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中国肿瘤生物治疗 2006年第04期杂志 文档列表

中国肿瘤生物治疗杂志专家论坛

肿瘤靶向治疗的现状和展望239-242

摘要：攻克癌症一直是医学界面临的重大挑战。尽管对癌症的基因组学及表观遗传学进行了大量研究，在肿瘤的基因突变、表达谱及信号转导基础研究领域取得了重大进展，但在临床上，自从50年前Burchenal等开创癌症化疗以来，癌症患者的生存期并未见显著增长。近年来，针对肿瘤细胞受体、关键基因和调控分子为靶点的新型治疗方案已逐步从实验室走向临床，这种特异性杀灭肿瘤细胞的肿瘤靶向治疗（targeted therapy）已对癌症的分子分型、疗效及预后产生重大影响。为此，2006年5月美国Science作专题报道，认为这是癌症研究的新时代。本文根据国际上的最新学术观点，结合我们的研究成果，对肿瘤靶向治疗提出自己一些肤浅思考。

中国肿瘤生物治疗杂志论著

转染嵌合性T细胞受体基因小鼠T淋巴细胞的体外抗肿瘤作用243-248

摘要：目的：研究小鼠T淋巴细胞在转染嵌合性T细胞受体基因后的体外抗肿瘤作用。方法：应用重组DNA技术，将HER2特异性嵌合性T-细胞受体构建人逆转录病毒载体；转入包装细胞后，收集病毒上清，转染小鼠T淋巴细胞，转基因后的小鼠T淋巴细胞分别与HER2阳性（SK-OV-3）或阴性（MCF-7）的肿瘤细胞系共培养，检测其细胞因子γ干扰素释放，^51Cr释放法检测CTL评价其抗肿瘤效应。结果：所构建载体经酶切鉴定符合要求，乒乓法转染包装细胞系GP＋E86，检测病毒滴度为1．2×10^6，Retronectin结合离心法转染经抗CD3／CD28单抗活化的小鼠T淋巴细胞，转染效率可达50％以上；转染嵌合性T细胞受体基因的T淋巴细胞与HER2阳性或阴性的肿瘤细胞系共培养后可检测到HER2特异性的细胞因子γ干扰素释放，^51Cr释放法测CTL可见转染嵌合性T细胞受体基因T淋巴细胞对HER2阳性的肿瘤细胞具显著杀伤效应。结论：转染嵌合性T细胞受体基因的小鼠T淋巴细胞在体外可通过细胞因子释放和CTL效应发挥显著的抗肿瘤作用。

树突状细胞免疫治疗辅助放射治疗抑制小鼠肾癌移植瘤的生长249-252

摘要：目的：研究树突状细胞免疫治疗联合放射治疗对小鼠肾癌移植瘤的作用。方法：BALB／c小鼠右腋皮下注射2．5×10^6 Renca肾癌细胞制作移植瘤模型，分为无治疗对照组、单纯放疗组、单纯DC治疗组和DC联合放疗组4组进行治疗。皮下荷瘤的BALB／c小鼠，在第12～16天连续5d接受肿瘤局部放射治疗，6脉伏电子线，7Gy／次，并于第11、15、19和22天分别4次在肿瘤部位直接注射未负载肿瘤抗原的DC细胞（1×10^6／次），第28天处死小鼠。检测各组肿瘤生长速度和瘤体重量，ELISA检测小鼠脾细胞IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10分泌水平。结果：与单纯治疗组比较，DC联合放疗组小鼠的肿瘤生长明显缓慢，体积明显减小，脾细胞分泌的IL-2、IFN-γ和IL-4的能力显著提高，与其它各组比较均有非常显著性差异（P＜0．01）。结论：瘤内DC注射免疫治疗联合放疗能够有效地抑制BALB／c小鼠肾癌移植瘤生长，其效果明显好于单一方法治疗。

中国肿瘤生物治疗杂志科技动态

浆细胞样树突状细胞通过GITRL活化NK细胞252-252

摘要：NK细胞是天然免疫中一类十分重要的淋巴细胞，通过其细胞毒活性和产生淋巴因子，在机体抗感染、抗肿瘤、免疫调节和造血调控等方面发挥重要的免疫功能。该文报告通过基因芯片分析发现，静息和活化的NK细胞表面表达糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体（glucocorficoid-induced tumor necrosis factor receptor,GITR），而活化浆细胞样树突状细胞（pDC）表面优先表达糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体配体（GITRL），由受体与配体相互作用的模式推测pDC与NK细胞之间可能通过GITRL和GITR发生相互作用而调节固有免疫系统的功能。

中国肿瘤生物治疗杂志论著

肺癌患者化疗前后免疫细胞格局的改变及其临床意义253-256

摘要：目的：研究肺癌患者化疗前后免疫细胞数量、亚群比例、细胞表型及功能的改变，并探讨其临床意义。方法：对23例次肺癌患者化疔前后的白细胞、淋巴细胞和中性粒细胞计数，以流式细胞术对CD3^＋、CD4^＋及CD8^＋T细胞亚群比例以及记忆样表型T细胞进行检测和分析；体外以PHA刺激外周血淋巴细胞，培养48h后检测对K562靶细胞的杀伤效应。结果：化疗后外周淋巴细胞数量迅速减少，1周左右达最低水平，此后逐渐恢复至化疗前水平；淋巴细胞恢复过程中，CD3^＋、CD8^＋T细胞亚群比例升高，记忆样表型T细胞（CD44^high，CD62L^low）比例增加；增生期淋巴细胞在体外以PHA刺激后对K562细胞的杀伤能力没有下降，个别患者的杀伤能力还有所增强。结论：肺癌患者化疗后不仅没有降低免疫功能，反而可增强其免疫效应，该结果为临床肿瘤患者化疗后开展免疫生物治疗提供了实验依据。

低氧环境下罗勒多糖对乳腺癌细胞TIMPs mRNA表达的影响257-260

摘要：目的：探讨低氧对人乳腺癌细胞株MDA-231金属蛋白酶组织抑制剂（TIMPs）mRNA表达的影响，以及罗勒多糖（basil polysaccharide，BP）对TIMPs的作用。方法：分别置MDA-231细胞株于常氧（21％ O2、5％ CO2）、低氧（1％ O2、5％ CO2和94％ N2）环境中和罗勒多糖（200 μg／m1）培养6h，RT-PCR技术检测不同处理组细胞TIMP1、2、3 mRNA水平。结果：MDA-231细胞株表达TIMP1、2mRNA，未检测到TIMP3 mRNA；低氧环境下MDA-231细胞株TIMP1、2mRNA水平显著上升（P＜0.05）；罗勒多糖处理后TIMPs mRNA的含量，无论常氧组还是低氧组都有显著改变：常氧环境下罗勒多糖可明显下调MDA-231细胞株中TIMP1、2mRNA的表达（P＜0．05），而低氧环境下则显著上调其表达（P＜0．05）。结论：罗勒多糖在常氧及低氧环境下对MDA-231细胞TIMP1、2基因表达的影响效应截然相反，提示抗肿瘤药物及生物疗法的体外机制研究设计应充分考虑氧环境的影响。

中国肿瘤生物治疗杂志科技动态

树突状细胞凋亡在维持免疫耐受中的作用260-260

摘要：细胞凋亡缺陷可以引起自身免疫疾病，但先前的研究发现，只抑制T细胞或B细胞的凋亡并不能诱发自身免疫疾病，这提示其他类型细胞的凋亡缺陷在自身免疫中起重要作用。树突状细胞（DC）是目前已知的体内功能最强的抗原提呈细胞，有研究发现自身免疫疾病的动物模型中存在DC的凋亡缺陷。因此，推测DC的凋亡缺陷可能引起自身免疫。

中国肿瘤生物治疗杂志论著

CpG-ODN持续刺激对小鼠骨髓树突状细胞成熟的影响261-265

摘要：目的：研究CpG-ODN持续刺激对小鼠骨髓树突状细胞（DC）成熟的影响。方法：小鼠骨髓细胞用GM-CSF培养7d，持续刺激组全程加入CpG-ODN，短期刺激组在培养的最后36h加入CpG-ODN，对照组不加CpG-ODN。流式细胞仪检测细胞表型和细胞摄取抗原的能力，ELISA检测细胞产生的细胞因子，混合淋巴细胞培养检测细胞提呈抗原的能力。结果：用CpG-ODN持续刺激的小鼠骨髓DC表达MHCU、CD86和CIMO等分子和分泌IL-12p70的能力并未增加，吞噬FITC-OVA的能力显著升高，刺激同种异基因T细胞和刺激同种同基因T细胞增殖的能力显著低于CpG-ODN短期刺激组。结论：CpG-ODN持续刺激可抑制DC的发育成熟，可能是持续严重感染时免疫功能低下的原因。

中国肿瘤生物治疗杂志简讯

《实用肿瘤杂志》征订启事265-265

中国肿瘤生物治疗杂志读者·作者·编者

文稿中统计学符号规范化书写的要求265-265

中国肿瘤生物治疗杂志论著

含MMP-9信号肽、人MMP-2PEX片段腺病毒载体的构建及其生物学活性266-271

摘要：目的：构建含MMP-9信号肽、人MMP-2PEX片段融合蛋白的重组腺病毒（ET-M9-PEX），通过基因治疗策略建立患者体内药物生物反应器，以期利用抗血管因子的体内表达实现肿瘤的有效治疗。方法：利用PCR、基因晕组等技术，构建含M9-PEX融合蛋白的腺病毒载体，经1293细胞包装、扩增后得到有感染力的ET-M9-PEX重组腺病毒。用Western blotting和免疫荧光检测其感染细胞后PEX的表达和分泌，通过生长曲线观察其感染内皮细胞（endothelialcell，EC）的培养上清对EC增殖的影响，利用鸡胚绒毛尿囊膜（chicken chorioallantoic membrane，CAM）实验检测其对血管发生和种植瘤生长的影响。结果：ET-M9-PEX构建成功，感染细胞后有PEX的表达和分泌。体外实验表明，ET-M9-PEX感染细胞的培养上清能抑制EC增殖。体内实验证实，ET-M9-PEX感染后的PG细胞接种于CAM，与E-T相比，对瘤重的抑制率为57．57％（P＜0．01），对一级血管的抑制率为33．52％（P＜0．01）；而E-T和PBS组之间瘤重和一级血管数均无显著性差异。结论：构建的ET-M9-PEX重组腺病毒能显著抑制EC细胞增殖，抑制CAM种植瘤生长和血管发生，ET-M9-PEX有望成为肿瘤基因治疗的有效药物。

中国肿瘤生物治疗杂志读者·作者·编者

正确使用数的修约规则271-271

中国肿瘤生物治疗杂志论著

BH3-HIV-TAT抗前列腺癌的活性272-276

摘要：目的：探讨人工合成的BH3-HIV-TAT肽对前列腺癌细胞株LNCaP增殖的影响。方法：以25、50、1000μmol／L的BH3-HIV-TAT处理LNCaP细胞12或24h，以激光共聚焦显微镜观察BH3-HIV-TAT肽的细胞定位；观察经BH3-HIV-TAT肽处理后，LNCap细胞凋亡过程中核染色质的形态学变化；用流式细胞仪分析不同时间不同浓度的短肽对细胞凋亡程度和周期的影响；以MTS／PMS测定，分析短肽对LNCaP细胞的增殖是否有浓度依赖性的影响。结果：激光共聚焦检测结果显示BH3-HIV-TAT肽主要定位在细胞核内；LNCap细胞经短肽处理后，可观察到分为2期的细胞凋亡过程；流式细胞仪检测结果证实了短肽对细胞凋亡程度和周期的影响；MTS／PMS测定表明该短肽具有浓度依赖性的抗前列腺癌细胞的活性。结论： BH3-HIV-TAT肽可有效地诱导前列腺癌细胞株LNCaP的凋亡，从而影响其增殖，实验结果为癌症靶向性治疗提供了依据。

中国肿瘤生物治疗杂志研究简报

rmhTNF-α 在肺癌细胞A549中的作用276-276

摘要：肺癌对人类健康造成了巨大威胁。目前临床上的治疗以化疗、放疗和生物治疗为主。肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）为内源性免疫调节因子，对多种肿瘤细胞有直接细胞毒作用，是迄今为止发现的抗肿瘤效应最强的生物因子。国内外许多学者通过改变TNF的结构寻找高效、低毒的TNF突变体，并取得较大进展。2003年4月中国SFDA批准上市的国家一类新药——重组改构人肿瘤坏死因子（recombinant mutant human tumor necrosis factor alpha，rmhTNF-α），是应用蛋白质工程技术改造天然TNF-α而制成的高活性、低毒性的基因工程TNF-α。

中国肿瘤生物治疗杂志论著

γ-干扰素对白血病细胞Fas／FasL系统的调控及凋亡的影响277-280

摘要：目的：探讨γ-扰素（IFN-1）对白血病细胞Fas／FasL表达的调控及凋亡的影响。方法：应用免疫组织化学方法、TUNEL测凋亡法、细胞培养技术，检测人髓系白血病细胞株HL-60及临床髓系白血病患者单个核细胞的Fas的表达及相关功能，并研究γ-干扰素对之的影响。结果：白血病细胞表达Fas蛋白较正常骨髓细胞低，并能致共同培养的Jurkat细胞发生凋亡；而IFN-1能提高其Fas蛋白的表达（P＜0．01），且调节作用具有时间、剂量依赖性，并有下调白血病细胞致Jurkat细胞凋亡的能力，且能够增强白血病细胞对Fas途径介导的凋亡敏感性及增强对化疗药物阿糖胞苷的敏感性。结论：IFN-1能通过对白血病细胞Fas／FasL系统的调控以防止其逃避免疫监视，并能增强白血病细胞对以Fas／FasL为靶标的化疗药物的敏感性。

VEGF反义寡核苷酸对Lewis肺癌细胞的抑制作用281-285

摘要：目的：探讨血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）反义寡核苷酸对C578L/6小鼠肺癌细胞的抑制作用。方法：制作C57BL／6小鼠皮下肺癌模型40只，分为VEGF反义寡核苷酸（ASODN）治疗组、VEGF正义寡核苷酸（SODN）治疗组、VEGF错义寡核苷酸（MODN）治疗组及对照组。接种Lewis肺癌细胞后24h内，用ASODN、SODN及MODN皮下注射进行治疗，对照组只注射生理盐水，观察小鼠肿瘤的生长情况以及组织形态学改变，标本常规石蜡切片，H-E染色，用免疫组化方法检测VEGF蛋白表达。结果：对照组、ASODN组、SODN组、MODN组平均瘤重分别为（7．33±0．71）g、（4．56±0．38）g、（7．59±0．32）g和（7．62±0．39）g，ASODN组、SODN组、MODN组抑瘤率分别为43．8％、5．5％、3．1％。光镜下观察，VEGF-ASODN能明显抑制肿瘤细胞生长，降低增殖活性。免疫组化结果表明，ASODN组VEGF的表达水平明显低于SODN组、MODN组及对照组（P＜0．05）。CD34免疫组化结果表明，ASODN组MVD为8．25±2．12，与对照组（14．78±3．51）、SODN组（13．71±3．62）及MODN组（12．81±2．56）比较，ASODN组MVD明显减少（P＜0．01）。结论：原位注射VEGF反义寡核苷酸能抑制小鼠肺癌生长。

中国肿瘤生物治疗杂志读者·作者·编者

化学元素和核素符号规范书写的要求285-285

中国肿瘤生物治疗杂志论著

腺病毒介导的HBsAg基因修饰树突状细胞的体外生物学特性286-289

摘要：目的：探讨腺病毒介导乙型肝炎病毒表面抗原（AdVHBsAg）基因修饰树突状细胞（dendritiC Cell，DC）瘤苗体外生物学活性。方法：将腺病毒表达载体AdVHBsAg转染人单个核细胞来源的DC，构建AdVHBsAg-DC肝癌瘤苗，采用Weslem blotting法鉴定转染基因表达，FACS检测表面分子和内吞功能，^3H-TdR法检测T细胞增殖反应的能力，MTI法检测CTL活性。结果：HBsAg基因转染后，Western blotting法检测结果示HBsAg基因表达于转染的DC，表明腺病毒介导的HBsAg基因转染的有效性。AdVHBsAg-DC可高表达CD1a、CD11C、CD83、CD86和HLA-DR，但内吞功能较DC组降低（P＜0．05）。AdVHBsAg-DC刺激自体T细胞增殖功能均明显高于DC对照组和AdVLacZ-DC组（P＜0．05）。AdVHBsAg-DC体外诱导CTL对HepG2.2.15肿瘤细胞的杀伤作用具有特异性。结论：肝癌相关基因HBsAg可作为乙型肝炎病毒相关性肝癌的切入点，该研究为HBV相关肝癌DC体内免疫治疗提供了实验依据。