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中国肿瘤生物治疗 2006年第05期杂志 文档列表

中国肿瘤生物治疗杂志述评

天然免疫识别与外周免疫耐受321-324

摘要：免疫应答强度的调节是决定机体可否有效控制致病因素（病毒、细菌、肿瘤等）而又不引起机体自身性损伤（如器官排异、自身免疫病等）的关键，其中负性调节（或外周免疫耐受）是免疫调节的核心。近年的研究证明，负调节性免疫细胞的各群体综合性地控制这一关键过程，其中调节性T细胞（T—reg）的研究占据目前研究的主流，并同时与辅助性T细胞的各亚群（Th1、Th2、Th3）的研究形成相互关联又互有区别的两大领域。这些研究对抗感染免疫、抗癌免疫、自身免疫病和器官移植提出了许多新的观点，并进而有可能诞生新的针对这些重大疾病的诊断与治疗技术。近3年来固有（天然）免疫细胞如NK、DC、γδT、NKT的某些亚群及其Toll样受体家族形成的天然免疫调节网络对免疫应答的调节作用引起学术界极大关注，

中国肿瘤生物治疗杂志研究简报

人HIF-1α基因沉默肺癌细胞株的筛选及鉴定324-324

摘要：乏氧条件下，肿瘤细胞基因不稳定，突变的基因型影响信号传导途径，细胞凋亡受抑制，恶性程度升高，转移能力增加，对放化疗的敏感性降低。在乏氧应答中起关键作用的是由仅和B亚基组成乏氧诱导因子-1（HIF-1）。HIF-1α作为肿瘤治疗靶基因正引起大家关注。建立HIF-1α基因沉默的细胞系模型，可为研究HIF-1α在肺癌乏氧应答中的作用和通过阻断HIF-1α基因表达为治疗肺癌提供工具。

中国肿瘤生物治疗杂志专家论坛

端粒酶：肿瘤治疗研究的新希望325-328

摘要：端粒是染色体末端的一段富含GC的重复序列，端粒双链中3＇端突出形成3＇悬端（3＇-overhang）。端粒酶是由RNA和蛋白质组成的反转录DNA合成酶，以端粒3＇突出端为引物，RNA组分为模板，蛋白组分催化合成、延长端粒重复序列。1978年Blackburn和Gall首次在四膜虫染色体末端发现了由重复序列组成的端粒。1985年Greider和Blackbum。在四膜虫中发现能合成延伸端粒重复序列的端粒酶。1989年Morin首次在端粒酶阳性的人Hela细胞开始了端粒酶的研究。近年来，端粒及端粒酶的研究已成为生物学热点，也是人类抗肿瘤药物研究的新“靶点”。

实时、动态和四维化的免疫学——评2006年全美免疫学家大会329-331

摘要：2006年全美免疫学家年会于5月12～16日在波士顿举行，来自全美及世界各地的数千名免疫学工作者参加了会议。会议以主席报告、重要演讲、主要论坛、获奖演说等多种形式向与会者展示了近1年来免疫学的研究成果，加拿大和墨西哥的国家免疫学会分别举办和主持了自己的分会场。与往届会议一样，本次会议分会场较多，壁报内容丰富，很难把握会议的全部内容。总体感觉是通过各种电子媒介能实时了解研究进展，通过各种成像技术能动态观察免疫细胞的变化，通过各种生物定量技术能精确得到数字化的实验结果。笔者3人作为唯一参会的中方小组有幸与会，感触颇多，选择以下几个侧面反映近1年来免疫学的某些主要进展。

文稿中数字用法的要求331-331

中国肿瘤生物治疗杂志论著

抑制食管癌与肺血管内皮黏附的功能性抗体的制备332-337

摘要：目的：制备抑制食管癌细胞与肺血管内皮黏附的功能性单克隆抗体，为研究食管癌转移的靶向治疗剂打下基础。方法：以人食管癌新鲜组织分离的肿瘤细胞免疫BALB／c小鼠，将免疫小鼠脾细胞与SP2／0细胞融合后，采用活细胞荧光、ELISA、免疫组化、肿瘤细胞-内皮细胞黏附实验、Western blotting等方法筛选并鉴定抑制肿瘤细胞黏附的功能性单克隆抗体。结果：共融合获得了1134株杂交瘤克隆，在能与食管癌细胞膜反应的486株克隆中，有294株与正常食管卜皮不反应或低反应；筛选到15株单抗显著地抑制食管癌细胞与人正常肺血管内皮黏附，其中2株单抗识别的黏附分子相对分子质量分别为30000和60000。结论：成功获得了多株具有抑制食管癌细胞与肺血管内皮黏附的功能性抗体，其中2株单抗具有治疗食管癌转移的潜住应用价值。

《中国肿瘤生物治疗杂志》2007年度征订启事337-337

硅和玻璃片基上的三维微结构对乳腺癌MCF-7细胞生长的影响338-342

摘要：目的：研究硅和玻璃片基上的三维微结构对乳腺癌MCF-7细胞生长的影响。方法：采用SU-8光刻胶光刻微加工技术在硅和玻璃片基表面制造沟槽、五角星、齿轮状3种三维微结构，与乳腺癌MCF-7细胞共培养，用倒置显微镜与扫描电镜观察三维微结构对肿瘤细胞的形态、分布、生长的影响，采用MTT法分析三维微结构对肿瘤细胞增殖的影响，用流式细胞仪分析凋亡细胞。结果：成功制作微米尺度带有不同深宽比的沟槽、五角星、齿轮。显微镜观察显示，MCF-7细胞喜欢在微结构的深槽中生长，特别是边角部位，而微结构的顶部及周边部位细胞非常少；悬浮细胞呈圆形且较多，作为对照的硅片基表面细胞分布稀疏，轻轻晃动后，细胞上浮；而玻璃片基表面对照细胞分布浓密，呈梭形，悬浮细胞很少。MTT分析显示，随着培养时间的增加，玻璃片基与硅片基微结构中细胞增殖抑制率增加显著（P〈0．05，P〈0．01）。流式细胞仪分析显示，随着培养时间增加，玻璃片基与硅片基上的微结构诱导的凋亡细胞率增加显著（P〈0．05，P〈0．01）。结论：在微米尺度带有不同深宽比的沟槽、五角星、齿轮微结构能够抑制MCF-7细胞的生长，并诱导细胞凋亡。此现象在肿瘤治疗方面具有潜在的应用价值。

中国肿瘤生物治疗杂志研究简报

反义hTERT对人舌鳞癌细胞裸鼠移植成瘤的抑制作用342-342

摘要：多种癌基因及抑癌基因的异常累积是口腔癌癌变过程的重要机制。已有研究表明，端粒酶逆转录酶（TERT）与癌的发生发展密切相关。本研究将经过hTERT反义寡核苷酸预处理后的Tca 8113细胞接种于裸鼠，观察处理后的Tca 8113细胞对裸鼠皮下移植瘤成瘤的抑制作用，初步探讨hTERT为靶点用于开展体内抗癌研究的可行性。

中国肿瘤生物治疗杂志论著

shRNA逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞株（MCF-7／AdrR）的多药耐药性343-348

摘要：目的：利用短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）表达载体逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞株（MCF-7／AdrR）的多药耐药性（muhidrug resistance，MDR）。方法：构建2个MDR1基因shRNA表达质粒，稳定转染MCF-7／AdrR细胞。RT-PCR分析MDR1基因mRNA的表达，Western blotting检测P-糖蛋白（P-gP）的表达，流式细胞术和MTT法分别检测乳腺癌细胞的凋亡和对阿霉素的敏感性，激光共聚焦荧光显微镜检测细胞内柔红霉素的稳态积累。结果：稳定转染pSilencer^TM 3．1-H1 neo MDR1-A和MDR1-B shRNA表达质粒的MCF-7／AdrR细胞，RT-PCR结果显示MDR1基因mRNA表达分别减少到37．6％和28．0％，Western blotting结果显示P—gP表达被明显而特异地抑制。转染细胞对阿霉素的耐药性由162倍分别减低到108倍和50倍，并且MDR1 shRNA表达质粒增加MCF-7／AdrR细胞内柔红霉素的积累。MDR1 shRNA表达质粒和阿霉素联合应用可诱导MCF-7／AdrR细胞的凋亡。结论：shRNA表达质粒有效地逆转多药耐药，使耐药的肿瘤细胞恢复对化疗药物的敏感性。

低表达MICA／MICB导致NK细胞对人鼻咽癌多药耐药细胞（CNE2／DDP）杀伤活性下降349-352

摘要：目的：探讨HLAⅠ类分子及MHCⅠ类链相关分子（MICA／MICB）在人鼻咽癌细胞株CNE2及多药耐药细胞株CNE2／DDP的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响。方法：流式细胞仪检测CNE2和CNE2／DDP细胞表面HLAⅠ类分子和MICA／MICB的表达情况；LDH释放法测定3例健康者的NK细胞在不同效靶比时对CNE2、CNE2／DDP细胞的杀伤活性；效靶比10：1时，用抗HLAⅠ类分子单抗（W6／32）和抗MICA／MICB单抗（BAMO-1）分别封闭HLAⅠ类分子和MICA／MICB，观察NK细胞杀伤CNE2、CNE2／DDP细胞活性的变化。结果：CNE2／DDP细胞表面HLAⅠ类分子和MICA／MICB的表达均较CNE2细胞明显减少（P〈0．01）。NK细胞对CNE2、CNE2／DDP细胞的杀伤活性在效靶比5：1时分别是（9．37±2．14）％、（4．37±0．63）％；效靶比10：1时分别是（27．14±1．82）％、（15．79±2．87）％；效靶比20：1时分别是（36．40±4．28）％、（26．20±4．18）％；效靶比30：1时分别是（54．67±2．80）％、（40．29±2．73）％。各效靶比时NK细胞对CNE2、CNE2／DDP细胞的杀伤活性与HLAⅠ类分子和MICA／MICB相关，NK细胞对CNE2／DDP细胞的杀伤活性明显低于CNE2细胞（P〈0．01）。效靶比10：1时，W6／32明显增强NK细胞对CNE2、CNE2／DDP细胞的杀伤活性（P〈0．01），BAMO-1明显抑制NK细胞对CNE2、CNE2／DDP细胞的杀伤活性（P〈0．01）。结论：HLAⅠ类分子和MICA／MICB在CNE2、CNE2／DDP的表达差异影响着NK细胞的杀伤活性，MICA／MICB在多药耐药肿瘤细胞的低表达导致耐药肿瘤细胞对NK细胞杀伤敏感性下降。

卵巢癌差异表达基因2氨基端PID结构域相互作用蛋白的筛选353-357

摘要：目的：筛选人卵巢癌差异表达基因2（differentially expressed in ovarian cancer2，DOC-2）氨基端磷酸酪氨酸作用结构域PID（nDOC-2）的相互作用蛋白质，为研究DOC-2作用的信号通路提供线索。方法：将含有人DOC-2氨基端PID结构域cDNA的片段插入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒，转化酵母菌AH109并在其内表达，然后转化人胎脑cDNA文库，在营养缺陷培养基和X-α-半乳糖苷酶（X-α-gal）上进行双重筛选阳性克隆，PCR扩增出目的片段并测序，进行生物学分析，寻找与DOC-2氨基端PID结构域蛋白相互作用的蛋白质。结果：经过扩增和筛选胎脑cDNA文库，排除假阳性克隆，得到21个侯选阳性克隆，其中3个克隆进行了序列分析，它们是：Amyloid beta（A4）precursor—like protein 1（APLP1）、TGFβⅢ型受体的部分mRNA和protocadherin gamma subfamily C 3（PCDHGC3）。结论：获得的3个基因编码的蛋白可能参与了DOC-2的信号转导通路，为研究DOC-2在卵巢癌基因治疗中的作用提供了新的思路。

浆细胞样树突状细胞能提呈同种抗原并介导血管性移植物的耐受357-357

摘要：对于血管性移植物，同种抗原并不是局限于某个部位而是弥散地分布于多个淋巴器官，因此需要诱导系统性免疫耐受。论文报告通过静脉回输供者脾脏细胞以及抗CD40L的单抗，成功建立了同种血管性心脏移植达10周的耐受动物模型，并首次发现小鼠浆细胞样树突状细胞（pDC）具有吞噬功能，其在针对血管性心脏移植物的耐受中起着至关重要的作用。

作为基因转移载体的乙肝病毒衣壳的制备及其功能的初步鉴定358-361

摘要：目的：构建具有肝脏靶向性的乙型肝炎病毒衣壳基因转移载体。方法：采用PEG8000病毒浓缩法提取HepG 2．2．15细胞上清液中的乙型肝炎病毒，用β-丙内酯法制备乙型肝炎病毒衣壳，用它包裹5．3kb的绿色荧光蛋白质粒以测试其装载能力，并用ELISA法、PCR法、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、透射电镜等对它进行定量、定性研究，最后将其转染HepG2细胞，通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况，通过流式细胞仪检测细胞发光率。结果：制备的乙型肝炎病毒衣壳载体保留病毒衣壳的表面蛋白HBsAg＋pre S1＋pre S2，无病毒DNA；该载体对绿色荧光蛋白质粒较高装载容量，装载绿色荧光蛋白质粒后在肝癌细胞中有很高的转移效率，并能实现高表达。结论：采用PEG8000病毒浓缩法、β-丙内酯法可从HepG 2．2．15细胞上清液中制备乙型肝炎病毒衣壳基因转移载体，该载体具有良好的生物学功能。

《临床肿瘤学杂志》征订启事361-361

抗肝癌单链免疫毒素hdsFv-RC-RNase的导向治疗作用362-366

摘要：目的：观察抗肝癌重组单链免疫毒素hdsFv-RC-RNase对荷人肝癌裸鼠移植瘤的导向治疗作用，并探讨其临床应用价值。方法：将原核表达载体TIG-hdsFv-RC-RNase转化E.coli BL21（DE3）plys中，利用IPTG大量诱导表达抗肝癌hdsFv-RC-RNase重组单链免疫毒素。表达产物在非变性条件下经Ni-NTA Agarose亲合层析法纯化并体外复性，利用细胞ELISA法检测其特异性结合体外培养的人肝癌细胞的免疫活性。建立荷人肝癌裸鼠移植瘤动物模型，初步评估其对荷人肝癌裸鼠移植瘤的导向治疗作用。结果：工程菌经IPTG诱导后，出现一条相对分子质量约为41000的新生蛋白带，且主要以可溶性形式表达。纯化后表达产物的纯度达到基本均一。细胞ELISA检测结果显示，纯化产物复性后能够与体外培养的人肝癌细胞特异性结合，而对正常肝细胞的结合能力非常弱，两者具有非常显著的差异（P〈0．01）。导向治疗结果表明，其对荷人肝癌裸鼠移植瘤治疗有效率为100％，与生理盐水组相比具有非常显著的差异（P〈0．01），抑瘤率达到79．38％。结论：成功获得了特异性强的有活性的抗肝癌重组单链免疫毒素hdsFv-RC-RNase，其对荷人肝癌裸鼠移植瘤具有一定的导向治疗作用，可能成为抗肝癌导向治疗药物。

简讯366-366

靶向siRNA对人直肠癌Colo320细胞的抑制作用367-370

摘要：目的：利用小分子干扰RNA（siRNA）技术抑制人直肠癌Colo320细胞c—my基因的表达，探讨c—myc基因在人直肠癌Colo320细胞中的作用。方法：设计人直肠癌Colo320细胞基因特异性小分子干扰RNA，用体外转录方法合成人直肠癌Colo320细胞的小分子干扰RNA并转染该细胞，培养48—96h后，收集细胞RNA，应用实时荧光定量PCR方法检测转染细胞中c-myc基因mRNA水平变化，Western blotting检测c—myc表达的蛋白，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和集落形成试验检测细胞增殖活性。结果：转染siRNA后，与对照组相比，实验组pGensil-c-myc-1、2、3、4的c—myc基因mRNA水平明显降低，c—myc的蛋白表达也明显降低。MTT法和集落形成试验检测表明，实验组的细胞增殖速率明显低于对照组。结论：在人直肠癌Colo320细胞中存在RNA干扰的机制，特异性siRNA能够有效地抑制c—myc基因的表达，从而抑制Colo320细胞的增殖。