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中国生物制品学 2017年第10期杂志 文档列表

乙型脑炎减毒活疫苗及稀释剂与其直接接触的包装容器的相容性1009-1016

摘要：目的 考察乙型脑炎减毒活疫苗及稀释剂与其直接接触的包装容器的相容性,评估疫苗及稀释剂现用包装容器的适宜性。方法 分别检测已包装的疫苗、稀释剂在加速条件及规定储存条件下,其包装容器的外观、胶塞对疫苗的吸附度,胶塞中抗氧剂2,6-二叔丁基对甲酚(2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol,BHT)和玻璃瓶中有毒有害金属离子As、Sb、Pb、Cd迁移量,玻璃瓶内表面脱片风险等,分析乙型脑炎减毒活疫苗及稀释剂现用包装容器对产品质量的影响程度及包装容器是否被疫苗或稀释剂腐蚀受损。结果 3批乙型脑炎减毒活疫苗在(25±2)℃、相对湿度(RH)(60±5)%放置6个月,(37±2)℃、RH(75±5)%放置4周,2~8℃放置24个月,疫苗及包装材料(容器)外观与0月结果一致,胶塞对疫苗的吸附度低于0.05%,包装容器中抗氧剂BHT及有毒有害金属离子As、Sb、Pb、Cd迁移至疫苗中的量远低于安全限值,玻璃瓶内表面被疫苗腐蚀脱片的风险较低。3批稀释剂在(40±2)℃、RH(75±5)%放置12个月,2~30℃放置至42个月,稀释剂及包装材料(容器)外观与0月结果一致,包装容器中抗氧剂BHT及有毒有害金属离子As、Sb、Pb、Cd迁移至稀释剂中的量远低于安全限值,玻璃瓶内表面被稀释剂腐蚀脱片的风险较低。结论 乙型脑炎减毒活疫苗及稀释剂分别与其包装容器发生相互作用的风险可接受,显示了良好的相容性,表明现用包装容器是适宜的。

Photobacterium sp.QH氨肽酶的基因克隆及其序列、酶学性质分析1017-1021

摘要：目的 克隆盐湖菌株Photobacterium sp.QH（Ps sp.QH）氨肽酶的基因,并对其进行序列及酶学性质分析。方法 从青海盐湖采集水样,筛选Ps sp.QH菌株,进行16S rRNA分子生物学测定。通过硫酸铵沉淀、阴离子交换层析、凝胶过滤层析法从筛选菌株的发酵液中纯化氨肽酶,同时对其进行质谱分析,基因克隆及酶学性质分析。结果 获得的菌株Ps sp.QH与Photobacterium halotolerans为同一属。该菌株分泌的氨肽酶属于金属螯合氨肽酶M28家族,全基因序列长1 527 bp,共编码508个氨基酸,预测其全酶分子相对分子质量为55 900,氨基酸序列与Photobacterium halotolerans氨肽酶（KKC99795.1）同源性达98%。该氨肽酶在50℃时酶活最高,4050℃及pH 8.5时稳定性较好;Co2+对其有激活作用,Mg2+、Mn2+、Zn2+、Ca2+、Fe2+及Cu2+对其有不同程度的抑制作用;该酶在13 mol/L的Na Cl溶液中仍保持较高活性。结论 Ps sp.QH分泌的氨肽酶对高盐有一定的耐受性,具有潜在的工业应用价值。

人用疫苗生产用工作细胞库Vero细胞的鉴别1022-1027

摘要：目的 采用两种不同的方法进行人用疫苗生产用工作细胞库Vero细胞的鉴别,为提高人用疫苗生产用细胞的准确性及疫苗的安全性提供保障。方法 采用短串联重复序列(short tandem repeat,STR)-PCR基因分型法对本所疫苗生产用Vero细胞的8个STR位点(D8S1106、D1S518、D6S1017、D17S1304、D4S2408、D5S1467、D19S245和DYS389)进行测定,并与文献报道的结果进行比对分析;采用染色体核型检查法,将Vero细胞经Giemsa染料染色,于显微镜下精确计数100个细胞的染色体后,统计染色体数为58或60条的细胞所占比例。结果 STR基因分型得到的特征性图谱与文献报道的结果完全相同,未出现三单位基因,且STR的重复数完全相同;高倍镜下精确计数100个细胞染色体数为58或60条的细胞所占比例为79%。结论 本所疫苗生产用工作细胞库Vero细胞为正确细胞株,不存在污染或交叉污染的情况,为本所人用疫苗的安全性和准确性提供了保障。

沉默血管内皮钙黏蛋白基因对人高转移肝癌HCCLM3细胞增殖及迁移的影响1028-1032

miR-25-3p调控CPEB4基因对人肺癌A549细胞侵袭和迁移的影响1033-1037

摘要：目的 探讨miR-25-3p和CPEB4基因在人肺癌A549细胞中的表达,阐明miR-25-3p对CPEB4基因的靶向作用及其对A549细胞侵袭和迁移的影响。方法 采用免疫荧光化学技术检测CPEB4在A549细胞中的表达;运用生物信息学方法对miR-25-3p和CPEB4基因的靶向配对关系进行预测;脂质体2000转染miR-25-3p模拟物以及干扰CPEB4基因的siRNA后,采用Real-time PCR检测miR-25-3p和CPEB4基因mRNA在癌细胞中的表达;Western blot法检测CPEB4蛋白在癌细胞中的表达;Transwell小室试验检测癌细胞体外的侵袭性;细胞划痕试验检测癌细胞的迁移情况。结果 A549细胞胞质内CPEB4蛋白高表达,呈绿色荧光;miR-25-3p和CPEB4基因二者靶向配对良好;过表达miR-25-3p能降低A549细胞中CPEB4基因mRNA和蛋白的表达,抑制A549细胞的侵袭和迁移。结论 miR-25-3p通过下调人肺癌A549细胞中CPEB4基因的表达,进而抑制癌细胞的侵袭和迁移。

X线辐射后肺腺癌A549细胞上清外泌体跨膜蛋白88表达与细胞增殖的相关性1038-1041

人和BALB/c小鼠对梭子蟹过敏组分的比较及主要过敏原的分离纯化1042-1045

摘要：目的 比较人和BALB/c小鼠对梭子蟹过敏的组分差异,评价用小鼠构建过敏模型对研究人类过敏症的可靠性,并对主要过敏原进行分离纯化。方法 制备梭子蟹蛋白浸液,经皮下注射建立小鼠过敏模型,获得特异的小鼠IgE(sIgE)血清,同时收集蟹过敏患者血清,采用Western blot法鉴定蟹的过敏组分,通过硫酸铵分段盐析和DEAE离子交换层析对主要过敏组分进行分离纯化。结果 用梭子蟹蛋白浸液成功建立了BALB/c小鼠过敏模型,并获得了高效价的sIgE血清。梭子蟹中有一相对分子质量为89 000的蛋白组分为人和小鼠共有的主要过敏原,通过硫酸铵分段盐析法和DEAE离子交换层析法分离到了该组分。结论 小鼠和人对梭子蟹过敏的组分基本一致,提示小鼠过敏模型可成为人类过敏症研究的可靠动物模型,纯化单一的过敏原组分有望提高过敏症诊断和治疗的特异性。

肝细胞生长因子基因治疗促进乙酸性胃溃疡组织再生修复的效果1046-1049

牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白单克隆抗体的制备及鉴定1050-1054

摘要：目的 制备牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gD蛋白单克隆抗体,并进行鉴定。方法 将扩增的IBRV gD基因插入原核表达载体p ET-28a(+),构建重组质粒gD-pET-28a,转化至感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白gD,通过Ni-NTA Agarous Kit纯化后,免疫BALB/c小鼠。取小鼠脾细胞,与SP2/0细胞融合,筛选阳性杂交瘤细胞,经小鼠腹腔注射,待小鼠腹腔膨胀时抽取腹水,用Hi Trap Protein G HP试剂盒纯化单抗,进行Western blot及间接免疫荧光检测。结果 重组蛋白gD相对分子质量为48 000,纯化后浓度为4.19 mg/ml。小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合后筛选出1株阳性杂交瘤细胞株,获得相应单克隆抗体的蛋白含量为1.81 mg/ml,且可与IBRV发生特异性反应,可与接种IBRV的MDBK细胞发生反应,产生特异性荧光。结论 本研究利用原核表达系统表达纯化了IBRV gD蛋白,成功制备了IBRV gD单克隆抗体,为下一步表位鉴定及致病机理的研究奠定了基础。

庆阳地区丙型肝炎病毒基因型分布特点及其临床意义1055-1058

2010～2016年吉林省森林脑炎流行特征分析1059-1062

摘要：目的 了解2010~2016年吉林省森林脑炎(tick-borne encephalitis,TBE)的流行情况,分析TBE病例时间、空间和人群分布特征。方法 收集2010年1月1日至2016年12月31日吉林省TBE发病监测数据,以地市为单位,按现住址、已审核、发病日期、年龄、性别、职业选择病例;使用Excel软件将各项数据制作成图表进行分析,Mapinfo软件绘制地区发病率地图。结果 吉林省TBE的流行季节为每年的5月至9月中旬,5月末至6月中旬为发病高峰,7月初再次出现1个小高峰;病例分布有明显的地区性,主要分布在长白山及其支脉的一带林区;发病年龄集中在50~60岁年龄组;男性发病高于女性,男女性别比为1.66∶1;主要发病职业为农民,占所有病例的61.47%。结论 吉林省TBE的流行有明显的时间、空间和人群特征,应采取综合措施对TBE进行预防和控制。

《中国生物制品学杂志》移动版上线了1062-

ROC曲线分析人附睾蛋白4在卵巢癌的诊断价值1063-1065

发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒糖蛋白抗原(Gn)定量检测方法的建立及验证1066-1072

摘要：目的 建立发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)糖蛋白抗原(Gn)的定量双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证,以用于疫苗生产过程中SFTSV糖蛋白抗原含量的监测。方法 用SFTSV糖蛋白抗原分别免疫新西兰兔及BALB/c小鼠,制备抗SFTSV多克隆抗体和单克隆抗体。以抗SFTSV多克隆抗体作为包被抗体,经辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体作为酶标抗体,建立SFTSV糖蛋白抗原(Gn)定量双抗体夹心ELISA检测方法,确定该方法的线性范围、定量限,并对该方法的特异性、精密度、准确性、稳定性、适用性进行验证。结果 建立的ELISA方法的线性范围为0.125~4.000μg/ml,定量限为0.125μg/ml,线性相关系数R2的平均值为0.994 1;该方法可特异性检测SFTSV病毒株,而与布尼亚病毒属其他病毒、Vero细胞培养上清及其他生产辅料均无交叉反应;该方法检测不同浓度SFTSV样品的变异系数小于15%,回收率在85%~115%之间;该检测试剂于37℃放置3 d对样品进行检测,变异系数小于15%;该方法检测SFTSV原液制备过程中不同阶段样品,随着工艺过程的不断推进,样品中单位蛋白的抗原含量呈上升趋势,可有效反映抗原纯化过程。结论建立了SFTSV糖蛋白抗原(Gn)的定量检测方法,具有较高的广谱性、灵敏度、特异性和稳定性,为疫苗生产工艺过程的质量控制奠定了基础。

13价肺炎球菌多型调理吞噬试验方法的建立及验证1073-1079

摘要：目的 建立标准化的针对肺炎链球菌荚膜多糖特异性抗体的多型调理吞噬试验(multiplexed opsonophagocytic killing assay,MOPA)方法,并进行验证。方法 参照有关组织研究和的MOPA实验操作规范(UAB-MOPA),通过菌种鉴定、HL60细胞分化规律的确定、补体筛选、质控血清质控范围的确定,建立本实验室的MOPA实验方法,并对方法进行特异性、线性、精密性、准确性以及耐受性验证。结果 工作菌种的所有指标均符合UAB-MOPA操作规范的要求;HL60细胞在分化后3~6 d均可作为工作细胞使用;27531和84321N两批补体可作为工作补体使用;建立了09CS、QC2、B、C和F 5个质控血清的质控范围。方法的特异性、线性、精密性、准确性及耐受性均符合预定指标。结论 成功建立了标准化的13价肺炎球菌多型MOPA方法,并进行了验证。

血管性血友病因子抗原含量ELISA检测方法的建立、验证及应用1080-1085

两种凝胶过滤介质纯化Sabin株脊髓灰质炎病毒效果的比较1086-1091

摘要：目的 比较两种不同的凝胶过滤介质对Sabin株脊髓灰质炎病毒的分离纯化效果。方法 将Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒收获液各3批经超滤浓缩后,分别采用Sepharose CL-6B和Sepharose 6FF填料进行凝胶过滤纯化,分段收集各纯化峰,检测D抗原及蛋白含量,计算比活性、蛋白去除率及抗原回收率,确定病毒峰收集范围。取抗原含量最高的病毒收获液,利用DEAE Sepharose FF离子交换填料进行纯化后,检测Vero细胞DNA残留量、Vero细胞蛋白残留量、牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量。结果 Sepharose 6FF填料按6%柱体积上样进行凝胶纯化,纯化的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒收获液抗原回收率均值分别为78.69%、78.03%和78.37%,与Sepharose CL-6B填料按3%柱体积上样(77.29%、78.60%和77.36%)相比,差异无统计学意义(P>0.05)。两种填料纯化的各型收获液再经离子交换纯化后,蛋白去除率、比活性、Vero细胞DNA残留量、Vero细胞蛋白残留量、牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量检测结果均符合《中国药典》三部(2015版)相关要求,两种填料纯化的各型收获液比活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论 使用Sepharose 6FF纯化的各型病毒纯化液抗原回收率和比活性与Sepharose CL-6B无明显差异,但可以减少纯化的上样次数,大幅提高纯化效率,可用Sepharose 6FF替换Sepharose CL-6B。

壳聚糖含量紫外分光光度检测方法的建立及验证1092-1095