IL-12家族细胞因子：肿瘤免疫治疗研究的热点分子
摘要：利用细胞因子提高宿主免疫能力、破坏肿瘤细胞的免疫逃逸功能是肿瘤生物治疗的重要策略。IL-12细胞因子家族是具有高度同源性的一类异源二聚体细胞因子,包括IL-12、IL-23、IL-27和IL-35,它们均由活化的抗原提呈细胞如巨噬细胞和树突状细胞产生,在辅助性T细胞分化过程中起重要作用。IL-12通过活化ATAT4信号转导途径产生IFNγ-促进细胞免疫反应;IL-27主要活化STAT1途径增强细胞和体液免疫反应;外源性IL-23可以产生抗肿瘤效应,而内源性IL-23通过活化STAT3诱导产生IL-17,从而促进肿瘤的发生和发展;IL-35可能是潜在的免疫抑制性细胞因子。总之,IL-12细胞因子家族成员在肿瘤免疫反应中各自发挥不同的作用,已成为肿瘤免疫治疗和研究的热点分子。mda7-/IL2-4和IL2-4delE5诱导急性髓系白血病细胞向单核细胞分化
摘要：目的：研究人黑素瘤分化相关基因-7（melanoma differentiation associated gene-7,mda-7;又称IL-24）及其剪接体IL-24 delE5与急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）细胞分化的关系。方法：十四烷酰佛波醇-乙酯（12-O-tetrade-canoylphorbol-13-acetate,TPA）处理人急性髓系白血病细胞系U937、HL-60,real-time PCR及Western blotting检测细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达,FACS检测细胞表面CD11b、CD14和CD115的表达。siRNA干扰U937、HL-60细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达后,再以TPA诱导细胞分化,FACS检测CD11b、CD14和CD115的表达。用前期构建的mda-7/IL-24和IL-24 delE5载体转染U937、HL-60及AML-M5患者的原代白血病细胞,观察异位过表达mda-7/IL-24和IL-24 delE5能否诱导白血病细胞向单核细胞分化。结果：TPA在诱导U937、HL-60细胞向单核细胞分化过程中显著促进mda-7/IL-24及其剪接体IL-24 delE5的表达,用siRNA干扰mda-7/IL-24及IL-24 delE5的表达后,TPA诱导U937、HL-60细胞向单核细胞分化的作用也被阻断。异位过表达mda-7/IL-24和IL-24 delE5可诱导U937、HL-60以及原代AML细胞向单核细胞分化：U937、HL-60细胞表面CD11b和CD14表达均显著升高,CD115表达仅在U937细胞有显著升高;3例AML-M5患者的原代AML细胞中CD11b、CD14及CD115表达均有不同程度升高,细胞呈现单核细胞的形态特征。结论：TPA可通过上调mda-7/IL-24及其剪接体IL-24 delE5的表达诱导白血病细胞向单核细胞分化。hTERT启动子驱动的肿瘤抑素靶向肝癌细胞表达及其抗血管形成的作用
摘要：目的：观察人端粒酶逆转录酶基因（human telomerase reverse transcriptase,hTERT）启动子驱动的肿瘤抑素（tamsta-tin）基因在肝癌细胞HepG2内特异性表达及其体外抗血管形成的作用。方法：构建phTERT-tumstatin、pCMV-tumstatin（阳性对照）、phTERT-EGFP（阴性对照）质粒,脂质体介导转染HepG2肝癌细胞、L-02正常肝细胞,荧光显微镜检测EGFP的表达。Western blotting检测tumstatin在HepG2细胞内的表达,MTS法检测稳定转染后HepG2细胞的增殖以及含或不含tumstatin蛋白的条件培养基对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vascular endothelial cell,HUVEC）增殖的影响。通过计数管样分支数检测tumstatin蛋白对HUVEC管道结构形成的影响。结果：成功构建phTERT-tumstatin、pCMV-tumstatin和phTERT-EGFP质粒,质粒转染后tumstatin基因在肝癌细胞HepG2中特异地表达,在正常肝细胞L-02中无表达。phTERT-tumstatin和phTERT-EG-FP转染均不影响HepG2细胞的增殖。含tumstatin蛋白的条件培养基CM-T抑制HUVEC的增殖[抑制率为（56.49±0.33）%];CM-T与不含tumstatin蛋白的条件培养基CM-N、CM-NT相比显著抑制了HUVEC血管结构的形成[（3.33±1.53）%vs（24.44±3.11）%、（23.94±2.92）%,P〈0.01）]。结论：phTERT基因启动子可驱动tumstatin靶向表达于肝癌细胞,并抑制HUVEC血管管道结构形成。第十二届全国肿瘤生物治疗学术会议征文通知（第一轮通知）
摘要：“中国免疫学会肿瘤免疫与生物治疗分会”和“中国抗癌协会生物治疗专业委员会”联合主办，由山东大学药学院免疫药理与免疫治疗研究所和《中国肿瘤生物治疗杂志》联合承办的“第十二届全国肿瘤生物治疗学术会议”定于2011年10月8-10日在山东省济南市召开。诚邀国内各位专家与同行踊跃投稿、参加会议交流。会议期间将邀请国内外著名专家介绍本领域基础及临床研究的新进展。肿瘤细胞对不同分化阶段树突状细胞脂含量和蛋白质二级结构的影响
摘要：目的：利用傅里叶变换红外光谱（Fourier transformed infrared spectrum,FT-IR）技术探讨肿瘤细胞共培养对不同分化阶段树突状细胞（dendritic cells,DCs）的脂含量和蛋白质二级结构的影响,为深入理解肿瘤的免疫逃逸机制寻找线索。方法：免疫磁珠法分离人CD14＋单核细胞,以经典方法将其诱导为未成熟DCs（immature DCs,imDCs）和成熟DCs（mature DCs,mDCs）,分别将imDCs和mDCs与肝癌细胞株BEL7402、红白血病细胞株K562以及人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelialcells,HUVECs）共培养48 h,正常培养的DCs作为对照。采用FT-IR技术研究不同肿瘤细胞对不同分化阶段DCs的脂含量和蛋白质二级结构的影响。结果：与正常培养的DCs相比,与肿瘤细胞BEL7402和K562共培养后imDCs和mDCs的膜磷脂成分减少（2.718±0.296,3.124±0.361vs4.855±0.324,P〈0.05;2.964±0.136,3.522±0.173vs4.217±0.206,P〈0.05）,而总的脂含量增加（3.768±0.185,3.591±0.197vs2.487±0.212,P〈0.05;4.288±0.156,4.155±0.167vs3.233±0.206,P〈0.05）;蛋白质α-螺旋含量减少（1.863±0.192,1.754±0.169vs2.364±0.188,P〈0.05;1.124±0.133,1.016±0.107vs1.392±0.113,P〈0.05）,β-折叠（3.397±0.225,3.433±0.236vs2.486±0.198,P〈0.05;2.646±0.209,2.591±0.216vs1.558±0.159,P〈0.05）和转角含量（4.366±0.284,4.322±0.266vs3.127±0.272,P〈0.05;2.675±0.221,2.627±0.235vs1.773±0.181,P〈0.05）增加;并且mDCs比imDCs更容易受到肿瘤来源因素的影响。结论：与肿瘤细胞共培养能够导致mDCs和imDCs的脂含量和蛋白质二级结构发生改变,可能是肿瘤导致DCs功能损伤的结构基础。Pias1对Foxp3的表观遗传学调控
摘要：鉴于Treg细胞在免疫负向调控方面的重要作用,Treg细胞的特征标志分子——Foxp3的转录调控一直受到广泛的关注。目前对诱导Foxp3的转录信号研究比较透彻,例如CD3、CD28介导的信号可以激活AP-1和NFAT,结合于Foxp3的启动子序列激活转录；而IL-2R介导的信号可以激活STAT5并结合于Foxp3的CNS2序列，稳定Foxp3表达；TGF-βR介导的信号可以激活SMAD2和SMAD3结合于Foxp3的CNSl序列，在iTreg的分化中起着重要的作用。但对抑制Foxp3转录信号几乎没有研究涉及。减毒水泡性口炎病毒诱导宫颈癌HeLa细胞的凋亡及其作用机制
摘要：目的：研究减毒水泡性口炎病毒（vesicular stomatitis virus,VSV）对宫颈癌HeLa细胞的凋亡诱导作用,并探讨其可能的机制。方法：将减毒VSV以1.0 MOI的接种密度感染HeLa细胞,在6、12、18、24和30 h后收集细胞,MTT法检测HeLa细胞的增殖;AO/EB染色观察HeLa细胞凋亡形态学变化,Annexin V-FITC/PI双染法检测HeLa细胞早期凋亡率,流式细胞术分析HeLa细胞sub-G1凋亡峰,JC-1染色法测定细胞线粒体跨膜电位水平,caspase试剂盒检测HeLa细胞caspase-3、caspase-8及caspase-9的活性。结果：减毒VSV感染HeLa细胞12和24 h后,HeLa细胞增殖活力分别为（78.4±1.9）%和（63.1±5.6）%（P〈0.01）;早期凋亡细胞率分别为（16.88±2.48）%和（31.9±4.24）%（P〈0.01）,sub-G1凋亡峰分别为（14.85±1.48）%和（21.05±2.28）%（P〈0.01）。随着减毒VSV感染时间的增加,HeLa细胞线粒体跨膜电位逐渐降低（P〈0.05）,caspase-9和caspase-3的活性显著升高（均P〈0.05）。结论：减毒VSV能够抑制HeLa细胞的增殖,并通过caspase-9和caspase-3依赖的途径诱导HeLa细胞凋亡。文稿中统计学符号规范化书写的要求
摘要：本刊严格遵守国家标准GB 3358-93《统计学术语》的有关规定。为此,请作者书写统计学符号时注意以下要求：（1）样本的算术平均数用英文小写x-,不用大写X,也不用Mean或M;（2）标准差用英文小写s,不用SD;（3）标准误用英文小写sx-,不用SE；（4）t检验用英文小写t；（5）F检验用英文大写F；（6）卡方检验用希文小写X^2；（7）相关系数用英文小写r；一个细胞内DNA的天然免疫识别受体——IFI16
摘要：识别细胞内的微生物DNA是天然免疫应答的首要节点,但目前关于这种DNA如何被识别仍然所知有限。论文作者揭示了一个可介导β-干扰素（IFN-β）产生的胞内DNA识别受体——PYHIN蛋白家族成员IFI16。一个有效的病毒免疫应答依赖于宿主细胞凶子和I型干扰素的诱导产生，而这主要是由胞内模式识别受体，通过检测出病毒核酸如病毒RNA和DNA、病毒复制中问物和转录产物而引发的。反义端粒酶RNA对肝癌细胞黏附和侵袭的影响
摘要：目的：探讨人反义端粒酶RNA（human telomerase RNA,hTR）对肝癌细胞系BEL-7402黏附和侵袭的影响及其机制。方法：利用前期实验成功转染端粒酶正、反义RNA基因的肝癌细胞,分为正义转染组（BEL-7402-hTR-EcoRⅠ细胞）、反义转染组（BEL-7402-hTR-BamHⅠ细胞）,空白对照组（BEL-7402细胞）。黏附实验和侵袭实验检测反义hTR转染后BEL-7402细胞的黏附和侵袭能力,免疫细胞化学检测整合素β1（integrinβ1,INTβ1）、上皮钙黏蛋白（epithelial cadherin,E-cad）的表达水平,明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-2、-9的活性变化。结果：与空白对照组和正义hTR转染组相比,反义hTR转染组BEL-7402-hTR-BamHⅠ细胞的黏附、侵袭能力明显减低（0.204±0.029vs0.505±0.037、0.465±0.029,34.80±3.19vs71.47±5.15、69.87±3.11,均P〈0.05）,INTβ1表达降低（0.153±0.016vs0.385±0.008、0.375±0.014,P〈0.05）,E-cad表达增强（0.209±0.020vs0.124±0.018、0.134±0.016,P〈0.05）,MMP-2和MMP-9的活性受到明显抑制（2 054.22±138.52vs3 105.56±329.60、2 923.22±269.08,846.33±104.66vs1 538.89±122.85、1 453.33±126.35,均P〈0.05）。结论：人反义端粒酶RNA能明显减低肝癌BEL-7402细胞的黏附、侵袭能力,其机制可能与上调E-cad的表达、下调INTβ1的表达,并抑制MMP-2和MMP-9的活性有关。bFGF单抗协同替吉奥抑制肺癌Lewis细胞的增殖及移植瘤血管新生
摘要：目的：探讨碱性成纤维生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）单抗与替吉奥（gimeracil and oteracil porassi-um,又称S-1）联合应用体内外抑制小鼠Lewis肺癌细胞增殖、移植瘤生长及转移、肿瘤血管新生的协同作用。方法：CCK-8法检测bFGF单抗及S-1对Lewis细胞增殖的抑制作用。建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌自发转移瘤模型,32只小鼠随机分成生理盐水（NS）组、bFGF单抗组、S-1组和bFGF单抗＋S-1组,每组8只;测量瘤体,绘制生长曲线,称瘤质量并计算抑瘤率;计数各组肺表面转移瘤结节;CD31标记血管内皮细胞,计数转移瘤微血管密度（microvessel density,MVD）。结果：bFGF单抗、S-1剂量依赖性抑制Lewis细胞增殖（P〈0.05）,联合用药组抑制率明显高于单药组（P〈0.05或P〈0.01）。bFGF单抗组、S-1组以及bFGF单抗＋S-1组对Lewis转移瘤的抑瘤率分别为37.8%、47.7%、65.9%,联合组抑瘤率明显高于单药组（P〈0.05或P〈0.01）。联合组肺表面转移结节、微血管密度明显低于单药组（2.71±0.76vs6.57±0.98、4.71±0.76;21.6±2.9vs33.4±4.9、41.9±6.3;P〈0.05或P〈0.01）。结论：bFGF单抗联合S-1对Lewis肺癌移植瘤具有协同抑制作用,其机制与抑制细胞增殖及血管新生有关。CEA mRNA转染的成熟树突状细胞体外诱导特异性抗肿瘤作用
摘要：目的：将体外转录的癌胚抗原（carcinoembryonic antigen,CEA）mRNA转染入成熟树突状细胞（dendritic cell,DCs）,观察其体外诱导的特异性抗肿瘤作用。方法：GM-CSF、IL-4、TNF-α体外诱导成熟DCs并用流式鉴定。构建pcDNA3.1-CEA载体,体外转录为CEA mRNA,电穿孔法将CEA mRNA转染入DCs。流式细胞术检测转染后DCs中CEA蛋白的表达;MTT法检测DCs刺激T细胞增殖能力;LDH法检测DCs体外诱导的CTL的特异性抗肿瘤作用;ELISA法检测诱导的CTL上清中IFN-γ的水平。结果：CEA mRNA转染后DCs细胞内CEA蛋白显著高于对照组（83.32%vs3.34%,P〈0.01）。CEA mRNA转染组DCs在效靶比为1∶10时,刺激T细胞增殖作用最强,明显高于未转染组[（19.11±1.89）%vs（15.59±0.70）%,P〈0.05]。CEAmRNA转染组DCs能产生CEA特异性的CTL效应,在效靶比为5∶1、10∶1、20∶1和40∶1时杀伤率分别为[（5.42±0.87）%、（14.09±1.13）%、（27.16±0.72）%、（32.49±0.84）%,P〈0.01],而未转染组和对照靶细胞均无杀伤作用。转染组DCs诱导的CTL上清中IFN-γ分泌量显著高于未转染组[（141.73±28.61）vs（9.45±4.63）pg/ml,P〈0.01]。结论：CEAmRNA转染的成熟DCs体外能产生特异性抗肿瘤作用,为研制CEA RNA-DCs疫苗提供了实验依据siRNA沉默RhoC表达诱导人肝癌BEL7402细胞凋亡
摘要：目的：研究siRNA沉默RhoC基因表达对人肝癌细胞BEL7402凋亡的影响及其机制,为肝癌的基因治疗提供实验依据。方法：构建RhoC-siRNA真核表达载体pU6mRFPRhoC-siRNA,转染BEL7402细胞,激光共聚焦显微镜检测转染效率,RT-PCR和Western blotting鉴定RhoC基因沉默效果;流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳和瑞氏染色检测BEL7402细胞凋亡,RT-PCR检测细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达。结果：成功构建pU6mRFPRhoC-siRNA重组载体,转染BEL7402细胞的效率为70%,RT-PCR和Western blotting检测RhoC基因沉默效率分别为85%和82%。pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞凋亡显著高于未转染BEL7402细胞和pU6mRFP Scramble-siRNA转染组BEL7402细胞[（21.00±2.23）%vs（6.47±1.64）%、（4.63±0.47）%,P〈0.01）],pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞DNA呈典型的＂梯状＂条带,瑞氏染色见转染组BEL7402细胞中有大量凋亡细胞。pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞Bcl-2基因水平显著低于、而Bax基因水平显著高于未转染BEL7402细胞和pU6mRFP Scramble-siRNA转染组BEL7402细胞（0.28±0.15vs0.96±0.21,1.03±0.24,P〈0.05;1.09±0.21vs0.26±0.10,0.25±0.07,P〈0.01）。结论：siRNA沉默RhoC基因可诱导人肝癌BEL7402细胞凋亡,其机制与下调Bcl-2基因、上调Bax基因表达有关。TRAIL联合吉西他滨对肺癌NCI-H460细胞增殖和凋亡的影响
摘要：目的：观察吉西他滨（gemcitabine）联合TNF相关凋亡诱导配体（TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL）对人肺癌细胞NCI-H460增殖和凋亡的影响。方法：MTT法检测NCI-H460细胞的增殖,流式细胞术检测NCI-H460细胞的凋亡。结果：吉西他滨和TRAIL单用或联用均可浓度（0.00110μg/ml）和时间（24、48、72 h）依赖性抑制NCI-H460细胞的增殖,两药联用比单用时抑制率更高,3组药物作用72 h时对肿瘤的抑制率分别为14.9%77.5%、23.4%74.8%、22.3%80.5%;作用72 h时两药单用和联用对细胞增殖抑制的IC50分别为0.085 3、0.098 2、0.043 5μg/ml。两药联用对NCI-H460细胞增殖的抑制效果还与用药顺序以及两药比例有关,吉西他滨作用24 h后再加TRAIL比TRAIL作用24 h后再加吉西他滨对NCI-H460的抑制效果更好,吉西他滨与TRAIL联用的比例为1∶0.3时对NCI-H460细胞增殖的抑制率最大。吉西他滨和TRAIL联用时NCI-H460细胞的凋亡率显著高于两药单用的凋亡率（49.04%vs29.33%、25.69%,P〈0.01）。结论：吉西他滨与TRAIL联用可协同抑制肺癌细胞NCI-H460的增殖、促进细胞凋亡。人外周血γδT细胞CD107a的表达变化与细胞毒活性的关系
摘要：目的：探讨人外周血γδT细胞体外诱导过程中CD107a的表达变化及其与γδT细胞细胞毒活性的关系。方法：分离健康人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）,加入含有IL-2和异戊烯焦磷酸（isopentenyl pyro-phosphate,IPP）的培养基,体外诱导γδT细胞。分别在第7、10、14天以流式细胞仪对培养的γδT细胞进行鉴定,并同时检测其CD107a、穿孔素和颗粒酶B的表达。CCK-8试剂盒检测γδT细胞对胰腺癌细胞SW-1990的杀伤效应。采用SPSS13.0软件进行spearman相关分析。结果：在培养的第7、10、14天,γδTCR阳性细胞分别为（60.31±3.84）%、（66.45±4.25）%、（70.99±4.66）%。CD107a、穿孔素和颗粒酶B的表达在γδT细胞培养第710天达到峰值后呈下降趋势,第7天与第0天相比差异有统计学意义[（80.66±4.42）%、（70.11±3.34）%、（94.26±4.25）%vs（69.02±5.04）%、（62.31±4.66）%、（53.62±3.69）%,P〈0.05]。培养第7天、第10天的γδT细胞对SW-1990细胞杀伤率显著高于第14天的γδT细胞[（58.86±5.12）%、（61.53±4.69）%vs（40.31±4.83）%,P〈0.05]。γδT细胞CD107a表达与穿孔素、颗粒酶B、其对SW-1990细胞杀伤效应显著相关（r=0.853,r=0.785,r=0.839,均P〈0.01）。结论：人外周血γδT细胞CD107a的表达与其抗肿瘤能力正相关,可能是γδT细胞细胞毒活性的一个标志。正确使用数的修约规则
摘要：在生物医学领域的各种研究中，对实验测定和计算所得的数据往往都要进行修约。过去习惯使用“四舍五入法”进行数的修约，该方法是不正确的，我们应将其废除。根据国家标准《出版物上数字用法的规定》，数的修约应遵照“四舍六人”的法则进行，具体介绍如下：（1）数的修约规则的简明口诀：4舍6入5看后，5后有数便进1，5后为0看左数，左数奇进偶舍弃。大规模平行测序技术筛选人肾细胞癌组织中差异表达microRNAs及其验证
摘要：目的：以大规模平行测序技术（massively parallel signature sequencing,MPSS）筛选人肾细胞癌（renal cell carcinoma,RCC）和癌旁组织中差异表达的microRNAs（miRNAs）,并验证差异表达miRNAs之一的miR-660在人RCC中的表达。方法：MPSS检测10例RCC组织及相应癌旁组织中miRNAs的表达,筛选RCC组织中差异表达miRNAs。RT-PCR检测5例RCC与癌旁组织中miR-660的表达,qPCR检测40例RCC与癌旁组织中miR-660的表达。结果：MPSS结果显示,RCC组织中283个miRNAs表达下调,187个表达上调,其中miR-660在RCC组织中表达量是癌旁组织的17.5%。RT-PCR初步验证了此结果;qPCR验证结果显示,40例RCC组织中33例miR-660表达显著低于癌旁组织,RCC组织中miR-660平均表达量是癌旁的19.5%。结论：人RCC组织中283个miRNAs表达下调、187个上调。miR-660在RCC组织中低表达,有可能成为RCC诊断及治疗的新靶点抗癌药物：阻断磷脂与蛋白质的相互作用
摘要：磷酸肌醇3激酶（PI3K）信号转导在肿瘤中经常发生异常,因此很多治疗策略都聚焦在PI3K途径,侧重于下游靶分子如Akt的抑制剂等。Miao的研究小组研究了一种新的调节途径,即通过阻断关键磷脂与蛋白质的相互作用,来抑制小鼠肿瘤模型中肿瘤的生长。
