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中国生物制品学 2017年第03期杂志 文档列表

中国生物制品学杂志疫苗研究

冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）冻干保护剂的筛选225-228

摘要：目的筛选适用于冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）的冻干保护剂。方法用同一批冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）原液在同一冻干条件下,改变右旋糖酐40、海藻糖及人血白蛋白3种保护剂主要成分的含量,组合成6种保护剂配方,分别制备成半成品。冻干后检测成品外观、疫苗效力及热稳定性,确定最佳冻干保护剂配方。以最佳保护剂配方制备6批成品进行适用性验证,并选择3批成品进行长期稳定性验证。结果确定最佳冻干保护剂的配方为4%海藻糖、3%右旋糖酐40、1%蔗糖、0.5%甘露醇、2%人血白蛋白。以该配方制备的6批成品的各项检测指标均符合《中国药典》三部（2010版）的要求,其中3批成品经2~8℃保存12个月后的效价较稳定。结论筛选获得了最佳冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）的冻干保护剂,且具有良好的稳定性。

欢迎光临2017第五届上海国际生物发酵产品与技术装备展览会228-228

摘要：由中国生物发酵产业协会主办、上海信世展览服务有限公司承办的2017第五届上海国际生物发酵产品与技术装备展览会（BIO CHINA）,将于2017年10月25~27日在上海新国际博览中心举行。BIO CHINA已成为全球发酵行业年度盛会,业界有识之士汇聚一堂,新观点新思想荟萃一处,为生物发酵行业和相关行业搭建了一个技术交流、促进合作、扩大上下游贸易、提高品牌和企业知名度的平台。

不同分子大小b型流感嗜血杆菌结合物免疫原性的比较229-233

摘要：目的评价不同分子大小b型流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae type b,Hib）结合物的免疫原性,确定结合物的最适分子大小。方法制备不同活化度的Hib多糖,分别与载体蛋白CRM197以胺还原法制备不同分子大小（K_D）的Hib结合物;此外,利用凝胶过滤层析分离Hib结合疫苗原液,收集K_D于0.05~0.25、0.25~0.45之间及大于0.45的结合物组分;分别免疫小鼠,采用间接ELISA法测定小鼠血清中抗Hib多糖IgG抗体滴度,以市售Hib疫苗作为对照。结果不同分子大小Hib结合物第2针及第3针免疫后,K_D0.35组与K_D0.01组诱导的抗体水平相当（P=0.166和0.882）,显著高于K_D0.53组（P=0.008和0.031）,也高于对照疫苗组;同样K_D0.25组第2针免疫后诱导的抗体滴度也显著高于K_D0.48组（P=0.037）。不同分子大小片段的Hib结合物组分第2针及第3针免疫后,K_D0.05~0.25组抗体水平最高,K_D0.25~0.45组次之,K_D〉0.45组最低。结论较高分子大小Hib结合物的免疫原性优于较低分子大小的结合物,在制备Hib结合疫苗时,以分子大小K_D0.20~0.35为宜。

中国生物制品学杂志基础研究

人颗粒酶B融合蛋白的原核表达及其免疫血清的制备234-238

摘要：目的在原核体系中表达人颗粒酶B（granzyme B,Gzm B）融合蛋白,并制备Gzm B免疫血清多克隆抗体。方法构建Gzm B原核表达重组质粒p ET32a-Gzm B,转化大肠埃希菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达重组Gzm B（r Gzm B）蛋白,镍离子螯合亲和层析柱纯化表达产物。以纯化的r Gzm B蛋白为免疫原,皮下多点注射BALB/c小鼠,共免疫3次,分别于免疫后2、4、6周经小鼠尾静脉采血,分离血清,间接ELISA法检测免疫血清中Gzm B特异性Ig G抗体水平,并确定其抗体最大稀释度,免疫斑点试验检测免疫血清多克隆抗体对Gzm B的特异免疫结合特性。结果质粒p ET32aGzm B经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的r Gzm B蛋白相对分子质量为48 000;纯化的r Gzm B蛋白免疫小鼠血清中Gzm B特异性Ig G抗体水平随免疫时间延长至第4周达到高峰,随后维持一定水平;抗体最大稀释度为1∶1 600;r Gzm B免疫血清能够特异地结合Gzm B,显示了其免疫结合特性。结论制备了r Gzm B蛋白和Gzm B小鼠免疫血清多克隆抗体,为后续开展Gzm B的靶向杀伤、靶向检测等应用研究奠定了基础。

不同尿细胞诱导多能干细胞效率的比较239-242

摘要：目的比较不同来源及不同批次尿细胞诱导多功能干细胞的效率。方法收集夜尿样本25份及非夜尿样本81份（其中31份来自男性,50份来自女性）,采用非整合、无血清、无饲养层细胞、无致癌基因c-MYC的重编程法诱导获得诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells,i PSCs）。经碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,AP）染色估算尿细胞重编程效率。结果夜尿与非夜尿中尿细胞分离的成功率分别为8%和44%,差异有统计学意义（P〈0.05）;同一来源不同批次尿细胞间及不同尿液来源尿细胞间的重编程效率的差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论夜尿不适宜作为收集尿细胞的来源。不同的尿细胞会影响重编程的效率,本实验为提高诱导效率的研究奠定了基础。

骨形态发生蛋白10在中国仓鼠卵巢细胞中的表达、纯化及其生物活性243-248

摘要：目的在中国仓鼠卵巢细胞（Chinese hamster ovary,CHO）中表达改造后的骨形态发生蛋白10（bone morphogenetic protein 10,BMP10）全长基因,纯化后检测其生物活性,以期获得具有生物活性的BMP10分子。方法于rh BMP10的propeptide与mature chain基因片段之间插入6×his-tag标签及DDDDK（肠激酶识别位点）,构建p MH3-rh BMP10-histag-DDDDK质粒,电转入CHO细胞,用500μg/ml G418从单克隆中筛选出稳定表达目的蛋白的重组细胞,悬浮驯化表达8 d后,收集培养液上清,阴离子交换柱和镍柱纯化目的蛋白。采用q-PCR法检测纯化蛋白的体外细胞活性。结果目的蛋白纯化液经SDS-PAGE检测到的条带相对分子质量与目的蛋白理论值相符,Western blot分析可见相对分子质量约48 000、96 000和190 000的3个条带,与目的蛋白单体及多聚体相对分子质量一致。酶切后的目的蛋白可有效刺激P19细胞的标志蛋白（Smad6）表达上调。结论 BMP10 propeptide的存在对BMP10的蛋白活性具有重要作用,改造后的BMP10在CHO细胞中表达具有一定的生物活性。本研究为全长BMP10活性二聚体的制备提供了新的思路。

吉林省2001～2014年麻疹病毒血凝素蛋白基因亲缘关系分析249-253

摘要：目的分析吉林省2001~2014年间麻疹病毒血凝素（hemagglutinin,H）蛋白基因的亲缘关系。方法选取35株吉林省麻疹病毒株作为代表株,采用RT-PCR法获得麻疹病毒H蛋白核酸分段扩增产物,将测得的序列用DNASTAR软件进行拼接,并用Mega 4.0和Bioedit软件对序列进行亲缘关系和同源性分析。结果 35株麻疹病毒代表株均属于H1基因型H1a基因亚型,且明显处于两个小分支上。35株麻疹病毒株H蛋白基因同源性变化为：株间核苷酸同源性为98.2%~99.8%,株间氨基酸同源性为95.2%~99.8%;与H1a中国代表株（China93-4/H1a）相比,核苷酸同源性为98.8%~99.6%,氨基酸同源性为96.7%~98.8%;与中国疫苗株（Shanghai-191）相比,核苷酸同源性为94.5%~95.2%,氨基酸同源性为84.7%~86.7%。结论吉林省2001~2014年间,麻疹病毒H蛋白与中国代表株（China93-4/H1a）的亲缘关系呈逐年渐远的态势发展,与中国H1a代表株和中国疫苗株相比,核苷酸和氨基酸同源性均呈逐年下降的趋势,提示应对吉林省麻疹病毒H蛋白进行持续监测和分析。

欢迎参加BioCon China 2017中国国际生物药大会253-253

摘要：BioCon China 2017中国国际生物药大会将于2017年3月24-25日在上海龙之梦大酒店盛大召开。大会由第四届中国国际生类似药论坛（主办方：BMAP;协办方：上海复宏汉霖生物技术有限公司）和第三届生物药物创新及研发国际研讨会（主办方：细胞工程及抗体药物教育部工程研究中心、上海交通大学药学院；承办方：BMAP）两大论坛组成。

沙门菌对小鼠胃癌细胞增殖及β-防御素-2表达的影响254-257

摘要：目的探讨沙门菌对小鼠胃癌细胞MFC增殖及β-防御素-2（mouseβ-defensin,m BD-2）表达的影响。方法将不同浓度（10、10~2、10~3和10~4个/ml）沙门菌分别作用MFC细胞不同时间（12、24和48 h）后,MTT法检测沙门菌对细胞抑制的最佳浓度及时间;TUNEL法检测不同浓度（10、10~2、10~3和10~4个/ml）沙门菌作用MFC细胞不同时间（12、24和48 h）对细胞凋亡的影响;将不同浓度（10、10~2、10~3和10~4个/ml）沙门菌作用MFC细胞4、8和12 h,定量PCR及Western blot法检测m BD-2 m RNA及蛋白水平。结果浓度103个/ml沙门菌作用24 h对MFC细胞的抑制作用明显,细胞凋亡也明显;沙门菌作用MFC细胞8 h时,m BD-2的表达量无论在蛋白还是m RNA水平均较高。结论m BD-2的表达在浓度103个/ml沙门菌作用8 h后达到最高,为进一步研究m BD-2的产生机制奠定了基础。

中度嗜盐菌Halobacillus Y5甘氨酸甜菜碱转运蛋白opuD基因的克隆及功能分析258-263

摘要：目的克隆中度嗜盐菌Halobacillus Y5甘氨酸甜菜碱转运蛋白（betaine-choline-carnitine transporter,BCCT）opu D基因,对其结构及蛋白功能进行分析,并通过耐盐碱特性试验明确其功能。方法将经过Sau3AⅠ部分酶切回收的Halobacillus Y5基因组总DNA,与用Bam HⅠ酶切并去磷酸化的线性p UC18载体连接,电转化法导入E.coli KNabc感受态细胞中,涂布在含0.2 mol/L Na Cl、Amp~（50）的LBK固体培养基上,筛选阳性克隆,提取质粒测序后,进行生物信息学分析及耐盐碱特性检测。结果已从中度嗜盐菌-喜盐芽孢杆菌Halobacillus Y5中成功克隆了1个新的耐盐碱基因,将其命名为HY5_opu D,该基因是1个新的甘氨酸甜菜碱转运蛋白基因,其编码的蛋白氨基酸序列和结构不同于以往报道的Opu D转运蛋白,且该基因能够使KNabc在0.2 mol/L Na Cl、5 mmol/L Li Cl及碱性p H 8.0环境下生长。结论成功克隆了1个新型的opu D转运蛋白基因,为开发利用中度嗜盐菌的耐盐碱基因奠定了理论基础。

征稿263-263

摘要：《中国生物制品学杂志》为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的生物制品专业学术期刊。由国家卫生部主管,中华预防医学会和长春生物制品研究所有限责任公司主办,是中华预防医学会系列杂志之一,月刊。

烯效唑对干旱胁迫下薏苡抗氧化酶活性及DNA甲基化水平的影响264-270

摘要：目的探讨烯效唑（S3307）对干旱胁迫下薏苡抗氧化酶活性及DNA甲基化水平的影响。方法将薏辽5号种子培养至幼苗的两叶一心期,实验分为3组：对照组（control）：用Hoagland培养液处理;干旱胁迫组（PEG）：用25%PEG的营养液处理;S3307缓解组（PEG＋S3307组）：经S3307预处理后,再用25%PEG处理。检测各组幼苗的形态指标（苗高、茎粗、根长、根数）及过氧化物酶（peroxidase,POD）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和过氧化氢酶（catalase,CAT）的活性,同时采用高效液相色谱（HPLC）法测定各组幼苗的DNA甲基化水平。结果经S3307预处理后,幼苗的株高和根长显著降低（P〈0.05）,茎粗及根冠比显著增加（P〈0.05）;SOD、CAT和POD抗氧化酶的活性显著升高（P〈0.05）;幼苗叶片中5-甲基胞嘧啶（5-m C）比例比control组增加了34.29%（P〈0.001）,增加幅度比PEG组降低了12.99%。结论 S3307可缓解干旱胁迫下薏苡的膜脂过氧化损伤及DNA甲基化水平的上升,具有良好的壮苗作用,为薏苡的抗旱性机理研究奠定了基础。

《中国生物制品学杂志》移动版上线了270-270

摘要：为深度推进《中国生物制品学杂志》数字化转型,使期刊的资源得到广泛传播和利用,本刊已入北京世纪超星信息技术发展有限责任公司的移动＂域出版＂平台,旨在更好地为业内同仁提供快捷的学习方式。扫描二维码,下载＂超星学习通＂,点击＂移动图书馆→期刊＂,输入＂中国生物制品学杂志＂即可浏览,敬请关注指导。

大肠埃希菌对人结肠癌细胞RKO产生β防御素-3的影响271-271

摘要：β防御素是天然抗菌肽家族的重要成员,同时也是机体先天性防御屏障的重要组成部分,对细菌、真菌和病毒入侵机体具有重要的防御作用。β防御素-3通常受外界环境的刺激而产生,在人体上皮细胞和黏膜组织中广泛表达,具有广谱的抗微生物活性,能促进伤口愈合,发挥免疫调节及抗肿瘤等多种作用。

中国生物制品学杂志治疗性制剂

水牛干扰素α的可溶性原核表达、纯化及其抗病毒活性272-277

摘要：目的在E.coli中高效表达可溶性水牛干扰素α（recombinant bovine interferon alpha,r Bo IFNα）,纯化后检测其抗病毒活性。方法采用RT-PCR方法从水牛肝脏总RNA中扩增IFNα基因,插入原核表达载体p ET-32a中,构建重组表达质粒p ET-32a-IFNα,转化E.coli BL21（DE3）,IPTG诱导表达。对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot检测后,使用His Trap~（TM） HP镍离子亲和层析柱进行纯化,并采用细胞病变抑法,在水泡性口炎病毒（vesicular stomatitis virus,VSV）/MDBK细胞滴定系统上检测其抗病毒活性。结果核酸测序结果显示,r Bo IFNα基因全长498 bp,与Gen Bank报道的牛IFNαC亚型基因核苷酸序列同源性为100%;表达的r Bo IFNα蛋白主要存在于破碎菌体的上清中,表达量约占菌体总蛋白的63.8%;纯化的r Bo IFNα纯度高达98.52%,能与牛IFNα多克隆抗体特异性结合,比活性为（3.6±0.2 5）×10~6 U/mg。结论成功在E.coli中高效表达了可溶性r Bo IFNα蛋白,纯化的蛋白具有较强的抗病毒活性,为其临床应用奠定了基础。

中国生物制品学杂志诊断制剂

肠出血性大肠埃希菌O157免疫磁珠的制备278-282

摘要：目的制备可高效、特异性富集肠出血性E.coli O157（enterohemorrhagic Escherichia coli O157,EHEC O157）的免疫磁珠。方法分别用5种不同规格磁珠与E.coli O157特异性单克隆抗体偶联制备免疫磁珠,通过比较磁珠蛋白偶联量,选取包被效果最佳的磁珠规格;对制备工艺进行优化（包括活化时间、温度,偶联缓冲液p H值,偶联温度、时间）;对制备的O157免疫磁珠选择性集菌的敏感性和特异性进行评价,并与进口磁珠吸附率进行比较。结果直径0.5~1.0μm羧基磁珠抗体包被效果及目的菌分离效果最好。加入NHS后,活化30 min为最佳时间;4℃磁珠活化温度、0.01 mol/L PBS（p H 7.4）构成的体系对磁珠偶联单克隆抗体效果最佳;偶联温度为37℃、偶联时间为120 min时,偶联蛋白量最高,且波动范围较小,为最佳偶联温度及时间。在复杂的微生物环境中,O157免疫磁珠的敏感性达到20 CFU/ml。在混合菌液中,E.coli O157菌含量在1.4×10~3 CFU/ml时,免疫磁珠特异性捕获率达到90%。结论获得羧基磁珠与E.coli O157单克隆抗体偶联的最佳条件。制备的免疫磁珠能够特异性富集EHEC O157,具有操作简便,分离速度快,捕获率高等特点,可用于临床样品或食品中EHEC O157的分离鉴定。

中国生物制品学杂志临床研究

冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）在10～60岁健康人群中的安全性及免疫原性283-287

摘要：目的评价冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）在10~60岁健康人群中的安全性及免疫原性。方法在广西岑溪市和苍梧县选择1 200名10~60岁健康人群,采用随机、盲法、同类制品阳性对照的试验设计,将1 200名受试者按1∶1随机配对,分别接种试验及对照疫苗（市售国产同类制品）。按0、3、7、14、28 d免疫程序接种,观察首剂疫苗接种后42 d随访期内全身和局部不良反应;于首次接种后14及42 d采集静脉血,通过快速荧光灶抑制试验检测狂犬病病毒中和抗体,计算抗体几何平均浓度（GMC）。结果共有1 199名受试者完成安全性观察,试验疫苗组（600名）和对照疫苗组（599名）的全身反应发生率分别为12.33%和18.03%（P〈0.05）,常见症状均为发热（发生率分别为8.00%和13.19%）;局部反应发生率分别为5.33%和10.52%（P〈0.05）,均以疼痛为主（发生率分别为4.17%和8.85%）。1 147名受试者完成免疫原性观察,试验疫苗组（571例）和对照疫苗组（576例）首剂疫苗免后14 d抗体阳转率分别为100.00%和99.83%,42 d均达100.00%,差异均无统计学意义（P〉0.05）;14 d抗体GMC分别为8.94和7.96 IU/ml,42 d分别为17.26和15.04 IU/ml,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）具有良好的安全性及免疫原性。

非特异性免疫技术治疗病毒性肝病288-289

摘要：近年来,由于细胞免疫疗法治疗病毒性肝炎疗效显著,不良反应罕见,在病毒的清除和疾病免疫发病中的作用明显,而引起医学界重视。研究证实,麻疹疫苗注入人体,在清除麻疹病毒的同时,HBV也得到部分清除或抑制;而且通过非特异性细胞免疫的激活,可直接清除和抑制HBV。停止应用后,CD4和CD8的比值保持在正常范围可长达48周。