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中国肿瘤生物治疗 2009年第06期杂志 文档列表

中国肿瘤生物治疗杂志专家论坛

肿瘤转移干细胞与抗转移策略547-556

摘要：肿瘤干细胞（cancer stem cell，CSC）能自我更新，分化形成异质性的肿瘤子代细胞群．是肿瘤复发与转移的主要原因。肿瘤转移干细胞（metastatic cancer stemcell，MCSC）具有CSC特性，同时伴有转移能力。肿瘤转移既发生于肿瘤晚期，也发生于早期。MCSC在起源、上皮-间质转变（epithelial-mesenchymal transition，EMT）、间质-上皮转变（mesenchymal—epithelial transition，MET）和靶器官小生境（niche）等方面与CSC不同，因而MCSC是肿瘤转移的基础。杀灭CSC、阻断EMT和MET、抑制MCSC微血管黏附和阻断MCSC依赖的小生境可构建抗肿瘤转移的治疗策略。本文主要介绍MCSC的可能来源，MCSC的生物学特性，MCSC近期研究中可能取得的突破，以及针对MCSC的抗转移策略．为肿瘤转移机制研究和抗转移研究提供参考。

中国肿瘤生物治疗杂志研究快报

吉西他滨化疗联合树突状细胞瘤内注射对小鼠巨大淋巴瘤的治疗作用557-563

摘要：目的：观察吉西他滨对荷B细胞淋巴瘤小鼠脾脏中髓源抑制性细胞（myeloid derived suppressorcell，MDSC）的影响，以及吉西他滨化疗联合树突状细胞（dendriticceils，DCs）治疗巨大淋巴瘤的疗效。方法：小鼠皮下接种A20淋巴瘤细胞，30d后形成巨大肿瘤，流式细胞仪分析吉西他滨化疗前后荷瘤小鼠脾脏中Gr-1＊CD11b＊MDSC的比例，免疫磁珠纯化的脾脏MDSC体外加入吉西他滨共培养后，Annexin—V／PI标记法检测细胞凋亡；观察荷瘤小鼠接受吉西他滨化疗联合DCs瘤内注射后肿瘤生长情况及小鼠存活期。结果：荷A20淋巴瘤小鼠脾脏中MDSC的比例显著上调，是正常小鼠脾脏中的10倍以上：体外吉西他滨时间依赖性诱导MDSC凋亡与坏死；荷瘤小鼠体内注射吉西他滨后，脾脏中绝大部分的MDSC被清除。单独吉西他滨注射或DCs瘤内注射对肿瘤生长产生一定的抑制作用，小鼠平均存活天数分别为（48．8±3．6）d和（47．2±7．4）d，而对照组小鼠平均存活天数为（38．8±2．2）d；吉西他滨化疗联合DCs瘤内注射后瘤体持续显著缩小，60％小鼠存活时间均超过90d：结论：吉西他滨可有效清除荷瘤小鼠脾脏MDSC，吉西他滨化疗与DCs瘤内注射免疫治疗具有协同效应，可以提高对巨大淋巴瘤的疗效，本实验为应用生物化疗综合治疗模式治疗复发、难治性淋巴瘤提供了实验依据。

中国肿瘤生物治疗杂志科技动态

Peli1分子促进TRIF依赖的TLR信号和炎性细胞因子的产生563-563

摘要：近年来，关于天然免疫（innate immunity）的识别机制成为了一个研究热点，其主要涉及抗原提呈细胞（DCs、B细胞以及巨噬细胞）、NK细胞、粒细胞等如何识别病毒、细菌等病原体感染以及随后触发的免疫与炎症过程和相关调控机制。

中国肿瘤生物治疗杂志专题报道：肺癌生物治疗的基础研究

突变型K-ras siRNA抑制肺癌A549细胞的增殖和迁移并诱导细胞凋亡564-569

摘要：目的：构建靶向K-ras的siRNA，研究K—rassiRNA对K-ras基因突变型肺癌细胞A549及K-ras野生型小细胞肺癌细胞NCI—H446生长和迁移的抑制作用。方法：设计并人工合成4条K．rassiRNA（针对野生型K-ras基因的K—rassiRNA1-K—rassiRNA3；针对突变型K-ras基因的K—rassiRNA4），并分别转入A549和NCI—H446细胞。RT—PCR和Westernblotting检测不同K—rassiRNA对K—rasmRNA和蛋白表达的影响，MTr法检测不同K—rassiRNA对A549和NCI—H446细胞增殖的抑制作用。Transwell实验和Hoechst33258染色检测K—rassiRNA对细胞迁移和凋亡的影响。结果：靶向突变型K-ras的K．rassiR—NA4能特异性抑制A549细胞中K-ras的表达，但对N-ras和H-ras的表达没有影响。K—rassiRNA4抑制A549细胞的增殖，但不影响含野生型K-ras基因的NCI—H446细胞的增殖。K—rassiRNA4还能诱导A549细胞凋亡、抑制A549细胞迁移。结论：针对突变型K-ras基因的siRNA可特异性抑制K-ras突变型肺癌细胞的增殖和迁移，并诱导该细胞凋亡，K—rassiRNA可望用于K-ras突变型肿瘤特别是肺癌的个体化治疗。

阻断表皮生长因子受体和环氧合酶-2信号途径对肺腺癌细胞的抗增殖作用570-576

摘要：目的：探讨表皮生长因子受体抑制剂吉非替尼（gefitinib）联合新型环氧合酶．2（cyclooxygenase-2，COX-2）抑制剂塞来昔布（celecoxib）对肺腺癌A549细胞株的抑制作用及其可能机制。方法：肺腺癌A549细胞培养于RPMI1640培养液中，实验分为正常对照组、吉非替尼5μmol／L组、塞来昔布25Ixmol／L组、吉非替尼5μmol／L加塞来昔布25μmol／L组。药物干预细胞48h后，倒置相差显微镜观察细胞形态学变化，锥虫蓝拒染法检测药物对细胞生长的影响，AnnexinV／PI法和Ho．echsG3258染色法检测细胞凋亡，流式细胞术检测药物作用周期，免疫荧光和Real—time PCR法检测EGFR、COX-2蛋白的表达及EGFRmRNA的表达情况。结果：吉非替尼联合塞来昔布组相比单药组，A549细胞明显出现大量颗粒和空泡，细胞变圆并开始脱落。吉非替尼与塞来昔布单药对A549细胞抑制作用具有时间和剂量依赖性，加药48h时吉非替尼（5μmol／L）联合塞来昔布（25μmol／L）组抑制率为（58．2±4．6）％，明显高于单药组（P〈0．01）。联合用药组A549细胞凋亡率明显高于单独用药组（33．9％抛6．0％，8．8％），其S期细胞明显减少、G0／G1期明显增加（P〈0．01）；EGFR、COX-2蛋白的表达明显减弱（P〈0．05），EGFRmRNA相对表达量（0．284-0．05）明显高于单独用药组（P〈0．05）。结论：吉非替尼和塞来昔布联合对肺腺癌A549细胞增殖的抑制具有明显协同作用，其可能机制是诱导凋亡、增强G0／G1期阻滞和进一步下调活化的EGFR与COX-2的表达。

中国肿瘤生物治疗杂志科技动态

miR-15a和miR-16在前列腺癌中的作用576-576

摘要：在前列腺癌中存在有部分13号染色体长臂基因组序列的缺失，而miR-15a和miR-16即表达于此段基因组中。该文作者发现，miR-15a和miR-16在前列腺癌中表达明显降低，并且miR-15a和miR-16对于前列腺癌的增殖、凋亡、细胞周期、迁移、侵袭和贴壁非依赖的生长均有作用，具体表现为miR-15a和miR-16能够抑制前列腺癌细胞的增殖、促进凋亡、阻滞细胞周期、减少迁移和侵袭、降低贴壁非依赖的生长，即miR-15a和miR-16表现为明显的抑癌基因特点。

中国肿瘤生物治疗杂志专题报道：肺癌生物治疗的基础研究

受体依赖性TRAIL重组腺病毒对人肺癌细胞凋亡的诱导作用577-582

摘要：目的：观察重组TRAIL腺病毒（Ad5-TRAIL及Ad5F35-TRAIL）对人非小细胞肺癌（nonsmall—cell lung cancer，NSCLC）原代培养细胞和细胞株的凋亡诱导作用，探讨两种Ad—TRAIL用于肺癌基因治疗的价值。方法：采用流式细胞术检测人肺癌细胞系A549、Z793、QG56和NCI—H520及10例原代培养肺癌细胞中CAR和CD46的表达水平；分别以Ad5-TRAIL及Ad5F35-TRAIL重组腺病毒按MOI10和50感染上述细胞，48h后AnnexinV—FITC双标法流式细胞术检测细胞的早期凋亡。结呆：A549、Z793、QG56和NCI．H5204株肺癌细胞中，CIM6的表达均明显高于CAR表达。Z793、QG56细胞对Ad5-TRAIL和Ad5F35．TRAIL的作用较敏感，MOI=10感染后凋亡率分别为（11．76±2．10）％、（15．96±2．89）％和（6．05±1．58）％、（10．11±1．26）％，显著高于对照组[（2．33±0．37）％和（5．95±1．89）％，P〈0．05]；MOI：50感染时NCI．H520细胞凋亡率分别为（12．89±3．2）％和（9．08±1．35）％，与对照组（7．04±2．17）％相比差异无统计学意义（P〉0．05）；Ad5-TRAIL和Ad5F35-TRAIL均不能诱导A549细胞凋亡。10例原代肺癌细胞CD46表达也明显较CAR高；Ad5-TRAIL或Ad5F35-TRAIL感染后，5例的原代肺癌细胞检测到凋亡；与Ad5-TRAIL相比，Ad5F35-TRAIL诱导的凋亡率更高。结论：两种TRAIL重组腺病毒对非小细胞肺癌细胞均有凋亡诱导作用，Ad5F35-TRAIL的作用强于Ad5-TRAIL，更适合于非小细胞肺癌的基因治疗。

Survivin-siRNA抑制肺癌A549细胞的增殖并增强其对顺铂的敏感性583-587

摘要：目的：构建靶向存活素（survivin）的干扰RNA（siRNA）质粒，观察其对A549细胞增殖、凋亡以及顺铂敏感性的影响。方法：应用pSilencer—U6质粒构建survivin—siRNA干扰质粒，RT—PCR和Westernblotting检测survivinmRNA和蛋白的表达，DAPI染色法检测细胞的凋亡，MTT法检测细胞的增殖。结果：成功构建了survivin．siRNA干扰质粒。Survivin—siRNA质粒转染可明显下调A549细胞中survivinmRNA和蛋白的表达、抑制A549细胞的增殖、促进细胞的凋亡、增强A549细胞对顺铂的敏感性。结论：Survivin—siRNA沉默survivin在肺癌细胞中的表达能够抑制肿瘤细胞的增殖、促进细胞凋亡．并能增强肿瘤细胞对化疗药物顺铂的敏感性，survivin可作为肺癌治疗的潜在靶点。

中国肿瘤生物治疗杂志基础研究

活体荧光成像评估Ag85A和Ag85B DNA疫苗对小鼠膀胱癌移植瘤的疗效588-594

摘要：目的：运用活体红色荧光成像技术及影像学特征评估Ag85ADNA疫苗和Ag85BDNA疫苗对膀胱癌的免疫治疗效果。方法：构建稳定转染香菇珊瑚红色荧光蛋白（discosomasp red fluorescent protein，DsRed）基因的小鼠膀胱癌B订细胞（BTT-DsRed），建立BTT—DsRed细胞移植瘤小鼠模型，将建模成功的24只小鼠随机分为pVAX1-Ag85ADNA疫苗组、pVAX1-A鹋5BDNA疫苗组和生理盐水治疗组，各组分别于肿瘤细胞接种后的第6天肌内注射pVAX1-Ag85A、pVAX1-Ag85B及生理盐水，然后用活体荧光成像系统检测移植瘤的生长和转移情况。结果：成功制备了稳定转染DsRed基因的B1Tr—DsRed细胞，BTT—DsRed接种小鼠建立可视化红色荧光膀胱癌移植瘤模型。重组质粒pVAX1-Ag85A和pVAX1-AgS5B治疗后的第2周，活体荧光成像显示pVAX1-As85B治疗组小鼠肿瘤荧光强度明显低于生理盐水组（P〈0．05）；治疗后第3周，pVAX1-Ag85A和pVAX1-Ag85B组小鼠肿瘤荧光强度都明显低于生理盐水组（P〈0．01），但pVAX1-Ag85B与pVAX1-Ag85A组无明显差别（P〉0．05）；pVAX1-Ag85B组小鼠淋巴结转移率（25．0％）明显低于生理盐水组（87．5％，P〈0．01）和pVAX1-Ag85A组（62．5％，P〈0．05）。结论：应用活体红色荧光成像技术能够动态、灵敏、可视化地评估DNA疫苗对小鼠膀胱癌移植瘤的疗效；Ag85A和Ag85BDNA疫苗均具有抗肿瘤免疫疗效。

中国肿瘤生物治疗杂志科技动态

细胞因子IL-21在慢性感染和T细胞衰竭中的作用594-594

摘要：HBV、HCV和HIV等病毒的慢性感染长期困扰着免疫学家。病毒特异性CTL细胞（cytotoxic Tlymphocytes）的衰竭被认为是机体不能有效清除病毒的重要机制，即CTL细胞功能耗竭，处于一种不反应的状态，不能增殖，不能分泌细胞因子（IL-2、IFN-y、TNF—α等）和杀伤感染细胞。在这过程中，如果缺失了CD4＋T细胞将导致更加严重的CTL细胞衰竭，然而其具体机制还不清楚。论文作者研究发现，在慢性感染中，CD4＋T细胞分泌的IL-21能够作用于CD8＋T细胞，促进其增殖，从而维持长期有效的抗病毒免疫。

中国肿瘤生物治疗杂志基础研究

胞嘧啶脱氨酶基因突变体D314A对人结肠癌细胞的抑制作用595-599

摘要：目的：构建大肠埃希菌胞嘧啶脱氨酶（E．colicytosine deaminase，EC—CD）基因突变体D314A（即EC—CD基因开放阅读框第314位氨基酸由天冬氨酸突变为丙氨酸）并研究其抗肿瘤作用。方法：构建含EC—CD基因的真核表达质粒pcDNA3．1-CDwt应用点突变技术将pcDNA3．1-CD中EC-CD基因开放阅读框第314位氨基酸的碱基由A突变为C，即构成pcDNA3．1-CDD314A。用LipofectamineTM2000将Ec—CD基因或D314A基因转入人结肠癌细胞系LoVo细胞，以G418筛选出稳定表达的阳性克隆LoVo—CDWT及LoVo．CDD314A。应用MTT法检测EC—CD基因及D314A基因对LoVo细胞的直接杀伤作用及旁观者效应。结果：成功构建EC—CD基因突变体D314A并经测序确认。LoVo细胞转染EC—CD基因及D314A基因后均能表达相应的mRNA，Lovo．CDD314A细胞对5-FC的IC50。为（85．13±0．60）mmol／L，显著低于LoVo—CDwt细胞的（689．76±0．45）μmol／L，（P=0．000）；在旁观者试验中，当LoVo—CDwt细胞和LoVo—CDD314A细胞比例均为30％时，细胞存活率分别为（48．5±0．49）％与（17．34-0．40）％（P=0．000）。结论：EC—CD基因突变体D314A的抗LoVo细胞作用显著强于野生型EC—CD基因，有望成为新的肿瘤基因治疗候选基因。

雷帕霉素抑制胆囊癌GBC-SD细胞的生长和转移600-603

摘要：目的：研究雷帕霉素（rapamycin）对胆囊癌GBC—SD细胞生长和转移的影响，探讨雷帕霉素治疗胆囊癌的临床应用前景。方法：采用MTY法检测不同浓度（12．5、25、50nmol／L）的雷帕霉素对胆囊癌细胞增殖的影响，以流式细胞术检测不同浓度的雷帕霉素对细胞凋亡和细胞周期的变化，Transwell小室检测雷帕霉素对细胞迁移能力的影响，利用Western blotting检测胆囊癌细胞中雷帕霉素哺乳动物靶标（mammalian target of rapamycin，mTOR）及其磷酸化p-mTOR水平。结果：雷帕霉素可显著抑制胆囊癌GBC-SD细胞中mTOR的磷酸化，但对mTOR表达无影响。雷帕霉素显著抑制胆囊癌细胞的生长，并呈剂量依赖性抑制（P〈0．01）。雷帕霉素可引起胆囊癌细胞周期G1／S阻滞和细胞凋亡；可显著抑制胆囊癌细胞的转移（P〈0．01）。结论：雷帕霉素能显著抑制胆囊癌细胞生长及转移，其机制可能与抑制p-mTOR通路、诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡有关。

Notch3 siRNA增强结肠癌细胞对托泊替康的化疗敏感性604-608

摘要：目的：探讨下调Notch3表达是否可增强结肠癌SW620细胞对化疗药托泊替康（topotecan）的敏感性。方法：将Notch3siRNA转染到SW620细胞中，Westernblotting检测转染后SW620细胞中Notch3的表达水平。转染后不同时间加入托泊替康，MTr法检测SW620细胞的增殖；Hoechst33342染色和流式细胞仪检测SW620细胞的凋亡；Caspase-3活化试剂盒检测SW620细胞中caspase-3的活化。结果：Notch3siRNA转染可明显抑制SW620细胞中Notch3蛋白的表达；托泊替康作用于Notch3siRNA转染组细胞的IC50较对照CtrlsiRNA转染组显著降低（P〈0．05）；流式细胞仪检测显示沉默Notch3的表达可显著增强托泊替康诱导的结肠癌细胞凋亡（P〈0．05）和caspase-3活化（P〈0．05）。结论：siRNA沉默Notch3的表达可增强SW620细胞对托泊替康的化疗敏感性。

中国肿瘤生物治疗杂志科技动态

DCs中NLRP3炎性复合体活化诱导IL-1依赖的获得性抗肿瘤免疫应答608-608

摘要：细胞死亡有多种形式，可以分为免疫性的和非免疫性的。正常细胞更新中的细胞死亡可认为是非免疫性的；而放射治疗或者化学治疗药物引起的细胞死亡是免疫性的，可以引起免疫应答，并且对于治疗效应是必须的。

中国肿瘤生物治疗杂志基础研究

PEI-RGD／125I-（αv）ASODN的制备及其对肝癌HepG2细胞侵袭力的抑制609-613

摘要：目的：探讨以PEI—RGD（polyethyleneimine—Arg—Gly-Asp）为转染载体的125I-（αv）ASODN投递在体外对HepG2肝癌细胞侵袭力的影响。方法：125I标记整合素αv亚基的ASODN，以聚乙烯亚胺衍生物PEI—RGD为载体制备PEI—RGD／125I（αv）ASODN复合物，通过受体介导方式转染进入HepG2细胞，利用Boyden小室侵袭模型检测复合物对HepG2细胞侵袭力的影响。结果：（1）125I-（αv）ASODN的标记率为（73．78±4．09）％，放化纯度为（96．68±1．38）％，37℃放置48h后的放化纯度仍〉90％，表明其稳定性良好；（2）HepG2细胞对PEI．RGD／125I（αv）ASODN的摄取于4μl／2μg时达到峰值[（12．77±0．85）％]，之后明显降低，故选择2μl／1μg作为PEI—RGD／125-（αv）ASODN对HepG2细胞的作用剂量；（3）相对于其他实验组和对照组，PEI—RGD／125I-（αv）ASODN组显著降低了HepG2细胞的侵袭能力（P〈0．01）。结论：以PEI—RGD为载体投递125I-（αv）ASODN能有效抑制HepG2细胞的侵袭力；

中国肿瘤生物治疗杂志科技动态

活体内共刺激分子PD-1抑制T细胞的功能613-613

摘要：B7：CD28家族成员Programmed death1（PD-1）在调控T细胞功能中发挥着重要作用，其通过与配体PD—L1、PD-L2结合向T细胞内传递抑制信号，防止T细胞过度活化。近期研究表明，PD．1与肿瘤以及慢性病毒感染进程密切相关，衰竭性CTL细胞（eytotoxic Tlymphocytes）是其研究的热点之一，PD-1的表达也作为CTL细胞衰竭的重要判定标准。

中国肿瘤生物治疗杂志基础研究

E1A抑制鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的生长并增强其对放疗的敏感性614-618

摘要：目的：探讨E1A基因对人鼻咽癌CNE2细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用和对放疗的增敏作用及其相关机制。方法：以腺病毒为载体，将E1A基因导人CNE2细胞，获得含EIA的阳性克隆。通过裸鼠致瘤实验，观察E1A基因的抑瘤作用。观察E1A基因疗法及其与放疗联合应用对CNE2细胞裸鼠移植瘤的疗效。RT—PCR法检0n,4E1A基因治疗对P53基因表达的影响。结果：建立稳定转染Ad—E1A的CNE2阳性细胞克隆（CNE2-Ad—E1A），CNE2-Ad-E1A组小鼠细胞移植瘤较CNE2组和CNE2-Ad—B—gal组（稳定转染Ad-β-gal对照质粒的CNE2细胞）成瘤时间晚、肿瘤小。单纯放疗、单纯Ad—E1A基因治疗及Ad—E1A＋放疗3种治疗方法均可抑制CNE2裸鼠移植瘤的生长，抑瘤率分别为（60．32±5．34）％、（70．53±6．12）％和（97．15±4．87）％。E1A基因治疗能上调鼻咽癌组织中P53的表达。结论：E1A可抑制人鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的生长并增加其对放疗的敏感性，该作用可能与E1A上调P53基因的表达有关。

中国肿瘤生物治疗杂志科技动态

人DCs表达的多聚唾液酸化的NRP-2调节DCs与T细胞间的相互作用618-618

摘要：多聚唾液酸（polysialie acid，PSA）是唾液酸以α-2，8连接形成的线性聚合物，能调节神经细胞黏附分子（neural cell adhesion molecule，NCAM）及其他黏附分子介导的细胞间相互作用。CD56分子是NK细胞上的一种NCAM亚型，是目前唯一已知的存在于免疫细胞上的PSA化的蛋白质，但是PSA在NK细胞上所发挥的功能尚未明确。