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中国肿瘤生物治疗 2007年第02期杂志 文档列表

中国肿瘤生物治疗杂志院士论坛

用于肿瘤治疗的抗体及其改造策略101-104

摘要：肿瘤是当前引起人类死亡的主要疾病之一。近40年中，人类肿瘤的治疗仍主要依靠手术、化疗和放疗。虽然对某些类型肿瘤的治疗是成功的，但手术结合化疗和放疗尚不能全面降低肿瘤的病死率，大多数患者化疗后产生耐药、复发，甚至因肿瘤转移而死亡。

中国肿瘤生物治疗杂志读者·作者·编者

文稿中数字用法的要求104-104

中国肿瘤生物治疗杂志专家论坛

EGFR突变与非小细胞肺癌酪氨酸激酶抑制剂靶向治疗105-109

摘要：肺癌的高发病率和高病死率，以及化疗对晚期肺癌疗效的十分有限，使之成为世界性医学难题。最近发现，表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinases inhibitors，TKIs）的分子靶向治疗可以使晚期非小细胞肺癌瘤体缩小；然而，以Gefitinib和Erlotinib为代表的TKIs治疗敏感性与EGFR基因突变显著相关。研究证实，EGFR最常见发生的19区缺失突变和21区点突变导致相应氨基酸序列和EGFR结构的改变，是其增加药物敏感性的主要机制。此外，EGFR基因扩增和CA重复序列的多态性、EGFR通路下游信号（如p-AKT等）激活、HER2和（或）HER3表达的增加、K—RAS基因突变等因素皆影响其对TKIs的治疗敏感性。鉴于此，进一步研究EGFR基因不同突变的功能，寻找能预测TKIs治疗敏感性的因素，并作为TKIs敏感患者的筛选指标，对于提高晚期肺癌患者TKIs靶向治疗疗效具有重要意义。

中国肿瘤生物治疗杂志科技动态

热休克蛋白gp96：Toll样受体的主要伴侣蛋白109-109

摘要：gp96，又名grp94，为一相对分子质量96000的糖蛋白，是热休克蛋白90家族的成员之一，高度丰富地表达于所有细胞的内质网中。类似于其他的热休克蛋白，gp96可被环境压力及累积的错误折叠蛋白所诱导。gp96的重要功能就是它的分子伴侣作用，在内质网中结合并水解ATP后，gp96可以辅助新合成的蛋白正确折叠和组装，促进错误折叠蛋白的降解。迄今发现，gp96可以辅助伴侣约20种蛋白的表达，如免疫球蛋白重链，整合素等。

中国肿瘤生物治疗杂志论著

肺癌抑制性抗体及其抗原的鉴定110-114

摘要：目的：鉴定抑制肺癌细胞生长的功能性单克隆抗体1E2及其抗原，为治疗肺癌提供有潜力的靶向抗体治疗剂和分子靶位。方法：采用活细胞荧光、MTT细胞增殖实验、ELISA、动物体内治疗实验等方法检测鼠单克隆抗体1E2对人肺癌细胞增殖的抑制、单抗与癌细胞的结合部位、单抗的亚类和单抗对肺癌移植瘤的抑制，以Western blotting和MALDITOF质谱方法鉴定该功能性单抗的抗原。结果：单抗1E2能够与肺癌细胞GLC82和NCI-H520的细胞膜结合，在体外能够明显抑制肺癌细胞的增殖。动物实验表明单抗1E2能够抑制肺癌移植瘤的生长，抑制率达49％。Western blotting显示其抗原相对分子质量约110000，质谱鉴定该抗原为氨甲酰磷酸合成酶（carbamoyl-phosphate synthetase1，CPS1）。结论：单抗1E2能够在体内外抑制肺癌的生长，具有成为肺癌靶向治疗剂的潜力。该抗体识别的抗原CPS1可表达于肺癌细胞的细胞膜，可能是一个肺癌靶向治疗的新靶位。

中国肿瘤生物治疗杂志读者·作者·编者

文稿中统计学符号规范化书写的要求114-114

中国肿瘤生物治疗杂志论著

人脂联素重组体体外对乳腺癌细胞侵袭和转移的抑制115-119

摘要：目的：研究人脂联素重组体对人乳腺癌MDA—MB-231细胞体外侵袭能力的影响。方法：将MDA—MB-231细胞分设对照组和脂联素重组体加药（2．5、5、0、10、20、30μg／ml）组，药物作用一定时间后，分别以MTT法、Transwell小室实验，Chamber小室实验，黏附实验检测脂联素重组体对乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移和黏附能力的影响，以明胶酶谱法检测其对肿瘤细胞分泌MMP-2和MMP-9的影响。结果：脂联素重组体质量浓度高于5．0μg／ml时，对MDA—MB-231细胞生长具有明显的抑制作用（P〈0．01）；能明显地降低肿瘤细胞体外侵袭能力（P〈0．01），侵袭抑制率随脂联素重组体质量浓度的升高而增加，介于22．64％～77．84％之间；脂联素重组体质量浓度高于2．5μg／ml时，明显地抑制肿瘤细胞的迁移能力（P〈0．01）；脂联素重组体对ECM和FN黏附能力影响的程度不同，对FN的敏感性大于ECM；脂联素重组体质量浓度大于2．5μg／ml时，明显抑制肿瘤细胞MMP-2和MMP-9的分泌（P〈0、05或P〈0．01），后者的分泌量随质量浓度的升高而下降。结论：脂联素重组体在大于2．5μg／ml时，可能通过保护基底膜不受破坏而抑制人乳腺癌细胞的侵袭能力。

肿瘤血管特异结合抗体ScFvH1的靶向性和抑瘤性120-125

摘要：目的：检测从肿瘤特异单链抗体库中筛选到的肿瘤血管特异结合单链抗体ScFvH1的靶向性和抑瘤性，探讨该抗体在癌症诊断和治疗中应用的可能性。方法：将该单链抗体基因插入到含绿色荧光蛋白（EGFP）基因及带有硫氧还原蛋白（Trx）基因的原核表达载体pET-28a（＋）／EGFP及pTIG—Trx中，在大肠杆菌中进行表达，并经镍柱（Ni—NTA）纯化。建立人宫颈癌HeLa细胞裸鼠皮下移植瘤模型，尾静脉注射纯化的单链抗体-EGFP融合蛋白，通过荧光显微镜观察肿瘤部位及其他器官中EGFP信号，考察该单链抗体的靶向性；同时在裸鼠致瘤部位注射纯化的单链抗体蛋白，观察该单链抗体对肿瘤生长的抑制性。结果：在大肠杆菌中表达了该单链抗体基因片段，并使单链抗体-EGFP融合蛋白得到了很好的表达，经镍柱纯化后得到了电泳级的单一条带。靶向性实验结果显示，单链抗体-EGFP融合蛋白在肿瘤部位得到了富集，而只注射EGFP蛋白的肿瘤组织中荧光很少，并且在裸鼠肺部组织中没有观察到EGFP荧光信号。抑瘤性实验发现，单链抗体处理组移植瘤生长速率与PBS组类似。结论：从肿瘤特异单链抗体库中筛选到的肿瘤血管特异抗体ScFvH1具有较好的肿瘤血管靶向性，而对肿瘤生长的抑制作用不明显，为进一步研究抗体在肿瘤诊断和治疗中的应用奠定了基础。

中国肿瘤生物治疗杂志科技动态

PI3K在双链RNA（dsRNA）-TLR3信号传导途径中的新作用125-125

摘要：双链RNA（dsRNA）作为常见的病毒感染的副产物，能够被TLR3识别并介导机体对病毒感染的天然免疫应答。识别配体后的TLR3通过活化丝／苏氨酸激酶TBK-1，进而磷酸化转录因子IRF-3的丝／苏氨酸残基，使其发生二聚化并转位人核，启动下游目的基因的转录和表达。PI3K是细胞正常生长和存活过程中非常重要的一个分子，主要参与了细胞生长、分化、

中国肿瘤生物治疗杂志论著

shRNA干扰HERG钾通道治疗裸鼠皮下人成神经细胞移植瘤126-131

摘要：目的：探讨发卡结构小片段RNA（small hairpin interfering RNA，shRNA）干扰人ERG（human ether-α—go-go—related gene，HERG）钾通道治疗裸鼠皮下人成神经细胞移植瘤的疗效和作用机制。方法：用真核转录载体mU6pro构建针对herg基因的发卡状RNA干扰质粒（shRNA-herg）。18只BALB／c裸小鼠皮下接种成神经细胞瘤SH—SY5Y细胞，建立裸鼠皮下人成神经细胞移植瘤模型，当瘤体积达到100mm^3时随机分成3组，分别为生理盐水组（Ⅰ）、对照质粒组（Ⅱ）、干扰质粒组（Ⅲ）。各组瘤内分别注射生理盐水、对照质粒、干扰质粒，以后每7d注射1次，连续15d。观察各组肿瘤生长情况，RT—PCR测定肿瘤组织herg基因mRNA含量变化，免疫组化检测肿瘤组织中HERG钾通道蛋白变化。结果：经治疗后，第Ⅲ组肿瘤生长受到明显抑制，Ⅱ、Ⅲ组抑瘤率分别为3．04％和29．78％（P〈0．05）。肿瘤组织内berg基因mRNA含量、HERG钾通道蛋白，Ⅲ组较Ⅰ、Ⅱ组表达减弱。结论：构建的shRNA干扰质粒可通过靶向性抑制herg基因及其编码的HERG钾通道蛋白的表达，有效地抑制人成神经细胞瘤的生长。

中国肿瘤生物治疗杂志简讯

肿瘤生物治疗国际研讨会暨第十届全国肿瘤生物治疗学术会议征文通知131-131

中国肿瘤生物治疗杂志论著

逆转录病毒载体介导大鼠乳腺癌细胞共表达MIP—1α和B7—1132-136

摘要：目的：建立共表达小鼠MIP-1α和B7-1基因的大鼠乳腺癌细胞株，并进行体外活性检测。方法：应用含不同选择标记的重组逆转录病毒载体，经1mg／ml G418和2rLg／ml puromycin双药物筛选后获得MIP-1α＋B7-1基因共表达的大鼠乳腺癌细胞株。RT-PCR、免疫组化检测mMIP-1α的表达，RT—PCR、流式细胞术检测mB7-1的表达；将共表达MIP-1α和B7-1的肿瘤细胞与大鼠脾淋巴细胞混合培养后，MTT法检测淋巴细胞的增殖指数、琼脂糖打孔法检测共表达MIP-1α和B7-1肿瘤细胞对单个核细胞的趋化活性。结果：经脂质体转染包装细胞产生的重组逆转录病毒上清病毒滴度达4．6×10^7CFU／L。细胞生长曲线显示，重组逆转录病毒感染对乳腺癌细胞增殖无明显影响。重组逆转录病毒感染的大鼠乳腺癌细胞株SHZ-88／mMIP-1α＋mB7—1有B7-1和MIP-1αmRNA及蛋白的表达。淋巴细胞增殖指数PI值SHZ-88／PLXSN组为（0．76±0．25），SHZ-88／mMIP-1α＋mB7-1组为（1．95±-0．31），后者体外刺激淋巴细胞增殖能力增强（P〈0．01），SHZ-88／pBabe puro组的趋化指数为（0．99±-0．19），mMIP-1α＋mB7—1组的为（3．88±0．33），后者显著增强了趋化活性。结论：通过逆转录病毒载体介导建立MIP-1α和B7-1基因共表达的大鼠乳腺癌细胞株具有招引单个核细胞，并将其激活的体外生物学活性。

淫羊藿苷体内抑瘤作用及其机制137-142

摘要：目的：探讨淫羊藿苷（icariin，ICA）对肝癌细胞H22荷瘤小鼠体内抑瘤作用及其机制。方法：肝癌细胞株H22右腋皮下接种C57BIM6小鼠，建立小鼠体内荷移植瘤模型。接种H22细胞后24h，用高、中、低不同剂量（9、4．5、2．25mg／ml）的ICA和环磷酰胺（cyclophosphamide，Cy）（30mg／kg）进行局部注射治疗，待荷瘤对照组肿瘤长至1g左右，各组小鼠称重，处死。留自凝血，取血清检测TNF—α；依次取脾脏及肿瘤组织称重；取1／2脾脏和肿瘤组织制成单细胞悬液，剩余的用10％中性甲醛溶液固定，做病理切片和H—E染色以及TUNEL实验；脾单细胞悬液用流式细胞术（FACS）检测CD3、CD4、CD8、DX5等抗原分子的表达；肿瘤单细胞悬液用AnnexinV／PI双染检测肿瘤细胞的早期与晚期凋亡情况，同时取适量的瘤细胞用70％乙醇固定以FACS检测肿瘤细胞周期各时相的分布情况。结果：Cy治疗组抑瘤率为67．16％，ICA高、中、低剂量治疗组抑瘤率分别为24．63％、32．84％、5．22％。AnnexinV／PI双染结果表明，Cy治疗组与ICA治疗组早期凋亡细胞率均高于荷瘤对照组[Cy组为（9．11±1．584）％，ICA组为（7．14±1．376）％，荷瘤对照组为（3．6±2．38）％]。TUNEL结果显示，ICA治疗组凋亡指数为（5．35±0．73）％，显著高于荷瘤对照组中的凋亡指数[（1．03±1．17）％]（P〈0．01）。正常小鼠血清中未检测到TNF—α的存在，而ICA治疗组及Cy治疗组中检测到微量TNF-α。病理检测表明，ICA中、高剂量组肿瘤组织中出现较多的灶状及小片状坏死，包膜处及肿瘤边缘可见瘤细胞坏死，包膜及肿瘤组织中可见少量的炎细胞（淋巴细胞与单核细胞）浸润。结论：ICA有显著的抑瘤作用，可能通过促进实体瘤细胞早期凋亡引起肿瘤组织坏死而起作用。

中国肿瘤生物治疗杂志读者·作者·编者

参考文献题名后需标注文献类型和文献载体标志代码142-142

文稿中须写成斜体的外文字符142-142

中国肿瘤生物治疗杂志论著

反义端粒酶RNA基因对肝癌细胞的抑制作用143-147

摘要：　目的：研究逆转录病毒载体介导的反义端粒酶RNA基因对肝癌细胞的抑制作用，探讨通过抑制端粒酶活性治疗肝细胞癌的有效途径。方法：采用电穿孔法将携带正反义端粒酶RNA基因的逆转录病毒载体导入PT67包装细胞，G418筛选获得稳定产病毒细胞株，收集逆转录病毒上清并感染人肝癌HepG2细胞，G418筛选获得稳定转染细胞克隆并扩增培养，经PCR鉴定后，通过MTT法分别检测转染正反义端粒酶RNA基因组肝癌细胞（HepG2-hTR—EcoRⅠ和HepG2-hTR—BamHⅠ）以及未转染端粒酶RNA基因组细胞（HepG2）的生长，免疫荧光化学检测肝癌细胞增殖，TRAP—PCR—ELⅠSA法检测细胞的端粒酶活性，流式细胞术检测各组细胞所处的细胞周期及凋亡率。结果：基因转染后经PCR扩增可于约500bp处检测到目的基因的表达。转染反义端粒酶RNA基因的HepG2一hTR—BamHⅠ组细胞生长受到明显抑制；抗中性粒细胞核增殖抗原（PCNA）表达减少；实验组端粒酶活性为（2．31±0．16），较HepG2-hTR—EcoRⅠ组（3．24±0．20）及HepG2组细胞（3．22±0．17）明显下降（P〈0．01）；流式细胞术检测显示实验组细胞的凋亡率为（9．58±1．38）％，与对照组相比差别具有显著性（P〈0．01）；实验组细胞出现G2／M期阻滞。结论：端粒酶RNA是端粒酶活性表达的一个重要组成部分，通过反义技术下调其表达能够抑制肝癌细胞生长增殖，并诱导其凋亡。

中国肿瘤生物治疗杂志科技动态

TLR7介导耐受的恶性B淋巴细胞对化疗药物敏感147-147

摘要：TLR信号通路的慢性活化状态在很多病理环境下存在，但是有关这方面的研究并没有像TLR通路的活化及调节那样受到更多的关注。人TLR7主要表达在B细胞和某些树突状细胞（DC）上，如浆细胞样树突状细胞（Plasmocytoid dentritic cells，pDC）。TLR7的天然配体为病毒的单链RNA和氧化的鸟嘌呤核苷，它的活化可被合成的咪唑喹啉（imidazoquinoline）类衍生物S28690模拟。

中国肿瘤生物治疗杂志论著

吉非替尼耐药人结肠癌细胞系HT-29／ZD的建立及其耐药机制探讨148-152

摘要：目的：建立吉非替尼耐药的人结肠癌细胞系HT-29／ZD，并初步探讨其耐药机制。方法：采用逐步增加剂量法诱导人结肠癌细胞HT-29形成耐药细胞HT-29／ZD；MTT法检测吉非替尼对细胞的半数抑制浓度IC50，计算耐药指数（RI）；计数法描绘生长曲线，计算倍增时间TD；FCM检测细胞周期；MTT法检测HT-29／ZD对氟尿嘧啶（fluorouracil，5-Fu）、顺铂（cisplatin，DDP）、奥沙利铂（oxaliplatin，L-OHP）、伊立替康（irinotecan，CPT-11）的交叉耐药谱；免疫细胞化学方法检测细胞P—gP、IGF-1Ra、P-IGF-1R的表达。结果：建立了吉非替尼耐药的人结肠癌细胞系HT-29／ZD，其耐药指数RI为26．67，HT-29／ZD和HT-29的TD分别为33．25h和37．7h。FCM显示HT-29／ZD的S期、G2／M期比例增加，G0／G1期减少。交叉耐药实验显示，HT-29／ZD对5-Fu、DDP、L—OHP敏感性增加，以L-OHP敏感性增加最显著；对CPT-11呈现一定程度的耐药。HT-29和HT-29／ZD均有P—gP表达，但无差异，（P〉0．05）；HT-29／ZD1GF-1Ra表达明显低于HT-29（P〈0．01），而P-IGF-1R表达则明显增强（P〈0．01）。结论：吉非替尼耐药细胞HT-29／ZD不存在与传统化疗药物相似的多药耐药性；磷酸化IGF-1R（P-IGF-1R）活性增强可能是HT-29／ZD的耐药机制之一，P-gp与其耐药性无关。