生物类似药物曲妥珠单抗临床研究的启示和思考
摘要：生物类似药物（biosimilar）是与原研药物（originator）高度相似,并且在纯度、活性和安全性上与后者没有任何临床意义差异的生物制品。但生物制品的结构复杂,生产工艺繁琐且可变性大,故生物类似药物与原研药物仅仅类似,却不完全相同。因此,对于生物类似药物的研发,只有通过理化性质检测、临床前研究和临床试验确认生物类似药物与原研药物之间的相似性,并经监管机构审批后,才可以作为Biosimilar推出。低分子量的生物类似药物于2006年开始面世,高分子量的单克隆抗体类生物类似药物直到2013年才被欧洲药监局（EMA）批准上市,未来10年将是全球生物类似药物研发的高峰时期。笔者试图通过介绍欧洲药监局对研发生物类似药物的指导原则,并以抗癌药物曲妥珠单抗（trastuzumab）的生物类似药物临床试验为例,阐述单抗类生物类似药物临床试验设计和应用中的多项关键问题,特别是临床试验敏感人群的选择、适应证外推、临床试验终点的确定、与原研药物可否互换、上市后监督及生物类似药物说明书中应列出商品名等问题。对用于治疗癌症等威胁生命的疾病的生物类似药的研发和审评,必须采取一种更为谨慎的做法,以确保生物类似药物与原研药物在安全性和有效性上高度相似。治疗性肿瘤疫苗临床试验的注意事项：美国FDA行业指南介绍
摘要：治疗性肿瘤疫苗的作用机制不同于细胞毒药物,其临床研究操作规范不能完全套用细胞毒药物的模式,因此迫切需要制定适用于治疗性肿瘤疫苗临床试验的操作规范。2011年11月,美国FDA正式公布了有关治疗性肿瘤疫苗临床试验的行业指南,对早期（Ⅰ、Ⅱ期）和晚期（Ⅲ期）肿瘤治疗临床试验中需注意的问题提出了一系列指导性意见,其内容主要包括肿瘤疫苗临床试验对受试者的选择、临床免疫反应的监测、佐剂的使用、疫苗的延迟效应、伴随治疗和后续治疗的影响、起始剂量和给药方案、剂量递增方案、统计学处理、终点评价指标等。本文尝试对该指南进行解读,将FDA有关肿瘤疫苗临床试验的一系列指导性意见介绍给国内读者,希望引起国内的肿瘤疫苗研究者、临床试验设计者、临床医生以及业务监管部门的重视,并在实际工作中加以借鉴,从而推动我国肿瘤疫苗的临床研究。本刊对论文中实验动物描述的要求
摘要：根据国家科学技术部1988年颁布的《实验动物管理条例》和卫生部1998年颁布的《医学实验动物管理实施细则》,本刊对论文中有关实验动物的描述,要求写清楚以下事项：（1）品种、品系及亚系的确切名称;（2）遗传背景或其来源;（3）微生物检测状况;（4）性别、年龄、体重;（5）质量等级及合格证书编号;（6）饲养环境和实验环境;（7）健康状况;（8）对动物实验的处理方式。抗体偶联药物抗HER2单抗-MCC-DM1细胞毒活性检测方法的建立及其检测效果评价
摘要：目的：建立抗体偶联药物（antibody-drug-conjugate,ADC）抗人类表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor-2,HER2）人源化单抗-MCC-DM1的细胞毒活性检测方法,并评价该药抗体偶联前后药物细胞毒活性的变化。方法：供试品为抗HER2-MCC-DM1原液及成品各3批,以抗HER2人源化单抗和抗HER2单抗-MCC-DM1标准品为参考品,利用CCK-8法、双荧光染色实验分别检测供试品和参考品对人乳腺癌BT-474细胞增殖的抑制作用,计算供试品相对百分效价,并比较抗体偶联前后该药细胞毒活性的改变;光学显微镜和荧光显微镜观察抗体偶联前后对BT-474细胞生存的影响。结果：抗HER2-MCC-DM1供试品及参考品在肿瘤细胞增殖抑制实验中均存在量效关系。3批原液和3批成品各经3次测定,对B7-474细胞增殖抑制活性的相对百分效价平均值在（92.50±8.80）%~（115.14±6.09）%,变异系数均小于15%。与抗HER2单抗原液相比,对应批次的抗HER2-MCC-DM1原液和成品各经3次测定,细胞增殖抑制活性平均值分别为偶联修饰前抗体活性的（326.72±21.58）%和（315.76±34.90）%。与偶联前抗体组相比,抗体偶联药物组细胞固缩和死亡明显增多。结论：所建立的体外细胞增殖抑制法可用于抗体偶联药物抗HER2-MCC-DM1的细胞毒活性检测,其重复性好、准确性高,可应用于ADC药物的质量控制及有效性评价。文稿中须写成斜体的外文字符
摘要：在科技文稿中出现许多外文字符,它们有的是正体、有的是斜体。正体和斜体外文字符各有其特定含义和用法,切不可混淆使用。现根据有关标准和规则,把生物医学文稿中须要写成斜体的外文字符归纳为以下几类：MicroRNA-203在人食管鳞癌组织和细胞中的表达及其基因的甲基化状态
摘要：目的：检测人食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）组织及细胞中MicroRNA-203（miR-203）的表达及其基因的甲基化状态,探讨miR-203在ESCC发生及发展中的作用。方法：选取河北医科大学第四医院2008—2011年间手术切除的83例ESCC原发灶组织及癌旁组织标本,实时定量PCR与甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP）分别检测其miR-203的表达及其编码基因的甲基化状态。用DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-aza-2’-deoxycitydine,5-Aza-dC）处理食管癌细胞系（TE1、TE13、YES-2、EC109、T.TN）,实时定量PCR与MSP分别检测5-Aza-dC处理对食管癌细胞中miR-203的表达及其基因甲基化状态的影响。结果：五种食管癌细胞中miR-203的表达均相对较低,且呈高甲基化状态。5-Aza-dC处理后,miR-203的表达均显著升高（P〈0.05或P〈0.01）;YES-2细胞中miR-203编码基因的甲基化程度显著降低,其余4种细胞均转变为非甲基化状态。miR-203在ESCC组织中的表达显著低于癌旁组织（0.54±0.11 vs 1.00±0.01,P〈0.01）,启动子区甲基化率显著高于癌旁组织[62.65%（52/83）vs 7.23%（6/83）,P〈0.01],并且两者均与TNM分期和组织分化程度有关（P〈0.05）。发生miR-203编码基因甲基化的ESCC组织中miR-203的表达显著低于未发生甲基化的ESCC组织（P〈0.05）。结论：miR-203在ESCC组织与细胞中呈低表达,与食管鳞癌的发生、发展有关,且其启动子区甲基化可能是导致其表达沉默的机制之一。中国免疫学会第九届全国免疫学学术大会征文通知
摘要：中国免疫学会定于2014年10月18日至10月21日在山东省济南市召开＂中国免疫学会第九届全国免疫学学术大会＂。本次会议由中国免疫学会主办,是我国免疫学界的学术盛会,欢迎全国免疫学工作者踊跃投稿。会议将授予部级一类继续教育学分（10分）。MicroRNA-10a通过靶向作用E2F3抑制肝癌细胞的增殖
摘要：目的：探讨微小RNA-10a（microRNA-10a,miR-10a）对肝癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法：收集广西医科大学附属肿瘤医院肿瘤科2001年10月至2005年7月144例肝癌患者手术切除的肝癌组织和癌旁组织（距癌灶组织边缘2~5 cm）标本,Real-time PCR法分析144例肝癌组织及癌旁组织中miR-10a的表达量。在肝癌细胞（QGY-7701、Huh7、PCL/PRF/5）中转染miR-10a模拟物,Real-time PCR法检测转染后细胞miR-10a的表达水平;CCK-8法检测过表达miR-10a的肝癌细胞的增殖水平,流式细胞术检测过表达miR-10a的肝癌细胞的凋亡和细胞周期;生物信息学预测并以Western blotting检测过表达miR-10a的肝癌细胞中转录因子E2F3的表达量。结果：与癌旁组织相比,肝癌组织中的miR-10a显著低表达[（-9.89±1.68）vs（-7.84±1.97）,P=0.000]。转染miR-10a模拟物后肝癌细胞系中miR-10a的表达量是转染对照小RNA组或空白组细胞的16倍左右。过表达miR-10a可显著抑制7种肝癌细胞（QGY-7701、QGY-7703、Huh7、PCL/PRF/5、HepG2、BeL-7402、SMMC-7721）的增殖（均P〈0.05）,并引起肝癌细胞细胞周期G1/S期阻滞,但并不能诱导肝癌细胞发生凋亡。生物信息学预测显示E2F3是miR-10a可能的靶分子,Western blotting检测显示过表达miR-10a可明显抑制肝癌细胞中E2F3的表达[（0.50±0.12）vs（0.79±0.21）,P〈0.05]。结论：人肝癌组织中低表达miR-10a,转染miR-10a模拟物后多种肝癌细胞的增殖均受到明显抑制,其机制可能与miR-10a靶向作用转录因子E2F3并阻滞肝癌细胞细胞周期于G1/S期有关。文稿中统计学符号规范化书写的要求
摘要：本刊严格遵守国家标准GB/T 3358-2009《统计学词汇及符号》的有关规定。为此,请作者书写统计学符号时注意以下要求：（1）样本的算术平均数用英文小写x珋,不用大写X,也不用Mean或M;（2）标准差用英文小写s,不用SD;（3）标准误用英文小写sx珋,不用SE;（4）t检验用英文小写t;（5）F检验用英文大写F;（6）卡方检验用希文小写χ2;（7）相关系数用英文小写r;转基因细胞株BaF3-mb15-RAE对IKDC功能分子表达的影响
摘要：目的：探讨单独或共同表达视黄酸早期转录因子1ε（retinoic acid early transcript 1ε,RAE1ε）和膜型IL-15的B淋巴细胞BaF3对小鼠产生IFN的杀伤性DC（IFN producing killer DC,IKDC）功能分子表达的影响。方法：以小鼠原B淋巴细胞株BaF3为基础,分别构建表达膜型IL-15的BaF3-mb15细胞和表达RAE1ε的BaF3-RAE细胞及同时表达膜型IL-15和RAE1ε的BaF3-mb15-RAE细胞。通过体外细胞因子诱导产生骨髓来源的小鼠成熟DC,将丝裂霉素灭活后的3株BaF3工程细胞株作为刺激细胞,分别与DC共培养,流式细胞术检测其对DC中CD11clowB220＋NK1.1＋IKDC比例和DC表面CD40、CD80表达的影响。流式细胞术分选DC中的IKDC,将丝裂霉素灭活后的3株BaF3工程细胞株与其共培养24 h,流式细胞术检测共培养对IKDC表面CD40、CD80、CD86、NKG2D、MHCⅡ类分子、CD107a和FasL表达的影响。结果：成功获得骨髓来源的小鼠成熟DC。与BaF3-mb15细胞和BaF3-RAE细胞相比,BaF3-mb15-RAE细胞刺激显著提高DC中IKDC比例[（50.0±5.6）%vs（30.3±8.2）%、（36.0±4.6）%,均P〈0.05],并且有效刺激IKDC表面CD40（180.1±28.2 vs 44.7±7.8、36.0±3.1,P〈0.01）和FasL（P〈0.05）表达上调;与BaF3细胞和BaF3-mb15细胞相比,BaF3-mb15-RAE细胞有效刺激IKDC表面CD80（P〈0.05）表达上调,而3株BaF3工程细胞刺激均不影响DC表面CD40、CD80的表达（P〉0.05）;同时,3株BaF3工程细胞对IKDC表面CD86、MHCⅡ类分子、NKG2D和CD107a的表达也没有显著影响（P〉0.05）。结论：RAE-1ε和膜型IL-15协同作用可促进IKDC增殖并诱导其高表达CD40和FasL。凡临床试验都应在中国临床试验注册中心注册
摘要：中国临床试验注册中心（Chinese Clinical Trial Register,ChiCTR）为卫生部下属的国家临床试验注册中心,是世界卫生组织国际临床试验注册协作网一级注册机构（World Health Organization International Clinical Trial Registration Platform Primary Register,WHO ICTRP Primary Register）,由卫生部中国循证医学中心和四川大学华西医院等于2005年7月25日正式成立并运行。过表达上皮膜蛋白1对结直肠癌SW-480细胞生物学行为的影响及其可能的机制
摘要：目的：探讨上皮膜蛋白1（epithelial membrane protejn-1,EMP1）在人结直肠癌（colorectal carcinoma,CRC）组织中的表达水平及其过表达对CRC SW-480细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法：免疫组织化学、Western blotting方法检测63例CRC组织及31例癌旁组织中EMP1的表达水平,分析EMP1表达与CRC临床病理参数的关系。慢病毒介导将pLenti6-EMP1质粒转染SW-480细胞,建立EMP1过表达细胞,转染plenti6/V5-DEST空白质粒为对照。Real-time PCR及Western blotting检测转染后SW-480细胞株中EMP1的表达,MTT、流式细胞术及Transwell实验分别检测EMP1过表达对SW-480细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。结果：EMP1蛋白在人CRC组织的表达显著低于癌旁组织（0.257±0.022 vs 0.863±0.086,P〈0.05）,并且其表达水平在不同T分期、有无淋巴结转移、临床分期以及组织分级组间表达有显著差异（P〈0.05）,而与患者年龄、性别、肿瘤部位无关（P〉0.05）。成功构建EMP1过表达的LeEMP1细胞。与LeEmpty细胞相比,LeEMP1细胞的增殖能力显著下降[（60.94±4.04）%vs（100.00±0.00）%,P〈0.05],凋亡率显著升高[（12.10±1.30）%vs（3.10±0.60）%,P〈0.05]、侵袭转移能力显著降低[穿膜细胞数：（87.00±12.00）vs（178.00±21.00）个,P〈0.05]。LeEMP1细胞Caspase-9表达显著高于LeEmpty细胞（0.764±0.073 vs 0.231±0.029,P〈0.05）,VEGFC表达显著降低（0.185±0.022 vs 0.663±0.065,P〈0.05）。结论：人CRC组织中EMP1蛋白表达明显减低,过表达EMP1能够抑制CRC SW-480细胞的恶性生物学行为,其可能通过调控Caspase-9和VEGFC的表达来发挥作用。MicroRNA-129-2对人鼻咽癌CNE1细胞裸鼠移植瘤的抑制及其可能的机制
摘要：目的：探讨microRNA-129-2（miR-129-2）对人鼻咽癌CNE1细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其可能的机制。方法：建立人鼻咽癌CNE1细胞裸鼠皮下移植瘤模型,按皮下注射的药剂将32只模型小鼠用随机数字表法分为4组：对照组（皮下注射生理盐水0.2 ml/d）、空白质粒组[（50μg/只,0.2 ml/次,1次/d]、顺铂（cisplatin,DDP）阳性对照组（1 mg/kg,0.2ml/次,1次/d）、miR-129-2组[（50μg/只,0.2 ml/次,1次/d],共治疗5周,记录裸鼠体质量、肿瘤体积、肿瘤质量。流式细胞术检测各组移植瘤组织S＋G2-M期细胞比例,免疫组化和Western blotting方法检测miR-129-2对移植瘤组织中转录因子SOX4表达的影响。结果：成功建立CNE1细胞裸鼠皮下移植瘤模型,治疗第22天起,miR-129-2组移植瘤的体积和质量均显著低于对照组和空白质粒组（P〈0.01）,而与DDP组始终无明显差异（P〉0.05）;5周后,miR-129-2组荷瘤小鼠的体质量显著高于其他3组（均P〈0.01）。miR-129-2组移植瘤组织S＋G2-M期细胞比例显著低于与对照组和空白质粒组（P〈0.01）,与DDP组无显著差异（P〉0.05）。移植瘤组织SOX4表达显著高于瘤旁组织,miR-129-2组和DDP组移植瘤组织内SOX4蛋白表达均较对照组显著降低（均P〈0.01）,且miR-129-2组SOX4蛋白表达显著低于DDP组（P〈0.05）。结论：miR-129-2对人鼻咽癌CNE1细胞裸鼠皮下裸移植瘤的生长有明显的抑制作用,其机制可能与SOX4表达下调有关。恶性疟原虫感染的红细胞可能通过囊泡传递抗性
摘要：疟疾是世界十大传染病之一,多发于非洲、东南亚、南美洲。由于疟疾的危害很大,会损伤人类的各种组织器官,发病的症状各不相同,所以在各个地方有着不同的称呼：＂瘴气＂、＂打摆子＂、＂冷热病＂等等。后来经过科学家的探索,发现疟疾是一种经蚊子传播到人体内的疟原虫引起的疾病,由于疟疾能够感染人的红细胞,并且周期性地爆发,所以才有了周期性发热的典型病症。HGF诱导不同EGFR基因型非小细胞肺癌细胞对厄洛替尼的耐药
摘要：目的：探究肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）体外诱导不同EGFR基因型非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞对厄洛替尼的耐药及其可能的机制。方法：用HGF、厄洛替尼单独或联合处理人NSCLC细胞株PC9（EGFR突变型,敏感株）、H292（EGFR野生型,敏感株）、A549（EGFR野生型,原发性耐药株）,实验分为四组：C组（不加药对照组）、H组（HGF处理）、E组（厄洛替尼处理组）、HE组（HGF＋厄洛替尼联合处理组）。MTT法检测其对细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对细胞周期和凋亡的影响,Western blotting检测其对细胞中c-Met、EGFR、ErbB3及其磷酸化蛋白表达的影响。结果：厄洛替尼对3种细胞增殖抑制的作用均呈浓度依赖性,HGF处理能够缓解厄洛替尼对瘤细胞增殖的抑制作用。3种细胞的HE组凋亡率均显著低于E组（均P〈0.05）。厄洛替尼阻滞3种细胞周期于G1期,对于H292、A549细胞,HE组G0/G1期比例显著低于E组（P〈0.05）。HE组p-Met蛋白含量较E组显著升高（P〈0.05）,而p-EGFR和p-ErbB3表达无显著差异（P〉0.05）。结论：在体外,HGF能够诱导不同EGFR基因型NSCLC细胞株对厄洛替尼耐药,其机制可能与其诱导cMet磷酸化活化有关。X盒结合蛋白1在三阴性乳腺癌发生和发展中的重要作用
摘要：肿瘤微环境不同于正常组织的生理环境,其表现为低氧、低糖及炎性细胞浸润等,而肿瘤细胞如何在这种不利细胞生长的条件下生存呢？最近康奈尔大学的Glimcher教授发表在Nature上的论文表明,在低氧条件下,三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer,TNBC）细胞内质网应激反应信号通路中的内质网跨膜蛋白肌醇酶1α（inositol-requiring enzyme 1α,IRE1α）、内质网类似激酶（PKR like ER kinase,PERK）被活化,活化的IREa1、PERK通过剪切X-盒结合蛋白1（X-box binding protein 1,XBP1）mRNA产生剪切体XBP1s,XBP1s和另外一个低氧诱导的转录因子缺氧诱导因子1a（hypoxia-inducible factor-1a,HIF1a）在细胞核内结合，协同HIF1a的目的基因转录，促进三阴性肿瘤细胞的生长和复发。去甲斑蝥素诱导人食管癌Ec9706细胞凋亡及其可能的机制
摘要：目的：研究去甲斑蝥素对人食管鳞癌Ec9706细胞的致凋亡作用及其可能的作用机制,为去甲斑蝥素应用于临床抗癌治疗提供实验依据。方法：不同质量浓度去甲斑蝥素（0、5、10、20、40μg/ml）分别作用Ec9706细胞不同时间（12、24和48 h）后,MTT方法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡及Caspase-3和Survivin蛋白表达的变化。结果：去甲斑蝥素作用后Ec9706细胞呈现不同程度的增殖抑制,而且细胞增殖抑制程度随作用剂量及时间增加不断增强,40μg/ml去甲斑蝥素作用48 h时,Ec9706细胞增殖抑制率达（80.00±2.15）%。去甲斑蝥素显著诱导Ec9706细胞凋亡,其20μg/ml作用48 h时,Ec9706细胞的凋亡率达（38.57±1.76）%。去甲斑蝥素作用后,Ec9706细胞中Caspase-3蛋白水平显著增高,而Survivin蛋白水平显著降低（P〈0.05）。结论：去甲斑蝥素明显诱导食管癌Ec9706细胞凋亡,其作用机制可能与下调细胞Survivin蛋白及上调Caspase-3蛋白表达有关。靶向hTERT的RNAi载体的构建及其对大肠癌SW-480细胞增殖的影响
摘要：目的：构建靶向人大肠癌细胞端粒酶逆转录酶（human telomerase reverse transcriptase,hTERT）基因的RNAi载体,探讨其对人大肠癌SW480细胞增殖的影响。方法：设计3条靶向hTERT的shRNA序列和阴性对照序列,分别克隆入pGPU6/GFP/Neo载体,构建RNAi载体pGPU6-hTERT-1、2、3和阴性对照载体pGPU6-hTERT-NC,转染SW480细胞。RT-PCR检测各组载体对hTERT mRNA表达的影响,MTT法检测下调hTERT mRNA表达对SW480细胞增殖的影响。结果：成功构建3个携带hTERT mRNA序列的重组载体,3种RNAi载体均能明显抑制SW480细胞hTERT mRNA的表达,pGPU6-hTERT-3组SW480细胞hTERT mRNA表达水平较空白对照组下调最为显著（0.347±0.028 vs 0.513±0.032,P〈0.01）。转染3种RNAi载体均能明显抑制SW480细胞增殖,pGPU6-hTERT-3组细胞增殖抑制率较空白对照组、脂质体对照组和pGPU6-hTERT-NC组升高最为显著[（50.08±0.43）%vs（4.11±0.39）%、（3.88±0.35）%、（3.38±0.35）%,P〈0.05]。结论：转染RNAi载体pGPU6-hTERT-3能够抑制SW480细胞的增殖,其机制可能与降低hTERT基因的表达从而抑制端粒酶活性有关。
