肝细胞癌的诱导分化治疗
摘要：肝细胞癌是最常见的恶性肿瘤之一,虽然其诊断和治疗有不少进展,但其预后仍较差,病死率较高。诱导分化治疗这一概念的提出为肝细胞癌的治疗指明了新的方向。诱导分化治疗在血液系统肿瘤治疗方面获得了成功,其经典范例是全反式维甲酸临床治疗急性早幼粒白血病;但是其在恶性实体肿瘤领域的进展远不如血液系统肿瘤。目前特异性的肝细胞癌诱导分化剂较少,相关的临床应用更是有限。靶向性地针对肿瘤干细胞分化相关的信号转导通路或转录因子进行干预可能起到诱导肝细胞癌分化的效果,例如通过上调与肝细胞分化密切相关的转录因子肝细胞核因子4α（hepatocyte nuclear factor4α,HNF4α）来诱导肝癌细胞,特别是诱导肝癌干细胞向成熟阶段分化,已初见成效。肿瘤发生发展过程中存在诸多表观遗传学异常改变,如甲基化、乙酰化水平异常或microRNA表达异常,有些改变与肿瘤分化密切相关,干预这些异常改变的药物如组蛋白去乙酰化酶抑制剂对肿瘤起到一定的诱导分化作用。因此,肿瘤干细胞学说的出现及表现遗传学的发展给肝细胞癌诱导分化治疗研究提供了具体的途径。CD103^-CD11b^hiDC通过CD70途径交叉提呈流感病毒抗原
摘要：何种类型的DC对呼吸道中的抗原作出反应，并将抗原交叉提呈给CD8T细胞一直是一个争论不休的问题。按整合素CD103和CD11b的表达情况，肺中的DC一般可分为两类：CD103^-CD11b^hiDC，主要定位在气管的黏膜下层；CD103^-CD11b^hiDC，主要存在于气管黏膜的上皮细胞之间。长期以来，对早已发现的这两群DC的功能并不明确。经典DC分泌IL-10减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤
摘要：Toll样受体（Toll—like receptor，TLR）属于模式识别受体家族，可经细菌特定成分或其他特定分子激活，组成防御多种病原体的首道屏障，在天然免疫中发挥重要作用。TLRs通过识别受损宿主细胞释放的危险信号相关模式分子，启动炎症级联反应，从而加重组织损伤。I／R损伤是一个复杂的病理生理过程，血流的阻断及氧运输的减少导致炎症反应并最终引起器官损伤。MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白的制备及其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用
摘要：目的：构建MDA-7/IL-24-HT7原核及真核表达质粒,制备MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白,研究该融合蛋白在肿瘤细胞内的定位及其对肿瘤细胞致凋亡作用。方法：PCR扩增MDA-7/IL-24基因,插入含有HaloTag（HT7）标签的载体中,构建MDA-7/IL-24-HT7原核及真核表达质粒;MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白经IPTG诱导表达后纯化。利用带有荧光标记的HT7配基观察MDA-7/IL-24-HT7在肿瘤细胞内的定位。MTT法及AnnexinV-PI染色法检测MDA-7/IL-24-HT7对肿瘤细胞生长和凋亡的影响。结果：成功构建了表达MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白的原核及真核表达质粒,MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白主要存在于E.coliBL21的包涵体内。MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白定位于肿瘤细胞的内质网上。MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白可抑制肿瘤细胞的生长,1mg/mlMDA-7/IL-24-HT7融合蛋白作用大肠癌HCT116细胞、肝癌SMMC7721细胞96h后,细胞凋亡率分别为（34.7±1.3）%和（22.1±0.9）%,显著高于未处理的肿瘤细胞（P〈0.01）。结论：带有HaloTag标签的MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白可抑制肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡。干扰mTOR表达增强食管鳞癌EC9706细胞对雷帕霉素的敏感性
摘要：目的：观察哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）特异性小干扰RNA（mTOR-siRNA）干扰mTOR表达后,食管鳞癌EC9706细胞对雷帕霉素（rapamycin）敏感性的变化。方法：mTOR-siRNA转染EC9706细胞,RT-PCR检测干扰效果。mTOR-siRNA转染前后的EC9706细胞用雷帕霉素处理,Western blotting检测EC9706细胞中mTOR及其下游p70S6K蛋白的表达;流式细胞术检测EC9706细胞的周期及凋亡,CCK-8试剂盒检测EC9706细胞的增殖。结果：mTOR-siRNA下调EC9706细胞中mTOR mRNA的表达（P〈0.05或P〈0.01）;雷帕霉素抑制EC9706细胞中mTOR和p-p70S6K蛋白的表达（P〈0.05）,并促进p70S6K蛋白表达（P〈0.01）,且mTOR-siRNA转染后此作用更明显（P〈0.05）。雷帕霉素可诱导EC9706细胞凋亡（P〈0.01）、抑制EC9706细胞增殖（P〈0.05或P〈0.01）、使EC9706细胞阻滞于G1期（P〈0.01）,且mTOR-siRNA转染后这些作用更强（P〈0.05）。结论：mTOR-siRNA能特异性下调食管鳞癌EC9706细胞中mTOR表达,提高EC9706细胞对雷帕霉素的敏感性。RNA干扰沉默PIN1对肺癌A549细胞增殖、细胞周期和成瘤的影响
摘要：目的：应用RNA干扰技术沉默肺癌A549细胞中PIN1（protein interacting with N1MA1）基因的表达,探讨其对A549细胞增殖、细胞周期和裸鼠成瘤能力的影响。方法：构建靶向PIN1基因的shRNA真核表达质粒pGPU6-GFP-Neo-PIN1和无义对照质粒pGPU6-GFP-Neo,以脂质体法转染A549细胞,G418筛选稳定沉默PIN1基因的细胞株。Real-time PCR和Western blotting验证PIN1基因在mRNA和蛋白水平的表达,MTT法和流式细胞术检测A549细胞增殖和细胞周期分布。将稳定沉默PIN1的A549细胞与对照细胞皮下接种裸鼠,观察接种后肿瘤生长情况。结果：成功构建了pGPU6-GFP-Neo-PIN1载体,转染A549细胞并筛选获得稳定克隆。稳定转染pGPU6-GFP-Neo-PIN1的A549细胞中PIN1mRNA表达量较pGPU6-GFP-Neo转染组下降了89.3%;蛋白表达同时也显著抑制。PIN1基因沉默组的A549细胞增殖速率明显下降（P〈0.01）,细胞出现G1期阻滞。小鼠体内实验显示,PIN1沉默的A549细胞在裸鼠体内成瘤能力降低（P〈0.01）。结论：pGPU6-GFP-Neo-PIN1质粒稳定转染肺癌A549细胞能有效沉默PIN1基因的表达,从而抑制A549细胞的增殖、影响细胞周期和抑制成瘤能力。RNA干扰CXCR4表达抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、黏附和迁移
摘要：目的：构建CXC趋化因子受体4（CXC chemokine receptor4,CXCR4）RNA干扰真核表达载体,研究其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、黏附及迁移能力的抑制作用。方法：构建针对CXCR4的带发夹结构的小RNA干扰序列,并连接到pGCsi-U6-Neo-GFP载体中,转染293T细胞,筛选出干扰效率最高的表达载体。脂质体法转染MDA-MB-231细胞。利用CCK8法、细胞-基质黏附实验和划痕修复实验检测shRNA干扰CXCR4表达对MDA-MB-231细胞增殖、黏附和迁移能力的影响。结果：成功构建CXCR4-shRNA重组质粒,并转染293T细胞,利用RT-PCR及Western blotting检测发现CXCR4沉默效率最高可达81.3%。CXCR4-shRNA转染能显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖（P〈0.05）以及细胞与细胞外基质的黏附（P〈0.05）。CXCR4-shRNA转染组MDA-MB-231细胞的迁移距离明显低于对照质粒组和空白对照组（P〈0.01）。结论：CXCR4-shRNA干扰载体能特异性抑制CXCR4的表达,从而抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、黏附及迁移。Rac1b siRNA对胃癌AGS细胞中血管生成相关分子表达的影响
摘要：目的：研究小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）抑制Rac1b表达后对胃癌AGS细胞血管生成相关分子表达的影响。方法：体外合成针对Rac1b基因的siRNA序列（Rac1bsiRNA）,脂质体法转染AGS细胞,RT-PCR和Western blotting观察Rac1b siRNA对AGS细胞Rac1b mRNA和蛋白水平表达的影响,ELISA和Western blotting检测缺氧条件下转染Rac1b siRNA后AGS细胞培养上清中VEGF表达水平以及细胞中血管生成相关分子P53、VHL和HIF-1α表达水平的变化。结果：测序证实体外合成的Rac1b siRNA序列正确。Rac1b siRNA转染AGS细胞后,可在mRNA和蛋白水平特异性抑制Rac1b的表达,对其同源分子Rac1的mRNA和蛋白表达水平无影响。Rac1bsiRNA可显著抑制AGS细胞培养上清中VEGF的分泌,这种抑制作用在缺氧情况下更为明显。同时,Rac1bsiRNA在缺氧情况下可抑制AGS细胞内HIF-1α蛋白的表达、上调p53和VHL蛋白的表达。结论：Rac1b siRNA可抑制胃癌AGS细胞中Rac1b在mRNA和蛋白水平的表达,可能通过调节血管生成相关分子HIF-1α、P53及VHL的表达抑制缺氧情况下AGS细胞VEGF的分泌。雌二醇通过let-7a和miR-125b的协调调节而抑制人巨噬细胞中NF-κB的激活
摘要：miRNA在动物及人类中广泛存在,并且与发育、分化、凋亡、脂肪代谢、病毒感染和癌症等多种重要生物学过程有联系。虽然在不同的时空发育阶段miRNA的表达量不同,但是多种miRNA在同一个细胞中的表达使得细胞处在一种内在的miRNA环境中,这个环境控制着成千上万的编码基因的mRNA水平,使得各种蛋白的表达处在一个适度水平。PHA-CD3AK细胞的制备及其对恶性肿瘤的疗效
摘要：目的：探讨植物血凝素（PHA）、抗CD3单克隆抗体（anti-CD3McAb）和rhIL-2共同诱导的PHA-CD3AK（PHA-CD3McAb actinated killer cell）细胞的临床应用质量控制,及其对恶性肿瘤的疗效。方法：选取陕西省友谊医院肿瘤生物诊疗科53例中晚期肿瘤患者（宫颈癌9例,肺癌6例,肾癌6例,非霍奇金淋巴瘤5例,肝癌5例,胃癌7例,食道癌5例,恶性黑素瘤5例,直肠癌5例）,分离患者外周血单个核细胞,加入PHA、anti-CD3McAb、rhIL-2体外诱导制备自体PHA-CD3AK细胞。质量控制检测细胞数量和活细胞比例、细胞毒活性、内毒素和感染源,流式细胞术检测免疫表型。将检测合格的自体PHA-CD3AK细胞静脉回输至患者体内,每2d回输1次,每疗程6次,共2个疗程,观察治疗效果和不良反应。结果：制备的PHA-CD3AK细胞符合预期免疫活性细胞质控的各项要求。治疗后患者外周血CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋T细胞和CD16^＋56^＋细胞（NK细胞）比例分别为（49.36±9.21）%、（34.85±4.35）%、（29.20±5.12）%和（21.15±6.50）%,较治疗前均显著升高（均P〈0.05）。大部分患者治疗后全身症状明显改善（43/53）,其中完全缓解6例、部分缓解14例、微效10例、稳定14例、进展9例,总有效率达56.6%,临床受益率达83.0%。所有患者治疗后相关化验指标均未出现异常变化,也未出现明显的全身毒性反应。结论：PHA-CD3AK细胞制剂质量控制指标切实可行,其对恶性肿瘤的疗效确切,并能有效提高患者的免疫功能。PA-MSHA疫苗增强急性髓细胞白血病源DC对Treg的抑制作用
摘要：目的：探讨带有甘露糖敏感血凝菌毛的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosawith mannose sensitive hemagglutina-tion pili,PA-MSHA）疫苗处理后急性髓细胞白血病源性树突状细胞（dendritic cells derived from acute myeloid leukemia,AML-DC）对调节性T细胞（regulatory Tcell,Treg）的抑制作用。方法：rhGM-CSF和rhII-4诱导的AML-DC分为对照组、PA-MSHA组和TNF-α组,培养24h后观察3组AML-DC的形态、流式细胞术检测各组AML-DC的表型、MTT法和混合淋巴细胞反应检测AML-DC对淋巴细胞增殖的作用。磁珠法分离健康人外周血CD4^＋T细胞,加入各组AML-DC中诱导Treg,ELISA法检测各组Treg上清液中IL-10、TGF-β的水平,流式细胞术检测Treg表面CD4、CD25的表达,RT-PCR法检测Treg中Foxp3mRNA的表达水平。结果：PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC呈树突状形态,且CDla、CD80、CD83、CD86和HLA-DR表达较对照组明显升高（P〈0.05）。PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC诱导的T细胞增殖能力显著增强（P〈0.05）。PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC诱导产生的Treg分泌较低水平的IL-10、TGF-β（P〈0.05）,CD4、CD25的表达及Foxp3mRNA水平均较对照组明显降低（P〈0.05）。上述各指标PA-MSHA组和TNF-α组间均无明显差异。结论：PA-MSHA疫苗可促进AML-DC的成熟,抑制初始T细胞向Treg的分化,增强AML-DC对AML患者Treg的抑制作用。乳腺癌各分子亚型中骨桥蛋白的表达及其临床意义
摘要：目的：研究骨桥蛋白（osteopontin,OPN）在乳腺癌各分子亚型中的表达及其临床意义。方法：收集2000年1月至2003年12月第二军医大学长海医院的99例乳腺癌组织标本,免疫组织化学法检测ER（estrogen receptor）、PR（progesteronereceptor）和HER-2（human epidermal growth factor receptor-2）的表达,并据此将乳腺癌患者分为luminal A型、luminal B型、HER-2过表达型和基底细胞样型。免疫组织化学法测定各分子亚型乳腺癌组织中OPN的表达情况,并分析OPN表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系。结果：根据ER、PR和HER-2的不同表达情况,99例乳腺癌患者中luminal A型45例、luminal B型27例、HER-2过表达型14例、基底细胞样型13例。OPN在luminal A型、luminal B型、HER-2过表达型和基底细胞样型中表达率分别为22.2%、29.6%、71.4%和61.5%,HER-2过表达型和基底细胞样型乳腺癌组织中OPN表达率均高于luminal A型和luminal B型（P〈0.01）。OPN低表达的乳腺癌患者生存率高于OPN高表达者,两者差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：OPN在基底细胞样型和HER-2过表达型乳腺癌组织中高表达,其表达可作为乳腺癌预后的评估指标之一。IL-7在自身免疫性疾病中对Th17细胞存活和扩增有重要作用
摘要：多发性硬化病（multiple sclerosis,MS）是一种中枢神经系统慢性炎症和脱髓鞘的自身免疫性疾病,实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalitis,EAE）则是对应于MS的小鼠模型。最近的研究表明,Th17细胞在该病中起着重要的作用。虽然发现一些因子对Th17细胞的分化具有调控和诱导作用,但对维持体内分化的Th17细胞的机制则知之甚少。结直肠癌中RASSF1A启动子甲基化与Cyclin D1和P53表达的关系
摘要：目的：检测结直肠癌组织中Ras相关区域家族1A（ras-association domain family1A,RASSF1A）基因启动子甲基化以及Cyclin D1和P53蛋白的表达,分析它们与结直肠癌临床病理特征的关系。方法：收集2008年8月至2009年8月长海医院病理科37例结直肠癌组织和14例癌旁组织（癌灶边缘5cm以外组织）标本。甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP）检测结直肠癌组织中RASSF1A基因启动子的甲基化,免疫组织化学法检测结直肠癌组织中Cyclin D1和P53蛋白的表达,分析RASSF1A启动子甲基化、Cyclin D1和P53表达的关联性以及三者与结直肠癌临床病理特征的相关性。结果：37例结直肠癌组织中RASSF1A启动子甲基化有23例（62.16%）,14例癌旁组织中RASSF1A启动子甲基化有12例（85.71%）;37例癌组织中Cyclin D1阳性14例（37.84%）、P53阳性15例（40.54%）,14例癌旁组织中Cyclin D1和p53表达均为阴性。直肠癌组织中RASSF1A启动子甲基化阳性率高于结肠癌（P〈0.05）。结直肠癌患者年龄与Cyclin D1表达呈负相关（P〈0.05）,淋巴结转移与P53表达呈正相关（P〈0.05）。结直肠癌组织中RASSF1A启动子甲基化与Cyclin D1和P53的表达无相关性。结论：RASSF1A启动子甲基化、Cyclin D1和P53蛋白表达三者的联合检测对研究结直肠癌的发生、发展有一定意义。IRAK-2诱导TRAF6泛素化介导TLRs活化NF-κB
摘要：IL-1受体相关激酶（interleukin-1receptor associated kinases,IRAKs）参与TLRs信号转导通路。目前已经发现4种IRAKs：IRAK-1、IRAKs-2、IRAKs-4和IRAKs-M。一直以来,IRAK-1被认为在TLRs诱导的NF-κB活化中起决定作用。但是Keating等最近发现,IRAK-1在某些TLRs诱导的NF-κB和IRF（interferon regulatory factor）活化中并非必须,IRAK-2则起着较IRAK-1更重要的作用。化学元素和核素符号规范书写的要求
摘要：化学符号虽然是化学专业的学术交流语言，但在生物医学领域也有很广泛的使用。化学符号的书写有其特殊的规律和要求，生物医学论文中必须重视化学符号书写的规范化。根据GB3102．8—93《物理化学和分子物理学的量和单位》的规定，把化学元素和核素符号书写的规范要求介绍如下：调控VEGF的转录因子及其与肿瘤的关系
摘要：肿瘤血管生成在肿瘤发生发展中起重要作用。肿瘤血管生成是一个多因素调控的复杂过程,血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）在肿瘤血管生成中起核心作用。VEGF的表达受细胞遗传特性和肿瘤微环境中众多因素的影响,涉及转录、翻译和翻译后等多个环节,但通过转录因子对VEGF的转录进行调控是其最主要途径。本文阐述了与VEGF转录关系最密切的5个转录因子（Sp1、HIF-1、AP-1、Stat3和NF-κB）,并对其与肿瘤的关系进行了分析。实际上这些转录因子的下游靶标除了VEGF外,还包括其他的血管生成促进因子（如PDGF、FGF）。因此,以这些转录因子为靶标的生物治疗可能是有效的肿瘤抗血管治疗策略。放射治疗联合EGFR靶向抑制剂治疗晚期局部非小细胞肺癌的研究进展
摘要：晚期局部不可切除非小细胞肺癌的标准治疗是联合放化疗。然而部分患者难以耐受，且联合放化疗的疗效似乎已达“平台期”。表皮生长因子（epidermal growth factor receptor，EGFR）抑制剂可通过降低S期和提高G2／M期肿瘤细胞的比例、抑制EGFR转导通路中的多级磷酸化和抑制肿瘤细胞的增殖等途径，发挥对放疗的增敏作用。EGFR酪氨酸激酶抑制剂（如吉非替尼、厄洛替尼等）联合化放疗的初步临床研究显示出一定的疗效优势，但是在维持治疗中的作用尚不明确。西妥昔单抗与放化疗联合的临床研究提示患者中位生存期和2年生存率高于单纯放化疗，有必要进一步开展临床Ⅲ期随机试验。总之，EGFR抑制剂与放疗或放化疗的联合治疗晚期局部不可切除非小细胞肺癌具有一定的潜力，值得进一步深入研究。
