肝癌发生过程中的免疫调控：防御还是协同？
摘要：原发性肝癌是一种严重威胁我国人民身体健康的致死性疾病。以往的肝癌治疗主要针对癌细胞本身，但近年来的研究表明，免疫系统尤其是肿瘤微环境对于肝癌的发生、发展具有十分重要的调控作用。本文瞄准肝癌发生过程中免疫调控这一研究热点，对肿瘤微环境中的淋巴细胞、炎症细胞、细胞因子、趋化因子等关键要素在肝癌发生、发展过程中所发挥的重要调控作用进行初步探讨，尝试从分子和细胞水平阐述免疫系统对于肝癌发生、发展的双向调控作用，并对这些关键因子的抗肿瘤作用和潜在的药物开发前景进行评价，希望为肝癌的发病机制研究以及肝癌免疫治疗药物的研发提供一定的线索。内皮分化基因受体介导溶血磷脂酸：肿瘤靶向治疗的新靶点
摘要：溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid，LPA）是一种对多种细胞具有不同生物学活性的磷脂介质，在组织中广泛存在。从细胞形态学改变到细胞功能的影响，LPA可产生如促进细胞增殖、迁移和耐药等生物学效应。如其他生物递质一样，LPA与细胞表面特定的G蛋白偶合受体（Gprotein—coupled receptor，GPCR）发生交联作用，这些受体主要有Edg-2／LPA1、Edg-4／LPA2和Edg一7／LPA3等，它们被命名为内皮分化基因或溶血磷脂受体亚家族（endothelial differentiation gene or lysophospholipid receptor subfamily，Edg／LPARsubfamily）。LPA在体内外参与细胞增殖以及血管生成等病理生理过程，LPA代谢和Edg／LPA受体功能的异常与肿瘤的发生、发展相关，可能是肿瘤临床诊治的潜在靶点。本文阐述了LPA通过Edg／LPA受体介导在肿瘤发生和发展中的作用及其机制，并就其在胰腺癌临床诊治中的意义进行了评价。TNF-α诱导巨噬细胞产生GSK3激酶依赖的交叉性内毒素耐受
摘要：天然免疫细胞可以识别外源病原体刺激，产生炎性细胞因子，TNF-α是其中重要的一种。大量的炎性细胞因子会促发过激的免疫反应并导致组织损伤，因此，炎性细胞因子调控机制的研究一直是免疫学研究的一个重点。缺氧微环境对TSST-1诱导的抗CEA^＋结肠癌LoVo细胞免疫治疗的调控
摘要：目的：研究缺氧微环境对靶向性表达的超抗原中毒性休克综合征毒素-1（toxic shock syndrome toxin-1，TSST-1）激活人外周血淋巴细胞（peripheral blood lymphocyte，PBL）对CEA^＋结肠癌LoVo细胞杀伤作用的调控。方法：包装、收集前期构建的缺氧反应元件（hypoxia-responseelements，HRE）和癌胚抗原启动子CEAp联合调控的逆转录病毒载体pLEGFP-N1-5HRE-CEAp-TSST-1-linker-CD80TM（简称pLEGFP-NI-5HCTC），感染CEA^＋LoVo细胞及CEA-宫颈癌HeLa细胞，获取稳定表达跨膜型超抗原TSST-1-linker—CD80TM蛋白（TC融合蛋白）的肿瘤细胞。用缺氧模拟试剂CoCl，模拟缺氧微环境，RT-PCR和West．ernblotting分别检测缺氧调控下TSST-1的表达水平。将健康人PBL与pLEGFP-N1．5HCTC感染后的肿瘤细胞共培养。H—TdR掺入法检测缺氧调控下PBL的增殖能力，MTr法检测缺氧调控下PBL对肿瘤细胞的杀伤效应。结果：pLEGFP-N1-5HCTC病毒成功感染CEA^＋LoVo细胞（5HCTC／LoVo），RT—PCR和Western blotting证实，缺氧可上调5HCTC／LoVo细胞中TSST-1 mRNA和蛋白的表达，CEA—HeLa细胞在常氧和缺氧条件下均无TSST-1的表达。缺氧可上调5HCTC／LoVo细胞诱导的人PBL的增殖（7．3×10。郴3．1×10^3 cpm，P〈0．05），缺氧环境下PBL对5HCTC／LoVo细胞的杀伤率明显高于常氧环境（82．69％vs53．50％，P〈0．01）；CEA—HeLa细胞不能刺激PBL增殖，PBL对其也无抑制作用。结论：缺氧微环境可显著上调靶向性表达的超抗原TSST一1诱导的对CEA^＋LoVo细胞的杀伤作用。siRNA沉默EphB2表达对胰腺癌CFPAC-1细胞增殖和凋亡的影响
摘要：目的：应用慢病毒介导的RNA干扰技术，靶向沉默人胰腺癌CFPAC-1细胞中的EphB2基因的表达，观察EphB2对CFPAC-1细胞增殖和凋亡的影响。方法：构建靶向EphB2基因的siRNA干扰质粒，通过LipofectamineTM2000将干扰质粒转染进293T细胞，筛选出能有效抑制EphB2蛋白表达的干扰序列。构建含有效序列的慢病毒载体pLentiGFP．EphB2，感染CFPAC-1细胞，筛选出稳定干扰EphB2蛋白表达的CFPAC-1细胞系。定量PCR、Westernblotting检测CFPAC-1细胞中EphB2 mRNA和蛋白的表达，CCK8法和流式细胞术检测EphS2下调对CFPAC-1细胞增殖和凋亡的影响。结果：成功构建了EphB2慢病毒干扰载体pLentiGFP-EphB2，获得稳定转染pLentiGFP-EphB2的CFPAC-1细胞（CFPAC-1EphB2RNAi）。CFPAC-1 EphB2 RNAi细胞中EphB2mRNA和蛋白表达较空载体组显著降低，EphB2 mRNA的沉默效率为63％。与空载体组和未转染组相比，pLentiGFP—EphB2感染显著促进CFPAC-1细胞的增殖（1．89±0．17销1．63±0．13、1．71±0．22，P〈0．05），抑制细胞的凋亡[（7．02±1．27）％椰（13．37±1．89）％、（15．71±2．35）％，P〈0．05]。结论：pLentiGFP—EphB2可有效下调胰腺癌CF—PAC-1细胞中EphB2的表达，促进CFPAC-1细胞增殖和抑制其凋亡。文稿中计量单位使用的要求
摘要：本刊严格执行国务院颁发的《中华人民共和国法定计量单位》，全面贯彻国家标准GB3100．3102．1993《量和单位》的规定，正确使用量和单位的名称和符号。（1）量符号以斜体拉丁和希腊字母表示（pH用正体除外），例如m（质量）、t（时间）、c（浓度）、y（体积）、p（压力）、F（力）等。MicroRNA-10a通过调控MMP的表达促进胶质瘤细胞侵袭
摘要：目的：研究microRNA－10a（miR－10a）对人脑胶质瘤细胞系U87MG侵袭性的影响。方法：脂质体包被miR-10a反义寡聚核苷酸（miR-10a antisense oligodeoxynucleotide，miR-10a-anti—ODN），转染胶质瘤U87MG细胞，并设无义miRNA转染组和空白对照组，流式细胞术和荧光显微镜检测miR-10a-anti-ODN对U87MG细胞的转染效率，流式细胞术检测转染miR-10a-anti-ODN后U87MG细胞的凋亡和细胞周期，MTF法检测U87MG细胞的增殖，Transwell实验检测miR—10a-anti-ODN对U87MG细胞迁移和侵袭的影响；RT-PCR和Western blotting法分别检测U87MG细胞中MMP-2、MMP-9、MMP-14mRNA及蛋白的表达。结果：转染miR-10a—anti-ODN后，U87MG细胞的增殖、周期和凋亡无明显改变，U87MG细胞的侵袭[（87±7．1）135（155±3．7）、（149±6．6）个细胞，P〈0．05]和迁移[（78．0±5．2）vs（150．3±3．7）、（147．3±6．6）个细胞，P〈0．05]能力明显下降，侵袭相关因子MMP-2、MMP-9、MMP-14的mRNA及蛋白表达水平也明显下降。结论：miR-10a通过调控MMP-2、MMP-9、MMP-14的表达促进胶质瘤U87MG细胞的侵袭，miR-10a可能是胶质瘤治疗的潜在靶点。常见参考文献著录格式示例
摘要：著录格式：主要责任者．题名[文献类型标志]．其他责任者（例如翻译者）．版本项（1版不著录）．出版地：出版者，出版年：起页-止页．沉默Livin基因表达对结肠癌LoVo细胞生物学特性的影响
摘要：目的：运用RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术沉默结肠癌细胞株LoVo中Livin基因的表达，研究Livin对LoVo细胞增殖和凋亡等生物学特性的影响。方法：构建针对Livin基因的干扰质粒pSilencer4．1-L1和pSilencer4．1-L2，转染LoVo细胞，通过RT-PCR、Westernblotting检测转染后LoVo细胞Livin的表达，并用流式细胞术、克隆形成实验、MTF法检测转染后LoVo细胞的凋亡、细胞周期、克隆形成、增殖以及对顺铂的敏感性。结果：成功构建pSilencer4．1-L1、pSilencer4．1-L2干扰质粒，pSilencer4．1-L1可有效沉默LoVo细胞中LivinmRNA和蛋白的表达（P〈0．01），但pSilencer4．1．也效果不明显。与对照组相比，pSilencer4．1一L1转染后Lo~o细胞的凋亡率增加[（24．2±3．2）％掷（8．14-1．4）％，P〈0．01]；细胞增殖明显抑制，转染后72h增殖抑制率约70％；细胞的克隆形成率明显下降[（15±4．6）％粥（85±5．8）％，P〈0．01]；S期细胞明显增加[（45．7±4．9）％vs（28．0±3．0）％，P〈0．01]，Gl期细胞明显减少[（43．0±5．2）％蟠（62．8±5．1）％，P〈0．01]；对顺铂的敏感性增加，细胞凋亡率增加[（65．34-6．2）％vs（43．44-6．9）％，P〈0．01]。结论：pSilencer4．1-L1可有效沉默结肠癌LoVo细胞中Livin基因的表达，抑制细胞增殖和克隆形成、诱导细胞凋亡、增加细胞对顺铂的敏感性。腺病毒E1a基因增强P16基因诱导SMMC-7721肝癌细胞的凋亡
摘要：目的：研究腺病毒E1a基因与P16抑癌基因协同对肝癌SMMC-7721细胞凋亡和增殖的影响，探索肿瘤基因治疗新模式。方法：构建剧。基因真核表达质粒pDC315-E1a和携带P16的重组病毒AdCMV—P16，RT-PCR和免疫荧光标记法检测pDC315-E1a质粒转染或AdCMV—P16病毒感染后SMMC-7721细胞中P16和剧n的表达。建立裸鼠SMMC-7721细胞移植瘤模型，pDC315-E1a和AdCMV—P16单独或联合治疗，观察其对移植瘤生长的抑制作用，免疫组化和TUNEL法分别检测移植瘤组织中P16、E1a蛋白的表达和移植瘤细胞的凋亡。结果：SMMC-7721细胞感染AdCMV—P16或转染pDC315-E1a后，P16、E1amRNA和蛋白水平均呈阳性表达。与空白对照组相比，AdCMV—P16治疗组移植瘤细胞凋亡率为（14．3±2．5）％（P〈0．01），抑瘤率为36．1％（P〈0．01）；pDC315-E1a治疗组抑瘤率为17．1％（P〉0．05），移植瘤细胞凋亡率为（8．5±2．9）％（P〈0．01）；AdCMV-P16联合pDC315-E1a治疗组移植瘤细胞凋亡率为（27．3±6．3）％（P〈0．01），抑瘤率达57．2％（P〈0．01）。结论：腺病毒即。基因能够增强P16基因对肝癌SMMC-7721细胞移植瘤的抑制作用，促进移植瘤细胞的凋亡，增强P16基因治疗的效果。新型增殖型腺病毒CNHK500-hγ对肝癌细胞的杀伤作用
摘要：目的：探讨一种新型增殖型腺病毒CNHK500-hγ[腺病毒肼A、E／B基因分别由人端粒酶逆转录酶（humantelomer-asereve rse transeriptase，hTERT）启动子和缺氧反应元件（hypoxia response element，HRE）启动子双重调控的、并携带hIFN-1的重组腺病毒]对肝癌细胞的体外杀伤作用。方法：TCID50法和MTT检测增殖型腺病毒CNHK500-hγ在两种端粒酶阳性肝癌细胞株HepG2和Hep3B以及一株端粒酶阴性的成纤维细胞株BJ中的扩增能力和对细胞的杀伤作用。用携带绿色荧光蛋白的CNHK500．GFP感染BJ、Hep3B和HepG2细胞，观察其扩增情况。Westernblotting和ELISA法检测CNHKS00-hγ感染后细胞和细胞上清中hIFN-1的表达。结果：CNHKS00-hγ感染HepG2、Hep3B和BJ细胞48h后，CNHK500-}ry在HepG2和Hep3B细胞中的扩增是BJ细胞中的16003和2116倍，对BJ细胞杀伤的ED，。值分别是杀伤HepG2和Hep3B细胞的500和10000倍（P〈0．01），且明显优于阳性对照增殖型腺病毒ONYX-015。CNHK500-hγ感染后HepG2及Hep3B细胞中hIFN-1的表达显著高于非增殖型腺病毒Ad-hγ感染后细胞中hIFN-1的表达（P〈0．01）。结论：增殖型腺病毒CNHK500-hγ可在肝癌细胞内特异性扩殖，高效表达hIFN-hγ基因，是一种具备治疗肝癌潜力的新型腺病毒。NLRX1——过度炎症反应的负向调控因子
摘要：NLR（nucleotide binding domain and leucine—rich—repeat—containing proteins）分子的功能是近年来免疫学研究的热点，该分子的功能不仅限于免疫识别，而且广泛参与免疫反应的调节，特别是炎症反应的调节。辐射诱导溶瘤腺病毒联合放疗对宫颈癌细胞HeLa S3的作用效果
摘要：目的：构建受辐射诱导的EGR-1启动子调控的携带人TRAIL基因的新型溶瘤腺病毒Ad-EGR—TRAIL，研究其联合放疗对宫颈癌细胞株HeLas3的杀伤效果。方法：构建重组腺病毒Ad-EGR-TRAIL，用腺病毒Ad-GFP检测对HeLas3细胞的感染效率。CCK-8法检测Ad．EGR-TRAIL组、单纯放疗组以及Ad-EGR-TRAIL联合放疗组对HeLaS3细胞的杀伤效应，同时观察它们对人正常宫颈细胞的作用。结果：成功构建腺病毒Ad—EGR-TRAIL，当MOI为100时，HeLas3细胞的腺病毒感染效率最高。单纯Ad-EGR-TRAIL或放疗对HeLaS3细胞增殖的抑制率分别为（8．07±3．02）％和（23．02±4．03）％，Ad-EGR—TRAIL联合放疗对HeLas3细胞增殖的抑制率达（79．77±9．15）％；同样的处理对正常宫颈细胞无明显抑制作用。结论：Ad-EGR—TRAIL联合放疗对宫颈癌细胞HeLas3有显著的杀伤作用。骨髓间充质干细胞体内外对胃癌细胞的趋向性
摘要：目的：探讨人骨髓间充质干细胞（human bone marrow—derived mesenchymal stemcell，hBMSC）对胃癌细胞的趋化性，为将MSC研发成为胃癌基因治疗载体提供实验依据。方法：骨髓培养法分离培养hBMSC并进行流式细胞术鉴定。Tran—swell实验检测hBMSC对胃癌MKN45细胞和人成纤维细胞（human fibroblast，hFB）的趋化能力。建立MKN45细胞裸鼠移植瘤模型，感染Lenti－EGFP（MOI为50）的hBMSC或hFB细胞经尾静脉注射入荷瘤小鼠，荧光显微镜下观察移植瘤组织及各脏器GFP的表达。结果：培养第3代的hBMSC细胞CD44、CD105阳性率为（96．7±1．84）％、（98．1±0．95）％，而CD34、CD45表达阴性。hBMSC细胞向MKN45细胞的趋化能力明显强于胃上皮细胞GES-1组及空白对照细胞[（239．5±54．3）傩（43．57±4．6）、（37．3±4．7）个，P〈0．01]，且hBMSC向MKN45细胞的趋化能力明显强于hFB细胞向MKN45细胞的趋化能力[（239．5±54．3）vs（27．7-4-16．7），P〈0．01]。与hFB相比，hBMSC对胃癌移植瘤组织具有明显趋向性；hBMSC组移植瘤组织内可见GFP表达，移植瘤小鼠部分肝脏（20％）及肺脏（20％）有GFP表达，但较移植瘤组织内GFP表达率和强度均低（P〈0．05）。结论：hBMSC在体内外对胃癌细胞均有特异性趋化作用，有望研发为胃癌基因治疗的良好载体。P53诱导产生的长链非编码RNA参与P53下游反应基因的广泛抑制
摘要：P53是一个重要的肿瘤抑制基因，当细胞受到损伤时，聊会引起DNA修复、细胞周期阻滞或细胞凋亡等生物学效应，从而维持细胞基因的完整性，但P53抑制其下游基因的分子机制尚不清楚。论文作者通过长链非编码RNA（10ngnon—coding RNA，lincRNA）来阐述丹3是如何参与其下游基因的广泛抑制。人血管能抑素抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤生长、转移及血管新生
摘要：目的：探讨人血管能抑素（canstatin）对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长、转移和血管新生的影响。方法：将pCMV—Script／canstatin及空载体pCMV—Script通过电穿孔的方法转染A549细胞，G418筛选获得阳性克隆。RT-PCR检测转染后细胞中canstatin mRNA的表达，Westernblotting检测转染后细胞中canstatin蛋白的表达。建立Lewis肺癌小鼠移植瘤模型，观察pCMV-Script／canstatin组A549细胞培养上清对小鼠Lewis肺癌移植瘤的治疗作用，免疫组化检测各治疗组荷瘤小鼠移植瘤的微血管密度。结果：pCMV-Script／canstatin转染A549细胞在G418筛选后成功形成克隆，转染的A549细胞能有效表达can-statin mRNA和蛋白。pCMV—Script／canstatin治疗组小鼠肿瘤体积明显小于pCMV—Script组和Ns组[（1．47±0．21）cm^3vs（2．43±0．15）cm^3、（2．53±0．18）cm^3，P〈0．01）；pCMV-Script／canstatin组、pCMV—Script组和NS组的肺转移结节数分别为（3．00±1．00）、（7．80±1．48）、（7．60±2．41）个，pCMV-Script／canstatin组肿瘤转移受到显著的抑制（P〈0．01）；pCMV-Script／canstatin组小鼠的肿瘤组织微血管数明显少于pCMV—Script组和NS组[（84．40±8．83）vs（188．68±11．15）、（190．24±12．91）个，P〈0．01]。结论：pCMV-Script／canstatin能在A549细胞中表达并分泌至细胞外，canstatin可明显抑制Lewis肺癌移植瘤的生长、转移和血管新生。碘化油紫杉醇白蛋白磁性纳米颗粒治疗大鼠肝癌的疗效
摘要：目的：制备抗肿瘤靶向药物紫杉醇白蛋白磁性纳米颗粒（magnetic paclitaxel albumin nanoparticle，MAG-TAX—NP）和碘化油MAG-TAX—NP，观察碘化油MAG-TAX—NP治疗大鼠肝癌的效果。方法：以白蛋白、纳米Fe，O。颗粒为载体，用乳化．超声-加热固化法制备MAG—TAX—NP和碘化油MAG—TAX-NP，紫外分光光度法检测其紫杉醇的含量并计算MAG．TAX—NP的载药率及包封率，电镜下观察MAG—TAX—NP的形态。建立大鼠肝癌模型，除空白对照组外，分别将碘化油、碘化油紫杉醇、碘化油磁性纳米颗粒、碘化油MAG-TAX—NP各0．2ml注入各组荷瘤大鼠肝固有动脉内进行治疗，14d后处死大鼠，取肝肿瘤组织称重，计算各组抑瘤率；电镜观察碘化油MAG—TAX．NP对肝肿瘤的抑制作用。结果：制备的MAG—TAX．NP形态圆滑，粒径约70nm，平均载药率为（5．624-0．08）％，平均包封率为（80．72±0．96）％。碘化油、碘化油紫杉醇、碘化油磁性纳米颗粒、碘化油MAG—TAX—NP各组的抑瘤率分别为（43．2±2．24）％、（51±3．33）％、（57．4±3．66）％和（87．4±4．11）％，碘化油MAG—TAX-NP组的抑瘤率明显提高（P〈0．01）；此外，碘化油MAG—TAX－NP作用于肝肿瘤后，肝癌细胞出现大量凋亡与坏死。结论：碘化油MAG－TAX-NP可抑制大鼠肝癌的生长，有望成为紫杉醇治疗肝癌的新剂型。乳腺导管原位癌与浸润性导管癌染色体微卫星杂合性缺失的比较
摘要：目的：研究乳腺导管原位癌与浸润性导管癌染色体3p区域微卫星杂合性缺失（10ssofheterozygosity，LOH）的发生情况。方法：选取本院2005年9月至2009年2月手术切除石蜡包埋的乳腺癌组织切块43例，应用激光显微切割技术留取组织中乳腺浸润性导管癌（invasiveduct Mtypecarcinoma，IDC）、导管原位癌（ductal carcinoma in situ，DCIS）及正常乳腺组织区域，采用毛细管电泳测序技术进行了4个微卫星位点的LOH检测。结果：40例乳腺癌患者中，染色体3p区域D3S1038、D3S1295、D3S1581、D3S3118等4个位点的LOH率分别为25．0％（8／40）、37．5％（15／40）、17．5％（7／40）和5．0％（2／40）。IDC的LOH率比DCIS稍高（47．5％VS37．5％），但差异无统计学意义。结论：乳腺导管癌染色体3P微卫星LOH是肿瘤发生的早期事件，DCIS的总LOH频率已经接近于IDC。在乳腺癌发展过程中，新的微卫星位点发生了LOH。
