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中国肿瘤生物治疗 2008年第03期杂志 文档列表

中国肿瘤生物治疗杂志述评

关于肿瘤干细胞问题的一些思考201-204

摘要：肿瘤干细胞是当今生物医药领域中的一个热点问题，它有可能为临床上肿瘤预防、诊断和治疗手段的研究和发展提供一套全新的知识体系。但由于其研究还很不充分，故其基本的知识体系还未形成。本文介绍了作者就肿瘤干细胞生物学中的几个重要问题的理解和评论，并介绍了目前这一领域中所存在的主要争议，以期引起肿瘤及其相关专业研究人员的关注和讨论。

中国肿瘤生物治疗杂志科技动态

Isolation and characterization of bipotent liver progenitor cells from adult mouse204-204

中国肿瘤生物治疗杂志论著

CAR的表达调节对肝癌基因治疗中腺病毒载体感染效率的影响205-209

摘要：目的：通过抑制Raf-MEK—ERK信号转导途径调节肝癌细胞表面柯萨奇病毒和腺病毒受体（coxsackie—adenovirus receptor，CAR）的表达，探索肝癌基因治疗中CAR表达与腺病毒（adenovirus，Ad）感染效率之间的关系。方法：选择两株人肝癌细胞株SMMC-7721及HepG2，以Raf-MEK．ERK信号转导抑制剂U0126作用后，应用Western blotting检测细胞表面CAR蛋白的表达水平。选用能表达GFP的非复制型E．A缺陷的Ad感染人肝癌细胞SMMC-7721及HepG2，应用FACS分析U0126处理前后Ad感染效率的变化。结果：细胞经MEK抑制剂U0126处理后，细胞膜表面CAR的表达呈明显上调趋势。FACS检测显示，经U0126处理后，在相同感染复数（10MOI）Ad—GFP的感染下，GFP＋细胞率明显升高，SMMC-7721细胞由（71．65±6．21）％上升至（86．54±5．70）％；HepG，细胞由（77．53±4．62）％上升至（87．06±2．83）％（均P〈0.05）。结论：抑制剂U0126抑制Raf-MEK—ERK信号转导途径后，可上调肝癌细胞膜表面CAR的表达，从而导致Ad在肝癌细胞感染效率的提高。

中国肿瘤生物治疗杂志科技动态

骨髓龛位内血管周围树突状细胞为B细胞存活提供关键信号209-209

摘要：骨髓通常被认为是初级淋巴器官，为干细胞提供向淋巴系或髓系分化所必需的独特微环境，即龛位。早期B细胞的发育是在骨髓中进行，并经历了一系列的分化阶段，如前祖B细胞、祖B细胞、前B细胞。随后，未成熟B细胞离开骨髓迁移到脾脏内继续发育成熟。其中有约四分之一的表达有IgD和IgM的成熟B细胞被发现能够通过再循环回归到骨髓内。

中国肿瘤生物治疗杂志论著

奥曲肽对紫杉醇抑制非小细胞肺癌细胞的增效作用210-216

摘要：目的：探讨生长抑素类似物奥曲肽（octreotide）对紫杉醇抑制非小细胞肺癌细胞的增效作用及其可能的机制。方法：RT—PCR检测非小细胞肺癌细胞株A549和H157生长抑素受体（somatostatin receptor，SSTR）1—5mRNA的表达；检测不同时间和浓度梯度的奥曲肽对两株细胞的抑制率，光镜下观测奥曲肽作用后细胞形态学的变化；MTT法检测奥曲肽与紫杉醇对两细胞株增殖的抑制是否具有协同作用；采用流式细胞仪检测奥曲肽、紫杉醇以及两者联合作用时A549细胞的凋亡率；荧光实时定量PCR检测奥曲肽作用后细胞多药耐药相关基因的改变。结果：A549细胞检测到SSTR1-SSTR5mRNA的表达，而H157细胞只有SSTR1和SSTR4mRNA的表达。奥曲肽对A549细胞增殖具有抑制作用并具有时间（24、48、72h）和浓度（1—1000nmol／L）依赖性，在光镜下可观测到细胞细胞受损伤的形态学改变；而对H157细胞无抑制作用。对于A549细胞，125、250、500nmol／L奥曲肽作用48h可明显增加其对紫杉醇化疗的敏感性（P〈0．01），并能诱导细胞凋亡，但未增加与紫杉醇联合作用后细胞的凋亡率；而对H157细胞，奥曲肽未发现化疗增敏作用。奥曲肽可下调A549细胞多药耐药相关基因MDR-1、MRP-1的表达（P〈0．05，P〈0．01），而对H157细胞多药耐药相关基因的表达无影响。结论：奥曲肽可提高SSTR受体阳性的非小细胞肺癌细胞对紫杉醇的敏感性，下调多药耐药相关基因的表达是其可能的机制之一。

中国肿瘤生物治疗杂志科技动态

TLR4相关蛋白PRAT4A参与TLR依赖的免疫反应216-216

摘要：Toll样受体（toll—likereceptor，TLR）目前被认为是最重要的模式识别受体（pattern recognition receptor，PRR），不同的TLR亚型可识别不同的病原体相关模式（pathogen associated molecular patterns，PAMPs），诱导不同的天然免疫应答。如TLR3主要识别病毒的双股RNA（dsRNA），TLR4主要识别细菌的脂多糖（LPS），TLR5识别细菌的鞭毛蛋白，TLR9识别多种病原体的核酸成分（CpG），TLR1、TLR2和TLR6则识别脂蛋白和肽聚糖（peptidoglycan）等。

中国肿瘤生物治疗杂志论著

抗ATPase F1α抗体对人非小细胞肺癌血管内皮细胞的抑制作用217-222

摘要：目的：探讨一种新的抗ATPase F1α抗体，人血管抑制和肿瘤转移相关蛋白（human angiostatin interacting and tumor metastasis involving protein，HAI-TMIP）抗体（（MAb3D5AB1，简称GX）对人非小细胞肺癌血管内皮细胞（non—small cell lung cancer—derived vascular endothelial cell，NSCLC-VEC）的抑制作用。方法：从非小细胞肺癌患者手术切除标本分离和原代培养NSCLC—VECs；采用免疫荧光法检测NSCLC—VECs膜上ATPaseF1α的表达，RT—PCR分析细胞ATPase Flα mRNA的表达水平；CCK-8法检测GX对NSCLC-VECs增殖的抑制效应，划痕损伤实验检测GX对NSCLC—VECs迁移的抑制作用，FACS检测GX对NSCLC—VECs凋亡的影响。结果：倒置荧光显微镜检测显示，NSCLC—VECs胞膜上有ATPaseF1α的显著表达；RT—PCR的结果表明，分别来源于肺腺癌、肺鳞癌的血管内皮细胞中ATPase F1αⅡ肽段基因片段大小为668bp。CCK-8结果表明，经GX处理，NSCLC—VECs的增殖活力显著低于对照组（P〈0．01）；划痕损伤实验结果显示，经GX处理的NSCLC-VECs的迁移速度显著低于对照组（P〈0．01）；FACS结果显示，GX处理后NSCLC—VECs的凋亡率高于对照组（P〈0．01）.结论：ATPaseF1α在NSCLC—VECs膜上有较高的表达，GX通过靶向作用于ATPaseF1α抑制NSCLC-VECs的增殖、迁移，并诱导细胞凋亡。

中国肿瘤生物治疗杂志简讯

《中国肿瘤生物治疗杂志》征稿启事222-222

中国肿瘤生物治疗杂志论著

重组腺病毒rAd-E1A-CDglyTK对人卵巢癌SKOV3细胞的抑制作用223-227

摘要：目的：探讨含腺病毒基因EIA、融合自杀基因CDglyTK及报告基因GFP的重组腺病毒rAd-E1A—CDglyTK与酶前体药物5-FC和（或）GCV联合应用对人卵巢癌SKOV3细胞的抑制作用。方法：将重组腺病毒质粒prAd—E1A—CDglyTK经脂质体介导转染293细胞，进行病毒的扩增、纯化与PCR鉴定，以紫外分光光度法与TCID50法测定纯化病毒的颗粒浓度与感染性滴度，计算病毒比活性；在SKOV3细胞中观察重组病毒的复制能力及感染效率，确定感染率达90％以上的最小MOI。用MTT法观察感染重组病毒的SKOV3细胞对5-FC或GCV的敏感性，并计算IC50；观察一定MOI的rAd—E1A—CDglyTK或重组复制缺陷型腺病毒rAd—CDglyTK与IC50的5-FC和（或）GCV联合应用对SKOV3细胞生长的抑制作用。结果：经PCR和琼脂糖凝胶电泳证实，纯化重组腺病毒中存在肼4和CDglyTK两个基因片段，其病毒颗粒浓度和感染性滴度分别为9．47×10^11VP／ml和3．16×10^10IU／ml，病毒比活性为3．34％。重组病毒可在SKOV3细胞中复制，对SKOV3细胞的感染效率随MOI的增加而增加，可致细胞感染率达90％以上的最小MOI为50IU／cell。5-FC或GCV明显抑制感染细胞的生长，且存在明显的剂量依赖效应。两种重组腺病毒／前药系统的抑瘤作用比较显示，rAd—E1A—CDglyTK组细胞生长抑制率[（16．57±1．59）％]显著高于rAd—CDglyTK组[（10．44±1．80）％，P〈0．01]；与IC50的5-FC和GCV双药联合应用，其抑制率达（71．68±2．63）％，显著高于rAd-CDglyTK／5-FC＋GCV组的（63．64±2．91）％（P〈0．01）。结论：重组腺病毒rAd—E1A—COglyTK与酶前体药物联合应用对卵巢癌SKOV3细胞具有显著的抑制作用，其效果优于重组复制缺陷型腺病毒rAd—CDglyTK。

Livin异构体特异性shRNA对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响228-232

摘要：目的：应用构建成功的Livin异构体（BIRC71，BIRC72）短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）真核表达载体转染Hela细胞，探讨其对Livin基因的沉默效应及诱导Hela细胞凋亡的作用。方法：采用脂质体转染法转染Hela细胞，荧光实时定量PCR、Western blotting检测转染前后宫颈癌Hela细胞Livin基因拷贝数和蛋白表达的变化，将shRNA表达载体流式细胞术检测不同时间（24、48、72h）的细胞凋亡率。结果：真核表达载体的转染效率48h较24、72h高；转染pGenesil-1-BIRC71、pGenesil-1-BIRC72后Hela细胞中Livin拷贝数明显减少（P〈0．05），蛋白质表达水平显著降低（P〈0．05）；流式细胞术检测24、48、72h凋亡率，转染LivinshRNA组细胞的凋亡率显著高于对照组（P〈0．05），随时间延长（24→72h）凋亡率相应增加。结论：靶向Livin的shRNA真核表达载体可以有效特异地阻断Livin基因的表达，明显诱导宫颈癌细胞凋亡。

中国肿瘤生物治疗杂志科技动态

磷脂酰丝氨酸受体TIM4的克隆鉴定232-232

摘要：磷脂酰丝氨酸（phosphatidylserine，PS）是表达在凋亡细胞表面的一种重要标志分子。它是第一个被鉴定出的细胞发生凋亡时表达发生变化的配体。目前很多研究表明，PS可以通过与一些特定分子相结合从而介导吞噬细胞对凋亡细胞的识别和摄取，其中大部分PS结合分子都为一些“桥联分子”。

中国肿瘤生物治疗杂志论著

pGL3-hTERT-tk／GCV对胃癌细胞的促凋亡作用233-237

摘要：目的：探讨重组质粒pGL3-hTERT—tk／GCV对胃癌细胞的促调亡作用。方法：以基因工程方法构建重组质粒pGL3-hTERT-tk和相应的荧光报告质粒pGL3-hTERT-tk-Luc＋；脂质体LipofectamineTM2000瞬时转染胃癌细胞系SGC-7901并用GCV干预，荧光显微镜观察细胞形态变化和转染效率，TUNEL标记和流式细胞术观察转染后胃癌细胞的凋亡；以上实验均以正常肝细胞L-02为对照。结果：经鉴定，重组质粒pGL3-hTERT-tk中tk片段的长度为1100bp。荧光素酶标记的阳性、阴性对照及治疗报告质粒pGL3-hTERT-tk-Luc。均能有效转染高表达端粒酶活性的胃癌细胞SGC-7901，转染效率为（8．2±1．14）％。重组质粒转染胃癌细胞后与GCV共育4d，细胞的凋亡率为（60．0±1．56）％；被pGL3-hTERT—tk转染的肿瘤细胞细胞周期发生了变化，处于细胞周期早期的细胞大量凋亡，早期凋亡率为（47．1±1．35）％。结论：pGL3-hTERT-tk／GCV对胃癌细胞有强烈的杀伤作用，但不影响正常细胞的生长，有潜在临床应用前景。

CpG对X线放射治疗Lewis肺癌小鼠移植瘤的增敏效应238-242

摘要：目的：探讨含胞嘧啶一磷酸盐一鸟嘌呤基序的寡脱氧核苷酸（cytosine—phosphate—guanine oligodeoxynucleotide，CpGODN）对X线照射荷瘤小鼠Lewis肺癌的放疗增敏作用。方法：在小鼠右前腋窝接种Lewis肺癌细胞，制备荷瘤小鼠模型，将32只荷瘤小鼠随机分为4组：对照组，无任何处理；X线照射组，3Gy／次，第1、3、5、8、10、12天照射，总剂量18Gy；CpG组，第1、3、5、8、10、12天注射，每次腹腔注射CpGODN0．05mg；D组：CpG＋x线照射组，每次X线照射前6h腹腔注射CpGODN。观察各组移植瘤生长速度和各治疗组移植瘤生长延迟时间，H—E染色法观察移植瘤组织病理变化，TUNEL法检测细胞凋亡。结果：成功建立荷Lewis肺癌小鼠模型，经治疗后各组小鼠移植瘤体积都较对照组明显减小（P〈0．01），CpG＋X线照射组移植瘤体积最小；X线照射组移植瘤的生长延迟时间为2．1d，CpG组为2．3d，CpG＋X线照射组为4．8d，CpGODN的放射增敏比为2．09。H—E染色病理观察到各治疗组都较对照组移植瘤坏死明显，CpG＋X线照射组最显著。TUNEL法检测对照组瘤组织细胞凋亡率为（2．75±0．89）％，X线照射组为（4．87±1．13）％，CpG组为（7．63±1．41）％，CpG＋X线照射组为（32．63±4．66）％；各治疗组都明显高于对照组，CpG＋X线照射组显著高于X线放射组和CpG组（P〈0．01）。结论：CpGODN能明显提高Lewis肺癌移植瘤对X线的放射敏感性，促进肿瘤细胞凋亡。

中国肿瘤生物治疗杂志科技动态

致癌受体EGFRⅧ通过微囊泡在肿瘤细胞间传递242-242

摘要：人脑胶质细胞瘤细胞表达表皮生长因子受体的一种变异形式，称之为EGFRⅧ。这种受体的表达使得肿瘤细胞拥有了转化表型，侵袭能力增加。一个脑胶质细胞瘤的患者其EGFRⅧ性的细胞只占极少数，但是大部分的肿瘤细胞却都拥有恶性侵袭的能力，其机制尚不清楚。

中国肿瘤生物治疗杂志论著

腺病毒介导人VEGF-siRNA对裸鼠移植骨肉瘤的抑制作用243-247

摘要：目的：研究腺病毒介导入VEGF-siRNA对裸鼠移植骨肉瘤的治疗作用。方法：利用腺病毒重组技术将VEGF—siRNA基因克隆入增殖缺陷型腺病毒基因组中，构建重组腺病毒Ad—VEGF-siRNA，重组腺病毒体外感染骨肉瘤MG63细胞，RT-PCR检测MG63细胞VEGF的表达水平。建立荷人骨肉瘤MG63裸小鼠动物模型，以Ad-VEGF—siRNA瘤组织注射治疗，检测移植瘤组织中VEGF的表达情况及Ad．VEGF—siRNA对肿瘤生长和肺转移的抑制作用。结果：成功构建了表达VEGF—siRNA的重组腺病毒载体Ad—VEGF-siRNA；体外与体内实验检测Ad—VEGF—siRNA转染骨肉瘤细胞MG63后显著抑制VEGF表达。荷人骨肉瘤裸鼠经Ad—VEGF—siRNA治疗后，显示其对移植骨肉瘤生长有明显抑制作用（P〈0．05），并且对骨肉瘤的肺转移有显著的抑制作用（P〈0．05）。结论：所构建的Ad—VEGF—siRNA可以有效抑制骨肉瘤中VEGF表达，使裸鼠移植骨肉瘤生长减慢，并且显著抑制荷瘤裸小鼠肺转移的发生。

EGFR、MVD和LRP在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义248-253

摘要：目的：探讨表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）、微血管密度（microvessel density，MVD）和肺耐药蛋白（lung resistance protein，LRP）在上皮性卵巢癌中的异常表达及其临床意义。方法：采用免疫组化法检测76例上皮性卵巢癌、9例交界性卵巢肿瘤、17例良性卵巢肿瘤和15例正常卵巢组织中EGFR、LRP的表达和MVD计数，并对患者进行随访，评价化疗效果及预后。结果：（1）卵巢癌组织中EGFR、LRP阳性表达率分别为73．68％和71，79％，MVD计数为21，77±9、85。均显著高于正常卵巢组织和良性肿瘤（P〈0．01）。（2）EGFR与FIGO分期、细胞学分级及腹水产生有关（P〈0.05），与年龄、组织学类型、残留灶大小及有无淋巴结转移无相关性（P〉0．05）；低分化、有腹水及残留灶≥2cm的癌组织中MVD计数较高（P〈0.05）；LRP与肿瘤临床病理参数无相关性（P〉0.05）。（3）在卵巢癌组织中，EGFR表达与MVD计数和LRP表达均呈正相关（P〈0．05）。（4）对患者术后化疗的随访资料分析发现，EGFR和LRP表达阴性者化疗有效率分别高于表达阳性者（P〈0.05）。（5）Kaplan—Meier法比较生存曲线表明，EGFR和LRP阳性表达、低分化、有腹水和化疗耐药者术后生存时间短（P〈0.01），多因素分析表明LRP蛋白表达和化疗疗效与患者术后生存时间独立相关（P〈0．05）。结论：EGFR和LRP与上皮性卵巢癌的血管生成及产生化疗耐药有关，两者阳性表达预示患者化疗敏感性低、术后生存时间短；该两指标有助于预测化疗耐药和判断患者预后。

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凋亡细胞可通过诱导调节性B细胞的产生保护小鼠免受自身免疫炎症反应253-253

摘要：细胞凋亡是由基因控制的细胞自主的有序的死亡。凋亡的细胞可被体内的抗原提呈细胞所吞噬。树突状细胞（dendriticcell，DC）作为目前已知的机体内功能最强的抗原提呈细胞，在摄取抗原后开始成熟，在成熟过程的同时发生迁移，进入外周淋巴器官。成熟DC表达大量MHCⅡ类分子，共刺激分子和黏附分子的表达也显著增加，可有效激发T细胞应答。

中国肿瘤生物治疗杂志论著

酵母双杂交技术筛查与vasostatin相互作用的蛋白质254-258

摘要：目的：通过酵母双杂交技术筛查与血管生长抑制因子vasostatin相互作用的蛋白质，为进一步阐明其抑制血管生成作用的分子机制奠定基础。方法：应用第3代酵母双杂交系统，构建vasostatin诱饵质粒，经过表达和自激活验证后筛选预转化的人内皮细胞cDNA文库。将在四缺培养基中筛选得到的阳性克隆提取酵母质粒转化大肠杆菌，进行限制性酶切和测序，寻找可能与vastotatin具有相互作用的蛋白序列。结果：经过酵母双杂交共获得21个克隆，经过验证，有3个阳性克隆；经过NCBI的BLAST进行同源性分析，它们的核酸和蛋白序列与已知基因高度同源，它们分别为层黏连蛋白面（7547—8112）和整合素αV（1257—1820、316—878）片段，均为重要的配体结合部位。Vasostatin蛋白通过与该区域结合，影响FAK、VEGF和bFGF等的信号通路，抑制血管生成。结论：酵母双杂交筛选获得的层黏连蛋白和整合素蛋白的3个蛋白片段，它们与肿瘤内血管内皮细胞增殖和迁移等密切相关。