内部核糖体结合位点介导的三顺反子抗人肿瘤坏死因子-α单克隆抗体表达质粒的构建及在CHO细胞中的表达

作者:李计来; 崔文禹; 王欣怡; 刘敬; 郝少杰; 徐静

摘要:目的构建内部核糖体结合位点(internal ribosome entry site,IRES)介导的三顺反子抗人肿瘤坏死因子-α(human tumor necrosis factor-α,hTNF-α)单克隆抗体的表达质粒,并在CHO细胞中进行表达。方法采用重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)技术扩增hTNF-α抗体的轻、重链基因,并与IRES基因连接,将连接产物LC-IRES-HC基因克隆至pOptiVEC~(TM)-TOPO~?TA载体,构建单表达载体pOptiVEC-LIH。将单表达载体pOptiVEC-LIH及共转染载体pOptiVEC-HC和pcDNA3.3-LC分别电转至CHODG44细胞,经氨甲喋呤(methotrexate,MTX)加压筛选稳定转染细胞,有限稀释法筛选高表达单克隆细胞株,并采用3 L反应罐对高表达株进行补料批次发酵培养。结果经测序鉴定,单表达载体pOptiVEC-LIH构建正确。瞬时转染后,单表达载体pOptiVEC-LIH转染组的抗体表达量明显高于共转染载体p Opti VEC-HC和pcDNA3.3-LC(P〈0.05);经稳定转染有限稀释筛选后,共获得132个克隆,其中A值〉2.0的克隆有18株,应用3 L反应器补料批次发酵培养,其表达量可达250 mg/L。结论成功构建了三顺反子抗hTNF-α单克隆抗体的表达质粒,并在CHO细胞中进行了表达。

分类:
  • 期刊
  • >
  • 自然科学与工程技术
  • >
  • 医药卫生科技
  • >
  • 基础医学
收录:
  • 国家图书馆馆藏
  • CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版)
  • 知网收录(中)
  • CA 化学文摘(美)
  • 上海图书馆馆藏
  • 维普收录(中)
  • 万方收录(中)
  • Pж(AJ) 文摘杂志(俄)
  • 北大期刊(中国人文社会科学期刊)
  • 统计源期刊(中国科技论文优秀期刊)
  • JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
  • 文摘杂志
  • 医学文摘
  • 哥白尼索引(波兰)
  • 农业与生物科学研究中心文摘
关键词:
  • 内部核糖体结合位点
  • 单克隆抗体
  • cho细胞

注:因版权方要求,不能公开全文,如需全文,请咨询杂志社

期刊名称:中国生物制品学

期刊级别:北大期刊

期刊人气:2216

杂志介绍:
主管单位:国家卫生健康委员会
主办单位:中华预防医学会;长春生物制品研究所
出版地方:吉林
快捷分类:医学
国际刊号:1004-5503
国内刊号:22-1197/Q
邮发代号:12-128
创刊时间:1988
发行周期:月刊
期刊开本:A4
下单时间:1-3个月
复合影响因子:0.55
综合影响因子:0.58