猪环鸟苷酸-腺苷酸合成酶cGAS基因的原核表达及其表达产物的生物活性分析

作者:龙朝琳; 何小兵; 陈国华; 贾怀杰; 王国蒨; 房永祥; 景志忠

摘要:为获得具有生物学活性的环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)蛋白与第二信使分子2′3′-cGAMP,构建了猪源cGAMP合成酶pcGAS基因的原核表达载体pET-28a-SUMO-pcGAS,将其转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),并通过优化诱导条件实现了可溶性表达;利用镍柱亲和层析对表达的重组蛋白产物进行初步纯化,随后切除SUMO标签蛋白,再用亲和层析进一步纯化,获得了纯度较高的重组蛋白pcGAS;将获得的重组蛋白pcGAS通过体外酶促反应生物合成了2′3′-cGAMP,且合成产物能够诱导启动细胞Ⅰ型IFNs的产生。结果表明,pcGAS重组蛋白和2′3′-cGAMP均具有生物活性,这为后续抗病毒、抗肿瘤药物以及免疫增强剂的开发奠定了基础。

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关键词:
  • cgas
  • 原核表达
  • 纯化
  • 活性分析

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期刊名称:中国兽医科学

期刊级别:北大期刊

期刊人气:1621

杂志介绍:
主管单位:中华人民共和国农业农村部
主办单位:中国农业科学院兰州兽医研究所
出版地方:甘肃
快捷分类:农业
国际刊号:1673-4696
国内刊号:62-1192/S
邮发代号:54-33
创刊时间:1971
发行周期:月刊
期刊开本:A4
下单时间:1-3个月
复合影响因子:0.75
综合影响因子:1.02