,题名后须标上[J/OL];如为网络专著中析出文献,题名后须标上[M/OL]。藻蓝蛋白/羧甲基壳聚糖纳米球的制备及其对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制
摘要：目的:制备新型负载藻蓝蛋白(C-phycocyanin,C-PC)的羧甲基壳聚糖(carboxymethyl chitosan,CMC)纳米微球(nanoparticle,NP),探讨藻蓝蛋白羧甲基壳聚糖纳米微球(C-PC/CMCNP)对人宫颈癌He La细胞生长的影响及其分子机制。方法:采用正交分析方法,以CMC和C-PC的质量比、CMC浓度、Ca Cl2浓度为考察因素,通过检测C-PC/CMCNP的粒径和CMC的包封率,优选制备C-PC/CMCNP的最佳条件,并制备C-PC/CMCNP。CCK-8法检测C-PC、CMC和C-PC/CMCNP对He La细胞增殖的影响,流式细胞术检测He La细胞凋亡情况,Westren blotting检测He La细胞中caspase-3蛋白的表达。结果:CMC与C-PC的质量比为1∶2、CMC质量浓度为1 mg/ml,Ca Cl2质量浓度为1 mg/ml为最佳制备条件,最终制备的C-PC/CMCNP的平均粒径为(118.4±2.07)nm,并具有较高的包封率(63.2%),其缓释12 h的累积缓释率超过60%。C-PC、CMC和C-PC/CMCNP均能抑制He La细胞的增殖,诱导细胞凋亡,并促进caspase-3蛋白的表达,但C-PC/CMCNP的作用效果最为显著。结论:优化制备条件得到具有高效缓释性能的C-PC/CMCNP,其对He La细胞显著的抑制作用可能是通过促进caspase-3蛋白的表达进而诱导肿瘤细胞凋亡来实现的。热烈祝贺本刊再次被评为“RCCSE中国权威学术期刊”
摘要：我国四大学术期刊评价体系之一——武汉大学中国科学评价研究中心于2015年1月13日公布了《RCCSE中国学术期刊评价研究报告(2015~2016)》中国权威和核心期刊的评价结果,该报告以65个一级学科共6 201种学术期刊作为评价对象,按得分从高到低排序,从中产生了权威期刊316种(0~5%)、核心期刊1 572种(5%~30%)、准核心期刊1 848种(30%~60%)、一般期刊1 828种(60%~90%)和较差期刊637种(90%~100%)。在316种权威学术期刊中,医学类期刊共48低氧下三氧化二砷对食管癌Eca109细胞放射敏感性的影响
摘要：目的:观察三氧化二砷(As2O3)在低氧条件下对食管癌Eca109细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响,探讨其发挥放射增敏作用的可能机制。方法:Co Cl2处理模拟肿瘤细胞模拟低氧微环境,MTT法分别检测常氧和低氧条件下不同浓度As2O3及不同剂量放射线对食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测低氧下As2O3、放射线单独及两者联合对细胞周期及凋亡的影响,Western blotting检测经As2O3、放射线单独及两者联合作用后Eca109细胞中HIF-1α、p27蛋白的表达情况。结果:在常氧和低氧两种条件下,As2O3均呈时间和剂量依赖方式抑制Eca109细胞增殖,相同时间和相同剂量条件下,其抑制水平相当(P>0.05);而低氧下放射线对Eca109细胞增殖的抑制作用较常氧下明显减弱(P<0.05)。低氧下Eca109细胞周期出现G0/G1期阻滞、G2/M期细胞比例明显减少(P<0.05),As2O3在低氧条件下可诱导G2/M期阻滞、G0/G1期细胞比例减少。As2O3与放射线联合作用时,Eca109细胞的凋亡率大于两者单独作用之和。低氧条件下,Eca109细胞HIF-1α、p27蛋白表达均明显增强,As2O3可逆转HIF-1α、p27表达水平的升高。结论:低氧条件下,As2O3对食管癌Eca109细胞有放射增敏作用,其机制可能与下调HIF-1α进而降低p27表达水平、解除G0/G1期细胞周期阻滞和促进细胞凋亡有关。γ-分泌酶抑制剂诱导B淋巴瘤细胞凋亡
摘要：目的:探讨γ-分泌酶抑制剂(gamma-secretase inhibitor,GSI)对伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma,BL)Namalwa细胞增殖与凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:GSI处理Namalwa细胞后,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞的凋亡,Western blotting法检测凋亡相关蛋白caspase-9、caspase-3以及Notch信号通路中Notch1蛋白胞内片段的表达。建立裸鼠移植瘤模型,观察GSI对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。结果:GSI处理Namalwa细胞48、72 h的IC50值分别为2.14和0.61μmol/L,GSI对Namalwa细胞的增殖抑制作用呈剂量和时间依赖性。GSI(1.25μmol/L)处理Namalwa细胞24 h后,其凋亡率明显高于对照组[(17.71±1.87)%vs(3.42±0.95)%,P<0.01];处理48 h后与对照组差异更为显著[(43.68±0.53)%vs(4.65±0.8)%,P<0.01]。GSI处理Namalwa细胞24、48 h后,凋亡蛋白caspase-3、caspase-9蛋白前体表达下降,caspase-9活性片段表达上调,Notch1蛋白胞內片段表达下降。GSI处理后裸鼠移植瘤体积明显小于对照组[13 d时,(2.199±0.183)vs(1.15±0.399)cm3,P<0.01〗;瘤组织中Namalwa细胞的凋亡率明显高于对照组[(5.3±0.48)%vs(2.1±0.26)%,P<0.01]。结论:GSI能够有效抑制BL细胞株Namalwa细胞的增殖及促进其凋亡,caspase-3和caspese-9凋亡蛋白以及Notch信号通路可能参与GSI诱导Namalwa细胞凋亡的过程。雌激素受体β在乳腺癌他莫昔芬内分泌治疗耐药中的作用
摘要：目的:探讨雌激素受体β(estrogen receptorβ,ERβ)的表达与乳腺癌他莫昔芬(tamoxifen,TAM)内分泌治疗耐药的相关性及其机制。方法:以前期构建的ERα/ERβ不同表达的人乳腺癌MCF-7细胞株[M/HK(阴性对照)、M/siα(ERαlow/ERβhigh)、M/siβ(ERαhigh/ERβlow)细胞]为研究对象,MTT法评估乳腺癌细胞对TAM的耐药性;用半定量RT-PCR法检测细胞中耐药相关基因MDR1、TOPOⅡ、LRP和GST-π的mRNA表达水平,用Western blotting法检测细胞中耐药相关信号通路MAPK、PI3K/Akt的p-ERK、p-Akt蛋白表达水平。结果:与对照组MCF-7细胞相比,MCF-7细胞中的ERβ高表达可促进高浓度TAM(1、5、10μmol/L)对MCF-7细胞增殖的抑制作用[(45.788±1.641)%vs(24.288±1.170)%,(57.899±1.583)%vs(31.499±1.978)%,(59.853±1.648)%vs(38.039±1.482)%;均P<0.05)],该抑制作用与TAM浓度呈剂量依赖性。ERβ高表达可显著抑制MCF-7细胞耐药基因MDR1、TOPOⅡ、LRP的mRNA表达水平(0.431±0.032 vs 0.932±0.083,0.234±0.008 vs 0.391±0.002,0.47±0.028 vs 0.586±0.036;均P<0.05);可显著下调Akt和ERK蛋白的磷酸化水平(0.224±0.006 vs 0.437±0.007,0.367±0.015 vs 0.756±0.039;均P<0.05)。结论:ERβ表达水平可影响乳腺癌细胞MCF-7对TAM的耐药性,该作用机制可能与耐药基因的表达及PI3K/AKT、MAPK信号通路激活有关。CXCR4-shRNA纳米复合微粒对肾癌细胞增殖的抑制作用
摘要：目的:制备聚酰胺胺型树枝状分子(polyamidoamine dendrimer,PAMAM-D)载送CXCR4-shRNA的纳米复合微粒(PAMAM-shRNA),研究其在体外抑制人肾癌A498细胞增殖的效应。方法:将第7代的PAMAM-D室温下与CXCR4-shRNA混合(质量比为1∶0.73),制备成纳米树形分子与CXCR4-shRNA的纳米复合物PAMAM-shRNA,采用透射电镜观察PAMAMshRNA的形态结构,激光粒径仪测定其粒径。分别以PAMAM-shRNA、CXCR4-shRNA和PAMAM-D转染A498细胞,MTT法检测PAMAM-shRNA对肾癌细胞A498增殖的抑制作用,流式细胞术检测PAMAM-shRNA诱导A498细胞的凋亡情况,Real-time PCR分析转染后肾癌A498细胞CXCR4 mRNA的表达水平。结果:成功制备的新型纳米复合微粒PAMAM-shRNA分散性好,不粘连,其平均粒径为(176.5±25.48)nm。PAMAM-shRNA可以有效地抑制人肾癌细胞A498的增殖,且随着PAMAM-shRNA浓度和药物作用时间的增加,细胞增殖抑制的效果越明显,其最高增殖抑制率达(66.5±2.7)%;其还可加强诱导肾癌A498细胞凋亡。Real-time PCR检测结果表明,与CXCR4-shRNA组相比,PAMAM-shRNA组的CXCR4 mRNA的表达水平明显下降[(0.29±0.035)vs(0.70±0.084),P<0.05]。结论:PAMAM-D能高效递送CXCR4-shRNA进入A498细胞,PAMAM-shRNA以剂量和时间依赖方式显著抑制肾癌细胞增殖和诱导肾癌细胞凋亡,其在肿瘤基因治疗中具有潜在的应用价值。固有淋巴细胞影响肠道稳态
摘要：美国西奈山医学院的Merad教授及其研究团队发现,肠道内的固有淋巴细胞(innate lymphoid cell,ILC)能通过巨噬细胞、树突状细胞发挥作用,影响肠道的耐受和稳态。相关工作发表在2014年3月份的Science杂志上。ILC是于2009年被科学家发现和定义的,这些细胞数目稀少,一只成年小鼠约有2亿个淋巴细胞,却只有数千个ILC。然而ILC在人体的免疫系统中却有着举足轻重的作用。ILC一经成熟便分布于人体的肺脏、肠道和皮肤的黏膜层,成为人体抵新型钙离子通道蛋白TRPV6在胃癌组织中的表达及其临床意义
摘要：目的:探究新型钙离子通道蛋白TRPV6在胃癌中的表达及其临床意义。方法:收集2010年5月至2013年3月在我院行手术切除并经病理证实的胃癌组织和相应的癌旁组织标本各65份,采用免疫组化SP法检测胃癌及癌旁组织中TRPV6蛋白的表达;以不同浓度的TRPV6拮抗剂2-氨基乙酯二苯基硼酸(2-amino ethyl two phenyl boronic acid,2-APB)处理胃癌MGC-803细胞,分别采用CCK-8法、流式细胞术和Transwell法检测胃癌MGC-803细胞的增殖、细胞凋亡和迁移能力,采用Western blotting检测细胞中TRPV6、AKT/p-AKT和p-GSK3β蛋白的表达。结果:与癌旁组织相比,胃癌组织中TRPV6蛋白的阳性表达率明显增高[95.4%(62/65)vs 36.9%(24/65),P<0.01],且其表达水平与瘤块大小、淋巴结及远处转移和DUKES分期有关(P<0.05)。2-APB以剂量和时间依赖方式显著抑制胃癌细胞MGC-803的增殖,诱导其凋亡,并使胃癌细胞迁移力减弱(P<0.05)。2-APB明显下调胃癌细胞MGC-803中TRPV6、p-AKT和p-GSK3β蛋白的表达(P<0.05)。结论:TRPV6在胃癌组织中高表达,以2-APB拮抗TRPV6蛋白则显著抑制MGC-803细胞的增殖和迁移能力并诱导细胞凋亡,其机制可能与下调p-AKT/GSK3β信号通路有关。本刊主编曹雪涛院士及其科研团队成果荣获“2014年度中华医学科技一等奖”
摘要：本刊主编曹雪涛院士科研团队,即第二军医大学免疫学研究所暨医学免疫学国家重点实验室完成的研究项目"天然免疫识别及其调控的分子机制研究"获得2014年度中华医学科技一等奖,这是该团队继2006年获得中华医学科技一等奖以来再次获此殊荣。2015年1月18日,医学免疫学国家重点实验室主任曹雪涛教授以及该团队的部分科研骨干参加了颁奖大会并曹雪涛院士科研团队成果发表于国际顶尖杂志并入选2014年度“中国高等学校十大科技进展”
摘要：近日,由教育部科学技术委员会组织评选的2014年度"中国高等学校十大科技进展"揭晓,曹雪涛院士科研团队的"免疫细胞分化发育与功能调控新机制研究"成果入选。团队的王品讲师和刘娟讲师2014年度相继在国际顶尖学术期刊《Science》和《Nature Immunology》上发表学术论文,内容相关免疫学领域前沿性重大科学问题之一:"免疫系统为什么能够精确地感知外界病原体侵袭并及时启动能够清除病原体的免疫应答反应?"目前认为具有"哨兵"功能的树突状细胞(DC)起了关键性作用,但对于DC为什么具有这样的特殊免疫功能曹雪涛院士荣膺“2014年中国科学年度新闻人物”称号
摘要：由中国科学院和中国工程院主办的"两院院士评选中国2014中国科学年度新闻人物"结果于1月31日在北京揭晓,共评出"2014中国科学年度特别新闻人物"1人和"2014中国科学年度新闻人物"10人,前者由2014年度国家最高科学技术奖得主、"两弹一星功勋奖章"获得者于敏院士当选,后者分别由曹雪涛、饶子和、赵忠贤、袁隆平、包信和、谢和平、赵闯和杨杨、程京、历军、单祥双等科学家获评。自体CIK细胞治疗对中晚期非小细胞肺癌患者免疫功能及生活质量的影响
摘要：目的:研究自体细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞治疗对放化疗后的中晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者免疫功能及生活质量的影响。方法:收集我院肿瘤科2012年6月至2014年3月放化疗后的中晚期NSCLC患者38例,输注自体CIK细胞同时行最佳支持治疗;选择同期放化疗后的中晚期NSCLC患者34例,仅行最佳支持治疗作为对照组。流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群及调节性T细胞的表达水平,ELISA法检测外周血清中IL-2、IL-12、IFN-γ浓度,评价自体CIK细胞治疗前后患者免疫学指标的变化、体能状态的改善情况及CIK治疗的安全性。结果:(1)38例NSCLC患者治疗后外周血CD4+、CD4+/CD8+比值较治疗前及对照组治疗后有明显升高(P<0.05或P<0.01),CD8+明显下降(P<0.05),对照组无明显变化;CIK细胞治疗组治疗前后及与对照组治疗后相比,调节性T细胞(CD4+CD25+)比率明显下降(P<0.01);(2)CIK细胞治疗后较治疗前及对照组治疗后IL-12、IFN-γ的水平明显升高(P<0.01),IL-2水平较治疗前有明显升高(P<0.01),但与对照组治疗后相比变化不明显(P>0.05);(3)治疗组CIK治疗后KPS评分明显升高(P<0.05),对照组KPS评分差异无统计学意义(P>0.05);(4)CIK治疗组中无一例出现畏寒、发热等不良反应。结论:自体CIK细胞治疗可改善放化疗后中晚期NSCLC患者的免疫功能、提高其生活质量,且细胞治疗安全。
