Al（OH）3佐剂对不同抗原含量肠道病毒71型灭活疫苗免疫效果的影响
摘要：目的分析Al（OH）3佐剂对不同抗原含量肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）灭活疫苗免疫效果的影响。方法将ICR小鼠随机分为9组,每组8只：常规剂量（160 EU/0.1 ml EV71）、1/2剂量（80 EU/0.1 ml EV71）、1/5剂量（32 EU/0.1 ml EV71）无佐剂及佐剂[Al（OH）31.0 mg/ml]疫苗组,并设佐剂、生理盐水及空白对照组,分别于0、28 d经肌肉免疫小鼠,分别于初免及加强免疫后28 d,经尾静脉采血,分离血清,采用体外微量中和试验法检测小鼠血清中和抗体效价,流式细胞仪检测IL-2、IL-4、IL-6、IL-17A、IL-10、IFNγ及TNF水平。结果初免后28 d,1/2剂量疫苗组中佐剂组小鼠血清抗体阳性率明显高于无佐剂疫苗组,差异有统计学意义（P〈0.05）,其余各组间差异无统计学意义（P〉0.05）;加强免疫后28 d,常规剂量疫苗组中,佐剂及无佐剂组小鼠血清抗体阳性率均为100%,抗体GMT分别为1∶152.2和1∶139.6,1/2剂量疫苗组中,佐剂组小鼠血清中抗体GMT与无佐剂组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）,其余组间抗体阳性率及抗体GMT差异均无统计学意义（P〉0.05）。常规剂量、1/2剂量、1/5剂量疫苗组,均诱导产生IL-6、IL-10、IFNγ及TNF 4种细胞因子,与佐剂对照组和生理盐水对照组相比,差异有统计学意义（P﹤0.05）,未检测到IL-2、IL-4、IL-17A。结论 EV71灭活疫苗可诱导小鼠产生IL-6、IL-10、IFNγ、TNF 4种细胞因子及特异性的抗EV71抗体,加入佐剂后免疫效果更好。壳聚糖-海藻酸盐复合微囊疫苗的制备及其对斜带石斑鱼的口服免疫效果
摘要：目的制备包裹哈维弧菌（Vibrio harveyi,Vh）重组外膜蛋白Omp K的壳聚糖-海藻酸钠复合微囊疫苗,并检测其对斜带石斑鱼的口服免疫效果。方法采用乳化-复乳化法将壳聚糖、海藻酸钠包裹哈维弧菌重组外膜蛋白Omp K,制备微囊疫苗,测定其粒径、包裹率及载抗原量;经口灌服免疫斜带石斑鱼,2周后进行加强免疫,设Omp K蛋白组和空白对照组,ELISA法检测免疫后斜带石斑鱼血清及后肠黏膜上清抗体水平;于免疫后30 d,经斜带石斑鱼腹腔注射1.0×10^7 CFU/ml的哈维弧菌,计算各组相对保护率（relative percent survival,RPS）。结果微囊为球形或类球形,粒径5.0~20.0μm,平均粒径10.6μm;微囊中蛋白平均包裹率为71.26%,平均载抗原量为1.67%。微囊疫苗组血清抗体效价峰值为29,明显高于Omp K蛋白组（P〈0.01）;微囊疫苗组后肠黏膜上清的吸光值（A450-A630）明显高于Omp K蛋白组和空白对照组（P〈0.01）。微囊疫苗组的RPS达62.5%,高于Omp K蛋白组（P〈0.01）。结论制备的壳聚糖-海藻酸盐复合微囊疫苗口服石斑鱼后,具有较好的免疫效果,作为鱼类口服疫苗的投递载体是可行的。脊髓灰质炎病毒减毒活疫苗中Ⅲ2株全基因测序及序列分析
摘要：目的对脊髓灰质炎病毒减毒活疫苗中Ⅲ2株全基因进行测序,并与P3/Leon/37株和SabinⅢ株的全基因序列进行同源性比较。方法通过大片段克隆和小片段克隆两种方法,采用RT-PCR法扩增覆盖中Ⅲ2株基因组全长且互相重叠的4个大片段和8个小片段,基因组中间片段的PCR产物直接测序,基因组末端的片段先进行TA克隆再测序。分别将两种方法得到的c DN段进行拼接,并将所得全长c DNA序列与P3/Leon/37株和SabinⅢ株的全基因序列进行同源性比较。结果两种方法均能得到长度为7 432 bp的中Ⅲ2株全长c DNA序列,且碱基序列完全一致;中Ⅲ2株全基因序列与P3/Leon/37株和SabinⅢ株全基因序列的同源性均为99%;中Ⅲ2株与P3/Leon/37株的碱基序列差异共有19处（非编码区3处和编码区16处）,编码区有6个基因突变导致氨基酸序列的改变;中Ⅲ2株和SabinⅢ株的碱基序列差异共有28处（非编码区13处和编码区15处）,编码区有3个基因突变导致氨基酸序列的改变。结论中Ⅲ2减毒疫苗株全基因组c DNA序列为7 432 bp,与SabinⅢ株全基因序列的同源性为99%。西尼罗病毒E蛋白在杆状病毒/昆虫细胞表达系统中的表达及其鉴定
摘要：目的利用杆状病毒/昆虫细胞表达系统表达西尼罗病毒（West Nile virus,WNV）囊膜E蛋白,并进行鉴定。方法利用分子克隆技术将WNV E基因克隆至杆状病毒供体质粒p Fast Bac1中,构建重组供体质粒p Fast Bac-E,转化大肠埃希菌DH10Bac,构建重组穿梭质粒Bac-E,转染sf9细胞,收获含WNV E基因的重组杆状病毒Ac MNPV-E,采用间接免疫荧光及Western blot法检测E蛋白的表达。结果重组供体质粒p Fast Bac-E经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,重组穿梭质粒Bac-E经PCR鉴定证明构建正确,转染约96 h后,sf9细胞体积变大、变圆,细胞颗粒化,进而从培养板上脱落,漂浮,收获的第1代Ac MNPV-E经PCR鉴定为阳性。感染重组杆状病毒Ac MNPV-E的sf9细胞周围出现绿色荧光,表达的目的蛋白可与兔抗WNV E蛋白多克隆抗体及鼠抗His单克隆抗体特异性结合,在相对分子质量约53 000处可见目的蛋白条带。结论利用杆状病毒/昆虫细胞表达系统成功表达了WNV E蛋白,为WNV快速诊断方法及新型疫苗的建立奠定了基础。氯化钠含量对人凝血因子Ⅷ冻干品结晶形态的影响
摘要：目的研究人凝血因子Ⅷ（FⅧ）中氯化钠含量与冻干品结晶形态的关系,为FⅧ冻干品的质量控制提供依据。方法采用阴离子交换凝胶柱层析法制备高纯度的FⅧ溶液,分别加入氯化钠至低中高浓度（40、80、160 mmol/L）后,真空冻干,并与添加160 mmol/L氯化钠和100 mmol/L甘氨酸的冻干品进行对比。目测法观察冻干品外观,扫描电镜（scanning electron microscope,SEM）下观察结晶形态;差示扫描量热法（differential scanning calorimeter,DSC）检测热力学性质;参考《中国药典》三部（2010版）检测FⅧ活性、含水量、复溶时间。结果 FⅧ溶液随着盐浓度增加,冻干品外观依次变差,由疏松网孔状结构变致密片层状结构,共晶点降低,凝血活性降低,复溶时间延长,含水量增加;添加甘氨酸作为保护剂的冻干品外观明显变好,呈疏松网孔状结构,共晶点高,凝血活性强,复溶时间短,含水量低。结论氯化钠含量对冻干品结晶形态有显著影响,可在溶液配制阶段调节氯化钠含量及添加保护剂,以控制冻干品的结晶形态。生物信息学方法预测高分子蛋白质twitchin的一级结构
摘要：目的预测高分子蛋白质twitchin基因的exon-intron结构,并确定其一级结构及结构域。方法利用生物信息学方法,从霸王莲花青螺（Lottia gigantea）基因组数据中探索有无twitchin的基因,预测twitchin的基因exon-intron结构及twitchin m RNA组成,从而确定该蛋白的一级结构,并检测其结构域;与同源蛋白进行序列比对,绘制系统树,了解其在系统进化中的位置。结果在霸王莲花青螺基因组数据中存在twitchin的基因,且该蛋白基因在基因组中横跨220 000 bp的序列区域（「sca38」的149 839-367 346区域）,预测编码twitchin的m RNA约由13 000 bp组成,推算相对分子质量约为480 000,该蛋白由Ig、Fn、kinase结构域和unique序列组成,与贻贝twitchin相比较,他们之间具有较高的同源性。结论在霸王莲花青螺中存在twitchin的基因,预测和确定了该蛋白质的一级结构。206例鸡蛋过敏儿童接种麻疹风疹联合减毒活疫苗后的安全性观察
摘要：目的观察鸡蛋过敏儿童接种麻疹风疹联合减毒活疫苗的安全性。方法选取北京市朝阳区2013年2~3月期间8~17月龄接种麻疹风疹联合减毒活疫苗的206名鸡蛋过敏体质儿童及242名非鸡蛋过敏体质儿童,接种麻疹风疹联合减毒活疫苗。采用电话调查的方法对接种疫苗后的不良反应发生情况进行回顾性队列分析。结果本次电话调查的总应答率为87.3%。在拨通电话的391例研究对象中,鸡蛋过敏组184例,非鸡蛋过敏组207例。鸡蛋过敏组和非鸡蛋过敏组的不良反应发生率分别为10.3%和8.2%;局部反应发生率分别为1.6%和1.0%;生命体征异常率分别为6.0%和4.8%;全身反应发生率分别为3.8%和5.8%,差异均无统计学意义（P〉0.05）。不良反应中,明确为偶合反应的3例（鸡蛋过敏组2例,非鸡蛋过敏组1例,临床诊断均为幼儿急疹）。结论鸡蛋过敏儿童接种麻疹风疹联合减毒活疫苗与非鸡蛋过敏儿童相比,不良反应发生率未增加。黄山市2010~2013年疑似预防接种异常反应监测分析
摘要：目的分析黄山市2010~2013年疑似预防接种异常反应（adverse events following immunization,AEFI）的发生特征,评价预防接种的安全性。方法采用描述性流行病学方法对2010~2013年黄山市AEFI监测资料进行分析。结果 2010~2013年全市共报告AEFI 116例,其中一般反应99例（85.34%）,异常反应11例（9.48%）,偶合症5例（4.31%）,接种事故1例（0.86%）。各区县均有AEFI报告,48 h内报告率为93.10%,48 h内调查率为97.14%;男女性别比为1.27∶1,年龄≤1岁占43.10%,报告疫苗以国家免疫规划（National Immunization Programme,NIP）疫苗为主;报告的AEFI病例主要集中在5~9月份,68.97%发生在接种后1 d内;AEFI报告发生率为7.39/10万,其中一般反应为6.30/10万,异常反应为0.70/10万,一般反应以发热、红肿、硬结为主,异常反应以过敏性皮疹、卡介苗淋巴结炎为主。结论全市AEFI监测质量有待继续提高,各区县报告数据差异较大。AEFI常发生于低年龄组儿童和NIP疫苗,为监测重点;各疫苗不良反应报告发生率均在预期发生范围内,安全性良好。结核病药效评价用结核分枝杆菌参考菌株的筛选
摘要：目的筛选结核病（tuberculosis,TB）药效评价用结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）国家参考菌株。方法取169株MTB临床分离株,采用结核杆菌生长指示管（mycobacterial growth indicator tube,MGIT）960液体培养基,对4种一线抗TB药物[链霉素（streptomycin,STR）、异烟肼（isoniazid,INH）、利福平（rifampin,RFP）和乙胺丁醇（ethambutol,EMB）]进行药敏试验,并对耐INH和/或耐RFP的菌株的相关耐药基因位点进行测序,确认突变位点;用间隔区寡核苷酸分型法（Spoligotyping）对所有菌株进行基因分型,多位点可变数量串联重复序列分型方法（mutiple loci VNTR analysis,MLVA）对北京家族MTB临床分离株进行基因分型。结果 169株MTB临床分离株中耐STR 118株,INH 143株,RFP 129株,EMB 95株,耐多药（至少对NIH和RFP耐药）120株,单耐INH 5株,单耐RFP7株,四种抗TB药均敏感共11株。143株INH耐药菌株中,kat G基因突变菌株占76.9%,inh A基因突变菌株占27.3%,aph C基因突变菌株占25.2%,至少2个基因发生突变的菌株有31株;129株RFP耐药菌株中,rpo B基因531位点发生突变,占67.4%,526位发生突变,占17.8%,516位点发生突变,占16.3%,至少2个位点发生突变的菌株有10株。169株MTB临床分离株分为北京家族和非北京家族,北京家族111株;非北京家族58株,主要有CAS家族2株,EAI家族7株,H家族11株,LAM家族6株,MANU家族6株,T家族7株,U家族1株,X3家族3株,还有15株在数据库中未表现的新基因型。111株北京家族MTB临床分离株分为4大群,其中Ⅱ群分布最广,占68.5%,代表性最好。筛选出耐多药菌株27株,敏感菌株5株,单耐异烟肼2株,单耐利福平3株。结论成功筛选出敏感菌株、单耐药菌株、MDR菌株作为候选菌株。2015中国（南京）国际生物医药产业博览会
摘要：随着Biotech China在境内外宣传力度的不断加大,引起了国内外生物医药行业组织的广泛关注,先后有美国、加拿大、瑞士、德国、澳大利亚、芬兰、苏格兰、以色列、印度、韩国及中国台湾等国家和地区组团参展,展会国际化程度进一步提升。转基因牛乳中重组人乳铁蛋白中试纯化工艺的建立及其活性分析
摘要：目的建立转基因牛乳中重组人乳铁蛋白（recombinant human lactoferrin,rh LF）的中试纯化工艺,并分析纯化的rh LF的活性。方法以含rh LF的转基因牛乳为原料,通过陶瓷膜分离技术除菌,一步阳离子交换层析,非离子型去污剂与金属络合剂去除内毒素,以及超滤浓缩脱盐,冷冻干燥制备重组蛋白纯品等步骤纯化rh LF,采用SDSPAGE、凝胶过滤色谱（SEC-HPLC）法和反相色谱（RP-HPLC）法分析rh LF的纯度;ELISA法检测rh LF的含量;鲎试剂法检测rh LF的内毒素含量;圆二色谱技术分析rh LF的二级结构;并检测rh LF的铁结合能力和抑菌活性。结果纯化的rh LF的平均纯度可达96%,内毒素含量小于0.5 EU/mg,整个工艺回收率达75%,且具有与天然人乳铁蛋白（human lactoferrin,h LF）相近的二级结构及正常的铁结合能力和抑菌活性。结论建立的牛乳中rh LF的中试纯化工艺简便高效,适用于rh LF的规模化生产。不同材质细胞培养容器培养甲型肝炎病毒的比较
摘要：目的比较中性玻璃转瓶和聚苯乙烯细胞工厂两种材质的培养容器培养人二倍体细胞和甲型肝炎病毒（hepatitis A virus,HAV）的差异。方法采用相同的培养条件,在中性玻璃转瓶和聚苯乙烯细胞工厂中分别培养人胚肺二倍体细胞KMB17,并接种HAV H2株,倒置光学显微镜下观察细胞的形态变化;细胞接种病毒后第0、7、14、18、22、26、30天时取样,ELISA法测定病毒的感染性滴度,分析病毒的增殖动力学。结果两种材质的容器培养的KMB17细胞的生长状态和形态无明显差异;HAV H2株增殖动力学相似;单位体积病毒收获液中的病毒产量无显著差异;聚苯乙烯细胞工厂培养的HAV的单位培养容积产量是中性玻璃转瓶的7.28倍。结论聚苯乙烯细胞工厂和中性玻璃转瓶培养的人二倍体细胞和HAV均能良好生长,细胞工厂可替代转瓶成为新的疫苗规模化生产的细胞培养技术。一步柱层析纯化血浆分离多种血液制品组分
摘要：目的采用一步吸附及分步解吸的柱层析技术——扩张床吸附（expanded bed adsorption,EBA）技术,从原料血浆中分离多个有效组分,从而提高血浆的综合利用率。方法以琼脂糖（碳化钨）-DEAE为吸附介质,将原料血浆按一定流速流经层析柱,并使待分离组分吸附于介质上,通过不同的缓冲液组成、洗脱流速、洗脱体积分步分离有效组分,并初步探讨工艺放大过程中的关键因素。结果 EBA技术可从原料血浆中依次分离出白蛋白、免疫球蛋白、纤维蛋白原、α-1蛋白酶抑制剂4种蛋白;该技术在工艺放大过程中,柱高及洗脱流速是影响分离效果的关键因素;该技术可去除部分病毒,使病毒滴度降低约一个数量级。结论一步柱层析技术具有血浆综合利用度高、易操作、操作周期短、成本低、可去除病毒等优势,其有望成为传统低温乙醇工艺的有效替代技术,应用于工业化生产。宿主遗传因素对疫苗接种后免疫反应的影响
摘要：疫苗是当今世界预防感染性疾病的主要手段,在降低传染病的发病率和死亡率方面,几乎没有其他干预方式能够达到疫苗的效果。众所周知,机体对疫苗的反应与很多因素有关,包括年龄、性别、种族、身体质量指数、疫苗的质量、注射剂量以及注射方式等。但就同一种疫苗而言,机体的遗传因素在免疫应答中发挥着重要作用。研究表明,直接或间接参与免疫反应的各种基因,例如,宿主细胞膜上的病毒受体基因、先天Toll样受体（Toll-like receptors,TLRs）基因、细胞因子及其受体基因、人类白细胞抗原（human leukocyte antigen,HLA）基因等,其单个变异或多个的变异均可能与疫苗所引起的免疫应答水平相关。本文就人群遗传因素与免疫反应的相关性作一综述。农村基层医护人员乙型肝炎防治措施及乙型肝炎疫苗接种影响因素的调查
摘要：乙型病毒性肝炎简称乙肝,是病毒性肝炎中危害最严重的一种传染病,居全球死亡原因的第10位[1]。我国是全世界仅有的少数几个乙肝病毒高流行和高发病的国家之一。我国自1992年开始实施接种乙肝疫苗防治乙肝,经过多年努力,取得了显著成效,尤其是儿童乙肝疫苗接种率明显提高,但是成人乙肝发病率仍维持在较高水平,尤其是医务人员,由于其职业的特殊性,经常接触患者的血液、尿液及其他潜在危险因素,感染乙肝的概率较普通人群增加[2]。2015第五届疫苗中国发展国际峰会将在上海召开
摘要：第五届疫苗中国发展国际峰会（Vac China 2015）将于2015年3月25~26日在上海召开。这是2015年中国最大的疫苗行业年会,几乎涵盖了整个疫苗产业链上的所有行业。在此,我们将通过人用疫苗及兽用疫苗两个分论坛,分别探讨行业的最新发展趋势、研发战略、合作模式。
